Bcl-2、Bax在百草枯诱导大鼠视网膜损伤中的表达

目的观察百草枯对SD大鼠视网膜损伤的作用及对Bcl-2、Bax表达的影响,并探讨Bcl-2、Bax在百草枯诱导的视网膜细胞凋亡中的作用及意义。方法将大鼠随机分成对照组和模型组,对照组玻璃体腔注射0.1 mol.L-1 PBS,模型组玻璃体腔注射一定浓度的百草枯,分别在12 h、1 d、2 d、5 d处死动物,HE染色观察视网膜的损伤程度,TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡情况,同时采用Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①HE染色观察随着时间的增加,外核层逐渐变得稀疏并观察到核固缩,内核层可观察到核固缩,神经节细胞出现空泡样,5 d时内丛状层消失,外核层内核层紊乱。②TUNEL法检测凋亡结果:对照组没有发现凋亡阳性细胞,PQ可以诱导视网膜细胞凋亡,2 d凋亡指数达到高峰③Western blot结果:百草枯诱导的大鼠视网膜损伤可上调Bcl-2的表达,在1 d时达到高峰,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),2 d开始下降;同时上调Bax的表达,在2 d时达到高峰,5 d时下降,各组之间差异均具有显著性(P<0.01);下调Bcl-2/Bax的比值,在2 d时达到最低,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),到5 d时升高,与对照组比仍较低(P<0.01)。结论百草枯诱导了视网膜细胞的凋亡,可能是通过调节Bcl-2和Bax的表达来诱导视网膜细胞的凋亡,Bcl-2/Bax也与凋亡的发生密切相关。     

即早基因在N-甲基-N-亚硝脲诱导SD大鼠视网膜变性中的表达

目的研究N-甲基-N-亚硝脲(N-m ethyl-N-n itrosourea,MNU)对SD大鼠视网膜毒性的分子机制。方法于♀SD大鼠出生后50 d,一次腹腔注射(ip)MNU 60 mg.kg-1。在MNU处理不同时间后,处死大鼠,取眼球。进行组织学检查;TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡;RT-PCR法检测基因c-jun和c-fos的表达。结果MNU作用24 h后,视网膜光感受器外节部定向紊乱;7 d后,外颗粒层和光感受层几乎完全消失。MNU作用12 h后,光感受器细胞开始发生凋亡,24 h达高峰。MNU可时间依赖性地上调即早基因的表达。结论MNU对视网膜的毒性作用是通过增加基因c-jun和c-fos的表达,从而诱导光感受器细胞发生凋亡。     

灵芝多糖和当归多糖促进人外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ

目的探讨中药灵芝多糖和当归多糖对人外周血活化T淋巴细胞的免疫调节作用。方法分离健康人外周血T淋巴细胞并分为空白对照组、灵芝多糖组和当归多糖组,免疫荧光观察各组T细胞PI3K和Caspase-3蛋白的表达;MTT法检测培养72 h后各组T细胞的增殖水平;流式细胞术分析各组T细胞凋亡率和细胞周期变化;ELISA检测各组T细胞培养上清液的IFN-γ含量。结果灵芝多糖组和当归多糖组T细胞均表达PI3K,细胞增殖OD值均明显高于空白对照组(P<0.01,P<0.05);灵芝多糖组T细胞Caspase-3蛋白表达的平均光密度值明显低于空白对照组(P<0.05),T细胞凋亡率也低于空白对照组,分别为18.23%和29.74%;灵芝多糖组和当归多糖组T细胞培养上清液IFN-γ的含量明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.05)。结论灵芝多糖和当归多糖均明显促进外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ,灵芝多糖还能下调Caspase-3蛋白表达并抑制T淋巴细胞凋亡。     

α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激及细胞凋亡的影响

目的 探讨氧化应激在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的作用以及α-硫辛酸的肾保护作用.方法 腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,并将糖尿病大鼠分为糖尿病非干预组(DM组)、α-硫辛酸干预组(LA组),非糖尿病正常大鼠作对照(NC组),每组10只.12周时检测肾皮质中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;原位末端标记(TUNEL)法检测肾脏细胞凋亡,免疫组化法检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达.结果 与NC组相比,DM组肾皮质MDA含量显著升高(P<0.01),SOD活性显著下降(P<0.01);肾脏凋亡细胞数及Caspase-3表达均显著增加(P<0.01).α-硫辛酸干预后可改善上述指标(P<0.01).结论 糖尿病可引起肾脏高水平的氧化应激和过度的细胞凋亡.α-硫辛酸通过抑制氧化应激和下调Caspase-3的表达来干预细胞凋亡发挥肾保护作用.     

