心肌肌凝蛋白诱导BALB/c小鼠发生自身免疫性心肌炎

目的:建立BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型.方法:采用差速离心、分级饱和硫酸铵沉淀和DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化等方法自猪心中提取并纯化心肌肌凝蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹方法鉴定.以此蛋白免疫遗传易感的BALB/c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型.结果:97％(35/36)小鼠在免疫后第14天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润、肌纤维排列紊乱和肌浆溶解.免疫鼠血清肌钙蛋白I水平升高,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体.结论:猪心肌肌凝蛋白可以诱导BALB/c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎.     

多肽诱导BALB/c小鼠自身免疫性心肌炎模型及鉴定

目的:以包含心肌球蛋白致病性抗原表位的人工合成多肽免疫BALB/c小鼠,建立实验性自身免疫性心肌炎动物模型。方法:FMOC法人工合成含心肌肌球蛋白抗原表位长度为14个氨基酸残基的多肽,经HPLC法纯化至纯度达95%以上并以质谱分析法鉴定。纯化多肽皮下免疫遗传易感BALB/c系小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型。结果:88.9%(32/36)的实验组小鼠第14天出现心肌损伤,至第21天心肌损伤达高峰。心肌病理切片可见心肌层充血,间质单核细胞浸润明显并伴心肌细胞肿胀、坏死。血清抗心肌肌球蛋白自身抗体阳性,并伴肌钙蛋白I水平升高。结论:应用本方法可成功诱导BALB/c系小鼠发病,建立实验性自身免疫性心肌炎动物模型。     

实验性自身免疫性心肌炎小鼠的免疫功能变化

目的 观察肌凝蛋白诱导Balb／c小鼠发生自身免疫性心肌炎后小鼠免疫功能的变化。方法 以猪心肌中提取并纯化的肌凝蛋白免疫Balb／c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型。流式细胞仪检测小鼠外周血和脾淋巴细胞CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、Th1、Th2及TCRVβ8．1＆8．2和TCRVβ10的变化,酶联吸附试验观察外周血TGF-β1和抗肌凝蛋白抗体的变化。^3H—TdR检测小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白刺激的增殖反应。结果 940（15／16）小鼠在免疫后第18天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润;免疫鼠血浆肌钙蛋白Ⅰ水平升高,TGF-β1水平显著下降,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体。免疫小鼠外周血CD3^＋CD4^＋细胞较正常对照小鼠显著增高。外周血和脾脏Th1、Th1／Th2及TCRVβ8．1＆．8．2阳性T淋巴细胞显著增加;小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白的增殖反应较对照组明显增加。结论猪心肌肌凝蛋白可以诱导Balb／c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎,是一种以Th1细胞介导为主的自身免疫反应。     

腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎的治疗作用

目的:研究腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎的治疗作用.方法:以猪心肌肌凝蛋白免疫BALB/c小鼠,诱导自身免疫性心肌炎;实验组以腺病毒为载体转移TGF-β1基因,对照组则转移Lacz基因;采用ELISA法测定血浆TGF-β1浓度,间接ELISA法检测肌凝蛋白自身抗体,荧光酶联免疫法检测肌钙蛋白I;从心肌炎细胞浸润程度、血浆肌钙蛋白I水平、血浆肌凝蛋白自身抗体滴度评估TGF-β1转基因治疗自身免疫性心肌炎的作用.结果:实验组血浆TGF-β1浓度显著高于对照组和正常小鼠(P<0.01),对照组和正常小鼠无显著性差异;实验组小鼠心肌炎细胞浸润程度明显低于对照组,血浆中的肌钙蛋白I水平和抗肌凝蛋白自身抗体水平低于对照组(P<0.01).结论:腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎有明显的治疗效果.     

小鼠自身免疫性心肌炎CXCR3的表达及染料木黄酮的干预作用

目的探讨小鼠自身免疫性心肌炎中CXCR3的表达变化及其拮抗剂(染料木黄酮)的干预作用。方法选择6～8周龄Balb/c雄性小鼠64只,其中正常小鼠16只(A组),其余小鼠于第0天和第7天注射提纯的猪心肌肌球蛋白建立实验性自身免疫性心肌炎模型,免疫后随机分为3组:心肌炎模型组(B组)、溶剂二甲基亚砜DMSO组(C组)和染料木黄酮干预组(D组),各组均为16只。分别于初次免疫后14、21d随机处死各组小鼠8只,取材检测相关指标。光镜下观察HE染色的炎症情况,用间接ELISA法检测小鼠血清中肌钙蛋白I(cTnI)水平,用免疫组化和RT-PCR检测小鼠心肌组织中CXCR3蛋白和mRNA表达变化。通过HE染色的炎症情况和血清中cTnI水平评估模型效果,但这两个指标也可以反映CXCR3表达与炎症的关系以及各组心肌炎症损害程度。结果初次免疫后14d,B组炎症评分、cTnI水平、心肌组织中CXCR3蛋白和mRNA表达量均明显高于其他各组(P<0.05),D组较B组炎症和心肌细胞损害程度减轻(P<0.05),C组与B组无差异。21d时B组炎性浸润和心肌细胞的损害较14d时更为明显(P<0.01),D组却较14d时减轻(P<0.0...     

