鼠视网膜感光细胞移植术后超微结构观察

目的 以遗传性视细胞变性动物ＲＣＳ鼠为受体,Ｗｉｓｔａｒ鼠为供体,观察纯视锥、杆细胞移植术后ＲＣＳ鼠视网膜外层超微结构的变化。方法 应用视网膜板层切削技术或准分子激光技术制备供体层状视细胞;视网膜板层外路移植技术,获得视网膜移植动物模型。术后２周及４周时处死动物,眼球常规切片后于光镜及透射电镜下观察受体视网膜。结果 移植的视细胞大多成层排列于受体鼠的视网膜色素上皮层及内颗粒层之间。重新出现的外网状     

视网膜神经上皮移植的实验研究

目的 对视网膜神经上皮移植后移植物的成活及发育情况进行初步观察。方法 采用内路注射移植方法建立动物模型，行２７眼移植手术。术后定期眼底检查，组织学检查和免疫组织化学检查。结果 ２１眼移植成功，组织学检查可见移植后移植物可以成部分细胞呈环状生长，可继续发育分层，未见明显的炎细胞浸润及免疫排斥现象。免疫组织化学检查要照相可见移植物Ｓ－抗原染色阳性。结论视网膜神经上皮移植术后移植物可以成活并继续发育，无     

玻璃体内注射他克莫司对异种移植的视网膜色素上皮细胞存活的影响

目的 观察少量、多次玻璃体内注射免疫抑制剂他克莫司（FK506）对移植到兔眼视网膜下间隙内的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）细胞存活情况的影响。 方法 采用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）逆转录病毒感 染人RPE细胞。将50 μl（4×10³个/μl）表达GFP的人RPE细胞悬液注射到18只白兔及1 0只灰兔双眼视网膜下间隙，手术后所有兔左眼玻璃体内注射5 μl FK506（5 μg/ μl），每周1次，连续5周，然后间周一次至20周;右眼不注射作为对照。眼球壁铺片倒置荧光 显微镜观察移植细胞的存活状态。 结果 白兔于移植后1、2、3、4 、6、10、11、14、18、20、23、24、25、33、54周，灰兔于移植后4、5、6、7、14、18、20、26周双眼视网膜下均可见表达的GFP细胞，但移植术后1~14周内玻璃体内注射了FK506的左眼视网膜下RPE-GFP细胞形态、细胞膜的完整程度均比未注射的右眼好。18周后，7只白兔和3只灰兔双眼视网膜下移植细胞的状态差异不明显。眼球切片苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色观察结果显示，移植术后1~6周，6只白兔和3只灰兔右眼脉络膜小血管周围可见灶性或弥散的淋巴细胞，应用了FK506的左眼淋巴细胞的浸润明显减少。 结论 移植术后早期玻璃体内使用小剂量免疫抑制剂可减轻局部炎症反应，有利于维持视网膜下间隙移植的异种细胞的存活。 （中华眼底病杂志，2003，19：333-404）     

视网膜移植术的神经生理学研究现状

视网膜移植术神经生理学研究虽刚刚起步，但成绩菲然。乙酰胆碱，谷氨酸盐及γ－氨基丁酸能协助调理胚胎视网膜的发生和发育，并调节视网膜移植片中枢内存活和功能表达。选用特殊的植片、实验条件和各种新研究方法，视网膜植片不但能与大脑中枢建立正常的结构和功能联系，而且参与宿主的行为过程，这为临床治疗各种眼病带来了新的希望。     

视网膜移植术的神经生理学研究现状

视网膜移植术神经生理学研究虽刚刚起步，但成绩菲然。乙酰胆碱，谷氨酸盐及γ－氨基丁酸能协助调理胚胎视网膜的发生和发育，并调节视网膜移植片中枢内存活和功能表达。选用特殊的植片、实验条件和各种新研究方法，视网膜植片不但能与大脑中枢建立正常的结构和功能联系，而且参与宿主的行为过程，这为临床治疗各种眼病带来了新的希望     