川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea，MNU)致大鼠视网膜损伤的作用。方法 大鼠生后47 d，腹腔注射不同剂量的川芎嗪注射液；50 d注射MNU 60 mg·kg^-1。测量视网膜总厚度；TUNEL和RT-PCR法分别检测细胞凋亡、c-jun和c-fos的表达。结果川芎嗪注射液可剂量依赖性地增加周边视网膜总厚度和降低凋亡指数，并抑制MNU诱导的即早基因表达。结论川芎嗪通过下调基因c-jun和c-fos的表达，抑制光感受器细胞凋亡，从而部分保护MNU引起的视网膜损伤。     

川芎嗪对小鼠颅脑损伤后大脑组织细胞凋亡相关因子的影响

目的:研究川芎嗪对小鼠颅脑损伤(CI)后的细胞凋亡通路中相关蛋白及其mRNA的影响,揭示川芎嗪治疗颅脑损伤的可能作用机制。方法:将50只昆明种小鼠,随机分成假手术组、模型组、川芎嗪治疗组(40,80,160 mg·kg^-1)五组,采用改良的Feeney自由落体损伤装置建立小鼠CI模型。造模3 d后开始灌胃治疗,每日1次,其他各组给予等量生理盐水,连续用药20 d;蛋白免疫印迹和RT-PCR技术分别检测小鼠大脑组织中凋亡相关蛋白及其mRNA(Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3)的表达量。结果:与假手术组相比,模型组小鼠大脑的凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,治疗组大脑凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达降低,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01)。结论:川芎嗪可能通过上调Bcl-2蛋白及其mRNA的表达,抑制Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白及其mRNA的表达,减少大脑组织细胞凋亡,保护大脑组织。     

色素上皮衍生因子对大鼠视神经夹伤模型视网膜组织中Caspase-3和Bax表达的影响

目的 探讨色素上皮衍生因子对大鼠视神经夹伤模型视网膜组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax表达的影响.方法 90只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、色素上皮衍生因子(PEDF)组,每组30只.除空白对照组外,均建立视神经夹伤大鼠模型,均取左侧眼球为标本,造模成功后,模型组玻璃体腔内注射平衡盐溶液5μl,PEDF组玻璃体内注射PEDF 5μl(浓度0.2μg/μl),模型组和PEDF组1周、2周再分2次分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μl和PEDF 5μl.3组大鼠均在第3周时取视网膜组织,电镜下观察视网膜组织超微结构的改变,采用免疫组化染色法观察Caspase-3、Bax表达情况,以及视网膜神经节细胞凋亡情况.结果 透射电镜观察模型组与PEDF组同空白对照组相比,均存在线粒体水肿、胞质浓缩轴突肿胀.同模型组相比,PEDF组胞质浓缩轴突肿胀轻,线粒体结构较完整.TUNEL法细胞凋亡监测:空白对照组染色阴性,模型组和PEDF组均可检测到染色阳性的RGCs,PEDF组TUNEL染色阳性的RGCs表达较模型组显著降低(P<0.05).PEDF组Caspase-3呈弱阳性表达,模型组呈强阳性表达,PEDF组Caspase-3光密度值显著低于模型组(P<0.05);模型组、PEDF组Bax表达高于空白对照组(P<0.05),PEDF组Bax表达又低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Caspase-3、Bax是诱导RGCs细胞凋亡的重要因子,采用PEDF干预治疗能够降低Caspase-3、Bax表达,减轻RGCs损伤.     

