双抗原夹心法检测丙型肝炎病毒抗体的应用分析

目的分析探讨应用双抗原夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的应用效果,为无偿献血样本的抗-HCV筛查提供参考依据。方法收集2017年4月至2018年1月某院经间接法ELISA检测的抗-HCV单试剂或双试剂反应性的献血者标本72份以及1 850份无偿献血者样本作为研究对象,采用双抗原夹心ELISA法和间接ELISA法进行检测,对于有一种以上试剂反应性(包括单试剂反应性、双试剂反应性及三种试剂均呈反应性)的标本采用重组免疫印迹实验(RIBA)进行进一步确认。以RIBA检测阴性或三种试剂均为阴性作为真阴性的标准,分析两种检测方法三种试剂的检测结果的假阳性率、特异性及符合性。结果总共1 922份检测样本中,一种以上反应性样本合计51例,三种试剂均为阴性反应性1 871份。51例反应性样本经RIBA验证,阳性29例,阴性22例。万泰双抗原夹心试剂诊断的假阳性率明显低于雅培间接试剂和万泰间接试剂,诊断与RIBA的符合率则高于两种间接法试剂,差异有统计学意义(P0.05)。1 871份阴性检测样本中,万泰间接试剂、雅培间接试剂和万泰双抗原夹心试剂诊断的特异度分别为96.69%、94.28%、99.79%,万泰双抗原夹心试剂诊断的特异度明显高于两种间接法试剂,差异有统计学意义(P0.05)。结论应用双抗原夹心法诊断试剂者检测血液样本抗-HCV具有较高的特异性和准确性,能降低生物学假阳性,值得在临床血液样本的抗-HCV筛查中进行广泛推广应用。     

混合抗体标记法在免疫组化技术中的应用及价值

免疫组化双标记染色技术是在一张组织切片上同时标记两种不同的抗体，可同步检测和观察两种不同抗原的表达情况，通常需要专用的试剂盒，而且操作过程复杂，染色时间长，即耗时又费力。我们用p63＋34βE12、p63＋SMA混合抗体法分别标记前列腺基底细胞及乳腺组织中的肌上皮细胞，既增加了单抗体标记法的敏感性，又达到了双标记法的染色效果，是一种简便易行、经济实用的免疫组化标记技术。     

电化学发光分析及其在核酸测定中的应用

电化学发光（ECL）分析是新近发展起来的既不同于传统的标记免疫分析（如酶标记、同位素标记、荧光素标记等）也与普通的化学发光有区别的一种新型检测方法，它将电化学法和化学发光法巧妙结合，具有灵敏、快速、准确、分析适应性广等特点。本文综述了ECL的原理、特点及其在核酸定量检测中的应用。核酸的杂交分析和聚合酶链反应（PCR）等技术已广泛应用于分子生物学的实验研究和临床诊断领域。根据核酸探针或反应体系中所用的示踪剂不同，核酸分析可分为放射性同位素法和非放射性同位素法如免疫荧光法、时间分辨荧光法、化学发光法、生物发光法等。90年代初期问世的将电化学（electrochemistry）和化学发先（chemiluminescence）完美结合的新型免疫分析技术电化学发光技术（electrochemiluminesence，ECL），同时联合新型的免疫固相放大技术──链霉亲和素系统，在免疫学检测中尤其是核酸测定中，发挥了以往的发光技术无可比拟的优势［1］，本文拟就ECL的原理，分析特点及核酸测定中的应用作一简要综述。     

双标记液相免疫放射分析技术的实验研究

[目的]通过双标记液相IRMA方法的建立，探讨其技术主要优点及临床应用价值。[方法]选择垂体前叶糖蛋白激素TSH和51个氨基酸组成的INS作为实验研究对象，对标记试剂中两种标记McAb的最佳比例，免疫反应温育时间，抗FITC作分离剂的用量进行优化，并和常规包被管检测血清TSH及竞争法检测血清INS作了方法学参数对比分析。[结果]本法在液相中生成双标记夹心免疫复合物时间短，精密度高于常规法，特异性在INS检测中显著较竞争法更强。测值为竞争法的75％。检测样品TSH值，双标记液相IRMA与固相包被法高度相关，r为0．9855。[结论]对比分析显示本法所设计的免疫反应模式新颖，检测方法简便快速，磁性微粒子抗FITC可共用，各项技术参数优于常规法。     

