CpG ODN刺激PBMC后作用于肝癌细胞BEL-7402杀伤活性的检测

目的 :探讨合成含CpG基序的寡核苷酸 (CpGODN)在肿瘤免疫治疗中的研究。方法 :将CpGODN刺激体外培养的人外周血单个核细胞 (PBMC)后作用于肝癌细胞株 (BEL 74 0 2 ) ,采用MTT法检测其杀伤活性。结果 :加CpGODN组较单独PBMC组杀伤活性明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 :CpGODN可刺激PBMC增殖 ,提高PBMC的杀伤活性 ,从而增强机体的特异性和非特异性免疫效应     

黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用

目的：探讨黄芪总黄酮（total flavonoids of Astragalus,TFA）在体外实验条件下对人肝癌细胞（BEL-7402）生长、繁殖的影响。方法：以BEL-7402细胞为实验对象,5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照,比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后,TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响。结果：数据表明TFA处理48h半数抑制浓度（IC50）为40μg／ml,5-FU为0．3μg／ml;TFA浓度达80μg／ml时可使BEL-7402细胞生长明显受挫（P〈0．05）,有丝分裂指数下降;与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多,胞浆出现大量空泡,核固缩。结论：TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用。     

雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制.方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位.结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和...     

几种中药注射剂体外对肝癌细胞 BEL-74O2的杀伤作用

目的：了解中药注射刺体外对肝癌细胞的杀伤作用。方法：人肝癌细胞株BEL-7402体外培养，采用MTT法测定不同浓度、不同时间几种中药注射刺体外对肝癌BEL-7402细胞的杀伤作用。结果：在本实验中所用浓度和作用时间范围内榄香烯、鸦胆子显示了良好的抗肝癌作用；生脉、参附、艾迪、华蟾素、康莱特和肝力对肝癌细胞也有一定的抑制作用。结论：部分中药注射刺具有良好的体外抗肝癌作用，而另一些对肝癌的作用不明显。     

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响

目的 了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响.方法 12.5 μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备.结果 12.5 μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变.扫描电镜结果显示BEL-7402细胞胞体体积缩小,与周围细胞群脱离,表面微绒毛卷曲、畸变、小球结构逐渐增多,细胞间连接逐渐断裂,细胞间隙增宽,有凋亡小体形成.透射电镜结果显示胡桃醌作用BEL-7402细胞24 h后,细胞内质网扩大,线粒体结构疏松,胞核核仁裂解,凋亡小体形成.结论 胡桃醌能有效改变人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构,诱导细胞凋亡.     

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 ,低剂量可诱导细胞凋亡     

稀土离子对BEL-7402细胞蛋白质构象变化的影响

应用傅立叶变换红外光谱 (FT IR)方法 ,考察了稀土离子作用于BEL 740 2细胞后所引起的整个细胞蛋白质构象的变化。结果 :在Hepes缓冲液介质中 ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1La3+对BEL 740 2细胞蛋白二级结构的影响随时间变化 ,作用 1h没有影响 ;作用 2h和 3h结果类似 ;作用 3h ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1的不同稀土离子相比较 ,使Random上升的程度是Yb3+>La3+>Gd3+。提示 :稀土离子可使BEL 740 2细胞蛋白质构象发生变化 ,这种变化可能是由于蛋白质很大一部分氢键作用发生了变化和蛋白质发生了聚集造成的     

新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法 体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine,MDC）染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3）和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素（rapamycin,Rap）和自噬抑制剂氯喹（chloroquine,CQ）后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加（P<0.05）,LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。     

川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的影响,研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为：亲本组、耐药组、逆转组（耐药＋TMP）、阳性对照组（耐药＋维拉帕米）、二抗阴性对照组,用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组（P〈0.01）;耐药＋TMP组和耐药＋维拉帕米组均显著低于耐药组和亲本组（P〈0.01）。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组（P〈0.01）;TMP组、维拉帕米组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组（P〈0.01）。结论 TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达,增加阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用,从而增加对肿瘤细胞的抑制率,提高化疗疗效。     

MiR-503靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性

目的：探讨miR-503是否能通过调控bcl-2的表达增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性。方法：采用实时荧光 定量PCR检测肝癌细胞中miR-503和bcl-2 mRNA的表达水平;Western印迹观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;脂质 体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402细胞;生物信息学软件预测miR-503潜在靶基因;双荧光素酶活性验证 miR-503潜在的靶位点;MTT法检测细胞药物敏感性的改变。结果：相比于HL-7702细胞,miR-503在BEL-7402细胞中 表达水平下调,Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503能够与bcl-2靶向结合,下调bcl-2的表达;miR-503转染组的细胞活 力较miRNA阴性对照组显著降低。结论：MiR-503可能通过靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的药物敏感性,抑制肝 癌细胞增殖。     

