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McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达 总被引:2,自引:3,他引:2
T淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程,为了使T细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能,采用抗CD3、CD28、CD80(B71)、CD2、CD58McAb分别刺激健康人PBLs后作用肝癌细胞,对作用前后PBLs用FACS进行表型分析,结果发现:作用后CD3和CD8分子表达比作用前明显增高,而CD4分子无显著变化,同时基因家族采用RTPCRSouthern印迹分析TCRVβ基因1~20亚家族表达水平与特征,健康人PBLs分别加入IL2、PHA、抗CD3和CD3+CD28、CD28+CD80、CD2+CD58作用肝癌细胞(BEL7402)前表达水平平均约为5%,作用BEL7402后表达水平约为13%~25%,其特征为Vβ7增高,这提示在癌抗原的参与下McAb共刺激的T细胞活化,TCR接受APC相应抗原的刺激,具有该TCR的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的T细胞克隆,发挥其识别和杀伤癌细胞的作用,这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。 相似文献
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识别肝癌抗原的TCRVβ7亚家族克隆转基因后的生物学作用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的研究将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后对肝癌细胞的生物学作用。方法用RT-PCR的方法扩增出TCRVβ7基因,克隆到表达载体pLXSN上,用脂质体转染的方法,将重组载体导入淋巴细胞,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞,淋巴细胞用流式细胞仪测表型,肝癌细胞作超微结构分析。结果具有TCRVβ7基因表达的淋巴细胞显著增多,肝癌细胞出现凋亡。结论TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。 相似文献
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目的:研究将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后对肝癌细胞的生物学作用。方法:用RT-PCR的方法扩增出TCRVβ7基因,克隆到表达载体pLXSN上,用脂质体转染的方法,将重组载体导入淋巴细胞,然后淋巴细胞作用于肝癌细胞,淋巴细胞用流式细胞仪测表型,肝癌细胞作超微结构分析。结果:具有TCRVβ7基因表达的淋巴细胞显著增多,肝癌细胞出现凋亡。结论:TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。 相似文献
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目的:探讨转染hTCRVβ8.4基因后健康人PBMC的免疫学特性及其对起源于乙肝病毒的肝癌细胞株BEL-7402杀伤活性的改变。方法:将hTCRVβ8.4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)上,并转染健康人PBMC,流式细胞术检测转染后PBMC中TCRVβ8.4蛋白表达,乳酸脱氢酶释放活性法检测重组质粒转染后PBMC对癌细胞BEL-7402的杀伤活性。结果:TCRVβ8.4在基因转染后淋巴细胞中表达显著增高;与BEL-7402共培养后,基因转染组CD3^ TCRVβ8.4T细胞增殖明显高于对照组;BEL-7402刺激后免疫细胞活化,表达CD122的细胞数量增多,表达CD19(B细胞活化的标志)的B细胞增加;重组质粒转染后,PBMC对肝癌细胞BEL-7402杀伤活性增强;透射电镜观察发现,重组质粒转染的PBMC使BEL-7402凋亡。结论:hTCRVβ8.4基因修饰可显著增强淋巴细胞在超抗原BEL-7402刺激下的增殖及免疫细胞活化,基因修饰后T淋巴细胞杀伤活性明显增强。 相似文献
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三羟异黄酮诱导人肝癌细胞凋亡及对相关基因的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨三羟异黄酮(genistein)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将三羟异黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721),MTT法检测增殖抑制率,光镜下观察凋亡细胞的形态,凝胶电泳分析DNA改变;通过免疫组化技术检测凋亡基因蛋白P53、survivin和caspase-3的表达。结果三羟异黄酮呈浓度和时间依赖性抑制人肝癌细胞的增殖。5mg/L、10mg/L和20mg/L三羟异黄酮作用48h对肝癌细胞的抑制率分别为9·86%、19·13%和25·64%。形态学显示,三羟异黄酮能诱导SMMC-7721细胞凋亡,细胞DNA电泳出现典型梯状条带;且凋亡相关基因蛋白survivin表达明显减少,而P53和caspase-3的表达增加。结论三羟异黄酮能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制之一可能是下调survivin基因蛋白表达,增强P53和caspase-3的表达。 相似文献
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NOD/SCID小鼠抗原对脐血T细胞上TCRVβ亚家族基因克隆性的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:了解脐血单个核细胞(MNC)体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后, TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点.方法:将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原, 分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养.第15天和第20天, 分别收集细胞提取RNA, 用RT-PCR扩增人TCRVβ亚家族基因, 并用基因扫描进行T细胞克隆性分析.结果:扩增前脐血T细胞表达大部分Vβ亚家族, 经NOD/SCID小鼠抗原诱导后, TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达, 某些Vβ亚家族基因(Vβ10、 11)呈寡克隆性增殖, 而某些Vβ亚家族基因(Vβ2、 15、 16、 19)呈寡克隆表达的趋势.结论:NOD/SCID小鼠抗原可刺激脐血T细胞选择性增殖, 提示在建立人源化NOD/SCID小鼠免疫模型时应考虑所存在的GVHR问题. 相似文献
