组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人骨髓瘤U266细胞生长的影响及其可能机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)MS-275对人骨髓瘤细胞U266的凋亡抑制基因生存素(survivin)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测survivin、p21、细胞周期依赖激酶4(CDK4)和NF-κB的抑制蛋白(IKB-α)等的表达,以及凋亡信号通路中caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.结果 MS-275抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,呈时间-剂量依赖性.MS-275作用U266细胞48 h的IC50为1.39μmol/L.2 μmol/L MS-275作用U266细胞24 h后,G0/G1期细胞所占比例为(64.57±4.09)%;作用36 h后,G0/G1期细胞所占比例为(87.20±2.83)%;瑞氏-姬姆萨染色显示,U266细胞形态发生明显变化.Western blot检测表明,MS-275作用U266细胞后,survivin和CDK4表达下降,p21表达增加,IκB-α磷酸化水平受到明显抑制,caspase-3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切,细胞发生凋亡.结论 MS-275可诱导人骨髓瘤细胞系U266凋亡,NF-κB信号通路阻断是凋亡发生的机制之一.     

Annexin 2基因对多发性骨髓瘤细胞侵袭力的影响及相关机制

 目的
了解Annexin 2(AnxA2)基因对骨髓瘤U266、RPMI8226细胞侵袭力的影响及相关机制。方法采用siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMI8226细胞,应用Real-time PCR、Western blot鉴定干扰效果。继而应用Transwell板检测细胞侵袭力,应用Real-time PCR检测对侵袭相关基因的影响。结果AnxA2 siRNA转染U266和RPMI8226细胞可明显降低细胞侵袭力(P<0.05),同时降低侵袭相关因子MMP-2、MMP-9、MT1-MMP和TIMP-2的表达(P<0.05)。结论AnxA2基因在骨髓瘤细胞U266和RPMI8226侵袭中起促进作用。     

RNA干扰抑制FANCD2基因对多药耐药骨髓瘤细胞株药物敏感性的影响

目的：探讨FA/BRCA（fanconi anemia/BRCA）中siRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响.方法：体外培养多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞系,通过相应渐增浓度的马法兰药物处理,选择性获得多药耐药的子代肿瘤细胞株RPMI-8226/R细胞.MTT法检测RPMI-8226和RPMI-8226/R细胞马法兰、ADM、VCR、CTX、Ara-C、VP-16及DDP的敏感性.siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达,观察多发性骨髓瘤多药耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化.结果：成功构建针对FANCD2基因的siRNA,将其转染多药耐药骨髓瘤细胞株,可以抑制细胞中FANCD2基因表达,转染细胞较转染前细胞FANCD2基因表达降低,对烷化剂的敏感性升高.结论：人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中FANCD2表达增强有关,可通过抑制FANCD2表达而逆转细胞的耐药性达到增强烷化剂对耐药肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性,而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法,因此它可能是一种有潜力的耐药MM辅助治疗新方法.     

miR-4298靶向TGIF2影响多发性骨髓瘤细胞的增殖和迁移的机制研究

目的 研究微小RNA-4298（miR-4298）对多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响以及作用机制。 方法 荧光定量PCR（qPCR）检测miR-4298在多发性骨髓瘤细胞系（U-266、SKO-007、RPMI-8226）中的表达量；RPMI-8226细胞随机分为对照组（常规培养细胞）、miR-NC组（转染miR-4298阴性对照）、miR-4298组（转染miR-4298模拟物）；qPCR检测转染效果，分别采用细胞计数（CCK-8），细胞划痕和Transwell实验检测RPMI-8226细胞增殖、迁移和侵袭能力， TargetScan预测，双荧光素酶报告基因验证miR-4298与转化生长交互作用因子2（IGFIF2）的靶向关系，蛋白质印迹法（Western blot）检测TGFB诱导因子同源盒2（TGIF2）蛋白表达水平。结果 miR-4298在多发性骨髓瘤细胞系（U-266、SKO-007、RPMI-8226）中表达量下调（P<0.05）；上调miR-4298抑制RPMI-8226细胞增殖（P<0.05），降低其迁移、侵袭（P<0.05）；TGIF2是miR-4298下游靶基因；miR-4298与TGIF2蛋白水平呈线性负相关；上调TGIF2能逆转miR-4298对RPMI-8226细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-4298在多发性骨髓瘤细胞系表达量下调，其可能通过抑制TGIF2阻碍RPMI-8226细胞增殖、迁移、侵袭。     

