阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的研究

明确化疗药物诱导急性白血病细胞凋亡的规律及在急性白血病化疗中的意义。方法应用光镜、电镜,结合ＤＮＡ电泳及流式细胞仪分析技术,观察阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）诱导的急性髓系白血病细胞系ＨＬ－６０凋亡模式。结果Ａｒａ－ｃ诱导的细胞凋亡在０～３６小时过程中持续存在,逐渐增强,其诱导效率呈剂量性增强。而且,经其他６种化疗药物诱导后,ＨＬ－６０以及经ＤＡ方案化疗的１例急性髓系白血病患者外周血白细胞,均表现典型的ＤＮＡ梯形图谱。进一步分析表明,化疗诱导凋亡与其下调ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达有关。结论化疗药物诱导的细胞凋亡是化疗的关键机制     

槲皮素逆转白血病细胞株HL-60/ADM多药耐药的研究

目的探讨槲皮素(Que)逆转白血病细胞多药耐药在膜转运蛋白方面的机制。方法通过四唑蓝体外药敏法,检测Que对柔红霉素(DNR)的增敏作用,并以不同浓度作用于HL-60／ADM耐药株及相应敏感株HL-60;运用逆转录多聚酶链式反应和流式细胞术,检测HL-60／ADM和HL-60细胞株多药耐药相关基因1(MRP1)及其膜蛋白产物MRP1蛋白的表达情况;借助激光共聚焦显微镜,观察DNR在亚细胞水平的分布变化。结果20～40μmol／L终浓度的Que在体外能明显提高DNR对HL-60／ADM耐药株的敏感性,并能下凋MRP1基因及其膜蛋白产物MRP1的表达,使DNR回归于细胞核内,从而逆转多药耐药,而且对细胞本身无明显毒性作用。结论Que有可能成为蒽环类药物治疗白血病的有效且低毒的化疗增敏剂。     

甲异靛诱导白血病细胞HL-60凋亡及机制探讨

背景与目的:甲异靛可有效治疗慢性粒细胞白血病,但其抗白血病的机制尚不清楚。本研究拟观察甲异靛诱导急性白血病细胞株HL-60细胞凋亡的作用及促凋亡机制。方法:用台盼蓝拒染实验观察甲异靛对HL-60细胞增殖抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;荧光显微镜观察细胞形态学的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和Fas蛋白的表达;免疫蛋白印迹法分析caspase-9、caspase-8、caspase-3、PARP、bcl-2、bax和胞浆细胞色素c的含量。结果:甲异靛可抑制HL-60细胞增殖和诱导其凋亡。20μmol/L甲异靛处理HL-60细胞12～48h可明显抑制HL-60细胞增殖;20μmol/L甲异靛作用于HL-60细胞1h,凋亡百分比为(3.70±0.56)%,当延长至3h、6h和12h凋亡细胞比例分别上升至(19.80±1.13)%、(29.20±2.69)%和(47.05±7.70)%,较阴性对照组[(2.65±0.78)%]明显增高(P<0.05)。HL-60细胞经甲异靛处理3h后出现细胞核染色质浓集和DNA梯形条带。甲异靛处理HL-60细胞1h后死亡受体Fas阳性率由(9.35±0.21)%升高到(21.30±1.27)%(P<0.05)。甲异靛可活化HL-60细胞的caspase-8、caspase-9、caspase-3和PARP,降低抗凋亡蛋白bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白bax,并升高细胞浆中细胞色素c的浓度。caspase-3抑制剂(z-DEVD-fmk)可以减少甲异靛对HL-60细胞的增殖抑制,降低细胞凋亡率。100μmol/Lz-DEVD-fmk预处理HL-60细胞后再加入20μmol/L甲异靛,5h后凋亡率为(16.5±5.5)%,甲异靛组为(29.8±5.4)%(P<0.05);12h后计数,抑制剂加甲异靛组活细胞高达(3.57±0.18)×105/ml,甲异靛组活细胞仅为(1.80±0.14)×105/ml(P<0.05)。结论:甲异靛可诱导HL-60细胞凋亡,其机制与caspases和bcl-2家族蛋白的调节有关。     

ADVANCES IN THE STUDY ON LEUKEMIA STRAINS AND LEUKEMIA CELL LINES IN CHINA

ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＴＨＥＳＴＵＤＹＯＮＬＥＵＫＥＭＩＡＳＴＲＡＩＮＳＡＮＤＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬＬＩＮＥＳＩＮＣＨＩＮＡＣｈｅｎｇＬｉ；程立；ＹｉｎＬｉａｎｈｕａ；殷莲华（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＭ...     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白     