血清铜nitro—PAPS终点比色法测定测量点选择的研究

目的 研究不同测量点设置方式对2-(5-硝基-2-吡啶偶氮)-5-[N-正丙基-N-(3-磺酸丙基)氨基]苯酚二钠(nitro-PAPS)终点比色法测定血清铜结果的影响,以获取准确、可靠的血清铜检验结果.方法 分别采用一点终点法、双置二点终点法和单置二点终点法检测样本中铜含量,以质控品、临床标本、精密度和准确度分析结果评价检测效果,应用SPSS 13.5统计软件对实验结果进行分析.结果 双置二点终点法和单置二点终点法通过质控品评价和临床标本验证且精密度与准确度符合要求,而一点终点法则否.结论 nitro-PAPS比色法测量血清铜时,选择双置二点终点法和单置二点终点法测量点设置方式均可获可靠的血清铜检验结果.     

抗凝剂选择对甲状腺功能测定的影响

近年来,标记免疫分析技术的研究和应用取得了新的进展.尤其是非放射性标记免疫技术的分析自动化已广泛应用于中小型因院.本院采用化学发光免疫分析(CLIA)技术进行甲状腺功能(T3、FT3、FT4、TSH)测定,并采用国内常用的肝素钠、EDTA-K2作为抗凝剂.比较了上述两种抗凝剂的抗凝标本和试剂要求的血清标本T3、FT3、FT4、TSH的检测结果,现报告如下.……     

磁性分离酶联免疫测定技术的应用

磁性分离酶联免疫技术是80年代中期瑞士serono(史郎洛)诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,称为磁性抗体免疫技术(MAIA)。使双抗体夹心(或双抗原竞争)酶联免疫技术在游离型标记抗体—抗原—抗体(或游离型标记抗体和酶标记抗原)复合物分离中具有分离完全和快速的特点,也为磁性分离酶联免疫技术的推广创造了条件。     

免疫胶体金电镜技术在医学研究中的应用

免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是通过标记的抗体与特定的抗原结合来观察和研究超微结构水平组织细胞形态和功能。根据标记方法的不同,分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金技术,其中应用较多的是胶体金技术。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨,因此利用胶体金标记的二抗,与相应一抗结合,从而将目标抗原标记。免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于医学生物学的各个方面,并取得了长足的进展,为解决一些医学上的微观结构问题提供了很好的帮助。     

液体芯片技术定量测定人体血清CEA、AFP、NSE和tPSA

目的 应用液体芯片技术,联合定量测定人体血清癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和前列腺特异性抗原（tPSA）,并对其临床应用进行评价.方法 制备交联微球以及生物素标记抗体,利用双抗体夹心法对60个血清样本进行测定,并将其结果与化学发光免疫分析法（CLIA）作比较.结果 同时检测CEA、AFP、tPSA、NSE的线性范围分别为0.078～200 ng/mL、0.030～30.3 ng/mL、0.007～7.5 ng/mL、0.146～75 ng/mL;最低检测限为26.0 pg/mL、19.7 pg/mL、4.9 pg/mL、73.2 pg/mL;批内精密度CV〈9.0%,批间精密度CV〈13.2%;检测结果与CLIA测值的相关系数r分别为0.986、0.979、0.964、0.958（P〈0.001）.结论 液体芯片技术是一种具有极大优势的新型检测技术.该技术打破传统测定技术每次只能测定一个指标的限制,并且具有高通量、高灵敏度、检测时间短、样本用量少等特点.     