兔视网膜色素上皮细胞移植及长期形态学的研究

视网膜色素上皮（ＲＰＥ）功能失调或发生病理改变，可导致许多视网膜疾病，包括年龄相关性黄斑变性，青年性遗传性黄斑变性及视网膜色素变性等，严重危害人类视力。能否通过移植正常、健康的ＲＰＥ细胞治疗这类视网膜疾病，是当前眼科界关注的重要研究课题。我们采用了改良式玻璃体密闭式移植术，术中增加了玻璃体切割，应用带有色素标记的兔ＲＰＥ细胞移植于无色素性兔的视网膜下间隙。结果显示，移植长达１年后的ＲＰＥ细胞不但存活，结构形态正常，并且与邻近的ＲＰＥ细胞（包括移植的与自体的）建立了闭锁小带。移植的ＲＰＥ细胞与受体的感光细胞紧密结合，受体眼的神经外节盘正常脱落，被移植的ＲＰＥ细胞吞噬，且未发生排异反应。上述结果显示，本实验兔ＲＰＥ细胞移植的成功，为临床治疗某些视网膜疾病开辟了新的治疗途径，提供了可靠的实验室根据和应用前景。     

移植视网膜组织视蛋白的测定

目的：建立玻璃体内视网膜移植的动物模型，检测玻璃体内视网膜移植片视蛋白的表达，来确定移植后视网膜的功能。材料和方法：取1－5d新生兔12只，取出神经视网膜组织，作为供体，取成年兔12只，经囊去除除晶状体，切除前段玻璃体后，将供体兔右眼视网膜移植到成年兔右眼的玻璃体腔，分别于手术后7，14，21d取出供体视网膜组织，进行视网膜总蛋白的抽取，分离兴视蛋白鉴定，结果：移植后的视网膜可以成活；在移植后7，14，21d的视网膜移植片中可检测到视蛋白存在。结论：移植到玻璃体腔内的视网膜组织可见到视蛋白的继续表达。     

视网膜视细胞的成片移植

目的 探索用准分子激光切削技术制备视网膜单层细胞植片,经内入路视网膜下腔的单层视细胞成片移植。方法 用准分子激光对大鼠视网膜进行切削,制取单层视细胞植片,此后,按内入路手术方法进行了兔视网膜下腔的异种移植。结果 切削后所得视细胞植片由单层视细胞组成,结构完整,包括外丛状层、外核层和外节层;视细胞植片经明胶包埋后被准确植入宿主视网膜下腔中,移植术后第1,2天宿主观视网膜未能复位,呈脱离状态,移植物没能与视网膜色素上皮层相贴;移植后10天,宿主视网膜复位,视细胞移植片平铺于宿主视网膜下腔中,植片视细胞外节也宿主视网膜色素上皮层相贴;移植后10天,宿主视网膜复位,视细胞移植片平铺于宿主视网膜下腔中,植片视细胞外节与宿主视网膜色素上皮层相贴,未见明显免疫排异现象。结论 准分子激光制备单层视细胞植片方法简单、可行;初步观察到内入路单层视细胞成片移植后,视细胞植片能够在宿主视网膜下腔中以正常生理位置存活;视网膜下腔为理想的视网膜移植的受位。     

