应用4种方法检测肠道病毒的结果分析

目的 对105例心肌梗塞患者和40例对照组应用4种方法检测肠道病毒（EV）。方法 用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测肠道病毒核糖核酸（EV－RNA），ELISA法检测柯萨奇B组病毒（Cox B V)IgM抗体，常规方法分离病毒及微量中和抗体（NT）。结果 病例组EV－RNA阳性23例（21．9％）。对照组1例（2．5％）；CoxB V IgM阳性29例（27．6％），对照组1例（2．5％）；病毒分离得到病毒6株（5．7％），对照组未分离出病毒；CoxB V NT阳性25例（23．8％），对照组3例（7．5％）。结论 用RT－PCR检测EV－RNA优于病毒培养，RT－PCR方法敏感，特异，简单，易于推广。采用RT－PCR，病毒培养，ELISA，NT4种方法同步进行检测EV则可以提高病毒的阳性检出率。     

HLA—DR基因及乙肝病毒基因型与肝细胞癌相关性的初步研究

[目的]探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染人群HLA—DR基因、HBV基因型与肝细胞癌的相关性。[方法]2007～2008年,应用序列特异性引物-聚合酶链反应（SSP—PCR）方法与荧光PCR（探针）法,分别对40例慢性乙肝患者（试验1组）、38例肝硬化患者（JR验2组）和34例肝细胞癌患者（试验3组）的HLA—DR等位基因、HBV基因型进行检测,并以中华骨髓库山东分库无血缘关系的自愿骨髓捐献者1383例为对照,分析其表达与肝细胞癌的相关性。[结果]HLA—DR1基因的检出率,试验3组为14．71％,对照组为4．85％（P〈0．05）;HLA—DR13基因的检出率,试验3组为14．71％,试验1组为0．00％（P〈O．05）;试验2组与试验3组各等位基因表型的检出率差异均无统计学意义（P〉0．05）。HBV基因型B型、C型、非B非C型所占比例,试验1、2、3组的差异无统计学意义（P〉0．05）。试验3组中,HLA—DR1、DR13阳性的5例均为HBV基因C型;其他29例HBV基因C型23例、非B非C型6例（P〉0．05）。[结论]HLA—DR1可能是肝细胞癌的易感基因．携带HLA—DR13基因位点的HBV感染者更易发展为肝细胞癌。     

多囊卵巢综合征与HLA—DRB基因相关性研究

目的探讨HLA—DRB1基因与多囊卵巢综合征（PCOS）的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR—SSP）方法,检测32例汉族PCOS患者和58例对照组（正常人）的HLA等位基因频率。结果PCOS患者HLA—DRB＊09、DRB1＊11、DRB1＊13、DRB1＊14、DRB4的等位基因频率较对照组明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论HLA—DRB1％09、DRB1女11、DRB1＊13、DRB1＊14、DRB4等位基因可能是PCOS的易感基因或与易感基因相连锁。     

核酸扩增检测结核杆菌DNA方法在肺结核诊断中的临床价值

目的确定核酸扩增结核杆菌DNh检测与抗酸杆菌涂片镜检两种方法在临床诊断上的应用价值。方法选取2009年11月至2011年5月肺结核病例208例为结核组,同期36例非结核病患者作为非结核组,对两组患者晨起痰液进行核酸扩增荧光定量聚合酶链反应（polyerasechainreaction,PCR）和涂片抗酸杆菌镜检,对痰检结果阳性率进行,检验。结果208例结核病患者的痰液中,FQ—PCR法和涂片抗酸染色法检出的阳性率分别为51．92％和25．96％,FQ—PCR法痰检患者结核杆菌DNA的阳性率明显高于涂片法,两种方法相比差异有统计学意义（x2=29．48,p〈0．01）：对两组方法的特异性及敏感性进行分析,两种方法特异性无统计学差异（x2=2．35,p〉0．05）,敏感性有统计学差异（J2=9．447,p〈0．01）。结论荧光定量PCR检测技术对临床上肺结核病的诊断和鉴别诊断有较高的应用价值。     

两种β-HCG检测方法的结果比较

目的：比较酶联免疫法（ELISA）和胶体金免疫层析（GICA）法检测β-HCG的准确性和敏感度。方法：用ELISA法和GICA法分别对100份血清标本进行β-HCG检测并比较两法的测定结果。结果：GICA法检测出β-HCG阳性52份,阴性48份;ELISA法检测出β-HCG阳性58份,阴性42份。有6份阳性标本胶体金免疫层析法没有检出,两法结果总符合率为94．0％。若以ELISA法结果作为真值,GICA法的敏感度为89．7％,特异性为100．0％,准确率为94．0％。结论：GICA法具有简便、快速、无需任何仪器等特点,但准确性和敏感度低于ELISA法。     

