汉防己甲素对人鼻咽癌细胞株的放射增敏作用及其机制

 目的：探讨汉防己甲素（Tet）对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放射增敏作用及其机制。方法：MTT法检测细胞增殖抑制作用,克隆形成实验比较细胞放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布。结果：Tet对CNE1和CNE2细胞的最大非细胞毒性剂量分别为1.5 μmol/L和1.8 μmol/L,该浓度的Tet联合放射线照射与单纯放射线照射相比,在培养至第4~6 d能明显抑制细胞增殖（P<0.01）。CNE1和CNE2细胞单纯放射线照射组平均致死剂量（Do）分别为(1.26±0.02) Gy和(2.27±0.04) Gy,Tet联合放射线照射组Do分别为(0.73±0.05) Gy和(1.61±0.08) Gy,放射增敏比分别为1.73和1.40（P<0.05）。单纯放射线照射组CNE1和CNE2细胞周期分布以G₂期为主,分别为(42.62±2.07)%和(34.82±2.74)%,Tet联合放射线照射组CNE1和CNE2 G₂期比例分别为(17.02±1.87)%和(19.64±4.82)%（P<0.01）。结论：Tet能增加人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2对放射线照射的敏感性,机制可能与去除放射线照射诱导的G₂期阻滞有关。     

榄香烯对人胶质瘤U251细胞的放射增敏机制

目的:探讨榄香烯对人胶质瘤U251细胞的放射增敏机制。方法:以U251细胞系为离体胶质瘤模型,用不同浓度榄香烯和不同放射剂量分别处理U251细胞,采用MTT实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:榄香烯对U251细胞具有生长抑制及放射增敏作用;放疗联合榄香烯组U251细胞较放射组有更高的早期凋亡率、继发性坏死率和总死亡率;榄香烯能诱导U251细胞G₂/M期阻滞;榄香烯通过降低细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)表达,导致放疗诱导的cyclin B1表达降低,从而抑制cyclin B-Cdc2复合物形成;同时抑制Cdc2蛋白第161位苏氨酸磷酸化,降低Cdc2的活性,从而诱导细胞G₂/M期阻滞;另外可能通过下调survivin表达,介导细胞凋亡。结论:榄香烯可能通过下调Cdc2蛋白、降低cyclin B1表达、抑制cylcin B-Cdc2复合物的形成、下调survivin表达等方面增强U251细胞对放疗的敏感性。     

甲氟喹对胶质瘤细胞的放射增敏作用

目的:研究甲氟喹对胶质瘤细胞的放射增敏作用,并对其机制进行初步探索。方法:取指数生长期的胶质瘤U251细胞,采用CCK-8检测法研究甲氟喹作用后U251细胞的存活率;细胞克隆形成实验评估甲氟喹对U251细胞的放射增敏效果;流式细胞技术检测甲氟喹联合X射线作用后U251细胞的活性氧水平和细胞凋亡率,探索联合作用下U251细胞的死亡机制。结果:甲氟喹对胶质瘤细胞具有良好的放射增敏效果,其对U251细胞的最大放射增敏比为1.64。X射线联合甲氟喹作用于U251细胞后,细胞的凋亡水平增加,活性氧水平增加,活性氧抑制剂谷胱甘肽能抑制X射线联合甲氟喹作用诱导的U251细胞凋亡。结论:甲氟喹对U251细胞有放射增敏作用,其作用机制可能为通过增加细胞活性氧水平、诱导细胞凋亡导致放射敏感性增加。     

放射敏感性启动子调控Apoptin基因表达对肺腺癌细胞的杀伤作用研究

目的构建放射敏感性启动子调控的凋亡素(Apoptin)基因的真核表达质粒pE6-Apoptin-EGFP,探讨其在X线调控下对肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法分别以限制性内切酶EcoRⅠ/NotⅠ双酶切质粒pE6-p53-EGFP及pApoptin-EGFP,电泳分离,回收目的线性DNA片段,T4连接酶连接,构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,测序、鉴定。脂质体介导瞬时转染肺腺癌细胞A549,RT-PCR、荧光显微镜等检测照射前后融合蛋白表达,流式细胞仪检测放射诱导前后转染细胞的凋亡变化。结果成功构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,并在被转染A549细胞中检测到Apoptin基因表达;经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照组pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(32.48±3.56)%和(10.67±2.42)%,未经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(6.33±1.21)%、(4.25±0.87)%;与其它3组相比,放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞凋亡率明显增高,具有非常显著统计学差异(P<0.01)。结论放射敏感性启动子调控的Apoptin基因表达可在放射线调控下在A549细胞中有效表达并诱导凋亡,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础。     

