纳米二氧化硅固定木瓜蛋白酶性能研究

目的：研究固定化木瓜蛋白酶的性质。方法：以纳米二氧化硅为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化木瓜蛋白酶。研究木瓜蛋白酶的最佳固定化条件以及固定化酶的酶学性质和动力学参数。结果：固定化酶的最适反应温度70℃,最适反应pH值为7.5,酶活回收率可达61.5％。结论：固定化酶催化的活性与游离酶相比不受显著影响。     

固定化脂肪酶的动力学研究

以壳聚糖为载体，用物理吸附固定化脂肪酶，对影响固定化过程的各种因素进行了考察，确定了最优条件，并比较了游离酶和固定化酶的最适温度、pH、酶的热稳定性以及表观Km。固定化酶水解的最适pH(pH7．0)稍低于游离酶(pH8．0)，最适温度为50℃(游离酶为40℃)。固定化酶在50℃的半衰期(0．96h)是游离酶(0．32h)的3倍，在4℃的冰箱中贮存3个月活力变化很小。     

PGA在含环氧活性基的多孔高聚物载体上的固定化及修饰

研究了青霉素G酰化酶(PGA)在含环氧活性基的多孔高聚物载体上的固定化及修饰,优化固定化条件为1 mol/L,pH 8.0的磷酸钾缓冲体系,每克载体(湿重)投酶量为500~550 U,30℃下150 r/min固定化36~48 h,得到的固定化酶表观酶活为每克载体(湿重)177 U,表观酶活回收率35%。固定化酶经巯基乙醇修饰后提高了热稳定性。固定化酶水解青霉素G的最适pH为9.0,最适温度为47℃,在pH 4~9,40℃以下稳定。固定化酶的各项性能均优于游离酶。     

甲壳糖固定血管紧张素转换酶的制备及其性质

目的 将血管紧张素转换酶(ACE)固定化并测定其动力学性质。方法 以甲壳糖为载体，碳二亚胺(EDC)为交联剂，与分离纯化的ACE混合,使ACE固定化；并以马尿酰甘氯酰甘氨酸(HCG)为底物，分别测定了其游离酶和固定化酶的动力学性质。结果 固定化酶活力110u／g湿重，固定化率为22％，与游离酶比较，固定化酶稳定且具良好的耐热性，在50—80℃固定化酶较游离酶稳定。在pH7．1的底物缓冲体系中，37℃，游离酶Km=0.026mol／L；在间歇振摇下固定化酶的表现Km=0．040mol／L。游离酶最适pH为、8.0固定化酶最适pH为9．0。结论 用甲壳糖固定ACE方法简便可行，且固定后的甲壳糖性能稳定，有广阔的应用前景。     

以甲壳胺为载体固定乙酰胆碱酯酶

目的 探讨以甲壳胺为载体固定乙酰胆碱酯酶的最佳条件及固定化酶的理化性质.方法 以戊二醛为交联剂,将乙酰胆碱酯酶固定在甲壳胺上,并分别测定固定化酶与溶液酶的活力.结果 固定化酶与溶液酶的最适温度相同,均为37℃;固定化酶与溶液酶最适pH分别为8.2、8.0;固定化酶在50℃仍有较高热稳定性,而溶液酶活力明显下降;固定化酶的米氏常数Km=0.84 mmol/L,溶液酶的Km=1.16 mmol/L;固定化酶活力回收为44.66%,在重复使用8次后仍能保持原有活力的50%.结论 该固定化酶与溶液酶相比,其热稳定性提高,与底物的亲和能力增大,且重复使用性较好.     

酶解牛肉工艺的研究

目的 研究木瓜蛋白酶和风味酶对牛肉进行分步酶解的最佳工艺参数.方法 本实验以木瓜蛋白酶和风味酶为水解酶对牛肉进行分步酶解,在单因素的基础上采用了正交试验对水解条件进行优化.结果 先用木瓜蛋白酶在加酶量为0.1%、料液比为3:1、温度为65 ℃、pH=7.0的条件下酶解1 h,再用风味酶在加酶量为0.4%、温度为55 ℃、pH=6.0的条件下酶解5h.结论 在此方法 下的牛肉水解物经美拉德反应生成的反应物肉香味更加浓郁,游离氨基酸含量较高.     