经巩膜外路至视网膜下腔移植视网膜细胞的实验研究

探讨视网膜光感受器细胞的移植方法及临床意义。方法将16只昆明鼠随机分为A组和B组,每组均8只鼠。于手术显微镜下,用特殊显微注射器穿过巩膜、脉络膜,在A组昆明鼠的视网膜下腔注入视网膜混合细胞,在B组昆明鼠的视网膜下腔注入纯光感受器细胞。于移植术后30、90及180 d摘除实验眼,于光镜下观察移植细胞在视网膜下腔生长的情况。结果大多数标本(13／15)HE染色显示视网膜细胞准确移植在受体眼的视网膜下腔,未见炎性细胞浸润和受体视网膜破坏;且移植到受体视网膜下腔的细胞在术后180 d仍存活。仅少数(2／15)标本可见受体视网膜结构破坏。移植的视网膜混合细胞均形成“玫瑰花”样结构,而移植的纯视网膜光感受器细胞则在视网膜下腔形成整齐的细胞层。结论经巩膜外路至视网膜下腔的显微注射法是较为理想的视网膜下腔注射给药和视网膜细胞移植方式。纯视网膜光感受器细胞移植后的生长状况和功能接近正常生理状态的视网膜组织结构,为临床治疗视网膜变性疾病提供了新途径。     

外伤性黄斑裂孔的治疗及研究进展

外伤性黄斑裂孔（traumatic macular hole，TMH）主要是指眼球在受到直接或间接、闭合或开放的外力创伤下立即或延迟发生的黄斑中心凹区的视网膜裂孔，在组织学上是从内界膜到感光细胞层的部分或全部组织缺损。目前的主要非手术治疗包括:定期随访观察，口服血塞通、地塞米松等药物，手术治疗方式为玻璃体切除联合气体或硅油填充术，术中内界膜（inner limiting membrane，ILM）剥除等，术中辅助使用转化生长因子-β₂、自体浓缩血小板、血清填充裂孔等。治疗进展主要包括局部非甾体类抗炎药物促进裂孔自愈，玻璃体切除手术系统进步、手术治疗方式增加（ILM移植术、ILM翻瓣术、自体晶状体囊膜移植术等）、术中辅助药物更新（基因重组纤溶酶等）。各种治疗干预方式中，松解黄斑裂孔周围牵拉、提供Müller细胞增生支架和促进光感受器功能恢复是需要关注研究的重点，更安全的生物黏合剂、生物填充材料、干细胞移植、组织工程视网膜移植等可能是未来值得期待的治疗手段。本文就TMH治疗及研究进展进行综述。     

视网膜神经干细胞移植研究进展

视网膜退行性变可以导致视力严重受损甚至失明。来源于视网膜的神经干细胞具有向视网膜细胞分化的潜能,将其移植入退行性变的视网膜内可以实现视网膜部分功能的恢复。目前,有关视网膜神经干细胞体外培养、增殖、分化和移植方面的研究进展为视网膜组织再生及视功能的恢复带来了希望。     

大鼠视神经损伤后移植人胚胎神经干细胞的实验研究

目的 探讨异种神经干细胞注射到玻璃体腔后迁移到视网膜的存活及分化，为进一步研究重建视觉传导通路奠定基础。方法在近SD大鼠眼球后壁夹住视神经根部5min，造成视神经损伤，将起源于人胚胎大脑海马的神经干细胞悬浮液注射到SD大鼠的玻璃体腔中。移植的神经干细胞预先用荧光染料Hoechst标记。分别于手术后不同的时间处死，剥离出视网膜，进行免疫组织化学染色，在荧光显微镜下观察实验结果。结果宿主视网膜在荧光显微镜下可见Hoechst标记阳性的移植细胞，移植前移植细胞神经胶质原纤维酸蛋白（GFAP）阳性表达的，移植后为阴性表达。结论视神经损伤大鼠的玻璃体腔内注射起源于人胚胎大脑海马的神经干细胞，移植细胞可以迁移到视网膜组织中存活。     