三种蟾毒单体对SMMC-7721和BEL-7402人肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨蟾蜍中主要蟾毒内酯类成分蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的抗肝癌作用及机制。方法：以SMMC—7721、BEL—7402人肝癌细胞为靶细胞，以丝裂霉素为阳性对照药物，应用四甲基偶氟唑盐比色法、锥虫蓝染色和DNA染色分析法观察这3种蟾毒单体对肝癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果：蟾毒灵和华蟾酥毒基对上述肝癌细胞具有明显生长抑制作用，华蟾酥毒基较蟾毒灵作用略弱，但两者达到相同生长抑制效果所需浓度均低于丝裂霉素，酯蟾毒配基只有在较高浓度下才显示对肝癌细胞的生长抑制作用；不同浓度蟾毒灵、华蟾酥毒基对人肝癌细胞细胞膜具有破坏作用；可使人肝癌细胞阻止于G2／M期，使处于S期的细施比例降低，并有明显诱导肝癌细胞凋亡作用。结论：蟾毒灵、华蟾酥毒基对上述人肝癌细胞具有明显生长抑制作用，具有对肝癌细胞膜的直接破坏作用和诱导凋亡作用；酯蟾毒配基抗肿瘤作用较弱。     

奥曲肽对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的实验研究

目的 观察生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的影响.方法 培养人肝癌细胞株BEL-7402至对数生长期.MTT比色分析法测定OCT对BEL-7402细胞增殖的影响;流式细胞术分析OCT在10～6mol/L时对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;HE染色观察10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学改变.结果 1)OCT在一定浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制肝癌BEL-7402细胞的生长;2)BEL-7402细胞经10-6mol/L OCT作用后细胞周期发生明显改变.3)10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学发生明显改变.结论 OCT在抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡中起着重要的作用.     

Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、Caco2细胞的生长抑制作用

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系Caco2生长的抑制作用.方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、Caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照.通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况.结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异.转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、Caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(P＜0.05),且Bcl-2 shRNA抑制Caco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(P＜0.05).MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA载体入BEL-7402、Caco2细胞在72、96 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:Bcl-2 shRNA可特异性地抑制BEL-7402、Caco2细胞生长.     

MiR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响

目的 探讨miR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的影响。方法采用qRT-PCR检测BEL-7402细胞与BEL-7402/5-FU细胞中miR-195的表达水平。将miR-195质粒载体瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果相比于BEL-7402细胞,miR-195在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调;miR-195转染组的细胞增殖抑制率较miRNA阴性对照组及未转染组明显增高。结论MiR-195能够增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖。     

缺氧时三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402生长的影响

目的 探讨由二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性缺氧条件下,不同浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法,测定常氧和缺氧条件下,不同浓度As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用.结果 不同浓...     

抗癌中药的研究进展

据WHO报道，仅2001年约有1400万人患癌症，目前约有4600多万人受癌症的煎熬。预测今后20年中，每年将有900万人患癌症。长期以来，国际社会花费巨资用于寻找治疗癌症的新药及方法。各种新技术、新方法，尤其是各种现代影像技术、内窥镜技术和免疫学技术的研究，大大提高癌症的早期诊断能力，如免疫疗法（各种生物反应调节剂，单克隆抗体及其交联物的治疗）、加温疗法、光敏疗法等不断涌现，使部分癌症的治愈率有所提高。然而由于化疗药物固有的毒副作用，使其在临床应用受到诸多限制，而传统中草药在这方面具有显著的优势，使得各国学者把注意力逐渐转向了中草药领域，并已取得了可喜的成就，现试将近年来有关抗癌中草药中植物药部分的抗癌作用研究进展作一简要综述。     

胡桃醌不同给药途径对人肝癌细胞BEL-7402裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的采用裸鼠皮下移植瘤模型,通过不同给药途径对胡桃醌抗肿瘤活性和毒性进行评价。方法建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射和局部注射两个给药途径观察胡桃醌抑制肿瘤生长的效果。结果①以600、300和150μg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,发现该剂量胡桃醌对肿瘤生长没有明显的影响;NK细胞活性检测发现,600、300μg/kg胡桃醌对裸鼠免疫功能有影响(P均<0.01),150μg/kg胡桃醌则没有影响(P>0.05);与阳性对照组(5-Fu)相比,600μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异无显著性(P>0.05),300和150μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异有显著性(P<0.05,P<0.01),结果提示胡桃醌对小鼠免疫系统有一定的损伤作用。②以4.5、3和1.5 mg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,抑瘤率分别为为78.24%、66.57%、48.94%;4.5、3 mg/kg胡桃醌的抑瘤作用可与阳性对照组比拟(P均>0.05)。但4.5 mg/kg胡桃醌组裸鼠出现明显的皮下脂肪减少、消瘦,并有死亡现象。③以pH...