干扰组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1基因对急性白血病HL-60和SHI-1细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨shRNA干扰组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）基因对急性白血病（AL）细胞增殖与凋亡的影响。方法构建慢病毒载体介导LSD1干扰的AL稳定细胞株HL-60和SHI-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Western blot方法检测两细胞株LSD1抑制效果,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖,采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果 LSD1干扰后,HL-60和SHI-1细胞株的LSD1 mRNA和蛋白表达水平（mRNA：0.242±0.023、0.207±0.006,蛋白：0.256±0.015、0.486±0.042）较未经转染处理的空白对照组（mRNA：1.021±0.178、1.039±0.395,蛋白：0.552±0.026、0.754±0.060）和空载体阴性对照组（shNC组）（mRNA：0.935±0.136、1.016±0.203,蛋白：0.500±0.026、0.750±0.049）均下调（P＜0.05）,且细胞增殖水平（吸光度值分别为0.712±0.010、0.549±0.007）低于空白对照组（吸光度值分别为0.823±0.010、0.625±0.005）和shNC组（吸光度值分别为0.818±0.019、0.621±0.003）（P＜0.05）,而细胞凋亡率[（32.80±1.35）%、（23.49±1.40）%]高于空白对照组[（8.08±0.62）%、（7.28±1.17）%]和shNC组[（8.00±0.32）%、（7.19±0.65）%]（P＜0.05）。结论慢病毒载体介导的shRNA干扰LSD1使AL细胞株HL-60和SHI-1增殖受抑制,凋亡增加。 LSD1有可能成为AL的生物分子标志和治疗新靶点。     

Potentiation of retinoid-induced differentiation of HL-60 and U937 cell lines by cytokines

Retinoids varied in their capacity to induce differentiation in HL-60 cells in this order: Ro 13-6307, tretinoin, isotretinoin, acitretin and Ro 13-7410 (high to low). In contrast, retinoids lacking a polar carboxylic acid, such as temarotene and Ro 14-6113, were inactive. Various cytokines had no differentiation-inducing effect by themselves. However, the addition of cytokines to retinoids increased differentiation. Combined with tretinoin, cytokines increased differentiation in this order: interferon (IFN) gamma, granulocyte colony-stimulating factor, interleukin-1α (IL-1α), IL-4, tumour necrosis factor alpha and IFN-α. Combination of cytokines with isotretinoin, acitretin, Ro 13-7410, and Ro 13-6307 showed a similar pattern of potentiation to that of tretinoin. Temarotene or Ro 14-6113 did not induce differentiation, alone or with cytokines. Combinations of cytokines were not synergistic in the presence of retinoids; antagonism was even observed. In U937 cells, lower levels of differentiation-induction were observed. Potentiation of the differentiation-inducing effect of retinoids by cytokines might indicate a clinical differentiation therapy of tumours.     

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

 目的 研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法 以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8 MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 超声辐照K562细胞后24 h,8 mV×5 min组及8 mV×10 min组细胞凋亡率分别为2.3 %和8.28 %;10 mV×5 min及10 mV×10 min组细胞凋亡率分别为9.36 %和21.46 %。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5 h,1 h,3 h,5 h细胞凋亡率分别为1.9 %,3.6 %,5.7 %,7.7 %。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。     

甲氧胺联合手霉素对白血病U937细胞凋亡的影响

背景与目的:DNA损伤修复对细胞生存很重要。我们既往的研究发现手霉素可诱导肿瘤细胞出现DNA损害反应。因此,碱基切除修复抑制剂甲氧胺(methoxyamine)有可能增强手霉素(manumycin)的抗肿瘤作用。为此,本实验研究甲氧胺对手霉素诱导白血病细胞凋亡的影响,探讨联合甲氧胺和手霉素诱导白血病细胞凋亡过程中线粒体凋亡途径的变化。方法:不同浓度手霉素和甲氧胺处理U937细胞48h后,MTT细胞毒性测定U937细胞存活率,软琼脂法检测细胞的克隆形成。应用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、Caspase-9、聚腺苷核糖聚合酶(poly-adenosyl ribose polymerase,PARP)的表达。中位效应方法评价两药的相互作用。结果:甲氧胺使手霉素的剂量反应曲线向左边移动,结合指数(CI)<1(P<0.05)。1μmol/L手霉素、5mmol/L甲氧胺和联合两药处理U937细胞,相对于对照组的克隆形成分别是0.3641±0.0463,0.7541±0.0379,0.0473±0.0024(联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,P<0.05);进一步发现,联合两药协同诱导细胞凋亡,引起Annexin V荧光值增加,阳性细胞增加,分别是(2.34±0.30)%、(8.80±0.95)%、(2.21±0.19)%、(13.37±0.91)%,联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合甲氧胺和手霉素增强细胞色素C从线粒体释放到细胞浆,Caspase-9激活,PARP特异性裂解。结论:甲氧胺增强手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937细胞凋亡,提示甲氧胺联合FTIs和DNA修复抑制剂治疗白血病的可能性。     