CFDA-SE标记虹膜色素上皮细胞的自体移植

目的探讨兔眼自体虹膜色素上皮细胞（irispigment epithelialcells，IPECs）羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）标记后，采用单通道内路移植方法将传代的IPECs移植于视网膜神经上皮层下的可行性。方法取兔眼自体虹膜细胞分离培养并传代，于第3代经CFDA-SE染色后移植到自体视网膜神经上皮层下。术后不同时间应用彩色眼底照相、激光扫描检眼镜、光学相干断层扫描进行活体观察。不同时间点对移植眼进行切片并常规染色及免疫组化，用光学显微镜对移植细胞进行观察和评价。实验数据采用两均数的等效检验，以0．5倍标准差作为等效界值观察移植前后ZO-1和Actin表达情况。结果移植术后观察显示移植区界限清晰；激光扫描检眼镜可观察到移植区内荧光；光学相干断层扫描和HE染色均显示移植区神经上皮层下有色素上皮细胞堆积，并随时间推移堆积逐渐变平。经免疫组化显示移植区ZO-1、Actin呈棕色点，有规律的间断分布在Bruch膜上，IPECs嵌插在原始的RPECs间，且形成完整的单层。结论CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料，在IPECs移植中可作为理想的标记物应用；我们首次使用的单通道内路移植方法具有手术快捷简单、安全、并发症少等优点。[眼科新进展2007；27（3）：165-169】     

视细胞移植后RCS鼠视网膜超微结构观察

自八十年代以来视网膜移植在世界上蓬勃兴起 ,为临床上视网膜色素变性和黄斑病变等难治性眼病的治疗开辟了一条全新的道路。我们通过观察皇家外科学院 (royal college of sur-geon,RCS)大鼠 [1 ] 在接受正常 Wistar鼠的视细胞层后重建的视网膜超微结构 ,以了解视细胞移植术后 ,移植 Wistar鼠视细胞 ,RCS鼠视网膜超微结构的变化。1　材料和方法供体动物选用 Wistar雄性鼠 (体重约 2 0 0 g) ,受体鼠为雄性 RCS鼠 ,出生后 6 0 d,体重 180～ 2 0 0 g( 级实验动物 ,北京医科大学实验动物部提供 )。移植视细胞片的制备及视细胞移植见文献 [2 …     

视网膜移植抗原性的初步研究

目的：探讨视网膜的免疫原性，为视网膜移植的免疫排斥提供理论依据。方法：采用C57BL/6小鼠，提供视网膜全层、感光细胞层，受体为BALB/C小鼠，并设立阳性及阴性对照组，测定脚掌皮肤迟发性超敏反应及细胞毒性淋巴细胞功能。
结果：①异种全视网膜移植引起了迟发性超敏反应(P<0.05)，而异种感光细胞移植未引起迟发性超敏反应(P>0.05)。②异种全视网膜移植后产生了一定的细胞毒性淋巴细胞功能，在1：90浓度下的杀死率为33.4%，明显高于阴性对照组(同种脾细胞为5.3%，同种全视网膜为4.8%，P<0.05)，而经过抗CD₈单克隆抗体处理后其毒性淋巴细胞功能消失。 结论：异种全层视网膜有一定的移植免疫原性，而异种感光细胞移植可能没有明显的移植免疫原性。 （中华眼底病杂志，1997，13：234-236）     

兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的：探索用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，经改良的内路法，不经玻璃体切割的情况下进行视网膜下间隙的移植，方法：用酶1（含220kU/L透明质酸酶和0．1％的胰蛋白酶）松解视网膜神经上皮细胞与RPE细胞之间的联接，再用酶II（含0．25％胰蛋白酶）从Bruch膜上离散RPE细胞，制成细胞悬液，用特制的注射针头，通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙，结果：术后2周供体RPE细胞层呈单层排列于受体视网膜下间隙，并存活，未见明显炎症反应，电镜观察，术后7周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘模型成镶嵌关系。结论：改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间隙，并至少存活7周，改良的内路法渴望为视网膜移植的实验室研究提供一条可供借鉴的途径。     