TNFSF14及HVEM在自身免疫性心肌炎中的表达及意义

目的:建立自身免疫性心肌炎大鼠模型,探讨肿瘤坏死因子超家族成员(TNFSF14)LIGHT及其受体HVEM在实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌组织表达及意义。方法:从猪心室肌组织提取心肌肌球蛋白,以猪心肌肌球蛋白与完全弗氏佐剂混合的乳浊液间隔7 d皮下注射免疫模型组大鼠,对照组大鼠仅用完全弗氏佐剂皮下注射。分别在初次免疫后第21天和第90天检测超声心动图,取心肌组织作病理学检查,用RT-PCR法检测心肌组织LIGHT及HVEM mRNA的表达。结果:在急性期(第21天),模型组大鼠心肌组织HE染色见有不同程度的急性炎性细胞浸润和心肌细胞变性坏死,同时超声心动图检测到心功能的下降。第90天,模型组大鼠心肌组织炎症减弱,并伴有纤维化出现,对照组均未出现心肌炎症和纤维化。在第21天,模型组大鼠心肌组织中LIGHT和HVEM基因表达水平均高于对照组(P<0.01)。第90天,模型组LIGHT与HVEM基因表达仍然高于对照组(P<0.01)。结论:LIGHT及HVEM基因在实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表达是上调的,LIGHT/HVEM通路可能参与自身免疫性心肌炎发生发展过程。     

抗FasL抗体在小鼠病毒性心肌炎治疗中的作用

目的：探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇B3（CVB3）病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及病毒滴度的调节作用。方法：随机将80只Balb／c小鼠分为空白对照组、病毒对照组、IgG对照组及抗FasL抗体治疗组,于感染后第10天每组处死8只并取其心脏,光镜检查的心肌病理变化,原位末端标记法（TUNEL）检测小鼠心肌组织的细胞凋亡,用空斑形成技术（PFU法）测定心肌病毒滴度。结果：抗FasL抗体治疗组小鼠死亡率、心肌病变积分、心肌细胞凋亡率、心肌病毒滴度均明显低于病毒对照组及IgG对照组（P均〈0．01）。结论：抗FasL抗体可降低小鼠CVB,病毒性心肌炎心肌内病毒滴度、减少心肌细胞凋亡和心肌损伤．     

4-1BB/4-1BBL在自身免疫性心肌炎小鼠心肌中的表达及意义

目的:探讨4-1BB/4-1BBL在实验性自身免疫性心肌炎(EAM)小鼠心肌组织中的表达及意义。方法:将提纯的猪心肌肌球蛋白和完全弗氏佐剂等体积混合成乳浊液在1 d、8 d免疫具有遗传易感性的BALB/c小鼠,建立EAM模型。对照组小鼠仅用完全弗氏佐剂皮下注射。分别于初次免疫后21 d、80 d进行心肌炎症评分及血清cTnI测定,采用免疫荧光及RT-PCR技术检测4-1BB/4-1BBL在小鼠心肌组织中的表达。结果:在急性期21 d,模型组小鼠心肌组织见不同程度的急性炎性细胞浸润和心肌细胞变性坏死、cTnI水平高于对照组(P<0.05);80d模型组小鼠心肌组织炎症减弱伴有纤维化出现、cTnI较前期降低;免疫荧光见4-1BBL在模型组心肌中表达明显,在对照组小鼠心肌中少量表达(P<0.05);21 d模型组小鼠心肌组织中4-1BB/4-1BBL基因表达水平均高于对照组(P<0.01),80 d时表达仍然升高(P<0.01)。结论:4-1BB/4-1BBL在EAM小鼠心肌中的表达是上调的,4-1BB/4-1BBL通路参与了自身免疫性心肌炎的发生发展过程。     