~(131)I-GMCSF诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期阻滞的研究

目的　观察和探讨1 31 I-GMCSF诱导HL - 6 0细胞凋亡及其与细胞周期的关系。方法　采用体外放射免疫治疗模型,通过MTT比色法、TUNEL来研究1 31 I -GMCSF辐射后HL - 6 0细胞的存活率、凋亡率的改变;用流式细胞术及免疫细胞化学方法细胞周期的改变。结果　放射性浓度≥18.5×10 8Bq/L时HL - 6 0细胞存活率显著下降。1 31 I -GMCSF能致HL - 6 0细胞凋亡、细胞发生G2 /M期阻滞。结论　GMCSF作为载体携带1 31 I能诱导HL - 6 0细胞凋亡,凋亡与细胞发生G2 /M期阻滞有关。     

As2O3诱导白血病细胞凋亡过程中活性氧自由基的变化

目的 研究As2O3对白血病细胞株NB4，K562，HL－60的活性氧自由基（ROS）的影响。方法 细胞内活性氧（ROS）用DCFH－DA标记，并用流式细胞仪检测。结果 0.6μmol/L As2O3作用72h能诱导NB4发生44.9%的凋亡，提高其浓度至2.7和8.1μmol/L，也能诱导K562和HL－60分别发生58.3％和62.3％。As2O3能显著降低三种细胞内ROS水平，且随浓度增加而降低。As2O3无论高浓度短时间作用或低浓度长时间作用对细胞内ROS抑制作用是相似的。结论 ROS水平下降在As2O3的诱导凋亡作用过程起了重要作用。     

HAG方案促白血病细胞株凋亡的机制

 目的　探讨HAG方案对白血病细胞株HL-60和U937的体外作用效果及机制,为临床急性白血病治疗提供指导。方法　以HL-60及U937为实验模型,体外分为单药组,加阿糖胞苷（Ara-C）、高三尖杉酯碱,二药联合组（HA）和以G-CSF为预激的HAG三药组,分别作用 24、48 h后收集细胞,进行细胞计数,细胞形态观察,CCK-8法检测不同药物的组合对二种细胞株的生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡标志AnnexinⅤ和PI、细胞分化抗原CD11b、线粒体膜电位JC-1及Caspase-3。结果　G-CSF预激24 h后,S期细胞明显增多（P＜0.05）。经HAG作用48 h后,HL-60和U937细胞数量明显减少,形态观察显示凋亡小体增多,早期凋亡标志AnnexinⅤ明显增高,三药联合组与单药组及两药联合组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且对U937细胞株凋亡作用优于HL-60细胞株。CD11b在三组间表达差异无统计学意义（P＞0.05）。药物作用后HL-60和U937线粒体膜电位崩塌的细胞比例增加,三药组显著高于单药组及对照组差异有统计学意义（P＜0.05）;药物作用后Caspase-3被激活,三药组及单药组与对照组相比Caspase-3的荧光强度显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　HAG的体外研究证实该方案主要通过降低线粒体膜电位途径从而起到诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

Autocrine and possible intracrine regulation of HL-60 cell proliferation by macrophage colony-stimulating factor