视网膜色素上皮移植细胞超微结构的观察

目的 观察视网膜色素上皮移植细胞的超微结构,为临床应用提供实验基础。方法 取有色兔眼球后段,去除视网膜的神经上皮层,获得视网膜色素上皮细胞作为移植的供体细胞。以１０只无色兔为移植的受体,内路法将供体色素上皮细胞移植到视网膜下腔,电镜观察移植细胞的超微结构。结果 移植的１０只眼,细胞成功移植到视网膜下腔,可见移植细胞粘附于受体的Ｂｒｕｃｈ膜并形成基底内褶,细胞间紧密连接,细胞内可见吞噬体。结论 内路     

分离视细胞层的新技术

目的为了进行视网膜视细胞移植研究，必须分离出可供移植的视细胞。能否得到纯视细胞，是对视网膜视细胞移植实验获得正确分析和良好结果的关键。方法采用一种从视网膜中分离切取纯视网膜视细胞层的可靠方法。用组织细胞震动切削机（ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）切削视网膜，取得纯视网膜视细胞层。结果得到了可供移植的小鼠、大鼠、兔、猴及人的纯视网膜视细胞层。结论用此方法可获得视细胞纯度达１００％的纯视细胞层，方法可靠，操作较为简便。     

视细胞移植术后RCS鼠视网膜谷氨酸的分布

目的 通过纯视细胞移植,观察重建视网膜神经传导通路中兴奋性神经递质谷氨酸的分布和变化。方法取同龄Wistar鼠和皇家外科学院鼠(RCS)为供／受体,准分子激光切削法制备视细胞层,外路途径移入RCS鼠的视网膜下腔,术后两周取RCS鼠手术眼,手术对照眼,RCS对照眼,Wistar鼠眼。分别做冰冻切片,免疫组织化学染色法染色,普通光学显微镜下观察。结果在视细胞移植术后两周,移植视细胞存活,外丛状层重建,与手术对照眼、RCS对照眼相比,受体RCS鼠重建视网膜中在内丛状层和节细胞层Wistar鼠谷氨酸免疫反应阳性的神经纤维相对密度增多。结论视细胞移植不仅可以使RCS鼠视网膜重建正常的解剖结构,而且在移植后的视网膜中观察到兴奋性神经递质谷氨酸的分布接近正常。     

视细胞移植术后RCS鼠视网膜 γ-氨基丁酸的分布观察

目的通过纯视细胞移植, 观察重建视网膜神经传导通 路中抑制性神经递质γ氨基丁酸(γ-Aminobutyric Acid,GABA)的分布和变化。方法取同龄Wistar/皇家外科学院鼠(royal college of surgeon rat,RCS)为供/受体，准分子激光切削法制备视细胞层，外路途径移入RCS鼠的视网膜下腔，术后2周取RCS鼠手术眼，手术对照眼，RCS鼠对照眼，Wistar鼠眼。分别做冰冻切片，免疫组织化学染色法染色，普通光学显微镜下观察。测量内丛状层(inner plexiform layer,IPL)和节细胞层(ganglion cell layer,GCL)的光密度，计数无长突细胞的数量， 方差分析组间差异,配对t检验RCS鼠手术眼组内差异。结果在视细胞移植术后2周，移植视细胞存活，外丛状层重建 ，与手术对照眼，RCS对照眼相比，受体RCS鼠重建视网膜中内丛状层GABA免疫反应阳性 的神经纤维光密度测量值差异有显著性的意义 P < 0．001，而与Wi star鼠眼比较无明显区别。和手术对照眼，RCS对照眼，Wistar鼠组比，GABA能无长突细胞 (amacrine cell)明显增多(P<0．05)。节细胞层GABA阳性免 疫反应光密度测量值和上述几组比变化不明显(P>0．05)。接受移植的RCS鼠各部位的无长突细胞在移植部二侧和对侧赤道，后极部之间的差异无显著性 的意义( P = 0．3436)。结论视细胞移植不仅可以使RCS鼠视网膜重建正常的解剖结构，而且在移植后的视网膜中观察到抑制性神经递质GABA的分布接近正常，无长突细胞反应性增生。(中华眼底病杂志,2001,17:128-131)