人类白细胞抗原等位基因与HBV宫内感染关系

目的研究人类白细胞抗原（HLA）-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因与乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvirus，HBV）宫内感染的关系，探讨FIBV宫内感染的遗传易感性，确定HBV富内感染的易感基因和保护基因。方法采用聚合酶链反应／序列特异性引物（PCR—SSP）技术检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例外周静脉血血块中HLA—DR3、DR7、DR13、DR53等位基因型分布及频率。结果（1）宫内感染组孕妇HLA—DR3基因频率为24．14％（7／29），显著高于非宫内感染组孕妇的6．33％（10／158）（P=0．007）。其余各表型比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）宫内感染组新生儿HLA—DR3基因频率为17．24％（5／29）。显著高于非宫内感染组新生儿的5．06％（8／158）（P=0．033）。其余各表型比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）母婴HLA—DR3同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比较差异有统计学意义（P=0．049）；母婴HLA-DR7、DR13、DR53同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比较。差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HBsAg阳性孕妇及其胎儿同时或任一携带HLA—DR3，易导致HBV宫内感染；HLA—DR3是HBV宫内感染的易感基因。     

儿童强直性脊柱炎HLA-B27抗原表达与骨损害关系的临床研究

目的探讨HLA—B27表达与儿童强直性脊柱炎骨代谢功能损伤的关系。方法检测HIA—B27不同型别的儿童强直性脊柱炎患者和对照群体骨代谢功能指标。结果分析显示各实验组间各项指标存在有不同程度的差异（FCT=87．3，P〈0．01；FBGP=197．1，P〈0．01），具体表现为：（可检测水平B27＋AS〉B27-AS〉B27＋对照和B27-对照（q12=7．48，q13=16．33，q14=20．87，q23=9．01，q24=12．47，P均〈0．01），而B27＋和B27-对照之间差异无显著意义（q34=2．33，P〉0．05）；BGP检测水平B27＋AS〉B27-AS〉B27＋对照和B27-对照（q12=11．6，q13=25．8，q14=30．7，q23=14．3，q24=17．7，P均〈0．01），而B27＋和B27-对照之间差异亦无显著意义（q34=1．69，P〉0．05）。结论儿童强直性脊柱炎HLA—B27的表达与骨质损害具有一定的关联性，为临床深入研究提供了有益的线索。     

双抗原夹心ELISA检测鼠疫F1抗体技术的应用

目的研究双抗原夹心酶联免疫吸附试验（DAgS—EusA）检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫监测中的实用性。方法用DAgS—ELISA和间接血球凝集试验（IHA）微量法对比检测558份标本鼠疫F1抗体。结果IHA检测出阳性33份,DAgS—ELISA检出阳性31份,阳性符合率为90．91％,阴性符合率99．81％,总符合率99．28％,二者检出阳性率分别为5．91％和5．56％,差异无统计学意义（X^2=0．25,P=0．625）。2种方法测定27份鼠疫免疫血清均阳性,IHA微量法的敏感性高于DAgS—ELISA（t=3．023,P=0．006）。结论DAgS—ELISA检测鼠疫F1抗体敏感性低于IHA微量法,但特异性好,无前滞反应,可避免初筛漏检问题。     

ABC-ELISA法诊断肠螨病的研究

目的：探讨生物素-亲和素酶联免疫吸附试验（ABC—ELISA）在肠螨病诊断中的应用价值。方法：采集48例肠螨病患者血清，用ABC—ELISA法检测血清螨特异性抗体IgG，并与葡萄球菌A-蛋白酶联免疫吸附试验（SPA—ELISA）进行比较。结果：用ABC—ELISA法和SPA—ELISA法检测48例肠螨病患者血清螨特异性抗体IgG阳性率分别为89.58％（43／48）和56.25％（27／48），两者比较，差异具显著性（χ^2=13．50，P〈0．01）。结论：ABC—ELISA法比SPA—ELISA法更有效诊断肠螨病。     

实时荧光定量PCR法检测NG、CT和UU的临床意义

目的应用实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitativePCR，FQ—PCR）法检测淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU），探讨该法的阳性检出率、敏感性和特异性。方法对临床疑似性病患者，取尿道或宫颈分泌物，同时用分离培养法和FQ—PCR法检测NG、CT、UU。结果168例患者中，培养法阳性检出数46例，阳性率27．38％，FQ—PCR法阳性检出数72例，阳性率42．86％。FQ—PCR法特异性为76．61％，灵敏度为97．83％。分别用FQ—PCR法和培养法检测NG、CT和UU，前者阳性率均高于后者。结论用实时荧光定量PCR法检测NG、CT以及UU，具有快速、敏感、特异、检出率高等优点，对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。     