双氢青蒿素对肺癌细胞株H1299增殖与放疗增敏的影响

目的:研究双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对非小细胞肺癌H1299放疗增敏的影响。方法:通过CCK-8法测定双氢青蒿素的IC10,选择低毒剂量IC10作为实验浓度,采用CCK-8法测定DHA对H1299细胞增殖的影响;流式细胞术、Hoechest33258染色分别检测DHA对细胞周期和凋亡的影响;软琼脂集落形成实验检测DHA对放疗敏感性的影响。结果:双氢青蒿素的IC10为14.87μmol/L,双氢青蒿素以剂量依赖性的方式抑制H1299细胞增殖,并使细胞阻滞在S期,增加放疗敏感性。结论:青蒿素能明显抑制细胞增殖,增加放疗敏感性。     

大蒜素对人皮肤基底细胞癌A431细胞的放疗增敏作用研究

目的 探讨大蒜素(Allicin)是否能增加人皮肤基底细胞癌A431细胞的放疗敏感性及其作用机制.方法 MTT法检测Allicin对A431细胞的生长抑制率,筛选出半数抑制浓度(IC50);将细胞分为对照组、照射组(IR组)、Allicin组和IR+Allicin组.采用流式细胞仪检细胞自噬水平.结果 MTT结果显示大蒜素作用A431细胞24、48、72 h后IC50分别为35.47、18.64、6.56 mmol/L(F =22.54、18.94和21.63,P＜0.05).和对照组相比,Allicin组和Allicin+ IR组A431细胞的自噬水平均增加(F=30.15、28.36,P＜0.05),以Allicin+ IR组升高最显著.结论 Allicin通过上调人皮肤基底细胞癌A431细胞的自噬水平来增加其放疗敏感性.     

白细胞介素—6反义基因对人肺癌细胞生长的抑制作用

目的通过体外实验证实白细胞介素－６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６,ＩＬ－６）为人肺癌细胞系ＰＧ自分泌生长刺激因子,本研究旨在进一步探讨ＩＬ－６对ＰＧ细胞体内生长的影响。方法构建ＩＬ－６反义基因表达载体,应用磷酸钙沉淀法导入ＰＧ细胞以降低内源性ＩＬ－６表达;应用ＲＮＡ斑点杂交检测ＩＬ－６反义ｍＲＮＡ表达;应用生物活性检测法测定ＩＬ－６分泌,裸鼠皮下接种检测细胞成瘤性。结果转染反义ＩＬ－６基因的细胞ＰＧＴＡＳ１、ＰＧＴＡＳ６、ＰＧＴＡＳ８、ＰＧＴＡＳ９能够表达较高水平ＩＬ－６反义ｍＲＮＡ,所分泌的有生物活性的ＩＬ－６降低;ＰＧＴＡＳ１、ＰＧＴＡＳ６、ＰＧＴＡＳ８、ＰＧＴＡＳ９细胞体外生长减慢;ＰＧ－ＴＡＳ６、ＰＧＴＡＳ８、ＰＧＴＡＳ９细胞体内成瘤延迟,生长减慢。反义ＩＬ－６对ＰＧ细胞生长的抑制作用与ＩＬ－６分泌量呈负相关。结论ＩＬ－６对ＰＧ细胞生长具有重要的调控作用,ＩＬ－６为ＰＧ细胞自分泌生长刺激因子。     

雌二醇对离体大鼠缺氧─复氧心脏的保护作用

本实验采用离体大鼠心脏灌注模型，观察雌二醇（３．３ｎｇ／ｍｌ）对缺氧─复氧心脏收缩功能及超微结构的影响。结果表明，雌二醇对缺氧─复氧心肌具有一定的保护作用，这一作用与雌激素能相对提高缺氧─复氧心肌组织中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性和相对降低其Ｃａ￣（２＋）含量有关。     

P162对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75NTR表达的影响

 目的：研究靶向Ras-GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)的新药P162对人食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75神经营养因子受体(p75NTR)表达的影响。方法：CCK-8法检测P162对食管癌细胞株Eca109增殖抑制的影响;集落形成实验检测P162对Eca109细胞的放射增敏效应,单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比;倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞术检测p75NTR的表达。结果：P162对食管癌细胞株Eca109有增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,2.5、5.0、10 μmol/L P162对Eca109细胞的放射增敏比分别为1.54、2.35和2.33。随着照射剂量的增加,食管癌细胞中p75NTR的表达增加,经5 μmol/L P162处理的实验组中p75NTR的表达明显低于未经处理的对照组。结论：P162对Eca109细胞有放射增敏作用,并且能抑制食管癌干细胞p75NTR的表达。P162的增敏作用可能与抑制食管癌干细胞有关。     