AS1-398中性蛋白酶固定化条件的初步研究

考察壳聚糖、卡拉胶、海藻酸钠、琼脂等固定化载体对ＡＳ１３９８中性蛋白酶固定化的影响。确定０３％戊二醛在３０℃,ｐＨ８．０的条件下处理壳聚糖８１０ｈ,加酶液,固定８ｈ,酶活力回收约为７７％,固定化酶最适作用温度为５５℃,最适作用ｐＨ为８０;固定化酶的稳定性比游离酶的稳定性有显著提高。     

重组日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH)酶学特性的研究

目的获得重组SjLDH主要的酶动力学参数。方法分光光度计测定NADH在340nm处吸光度的变化,检测不同pH及温度下重组蛋白催化正、逆反应的效率以确定其最佳pH、最佳温度;分别固定底物NADH、丙酮酸、NAD＋及乳酸浓度,分别测定丙酮酸、NADH、乳酸及NAD^＋在不同浓度下的反应速度,计算机Lineweaver-Burk双倒数方程回归计算各底物的米氏常数（Km值）、最大反应速度（Vmax）。并比较各自的Vmax／Km值。结果重组蛋白酶活性为379U／mg。催化正、逆反应的最佳pH分别为pH6．0—7．0和pH9．0—10．0;催化正、逆反应的最佳温度分别为37—60℃及40—50℃,后者在70℃时仍有较高催化活性;在NADH辅酶作用下,重组SjLDH催化丙酮酸还原为乳酸的最大反应速度是催化NAD＋作用下乳酸氧化为丙酮酸的21倍。比较丙酮酸与乳酸的Vmax／Km值。前者是后者的23倍。而NADH的Vmax／Km值是NAD＋的7倍。结论重组蛋白在生理条件下主要催化丙酮酸还原为乳酸的反应。     

壳聚糖固定α-淀粉酶的研究

目的　从虾蛄壳提取壳聚糖 ,将α-淀粉酶固定在壳聚糖上。　方法　以自制壳聚糖为载体 ,一氯乙酸或三氯乙酸为交联剂 ,将α-淀粉酶固定化。　结果　三氯乙酸是较好的交联剂。固定化酶与原酶的最适 p H及最适温度基本相同 ,均为 6.5 ,5 0℃ ;固定化酶在 65℃仍有较高热稳定性 ,而原酶活力明显下降 ;固定化酶的表观米氏常数 Km =0 .6× 10 -2 g/ml,原酶 Km =1.1× 10 -2 g/ml;一定浓度 Cl-、Br-离子有助提高固定化酶活力。　结论　该固定化酶活力较高 ,热稳定性和贮存稳定性好 ,是良好的检测试剂。     

载天冬酰胺酶纳米囊的活性及体外稳定性评价

目的 制备载天冬酰胺酶(asparaginase,AN)透明质酸-聚乙二醇[hyaluronic acid-graft-poly(ethylene glycol),HA-g-PEG]/α-环糊精(α-cyclodextrin,α-CD)纳米囊(HA-g-PEG/α-CD hollow nanocapsules loaded with asparaginase,AHAPs),并对其体外活性及稳定性进行初步考察.方法 采用自组装法制备AHAPs,测定AHAPs的最适温度、最适pH、粒径、zeta电位和包封率,并通过热稳定性、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、抗金属离子和有机化合物能力、血浆稳定性和贮存稳定性实验对游离AN与AHAPs的体外稳定性差异进行考察.通过荧光实验对AN与空白HA-g-PEG/α-CD纳米囊的相互作用进行研究.结果 AHAPs的最适温度为50℃,最适pH值为7.0,测得平均粒径为(424.53±7.25) nm,zeta电位为(-48.77±0.99) mV.经计算,AHAPs的平均包封率为(64.40±1.82)％.稳定性实验结果显示,AHAPs中AN的体外稳定性及活性明显优于游离AN,且部分实验结果差异具有统计学意义(P＜0.05).荧光实验结果表明,AHAPs中AN生物活性的提高可能与AN和空白HA-g-PEG/α-CD纳米囊的相互作用引起蛋白质残基微环境和酶构象改变相关.结论 AHAPs不仅提高了AN的活性,而且明显增强了AN的体外稳定性.