肠道病毒71型手足口病病毒3种检测技术比较研究

目的探讨不同方法在肠道病毒71型（EV71）检测中的效果对比分析,方便对EV71做出及时而有效的诊断,为该病快速鉴别诊断奠定基础。方法采用ELISA、荧光定量RT—PCR、RT—PCR3种方法对EV71病毒特异性和灵敏度进行综合分析。结果通过对比分析,ELISA方法检出阳性18份,阳性率为11．32％;实时荧光定量PCR方法检出阳性53份,阳性率为33．33％;RT—PCR方法检出阳性51份,阳性率为32．08％。结论3种方法中实时荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度及特异性,更具优势,更能满足临床需要。     

176例儿童手足口病病原体检测结果分析

目的对惠州市部分手足口病病例进行流行病学特征调查和病原学分析,明确导致手足口病肠道病毒的主要型别和分布特征,为制定预防控制措施提供实验室依据。方法选取2009年惠州地区各大医院临床诊断为手足口病的病例为对象,采集患者发病1周内的咽拭子、肛拭子、粪便、脑脊液和疱疹液共计176份标本,采用Real—time PCR对患者标本进行总肠道病毒、柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）和肠道病毒71型（EV71）特异性核酸检测,同时运用CoxA16型和EV71型的特异性引物,采用RT-PCR法进行平行核酸分型检测。结果实时荧光定量PCR法检测176份标本,肠道病毒通用型核酸阳性150份（85．2％）,其中CoxA16、EV71病毒核酸阳性分别为93、34份,分别占肠道病毒感染阳性总份数的62．0％（93／150）、22．7％（34／150）,另外NEV（非肠道病毒）占14．8％（26／176）。应用RT—PCR方法对Real-time PCR检测的150份肠道病毒阳性标本进行分型检测．分别检出EV71、CoxA16阳性33、91份,此结果与实时荧光定量PCR法的符合率达98％。总肠道病毒阳性病例数的男女比例为1．78：1（96／54）,EV71阳性者中以3岁以下幼童为多,占58．8％（20／34）。结论所检测儿童手足口病标本中以CoxA16感染为主。RT-PCR法与实时荧光定量PCR法检测肠道病毒的特异性与准确性相当,而实时荧光定量PCR可用于手足口病暴发疫情和临床病例的早期高通量快速诊断。     

五种SARS冠状病毒-IgG抗体检测试剂的比较

目的 比较五种SARS冠状病毒—IgG抗体诊断试剂，检测SRS冠状病毒特异性抗体的敏感性和特异性。方法 分别用间接免疫荧光(IFA)和四种ELISA诊断试剂(其中SLISA—1为全病毒抗原建立的间接法，ELISA—2为表达抗原片断建立的双抗原夹心法，ELISA—3/4为表达抗原建立的间接法)检测IgG抗体。100份血清标本分别采自发病7d以上的临床确诊SARS病例34例和疑似病例42例、发病6d以内临床确诊病例1例和疑似病例23例。结果 用IFA及四种ELISA诊断试剂检测34份发病7d以上临床确诊SARS病例的血清样本，其IgG检出率与临床诊断的符合率分别为：IFA44．12％，SLISA—1、4为41．17％、ELISA—2、3为23．52％；对42例疑似病例的检出率，IFA、ELISA—3为11．9％，ELISA—-1、2、4为9、52％；发病1～6d内的确诊和疑似病例血清中未能检出特异性的IgG抗体。结论 五种诊断试剂都可以帮助临床做出符合诊断和鉴别诊断，可以作为SARS血清学诊断方法，但其检出率与临床诊断的符合率均较低。     

用SPSS软件包快速绘制ROC曲线并决定敏感性、特异性截断点的方法

目的 分享用SPSS v18以上软件包快速绘制ROC曲线、输出“曲线下面积AUC”并决定敏感性Se、特异性Sp的最佳截断点cutoff值的方法,提高应用的科学性与可及性。方法 用两个实例,一是某法糖尿病诊断的cutoff值、敏感性Se和特异性Sp;二是比较A、B两法检测的Se和Sp。用SPSS的有关命令语句汇总为分析程序,解释语句作用、分析输出和评价结果,以适应推广应用。结果 快速绘制了某法糖尿病诊断的ROC曲线,当cutoff值=6.04 mmol/L时,Se=0.928、Sp=0.894、曲线下面积AUC=0.911,P=0.000;比较了A、B两法诊断效能的ROC曲线,A法AUC=0.947、P=0.000;B法AUC=0.679、P=0.002,可见A法诊断效能远优于B法。结论 用SPSS v18以上软件包可快速绘制ROC曲线、并决定敏感性、特异性的最佳截断点,其科学性、便捷性和可及性均佳。     