人血清中总前列腺特异性抗原化学发光免疫分析法的建立

目的建立一种定量分析人血清中总前列腺特异性抗原（t—PSA）的化学发光免疫分析方法。方法采用生物素和碱性磷酸酶分别标记捕获抗体与检测抗体,与样本中的抗原形成免疫复合物,然后通过链霉亲和素与生物素的反应被链霉亲和素标记的磁微粒捕获,利用碱性磷酸酶与发光底物的反应建立了双单抗夹心法检测人血清中t—PSA的化学发光免疫分析方法。结果标准品对WHO96／670国际标准品进行溯源,同时检测血清样本,线性回归方程为y=0．9434X-0．1605,相关系数r=0．99。选择具有等摩尔分子反应性的单抗,对不同存在形式的PSA检测偏差在士3％以内。病人血清样本的测试结果与雅培architecti2000化学发光试剂盒检测结果显著相关,相关系数r=0．989。结论该方法具有较高的灵敏度和重复性,检测结果准确,提高了国产同类试剂的竞争力,同时比同类进口试剂成本低,适于临床检测和科研应用。     

双抗原夹心与间接ELISA法检测抗HCV对比研究

[目的]用研制的双抗原夹心ELISA法试剂与间接ELISA法试剂对比检测抗HCV。[方法]利用基因重组技术表达的HCV多表位抗原分别包被和标记，收集献血员样本，二种国产（试剂A，B）及雅培间接抗HCV试剂同时检测，对一种试剂单独阳性和3种试剂检测均为阳性的样本，再用研制的双抗原夹心法进行检测。[结果]试剂A检测单独阳性的样本12份，试剂B单独检测阳性20份样本中，双抗原夹心检测为阴性 ；而三家试剂检测均为阳性9份样本，双抗原夹心检测均为阳性。[结论]双抗原夹心检测抗HCV特异性较间接法好，灵敏度二者相当。     

时间分辨荧光免疫技术在HBV定量检测中的应用

目的探讨铕标记时间分辨荧光免疫技术(TR-FIA)对乙型肝炎病毒标志物(HBV M)定量检测在临床的应用价值.方法TR-FIA法、放射免疫(RIA)法及ELISA法检测并统计分析.结果TR-FIA法较RIA法灵敏度高,测量范围宽,准确度相近.结论在乙肝病毒标志物定量检测上,两种方法检测结果的临床符合性基本一致,TR-FIA较RIA测量范围宽,标记物稳定,无放射性污染,具有良好的应用价值.     

量子点在标记免疫分析中的应用研究进展

免疫分析（Immunoassay IA）是利用抗原抗体的特异性反应进行定性和定量的分析技术。标记免疫分析就是标记技术与免疫反应相结合的分析技术。由于标记物的放大效应可提高分析方法的检测灵敏度。在传统标记免疫分析技术中。放射免疫分析（RIA）存在污染,酶免疫分析（EIA）灵敏度较低,发光免疫分析（LIA）和荧光免疫分析（FIA）发光时间短,容易猝灭。寻找高效的标记试剂一直是人们孜孜以求的工作,早在20世纪70年代就引起科学家重视的量子点由于良好的光电性能重新引起了人们的广泛关注,开始在标记免疫分析中初步应用,并取得了令人满意的效果。本文就量子点的特性,与生物大分子的偶联方式及其在标记免疫分析方面的应用研究做一综述。[第一段]     

国内外标记免疫分析技术研究现状

标记免疫分析是一大类超灵敏度,高特异性检测技术的总称,因其具有许多独特优点,已广泛应用于基础医学和临床各领域。它们的基本原理相同,仅依标记物的不同而最终测量所发出的信号而异。虽然文献报告的方法已有１０余种,但有推广应用价值或已被广泛应用的主要有：放射免疫分析（ＲＩＡ）、酶免疫分析（ＥＩＡ）、时间分辨荧光免疫分析（ＴＲＦＩＡ）和化学发光免疫分析（ＣＬＩＡ）等。以下仅就这四种分析技术研究现状和前景作简要介绍。放射免疫分析一、试管固相法［１］当前ＲＩＡ发展的方向是以试管固相作为取代常规液相法的换代技术…     