The abnormal expression of macrophage colony stimulating factor (M-CSF) isoforms, i.e. membrane bound M-CSF (m-M-CSF) and intracellular M-CSF (c-M-CSF), and their receptor were reported in some leukemia and tumor cells. Furthermore, the nuclear localization of them may be related to poor prognosis and metastasis, while the mechanism is uncertain. We previously reported that m-M-CSF and its receptor played auto-juxtacrine and adhesion molecule role in human leukemia cell line J6-1. In this paper, we show that HL-60 cells highly express M-CSF and its receptor. The localization of positive reactions was mainly in cytoplasma and nuclear in HL-60 cells. In cytoplasma and nuclear, three isoforms of M-CSF were found with molecular weight (MW) of 20, 16 and 14 kDa, while one type of m-CSF receptor (M-CSFR) was discovered with MW of 120 kDa. Immunoprecipitation assay showed that these ligands could exist separately or binding with their receptor. Monoclonal antibody (McAb) against M-CSF and anti-sense oligodeoxynucleotides (ASON) blocking M-CSF expression inhibited the proliferation of HL-60 cells. McAb and ASON regulated the expression of cyclin D1/E, CDK2/4 and p16. Simultaneous administration of both McAb and ASON inhibited the proliferation of HL-60 cells and modulate the expression of cyclins at greater degrees. Our results suggested an autocrine and possible an intracrine loop of M-CSF/M-CSFR in HL-60 cells.     

Alkylphosphocholines induce apoptosis in HL-60 and U-937 leukemic cells

Alkylphosphocholines (APC) represent a new group of ether-lipid-related compounds with remarkable activity against transformed cells in vitro and good tolerability in vivo. Their mechanism of action remains unknown. The aim of the present study was to investigate the effects of a series of APC on three human leukemic cell lines: K-562, HL-60, and U-937. The tetrazolium dye-reduction (MTT) assay and cell counting were used to determine the cytotoxicity of the APC used. DNA gel electrophoresis and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) detection of oligonucleosomes were performed to identify and quantify DNA fragmentation. Electron and phase-contrast microscopy were used to detect morphologic changes specific for programmed cell death. HL-60 and U-937 cells were found to be sensitive, but K-562 cells were relatively resistant to APC exposure. APC with long alkyl chains exerted stronger cytotoxicity than did those with short alkyl chains. DNA fragmentation was found after treatment with APC in HL-60 and U-937 cells but not in K-562 cells. In HL-60 cells the increase in mono- and oligonucleosome formation as measured by ELISA was correlated with the length of the alkyl chains at 14 h of exposure to APC but plateaued at 20 h. The morphologic alterations in HL-60 and U-937 cell lines, such as cell shrinkage, chromatin condensation, and formation of apoptotic bodies, confirmed the induction of apoptosis after APC exposure. It is concluded that programmed cell death plays an important role in the cytotoxicity of APC against certain human leukemic cell lines. The antineoplastic profiles of APC with long alkyl chains render them attractive for further therapeutic application. Received: 1 September 1996 / Accepted 4 July 1997     

全反式维甲酸对HL-60细胞分化和凋亡的影响

背景与目的：用全反式维甲酸(all trans retinoid acid,ATRA)治疗早幼粒细胞性白血病(premyeloid leukemia,M3)在肿瘤治疗史上是一个重要里程碑。已有研究表明,ATRA治疗白血病的机理是诱导白血病细胞向成熟细胞方向分化,然而人们对分化的肿瘤细胞最终去向还不完全清楚。本实验进一步探讨ATRA诱导HL-60细胞分化和凋亡的关系。方法：以分化诱导剂ATRA(终浓度为10μmol／L)作用不同时间的HL-60细胞为检测对象,应用流式细胞仪分析细胞表面的分化标志物及细胞周期;经碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后,激光共聚焦显微镜下对已分化细胞进行形态学确认;应用流式细胞仪检测药物诱导后不同时间点的细胞凋亡。结果：(1)随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大,在72h后,被诱导细胞开始表达分化标志物CD11b并出现细胞核型的变化;(2)在药物诱导96h后,细胞开始出现了凋亡峰,而在药物诱导72h后脱药培养8h,则可以出现高于96h的凋亡峰。结论：ATRA并不能诱导HL-60细胞完成终端分化,但是该药可以诱导白血病细胞向成熟方向分化,而且已分化的肿瘤细胞易于发生凋亡。     