非促分裂haFGF对MNU所致大鼠视网膜损伤的保护作用

目的研究非促分裂haFGF(nm-haFGF)对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)所致大鼠视网膜损伤的保护作用及其作用机制。方法通过ip MNU (60 mg·kg^-1)复制大鼠视网膜损伤模型，0和12 h后，玻璃体腔内注射不同剂量nm-haFGF。24 h和7 d后，测量周边视网膜总厚度和外视网膜厚度、光感受器细胞凋亡指数及视网膜Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果MNU作用24 h后，nm-haFGF组周边视网膜的凋亡指数显著降低(P<0.01)；7 d后，nm-haFGF组周边视网膜光感受器细胞数明显增多，且周边视网膜总厚度和外视网膜厚度增加(P<0.01)；不同剂量nm-haFGF可调节Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结论nm-haFGF 能部分抑制MNU引起的SD大鼠视网膜损伤，其作用机制可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关。     

葛根素对遗传性视网膜色素变性rd小鼠的干预作用及其抗凋亡机制研究

目的观察葛根素对视网膜色素变性rd小鼠外核层细胞和视网膜光感受器外段的病理、超微结构、凋亡和Bcl-2表达的影响,探讨葛根素对rd小鼠的干预作用和干预机制。方法rd新生小鼠随机分为2组,实验组和对照组。实验组小鼠从出生时腹腔注射葛根素80mg.kg-1,每天2次,至生后35d,对照组同时注射等量生理盐水。分别在用药后当日和3、7、14、21、28、35d取眼球,固定后,常规病理和电镜观察。用TUNEL方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组化方法测定Bcl-2在视网膜的表达。结果病理结果显示,经葛根素治疗后14、21、28、35d,rd小鼠光感受器细胞层数与未用药的对照组相比较明显增加,P<0.01。电镜结果显示,葛根素可减缓rd小鼠光感受器细胞及其外段盘膜部位线粒体的病变,减少盘膜和外界膜的破坏。rd小鼠经葛根素药物治疗后d7、14、21、28、35,光感受器细胞的凋亡率比未用药的对照组明显减少,P<0.01;d3、7、14、21、28、35,Bcl-2在视网膜外核层及光感受器细胞外段的表达明显增强,P<0.05或P<0.01。结论葛根素可延缓rd小鼠视网膜外核层细胞和视网膜光感受器外段损伤。     

灵芝孢子油对人肺腺癌LTEP-a2细胞凋亡的影响

目的 观察灵芝孢子油对人肺腺癌细胞LTEP-a2增殖、凋亡与miR-16及其靶基因表达的影响,从miRNA角度揭示灵芝孢子油的抗肿瘤机制.方法 灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞LTEP-a2 24和48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,real-time PCR 检测miR-16及其靶基因bcl2和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 灵芝孢子油呈剂量、时间性地抑制人肺腺癌LTEP-a2细胞的增殖;当灵芝孢子油浓度达到2 μL·mL-1,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油可显著上调LTEP-a2细胞中miR-16的表达并相应下调bcl2和VEGF基因的表达.结论 灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞LTEP-a2细胞增殖,引起细胞形态学改变.其作用机制之一是上调miR-16的表达、下调Bcl2和VEGF的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的效果.     

丙泊酚对大鼠肠缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的探讨丙泊酚对大鼠肠缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡及Caspase-3的影响。方法成年健康Wistar大鼠42只,随机分为3组:实验对照组(C组,6只)、肠缺血再灌注组(IR组,18只)、丙泊酚干预组(P组,18只)。各组根据再灌注时间分为1,3,6h三个时相。通过夹闭肠系膜上动脉制作肠缺血再灌注损伤模型,实验结束后即刻取肝左叶做标本。用免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白表达量,末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测肝细胞凋亡指数(AI)。结果与C组比较,IR组和P组肝组织Caspase-3蛋白含量、AI均增加(P<0.05);与IR组比较,P组Caspase-3蛋白表达减少、AI减少(P<0.05)。结论丙泊酚可以下调大鼠肠缺血再灌注时Cas-pase-3蛋白表达,使肝细胞凋亡减轻,从而对肝损伤有一定的保护作用。     