X射线对人肺腺癌细胞及其耐药细胞株的影响

目的观察人肺腺癌细胞株A549及其耐顺铂细胞株（A549／DDP）对x射线的不同反应,不同放射剂量、照射时间对细胞周期的影响。方法用Vi—Cell细胞活力分析仪绘制A549及A549／DDP生长曲线;分别用4、8、12、16Gv6MVX射线照射A549及A549／DDP,以流式细胞仪检测细胞周期变化。结果A549与A549／DDP存活率分别为83．12％±2．23％,92．00％±2.31％（P〈0．05）。与亲本细胞株相比,A549／DDPGdG,期比例降低（P〈0．01）,GgM期比例升高（P〈0．01）。X射线照射后两种细胞出现G2／M期阻滞．照射后24h达到最大阻滞高峰．48h显示最大峰值回落。G2／M期阻滞强度在24h时与放射剂量呈正相关。在4Gy照射后,A549在6h即出现GgM期阻滞,但在照射后12h阻滞解除;而A549／DDP在24h内G2／M期阻滞呈递增趋势。在16Gy照射后,A549及A549／DDP6～12hG2/M期阻滞迅速增加,并持续至24h。结论A549／DDP较其亲本细胞株存活能力更强,对于放射线的敏感性增加。X射线可以改变A549及A549／DDP的细胞周期进程。A549经高放射剂量照射后细胞周期阻滞明显,而A549／DDP无论经过高放射剂量还是低放射剂量照射均表现出明显G2／M期阻滞．     

化瘀消瘤方含药血清对体外培养的人肺癌细胞周期的影响

目的：探讨化瘀消瘤方含药血清对肺癌细胞周期的作用。方法：制备高、中、低剂量含药血清、西药血清和对照血清，作用于人肺癌细胞。MTT法观察血清对细胞增殖的作用，流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果：高剂量含药血清组与对照血清组之间的吸光度差异有统计学意义(P<0.01)，中剂量血清组、高剂量血清组的S期细胞所占比例与对照血清组之间的差异有统计学意义(中剂量血清组P<0.05，高剂量血清组P<0.01)。结论:本实验提示化瘀消瘤方含药血清可能是通过干扰细胞DNA合成而抑制肺癌细胞的增殖，为该药的临床应用提供了科学的实验依据。     

Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用

目的: 探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法: Western blotting 检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果: Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论: Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。     

抑制氯通道阻抑鼻咽癌细胞周期和细胞增殖

目的:研究Cl^-通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩(RVD)、增殖及细胞周期分布中的作用。方法:活细胞图像分析低分化鼻咽癌细胞(CNE－2Z)RVD,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,MTT法检测细胞增殖能力。用流式细胞仪测定细胞周期不同时相细胞百分率。结果:Cl^-通道抑制剂硝基苯丙胺基苯甲酸(NPPB)剂量依赖性抑制RVD和细胞增殖,100μmol/LNPPB明显阻抑细胞周期进程,使细胞停滞于G₁期,G₁期细胞百分率从54%提高到71%,但对细胞存活率没有显著性影响。结论:阻抑Cl^-通道可阻滞细胞于G₁期而抑制细胞增殖。提示Cl^-通道和RVD的激活是促进细胞从G₁期进入S期和维持增殖所必需的因素。     

CDK及Myc等对干细胞周期和多能性的调控作用

干细胞具有自我更新和分化能力,其中自我更新与在持续增殖的细胞周期保持其多能性密切相关.因此,干细胞的周期改变和调节方式均能从多方面影响其多能性,如细胞周期蛋白在干细胞多能性调节中发挥着重要作用,其中,周期蛋白依赖性激酶（CDK）等对干细胞的增殖和分化具有举足轻重的影响;S期是遗传和表观遗传学调控影响干细胞多能性的重要时期;转录因子Myc平衡着干细胞多能性和定向分化能力等.从CDK及Myc分子对干细胞周期的调节和对多能性的影响等方面进行综述和探讨,以促进细胞周期对干细胞相关调控机制的研究,为再生医学后续干细胞的深入研究提供理论依据.     