YC-1抑制人类白血病细胞株 U937、THP-1增殖作用的研究

 【摘要】　目的　探讨YC-1对人类白血病细胞株U937和THP-1增殖、凋亡、周期及Caspase-3、-8、-9蛋白表达的影响。方法　实验分为YC-1组（1.0、3.0、10.0 μmol／L）,以不加YC-1组为对照。四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡及周期;Western blot检测Caspase-3、-8、-9蛋白表达的变化。结果　1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1以剂量依赖方式抑制U937、THP-1细胞增殖,24 h细胞存活率分别为（76.5±4.4）%、（68.7±6.8）%、（60.9±13.2）%,（94.1±1.4）%、（81.4±2.0）%、（72.7±3.0）%,与对照组的100 %比较差异均有统计学意义（F＝15.870、126.629,均P＜0.01）。U937、THP-1细胞经1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1作用24 h后,凋亡率分别为（40.7±1.0）%、（55.6±2.3）%、（71.8±1.5）%,（34.6±2.0）%、（50.3±3.5）%、（59.6±4.6）%,与对照组的（4.7±1.4）%、（1.8±1.0）%比较差异均有统计学意义（F＝937.229、200.447,均P＜0.01）,但细胞周期无明显变化。经1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1作用24 h后,U937细胞Cleaved Caspase-3、-8蛋白表达上调,Caspase-9无变化,THP-1细胞Cleaved Caspase-3蛋白表达上调,Caspase-8、-9无变化。结论　YC-1能够抑制U937、THP-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对周期无影响,其诱导白血病细胞凋亡的机制可能与Caspase蛋白活化有关。     

白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究

目的  探讨白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4经外源性IL-33以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）特异抑制剂（SB203580）处理72 h后,采用Annexin V/DAPI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞周期检测试剂盒检测细胞周期,Western blot 检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases 1,CDK1）蛋白表达以及p38 MAPK的磷酸化水平。结果 与对照组相比,IL-33组的HL-60和NB4细胞经IL-33作用后,细胞凋亡水平降低（P<0.05）,细胞周期中S期比例升高（P<0.001）;而SB+IL-33组细胞经SB203580和IL-33联合处理后,细胞凋亡水平高于IL-33组（P<0.05）,S期细胞的百分比低于IL-33组（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与对照组相比,IL-33组细胞的p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK） 水平和CDK1蛋白表达水平均显著增高（均P<0.05）,而SB+IL-33组的p-p38 MAPK水平以及CDK1水平较IL-33组显著下降（均P<0.05）。 结论 IL-33可通过激活p38 MAPK,抑制急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4细胞的凋亡,抑制细胞周期停滞。     

EKI-785对U937细胞系的生长调节作用

目的探讨erbB家族受体在急性单核细胞白血病细胞系U937中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测erbB家族成员在U937细胞中的表达情况,Western blot检测erbB2在蛋白水平的表达。以erbB受体抑制剂EKI-785处理细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验并绘制细胞生长曲线,观察细胞的生长变化情况;应用Annexin V/PI双染和流式细胞仪计数,观察细胞是否发生凋亡;Western blot检测细胞增殖生长信号的变化。结果在U937细胞中,除了erbB1外,其他erbB受体均有表达,且erbB2有蛋白水平的表达。经过1、2、4和8μmoL/L EKI-785处理48h后,U937细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为(10．49±3．69)%、(13．79±2．13)%、(31．42±3．90)%和(44．05±1．56)%,并呈现出比较明显的浓度依赖关系。EKI-785诱导U937细胞发生了早期凋亡,4μmol/L EKI-785处理U937细胞48和72h,Annexin- V~+/PI~-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．03倍和6．64倍。经4μmol/L EKI- 785作用24、48、72h后,磷酸化的MEK和Akt蛋白水平随着时间延长不断下降,72h时磷酸化的MEK和Akt几乎消失。结论erbB家族受体很可能在某些类型的白血病发生中发挥重要作用,有望成为这些白血病的新治疗靶点,EKI-785具有治疗白血病的应用前景。     

Lipid raft disruption prevents apoptosis induced by 2-chloro-2'-deoxyadenosine (Cladribine) in leukemia cell lines

To clarify the role of lipid rafts in 2-chloro-2′-deoxyadenosine (2CdA; Cladribine)-induced apoptosis, the effects of disruption of lipid rafts by methyl-β-cyclodextrin (MβCD) and filipin on 2CdA-induced apoptosis were investigated in four human acute lymphoblastic leukemia (ALL) cell lines comprised of T cells (MOLT-4, Jurkat) and B cells (NALM, BALL-1). The disruption of lipid rafts significantly inhibited 2CdA-induced apoptosis, indicating the crucial role of lipid rafts in the induction of apoptosis in leukemia cells. These reagents significantly inhibited 2CdA-induced elevation of the intracellular calcium concentration ([Ca²⁺]_i) in MOLT-4 cells, and 2CdA-induced apoptosis was partly inhibited by the Ca²⁺ chelators BAPTA-AM and EGTA, and the L-type Ca²⁺ channel blocker nifedipine. On the other hand, they had no effects on the cellular uptake of 2CdA. These results indicated that lipid rafts partly contributed to 2CdA-induced apoptosis by regulating Ca²⁺ influx via the plasma membrane.