核因子-κB活化在小鼠CVB3病毒性心肌炎的病理作用机制研究

目的 观察Balb/c小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌组织核因子-κB活化的动态变化并探索其病理机制.方法 采用CVB3感染Balb/c小鼠,分别于感染后2 h、第3、7、14、21天取其心肌,采用凝胶滞留分析法检测NF-κB活性、TUNEL assay检测心肌组织细胞凋亡,测定心肌组织Caspase 3酶活性.结果 小鼠感染CVB3后NF-κB迅速活化,并呈持续性活化状态,主要是P65-PSO二聚体活化.TUNEL检测细胞凋亡发现病毒感染第7天病灶内炎症细胞凋亡,至第15、21天心肌细胞凋亡.Casptme 3酶活性在病毒感染后第7天开始升高,第14、21天明显升高.结论 NF-κB活化在病毒性心肌疾病的病理机制中,对炎症反应与细胞凋亡的调控均起重要作用.     

牛血清白蛋白诱导免疫性心肌炎小鼠模型的建立

目的 探讨异种动物蛋白致小鼠免疫性心肌炎的可能性,为研究自身免疫性心肌炎提供新的动物模型.方法 实验组和对照组小鼠分别于0、3、5、10d经腹腔皮下注射0.5 ml的10％牛血清白蛋白和生理盐水.分别于第14日和第28日进行检测.结果 所有实验组小鼠在初次免疫后第14日出现不同程度的心肌炎病理改变,光镜下主要表现为心肌间质淋巴细胞浸润,局灶性心肌坏死和局灶性出血,并同时存在心内膜炎和心外膜炎.电镜下见心肌细胞及线粒体肿胀、肌丝溶解和淋巴细胞浸润.免疫鼠脾脏淋巴细胞升高,心肌酶值升高.在初次免疫后第28日上述炎症及心肌坏死减轻,脾脏淋巴细胞较前下降,血清心肌酶值较前无明显变化.结论 用牛血清白蛋白能够诱导小鼠产生自身免疫性心肌炎,该动物模型病理改变典型.     

Clinical significance and pathogenic role of anti-cardiac myosin autoantibody in dilated cardiomyopathy

Objective In order to explore the possible roles played by the autoimmune mechanism in the progression of myocarditis into dilated cardiomyopathy (DCM) using an animal model, we investigated whether autoimmune myocarditis might develop into DCM.Methods Experimental Balb/C mice (n = 20) were immunized with cardiac myosin with Freund‘s complete adjuvant at days 0, 7 and 30. The control Balb/C mice ( n = 10 ) were immunized with Freund‘s complete adjuvant in the same mannere. Serum and myocardium samples were collected after the first immunization at clays 15, 21 and 120. The anti-myosin antibody was examined by enzyme-linked immunosorbent assay and immunoblotting.Results Pathological findings demonstrated that there was myocardial necrosis or inflammatory infiltration during acute stages and fibrosis mainly in the late phase of experimental group, but the myocardial lesions were not found in the control group. Autoimmunity could induce myocarditis andDCM in the absence of viral infection. High titer anti-myosin IgG antibodies were found in theexperimental group, but not in the control group. Furthermore, the anti-myosin heavy chain (200 KD)antibody was positive in 21 of 48 patients with DCM and viral myocarditis, but only 4 of 20 patients with coronary heart disease, including 1 case and 3 cases that reacted with heavy and light chains(27. 5 KD), respectively. The antibodies were not detected in healthy donors.Conclusion Cardiac myosin might be an autoantigen that provokes autoimmunity and leads to the transformation of myocarditis into DCM. Detection of anti-myosin heavy chain antibody might contribute to diagnosis for DCM and viral myocarditis.     

Myosin-induced autoimmune myocarditis in BALB/C mice

Ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓａｎｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙａｒｅｄｉｓｅａｓｅｓｏｆｕｎｋｎｏｗｎｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｒｅ－ｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｖｉｒａｌｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ（ＶＭＣ）ａｎｄｄｉｌａ...     

自身免疫性心肌炎小鼠心肌Annexin Ⅵ的表达及意义

目的:研究膜联蛋白Ⅵ(annexin Ⅵ)在自身免疫性心肌炎小鼠心肌中的表达变化,探讨其在心肌炎各阶段心功能改变中的意义。方法:人工合成多肽诱导BALB/c小鼠自身免疫性心肌炎;分别于免疫后第14,21,30,60,90,120天测心身比值,HE染色观察心肌炎症情况,免疫组化与Western blot法观察annexin Ⅵ在心肌组织中的分布与表达情况。结果:在心肌炎的炎症慢性期心肌细胞的胞浆与间质中均可表达annexin Ⅵ;与正常对照组相比,急性期annexin Ⅵ表达减少(P<0.05),随炎症迁延进展慢性期表达逐步增加(P<0.01)。结论:人工合成的多肽可以成功诱导出自身免疫性心肌炎;炎症早期annexin Ⅵ表达下降而晚期表达增加,可能参与了心功能代偿与失代偿期的变化。     