酶联免疫法临床检测中假阳性现象分析

正酶联免疫法即酶联免疫吸附试验,是目前临床实验室和血站应用最广泛的检测抗原抗体的成熟技术,在酶免疫分析技术中,酶联免疫法是发展最快、应用最广,也是最成功的技术[1]。该技术具有灵敏度高、特异度强、准确性好、酶标记物有效期长、试剂价格低廉等优点。酶联免疫法在临床应用中一直占据领先地位,然而实际应用中一直受出现假阳性这一现象的困扰。众所周知,乙型肝炎是我国广泛流行的一种公众危害性疾     

全自动生化分析仪双速率法检测G6PD的探讨

目的探讨用双速率法和传统的双通道单速率法在全自动生化分析仪上检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性结果是否存在显著差异。方法在7600全自动生化分析仪上同时采用两种方法对92例样本进行G6PD检测。结果双速率法与双通道单速率法对92例样本的G6PD测定结果的差异无统计学意义（P〉0．05）,两种方法相关性较好（r=0．9705）,两法具有良好的可比性。结论应用7600全自动生化分析仪的双速率法检测G6PD,既简便、准确、快捷,又能减少试剂用量,减少仪器损耗,降低成本,可作为一种更为经济和实用性强的检测方法,值得应用推广。     

自制铕标记Free β-hCG—TRFIA试剂盒的临床应用研究

目的 对自制铕标记Free β-hCG-TRFIA定量测定试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒的临床应用提供科学依据.方法 收集血清样本1 000份,用自制试剂盒进行测定,对照试剂盒选用PE公司钐标记Free β-hCG TRFIA试剂盒,复核试剂选用美国Diognastic Automation公司ELISA试剂盒,获取相关目标实验数据,进行"符合率"、"相关性"等统计学分析.结果 以PE公司钐标记法为对照实验,自制试剂盒的高值符合率为78.4%;低值符合率为100%,正常值符合率为95.1%,总符合率为93.8%;两种试剂盒测定值相关性良好,相关系数为0.985.结论 自制试剂盒临床检测性能与现行临床广泛应用的方法相仿,可以满足临床应用的需要.     

六色荧光标记流式细胞术在淋巴细胞亚群检测中的应用

淋巴细胞是机体免疫系统功能中最重要的细胞群,是反应机体免疫状态的重要指标,对多种疾病的辅助诊断、疗效观察及预后检测有重要意义.流式细胞术是对细胞生物学性状、功能等进行定量检测的一种现代细胞分析技术.本科应用六色荧光标记流式细胞术(flow cytometry)对呼吸道感染患儿进行淋巴细胞亚群检验,以了解呼吸道感染患儿的免疫状况,为临床治疗提供参考.     

金标记SPA活性简易测定法

免疫金银染色法(IGSS)是近年发展起来的一项免疫化学染色技术.金探针制备技术简便,反应灵敏特异,结果清晰可辨,在免疫学及微生物学领域中的应用已日趋广泛.将该法用于抗核抗体的检测,已获满意结果(免疫学杂志1989;3:206).最常用的免疫金探针是金标记SPA.鉴定金标记SPA 的生物学活性,通常采用电镜负染法或细胞化学染色试验,较费时费工.此处介绍一种简易的红细胞凝集试验,方法如下:取洁净玻片一张,加抗体(人、兔、鼠IgG 均     

双向侧流免疫法检测超敏C反应蛋白（hs—CRP）及临床应用

目的 探讨利用双向侧流免疫法检测hs-CRP及临床应用价值.方法 利用双向侧流免疫法检测110份病人全血、血浆、血清标本hs-CRP,同时与免疫散射比浊法检测血清hs-CRP的结果相比较.结果 检测血浆的灵敏度、特异度和总符合率分别为96.2%,98.3%和97.3%;检测全血的灵敏度、特异度和总符合率分别为96.2%,94.8%和95.5%;检测血清的灵敏度、特异度和总符合率分别为96.2%,96.6%和96.4%.三种样本的灵敏度、特异度和总符合率均超过90%,表明两种试剂的检测结果具有较高的一致性和等效性.结论 双向侧流免疫法检测hs-CRP可同时用于检测全血、血浆和血清三种样本,操作简便,标本用量少,结果准确、可靠,具有很高的临床应用前景.