基于nNOS途径的天麻素注射液改善甲基苯丙胺诱导大鼠神经毒性损伤的作用机制研究

目的:研究天麻素注射液通过神经型一氧化氮合酶(nNOS)途径改善甲基苯丙胺诱导大鼠神经毒性损伤的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为对照组、甲基苯丙胺组、常规剂量天麻素组、加倍剂量天麻素组、阴性对照(NC)腺病毒组、NC腺病毒+甲基苯丙胺组、NC腺病毒+天麻素组、n NOS腺病毒+天麻素组,每组10只。对照组大鼠腹腔注射生理盐水,每日2次;甲基苯丙胺组大鼠腹腔注射甲基苯丙胺(7.5 mg/kg),每日2次;常规剂量、加倍剂量天麻素组大鼠提前30 min分别腹腔注射不同剂量天麻素注射液(10、20 mg/kg),每日1次,再按甲基苯丙胺组方法注射甲基苯丙胺。NC腺病毒组大鼠在纹状体一次性注射NC腺病毒(4.8×107PFU)3μL+腹腔注射生理盐水,每日2次;NC腺病毒+甲基苯丙胺组大鼠同法注射NC腺病毒,然后腹腔注射甲基苯丙胺(7.5 mg/kg),每日2次;NC腺病毒+天麻素组大鼠同法注射NC腺病毒+甲基苯丙胺,同时在注射甲基苯丙胺之前30 min腹腔注射天麻素注射液(20 mg/kg),每日1次;nNOS腺病毒+天麻素组大鼠同法注射nNOS腺病毒和甲基苯丙胺,同时在注射甲基苯丙胺之前30 min腹腔注射天麻素注射液(20 mg/kg),每日1次。各组大鼠每次腹腔注射体积均为1 mL/100 g,均连续注射给药3 d。观察大鼠刻板行为并评分,检测大鼠纹状体的细胞凋亡率、凋亡相关因子[Bcl-2、Bax、活化胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)]蛋白表达量、氧化应激相关因子[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)]水平,以及一氧化氮(NO)水平和nNOS蛋白表达量。结果:与对照组比较,甲基苯丙胺组大鼠的刻板行为评分和纹状体的细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3、nNOS蛋白表达量及MDA、NO水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GPx水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);与甲基苯丙胺组比较,常规剂量、加倍剂量天麻素组大鼠的刻板行为评分和纹状体的细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3、n NOS蛋白表达量及MDA、NO水平均显著降低,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GPx水平均显著升高,且加倍剂量天麻素组大部分上述指标均显著优于常规剂量组(P<0.05或P<0.01)。与NC腺病毒组比较,NC腺病毒+甲基苯丙胺组大鼠纹状体的细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3、n NOS蛋白表达量及MDA、NO水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GPx水平均显著降低(P<0.01);与NC腺病毒+甲基苯丙胺组比较,NC腺病毒+天麻素组大鼠纹状体中细胞凋亡率,Bax、Cleaved caspase-3、n NOS蛋白表达量以及MDA、NO水平均显著降低,Bcl-2蛋白表达量以及SOD、GPx水平均显著升高(P<0.01);与NC腺病毒+天麻素组比较,n NOS腺病毒+天麻素组大鼠纹状体中的细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3、n NOS蛋白表达量及MDA、NO水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GPx水平均显著降低(P<0.01)。结论:天麻素注射液对甲基苯丙胺诱导的大鼠神经毒性损伤具有明显的保护作用,且这一作用与抑制n NOS介导的细胞凋亡及氧化应激反应有关。     