TaqMan real-time fluorescent quantitative RT-PCR in detection of macrophage in-flammatory protein-2γ mRNA in myocarditis murine

Objective: To study the role of macrophage inflammatory protein (MIP)-2γ in myocarditis pathogenesis in BALB/c mice. Methods: The relationship, between the progression of Coxsarckie virus B3 ( CVB3 ) viral myocarditis and experimental autoimmune myocarditis and MIP-2γ mRNA expression in mouse was studied by TaqMan real-timefluorescent quantitative RT-PCR. Results: MIP-2γ mRNA expression rose on 3 to 5 d after CVB3 infection, reachedpeak on 7 d, and returned to normal level until 14 d, which corresponded well with the disease course. The MIP-2γ/mRNA expression level rose significantly on the day 18 d after immunization with porcine cardiac myosin, which wasconsistent with pathological examination. Conclusion: MIP-2γ/may be involved in the pathogenesis of myocarditis.     

抗心肌肌球蛋白抗体在慢性病毒性心肌炎小鼠中的表达及卡托普利、氧化苦参碱的干预效果

目的 观察抗心肌肌球蛋白抗体(AMA)在慢性病毒性心肌炎(VMC)小鼠中的表达,比较卡托普利和氧化苦参碱的干预效果.方法 以柯萨奇病毒B_3株(CVB_3)重复增量感染(第0、14、28天,剂量分别为0.20、0.25、0.30mL)BALB/c小鼠建立慢性VMC(n=60)模型,正常对照组(n=8)同期腹腔注射等体积生理盐水.42d将慢性VMC模型组存活小鼠随机分为慢性VMC对照组(n=8)、卡托普利干预组(n=8)及氧化苦参碱干预组(n=8),干预28d后,即实验第70天杀死各组小鼠.称取小鼠心脏质量,计算心脏与体质量比值;分别以苏木素-伊红(HE)、苦味酸天狼猩红行心肌组织及心肌胶原组织特异性染色,运用图像分析软件计算心肌组织中胶原容积积分(CVF,%);酶联免疫法(ELISA)检测实验小鼠血清中AMA的表达,以光密度值(OD值)>(x-)+2s为阳性组,<(x-)+2s为阴性组.结果 慢性VMC组小鼠在实验第70天心脏与体质量比值、CVF及血清中AMA OD值均较正常对照组增高(P均<0.01).卡托普利及氧化苦参碱干预后心脏与体质量比值、CVF较慢性VMC组降低(P均<0.01),血清中AMA OD值较慢性VMC组降低(P<0.05).AMA阳性组心脏与体质量比值、CVF及OD值均较阴性组增高(P均<0.01).结论 慢性VMC小鼠血清中AMA表达增高,卡托普利及氧化苦参碱可下调AMA的表达,抑制慢性VMC小鼠的心肌重构.     

Beneficial effects of dimethyl fumarate on experimental autoimmune myocarditis

BACKGROUND: Fumaric acid esters (FAE) have been proven to be effective for the systemic treatment of psoriasis and multiple sclerosis, Th1 cell-mediated chronic inflammatory diseases, but their effect on autoimmune myocarditis has not yet been addressed. We investigated the effect of dimethyl fumarate (DMF) on myosin-induced experimental autoimmune myocarditis (EAM). METHODS: Dark Agouti (DA) rats immunized with porcine cardiac myosin were orally treated with 5 and 15 mg/kg body weight (bw) DMF either from days 0-10 (early treatment groups) or from days 10-21 (late treatment groups) after induction of EAM. All rats were sacrificed on day 21 after immunization and hearts were evaluated macroscopically and microscopically. Levels of TNF-alpha and IL-10 in serum and lymph node cells culture supernatants were detected by ELISA. RESULTS: Both early and late treatment with 15 mg/kg body weight (bw) DMF markedly reduced the severity of myocarditis by comparing the incidence, heart weight/bw ratio, macroscopic and microscopic scores, and number of OX-6+ cells in the myocardium. Further, levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in serum and culture supernatants of lymph node cells stimulated with ConA or myosin were significantly lower in DMF-treated EAM animals compared with vehicle-treated EAM rats. There was no significant difference in serum levels of interleukin-10 between DMF- and vehicle-treated EAM rats. CONCLUSIONS: These results show for the first time that DMF ameliorates experimental autoimmune myocarditis and may be acted, at least in part, by interfering with the production of TNF-alpha.