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细胞凋亡基因Fas的研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
细胞凋亡的研究方兴未艾,日益引起人们的关注。本文扼要介绍了细胞凋亡相关基因Fas的基因结构,表达调控,信号传导在细胞凋亡中的作用及与某些人类重大疾病的关系。 相似文献
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目的: 研究肝癌特异性识别基因TCRVβ7.1表达重组体转染外周血单个核细胞(PBMCs)后对T细胞细胞因子表达的影响和信号通路的激活作用。方法: 以肝癌特异性T细胞受体Vβ7.1转染PBMCs,流式细胞仪检测TCRVβ7.1表达量;Western blotting检测ERK1/2表达量及磷酸化水平(p-ERK)的改变;用ELISA法检测白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)的表达量。结果: TCRVβ7.1基因转染健康人PBMCs并得到有效表达,转染TCRVβ7.1基因的PBMCs 与肝癌细胞共培养后ERK蛋白磷酸化水平明显高于未转染组(P<0.01)。p-ERK1/2水平与T细胞激活有关。ELISA结果表明,转染PBMCs细胞与肝癌细胞共培养后,IFN-γ水平明显高于未转染组,而IL-4无明显改变。结论: TCRVβ7.1转染PBMCs与肝癌细胞共培养后,ERK信号通路被激活,IFN-γ表达增高。 相似文献
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目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白-1(SOCS-1)蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。 相似文献
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目的 研究B细胞抗原受体(BCR)介导的细胞凋亡,探索其可能的信号传导通路。阐明B细胞凋亡的分子机制。方法 ^3H掺入法检测细胞生长,应用FACS方法分析细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测anti-IgM刺激引起Daudi细胞信号分子的变化。结果 anti-IgM可导致人B淋巴瘤Daudi细胞发生凋亡。细胞凋亡的数量与anti-IgM浓度呈正相关,Western blot结果显示,anti-IgM刺激引起Daudi细胞内氨酸蛋白分子磷酸化水平的变化速度与浓度相关;但随时间的延长,变化状况趋于稳定;在48-72h,许多被激活的,呈现磷酸化的栈氨酸蛋白分子又回复到低磷酸化或去磷酸化的静止状态,另外,虽然JNK1和ERK2蛋白水平未发生明显改变,但JNK/SAPK的重要下游分子之一,c-Jun的蛋白表达水平及其63和73位点的丝氨酸磷酸化水平立即长高并维持在高水平状态。结论 anti-IgM刺激激活JNK/SAPK,JNK/SAPK通路可能参与了anti-IgM引起的Daudi细胞的凋亡过程。 相似文献
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McAb共刺激PBLs膜表面分子表达与肝癌细胞凋亡的相关性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究McAb共刺激PBLs前后的表型变化及与肝癌细胞凋亡的相关性。方法采用流式细胞仪分析PBLs被刺激前后的表型,用电镜超微结构和DNA梯子电泳观察肝癌细胞凋亡。结果CD3、CD4分子表达高于刺激前约10%,肝癌细胞出现凋亡,细胞核固缩、边聚、裂解。同时也出现典型的DNA梯子。而肝癌患者用共刺激PBLs后,CD3和CD8增高(P<0.05)。结论共刺激使共刺激信号分子增加,抗原呈递能力增强,也使细胞因子分泌增加,这些因素促使肝癌细胞凋亡,而肿瘤患者T细胞增加时向CD8 相似文献
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采用抗胸腺细胞球蛋白(ATG)和环胞菌A (CyA)为主的治疗方案,约50%~75%的再生障碍性贫血(AA)患者可获缓解,鉴此,患者体内异常活化的淋巴细胞在本病的发生发展起关键作用。本研究采用定量PCR技术(Q-PCR)测定了AA患者T细胞抗原受体(TCR)的25对Vβ等位基因,对比分析其它自身免疫性疾病的TCRVβ变化,探讨免疫功能在AA发病中的作用。 相似文献
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目的:探讨低毫安(10 mA)电化学疗法对体外肝癌细胞凋亡的诱导及对细胞周期的影响。材料和方法:将等量肿瘤细胞置于细胞培养板.按随机原则分为对照组和治疗组,治疗组按电量不同又分为四组:3C、5C、10C、20C(C为电量库仑)电化学治疗后6小时和24小时用流式细胞仪分别检测各组细胞周期变化及凋亡率。结果:低毫安(10mA)电化学治疗后6小时检测结果:肝癌细胞凋亡率及细胞周期无明显改变。治疗后24小时检测结果:治疗组凋亡率明显增高(P<0.05),各期细胞比例随电量的增加处于G_0-G_1期的比例有逐渐增高趋势,而S期细胞比例有下降趋势。结论:低毫安电化学治疗在6小时内对肝癌细胞凋亡率及对细胞周期的影响不明显,24小时后凋亡率及细胞周期变化明显。 相似文献
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TCR Vβ7基因转染PBLs的表达及抗肝癌的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后研究肝癌细胞的生物学作用。 方法 :用RT PCR的方法扩增出TCRVβ7基因 ,克隆到表达载体pLXSN上 ,用脂质体转染的方法 ,将重组载体导入淋巴细胞 ,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞 ,淋巴细胞用流式细胞仪测表型和用激光共聚焦检测TCRVβ7 1基因的表达 ,肝癌细胞作超微结构分析。 结果 :TCRVβ7基因表达的跨膜蛋白显著增多 ,而且淋巴细胞增多 (P <0 0 5 ) ,肝癌细胞出现凋亡。结论 :TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。 相似文献