38例强直性脊柱炎早期诊断影响因素探讨

目的总结强直性脊柱炎早期的重要临床表现以及实验室检查方法,进一步提高对强直性脊柱炎的认识。方法收集笔者所在医院2007年7月～2009年6月间38例确诊为强脊炎早期患者的病例资料进行回顾性分析。结果38例强直性脊柱炎患者中有夜间休息痛和晨僵者24例（63．2％）,有活动后疼痛缓解者30例（78．9％）,骶髂关节检查阳性者22例（57．9％）;HLA—B27阳性者36例（94．7％）,血沉和C反应蛋白异常增高者分别为15例（39．5％）和14例（36．8％）。结论晨僵和休息后疼痛加重以及活动后疼痛缓解是强直性脊柱炎早期重要的临床症状,HLA—B27阳性对早期诊断具有重要价值。骶髂关节检查具有较高阳性率,血沉和C反应蛋白有辅助诊断意义。     

间接酶联免疫定量检测风疹IgG的方法学研究

目的 建立检测血清风疹IgG(RV-IgG)抗体的间接酶联免疫测定(在和,ELISA)方法。方法 利用RV－GOS株感染单层Vero细胞方法制备RV抗原，并采用血凝素方法提纯抗原，建立定量间接ELISA方法，进行了实验条件的选择。然后用优化的ELISA法对检测RV－IgG的敏感性，特异性和重复性进行鉴定，并与美国食品与药品监督局认证的ELISA方法进行比较。结果 间接定量ELISA方法的敏感度为3IU／ml,以Diasorin公司生产的RV－IgG试剂盒检测结果为标准，其敏感性，特异性和准确性分别为97．79％（221／226），95．45％（42／44），97．41％（263／270）；2种方法相关系数为0．92，P＜0．05，呈显著相关。结论 该ELISA方法敏感性高，特异性强，且简便，快速，重复性好，具有实际应用价值。     

三种支气管肺泡灌洗液结核杆菌检测方法在菌阴肺结核诊断中的应用研究

目的探讨涂片、培养、荧光定量PCR（FQ—PCR）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）结核分枝杆菌对菌阴肺结核的诊断价值。方法对73例菌阴肺结核患者的BALF行涂片、培养、VQ—PCR同步检测。结果菌阴肺结核患者的BALF涂片、培养、FQ—PCR检查的阳性率分别为21．9％、34．2％和60．3％,FQ—PCR法敏感度高且假阳性低（占2．2％）。结论BALF涂片和FQ—PCR检测对菌阴肺结核的快速诊断具有重要的临床应用价值,培养仍是目前诊断肺结核的金标准;三种方法结合使用可提高菌阴肺结核的诊断率。     

FQ—PCR技术在儿童尿液巨细胞病毒检测的临床应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ—PCR）方法检测尿液巨细胞病毒在儿童CMV感染诊断中的意义。方法分别应用FQ—PCR和ELISA法检测75例确诊或高度怀疑为CMV感染和25例对照儿童尿CMV—DNA和血清CMV—IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果75例确诊或疑诊CMV活动性感染患儿中,检测到CMV—DNA65例;检测到CMV—IgM54例。两种方法阳性符合率为77％,FQ—PCR和ELISA法阳性检出率分别为88％和72％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FQ～PCR法检测尿CMV—DNA对诊断活动性CMV感染具有良好的应用价值。     

间接免疫荧光法在健康人群新布尼亚病毒抗体检测中的应用

目的探讨间接免疫荧光法（IFA）对急性发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SVTSV）感染的诊断价值,并了解宁波市象山县SFTSV流行区健康人群的抗体水平。方法非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）分离的本地SYTSV株制作抗原片,以IFA法和EUSA法对象山县265份健康人群血清进行SFTSV抗体测定,并用病毒微量中和试验（MNT）验证两种方法的检测效果。结果265份象山县健康人群血清中,IgG抗体经IFA法检测共36份阳性,阳性率为13．58％（36／265）;经ELISA法检测,共23份阳性,阳性率为8．68％（23／265）;两者差异有统计学意义（X^2=9．624,P〈0．05）。与MNT法检出结果对比,IFA法诊断的符合率为89．19（33／37）,而ELISA法的符合率为70．27％（26／37）;两者比较差异有统计学意义（X^2=4．097,P〈0．05）。所有SFTSV—IgG阳性样本中SFTSV—IgM同时阳性共23份,占62．16％（23／37）。结论IFA法可同时检测SFTSV—IgG和-IgM抗体,可作为未在病毒血症期内就症病例的补充诊断方法,也适合对人群抗体水平的调查。宁波市象山县健康人群中检出较高水平的SFTSV-IgG抗体,表明存在SFTSV的流行以及隐性感染;SFTSV—IgM阳性提示这些感染为新近感染。