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞株143B增殖和凋亡的作用

目的观察双氢青蒿素(dihydroarteminin,DHA)对人骨肉瘤细胞143B的增殖和凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞株143B;MTT比色法和克隆形成实验检测不同浓度DHA对骨肉瘤细胞存活与克隆形成能力的影响。Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态变化。构建β-Catenin荧光素酶报告基因(β-Catenin-Luc,p-Top)检测DHA作用143B后细胞内β-Catenin活性变化。不同浓度的DHA作用后,Western blot检测与细胞增殖(如PC-NA、Cyclin D1、c-Myc)、凋亡(如Bad、Bcl-2、Caspase-3)密切相关的标志物蛋白质表达变化。结果 DHA作用于143B细胞24 h后,MTT结果显示143B细胞的增殖活性受到明显抑制,且其克隆形成能力减弱(P<0.05),在DHA浓度达35μmol.L-1时,抑制效率最明显。Western blot结果显示PC-NA表达下调;而促凋亡蛋白Bad和Caspase-3表达上调,Bcl-2蛋白表达明显减弱。结论双氢青蒿素具有较明显的抑制人骨肉瘤细胞的增殖且促进其凋亡的作用,可能通过下调细胞增殖相关蛋白PCNA、Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bad和Caspase-3,启动凋亡程序,致143B细胞发生凋亡。     

Tetramethylpyrazine protected photoreceptor cells of rats by modulating nuclear translocation of NF-κB

Aim: To evaluate the effect of tetramethylpyrazine (TMP) injection on retinal damage induced by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) in rats and on nuclear factorkappa B (NF-κB) family members. Methods: Female Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into groups: (i), control group; (ii), model group; and (iii), TMP-injection groups, in which the rats were subdivided into 40 mg/kg, 80 mg/kg and 160 mg/kg groups. Drugs were injected ip into 47-day-old SD rats once a day. At 50 days of age, all rats in the model group and drug groups also received a single ip injection of 60 mg/kg MNU. Rats in group 1 received ip injection of physiological saline. All rats were killed at different times after MNU or physiological saline treatment. The apoptotic index of photoreceptor ceils was calculated by TUNEL labeling; retinal damage was evaluated based on retinal thickness and the expression of NF-nB family members was detected by Western blot. Results: TMP injections, in a dose-dependent manner, suppressed photoreceptor cell apoptosis and decreased its loss in the peripheral retina. As compared with the MNU-treated group, TMP injection at a dose of 160 mg/kg also timedependently upregulated the NF-κB/p65 protein level in the nucleus and downregulated the IκBα protein level in the cytoplasm. However, no protective effect of TMP injection on MNU-induced central retinal damage was found. Conclusion: TMP injection partially protects against MNU-induced retinal damage by upregulating the nuclear translocation of p65 to inhibit photoreceptor cells apoptosis.     

瓜子金皂苷己对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响,并且探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,JC-1染色倒置显微镜检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测Caspase-3蛋白的水平。结果 500μmol.L-1MPP+作用PC12细胞48 h,能明显抑制细胞生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,同时降低MMP,增加活性Caspase-3的蛋白水平。同时给予不同浓度PS-F处理,PC12细胞存活率增加(P<0.01);凋亡细胞量减少;MMP增高;活性Caspase-3蛋白水平降低(P<0.01)。结论 PS-F能抑制MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,其作用机制可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,降低活性Caspase-3蛋白水平有关。     

激动γ-羟基丁酸受体对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经细胞凋亡的影响

目的研究γ-羟基丁酸受体(gamma-hydroxybutyrate receptor,GHBR)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经细胞凋亡的影响。方法成年♂SD大鼠,分为假手术组(Sham),缺血/再灌注(Isc/R),NCS-356160、320、640μg.kg-1组(N1、N2、N3),NCS-382640+NCS-356640μg.kg-1组(NCS-382+N3),尼莫地平600μg.kg-1组(Nim)。采用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。再灌24h后,一部分动物应用免疫组织化学染色法测定大鼠缺血侧大脑皮质Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白的表达,另一部分动物应用流式细胞仪测定神经细胞凋亡率。结果NCS-356160、320、640μg.kg-1及Nim增加缺血神经细胞的Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,降低Bax、Caspase-3阳性细胞数和细胞凋亡百分率,上述作用可被NCS-382拮抗。结论激动GHBR可抑制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤引起的细胞凋亡。