HMGB2对肺腺癌细胞周期和增殖的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B2(HMGB2)对肺腺癌细胞周期和增殖的影响。方法:从Cancer RNA-Seq Nexus (CRN)数据库分析肺腺癌组织HMGB2表达情况;从OncoLnc数据库分析HMGB2与肺腺癌患者预后的相关性;从肿瘤单细胞数据库(CancerSEA)分析HMGB2与肺腺癌细胞14种功能状态的相关性;利用siRNA技术下调人肺腺癌A549细胞中HMGB2表达,通过real-time PCR和Western blot验证沉默效果,CCK8和EdU实验检测细胞的增殖。结果:HMGB2在肺腺癌中高表达;HMGB2高表达组肺腺癌患者的总生存期明显低于HMGB2低表达患者(log-rank检验P=0.017 3);HMGB2表达与肺腺癌细胞周期和增殖呈正相关;敲减HMGB2表达后A549细胞的活力和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论:HMGB2的表达与肺腺癌细胞周期和增殖显著正相关,可以作为潜在的评估肺腺癌患者预后的标志物和治疗靶标。     

重组腺病毒介导的p^16与p^53基因联合转移对人肺癌细胞系 …

目的 探讨ｐ＾１６和ｐ＾５３基因对肺癌细胞的协同抑制效应及凋亡诱导作用。方法 首先用同源重组技术构建重组ｐ＾１６和ｐ＾５３腺病毒载体,然后单独或联合感染人肺癌细胞系Ｈ３５８,用免疫组织法及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测腺病毒介导的基因转移效率与表达水平,用克隆形成实验、原位末端标记及流式术观察它们对Ｈ３５８生长特性及凋亡的影响,结果 免疫组织化学染色结果表明重组腺病毒载体可高效地将外源基因ｐ＾５３转     

EB病毒LMP1表达对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期分布的影响

目的:观察EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)表达对鼻咽癌细胞系增殖和细胞周期分布的作用。方法:用免疫组化(LSAB)法检测LMP1蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的增殖能力;用流式细胞术检测细胞周期的分布。结果:表达LMP1的鼻咽癌细胞系L-CNE1的OD值明显高于LMP1阴性的鼻咽癌细胞系V-CNE1和CNE1(P＜0.001)。L-CNE1细胞系的G₁期细胞百分率明显减少和S期细胞百分率明显增加,与V-CNE1和CNE1细胞系比较均有非常显著性差异(P＜0.001)。而V-CNE1与CNE1细胞系之间各期细胞百分率则无明显差异(P＞0.05)。结论:EBV-LMP1表达可使鼻咽癌细胞系细胞周期分布改变和增殖能力增强。     

稳定过表达的HLrg蛋白对HepG2细胞周期和细胞形态的影响

目的在肝癌细胞系HepG2中稳定过表达HLrg，观察过表达的HLrg蛋白对HepG2的细胞周期和细胞形态等生物学影响。方法构建真核重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-hlrg，转染到HepG2细胞并进行稳定筛选；对稳定过表达pcDNA3．1（＋）空载体的对照组、pcDNA3．1（＋）-hlrg的实验组进行观察。Westernblot进行HLrg蛋白的鉴定。流式细胞仪测定细胞周期、MTT法测定生长曲线、透射电子显微镜观测细胞形态的改变。结果获得了稳定过表达pcDNA3．1（＋）-hlrg的HepG2细胞株。与对照组相比，过表达HLrg蛋白的细胞株出现G1阻滞，微绒毛减少，分裂相减少，生长趋缓。结论稳定过表达的Hk蛋白对细胞周期有调节作用，对肝癌细胞HepG2具有生长阻滞的作用。     

沉默ClC-3氯通道基因对HeLa细胞周期分布的影响

目的:探讨沉默HeLa细胞的ClC-3氯通道基因后细胞周期分布的变化及其作用机制。方法:依照siRNA设计原则构建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并转染HeLa细胞;实验分为空白对照组(control组)、转染试剂对照组(Lipo组)、阴性对照组(negative siRNA组)和ClC-3 siRNA组。采用real-time PCR检测ClC-3 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测细胞周期分布情况;Western blot检测ClC-3蛋白及相关细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4、CDK6、P21和P27等表达。结果:CIC-3 siRNA成功沉默HeLa细胞的ClC-3基因。和其它组相比,ClC-3 siRNA组的细胞周期被阻抑在G_0/G_1期。CIC-3 siRNA组的cyclin D1、CDK4和CDK6蛋白表达水平明显下降,P21和P27蛋白表达水平明显上升。结论:沉默HeLa细胞ClC-3氯通道基因可影响cyclin D1、CDK4、CDK6、P21和27蛋白的表达水平胆抑HeLa细胞周期停滞在G_0/G_1期。