苦瓜蛋白MAP30 通过AKT/mTOR通路促进多发性骨髓瘤细胞的自噬和凋亡

[摘要] 目的：探讨苦瓜蛋白MAP30 在多发性骨髓瘤中的作用及其机制。方法：将人骨髓瘤RPMI-8226、NCI-H929 和U266 细胞为靶细胞,以不同浓度（1～10 μmol/L）的MAP30 处理后,采用CCK-8 法检测多发骨髓瘤细胞株RPMI-8226、NCI-H929和U266 的增殖能力,Annexin V/PI 流式细胞术检测骨髓瘤细胞的凋亡情况,Wb实验检测骨髓瘤细胞凋亡相关蛋白（PARP）、自噬相关蛋白（LC3II、P62）及AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平,CCK-8 法、流式细胞术和Wb实验检测MAP30 联合自噬激动剂雷帕霉素（Rap）或自噬抑制剂巴弗洛霉素（Baf）作用后骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的变化。结果：MAP30（1～10 μmol/L）抑制骨髓瘤细胞的增殖,且其对增殖的抑制呈时间和剂量依赖关系（P<0.05 或P<0.01）。MAP30 单独作用骨髓瘤细胞后,细胞凋亡和细胞自噬增加,PARP裂解增多,LC3II 表达水平增加,P62 表达明显下降（均P<0.05 或P<0.01）;MAP30+Rap 作用骨髓瘤细胞后,较单用MAP30 细胞增殖率增加、细胞凋亡率减少、细胞自噬减少、PARP裂解降低、LC3II 表达降低及P62 表达增加（均P<0.05 或P<0.01）;相反,MAP30+Baf 作用骨髓瘤细胞较单用MAP30,细胞增殖率减少、细胞凋亡率增加、细胞自噬增加、PARP裂解增加、LC3II 表达增加、P62 表达降低（均P<0.05 或P<0.01）;MAP30 作用骨髓瘤细胞后,AKT/mTOR通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR表达水平明显降低（均P<0.05）。结论：MAP30 可通过AKT/mTOR通路促进骨髓瘤细胞的凋亡和自噬,可能为骨髓瘤的治疗提供新的治疗策略。     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞凋亡机制研究

目的 了解三氧化二砷（As2O3)诱导多发性骨髓瘤细胞（MM）凋亡的可能机制及其与维甲酸和干扰素的相互作用。方法 联合应用As2O3和巯基还原剂（DTT）、谷胱甘肽耗褐剂（BSO）、全反式维甲酸（ATRA）或干扰素（ＩＦＮ－α）处理MM细胞系RPM18226和U266细胞;应用台盼蓝拒染法计数细胞活力,经细胞形态学和流式细胞仪等判定细胞凋亡的程度;通过测定细胞内荧光染料Rhodamine123的色强度分析线粒体跨膜电位（△ψm)。结果 BSO可加强As2O3诱导的RPM18226和U266细胞线粒体△ψm下降和凋亡,而DTT则有部分拮抗的作用,ATRA诱导RPMI8226细胞闻过则喜亡,但它和As2O3之间无协同效尖,ATRA并不诱导U266细胞凋亡。此外,INF-α,既不抑制RPMIS226和U266细胞的生长和活力,也不改变As2O3对这些细胞的作用。结论 As2O3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和巯基有关,但ATRA干扰素和As2O3无协同效应。     

脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合诱导U266细胞凋亡和p16基因重新表达

背景与目的：DNA甲基化调节基因表达与组蛋白脱乙酰化的作用密切相关,针对这两大途径用药,观察对肿瘤细胞的影响是有意义的,本文探讨脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠（sodium phenylbutyrate,SPB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)处理人骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法：通过透射电镜,DNA梯形条带及流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR和Western blot检测p16表达水平。结果：单用5-Aza-CdR(1μmol/L）或SPB（1mmol/L)及两药联合诱导的细胞凋亡率分别是15.09%,89.19%和85.18%。单用5-Aza-CdR或SPB对细胞G1期无影响,单用SPB使G2/M期细胞比例增高,联合用药发生明显的G1期阻滞,且出现亚G1期峰达50%。单用PB不能诱导U266细胞p16的表达,单用5-Aza-CdR可诱导p16重新表达,两药联合明显增强p16表达水平。结论：PB与5-Aza-CdR协同可显著诱导U266细胞p16重新表达,细胞阻滞在G1期,并使细胞凋亡发生的时相不同于单独用药组。     

MiR-21下调SPRY2表达对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P<0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P<0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)%、(38.6±1.56)%]、siRNA组[(27.3±1.72)%、(37.3±1.59)%]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)%、(22.1±1.63)%],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P<0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P<0.05)。结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据。     

艾拉莫德通过活化AMPK对骨髓瘤细胞株U266增殖的影响

目的:探讨艾拉莫德对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞株U266细胞增殖的影响。方法:艾拉莫德（10、20和30 μg/ml）作用于骨髓瘤细胞株U266细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测U266细胞活力;细胞周期染色试剂盒检测U266细胞周期分布情况;Western blot检测细胞周期相关蛋白CDK2、AMPK及p-AMPK的表达水平。结果:10、20和30 μg/ml的艾拉莫德处理24 h后,U266细胞活力呈剂量依赖性的降低。艾拉莫德（10、20和30 μg/ml）处理U266细胞24 h后,G0/G1期细胞数明显增加,S期细胞数明显降低。本研究还进一步发现10、20和30 μg/ml的艾拉莫德处理24 h后可显著下调U266细胞的CDK2蛋白表达水平。此外,艾拉莫德人处理骨髓瘤细胞株U266细胞24 h后,U266细胞的p-AMPK/AMPK水平明显增加。结论:艾拉莫德可抑制骨髓瘤细胞株U266细胞增殖以及细胞周期,其作用机制可能涉及促进AMPK的活化。     

葛根总黄酮对骨髓瘤细胞株U266及RPMI8226增殖作用的研究

 【摘要】　目的　初步探讨葛根总黄酮（PRF）对骨髓瘤细胞株U266及RPMI 8226增殖影响及其机制。方法　采用0、10、30、50、100 μg／ml PRF分别处理U266、RPMI 8226细胞 48 h及72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,瑞特染色观察细胞形态学改变,FITC-Annexin V／PI双染法检测细胞早期凋亡率改变,DNA片段化分析观察PRF处理U266细胞DNA断裂片段。结果　PRF可以抑制2种骨髓瘤细胞增殖,对U266细胞抑制作用大于对RPMI 8226细胞的作用,呈浓度依赖性;随PRF浓度增加2种细胞凋亡比例增加。瑞特染色未观察到2种细胞凋亡形态学特征。0、10、30、50、100 μg／ml PRF 处理U266细胞48 h早期凋亡率分别为（3.20±0.36）%、（5.20±0.92）%、（7.30±1.22）%、（8.10±0.53）%、（10.80±0.90）%,呈剂量依赖性增高,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。DNA片段化分析U266细胞未出现凋亡细胞特有的DNA梯带。结论　一定浓度PRF对骨髓瘤U266及RPMI 8226细胞具有较明显的增殖抑制作用;PRF对U266细胞增殖抑制作用机制虽可能与凋亡相关,但并非U266细胞增殖受抑的主要途径,其确切机制有待进一步探讨。     

5-氮-2'-脱氧胞嘧啶对U266细胞系P16基因去甲基化作用研究

  目的 探讨5-氮-2'-脱氧胞嘧啶（5-Aza-CdR）诱导骨髓瘤细胞系U266 p16基因 DNA 5′CpG岛去甲基化作用及对U266细胞增生的影响。方法 采用巢式甲基特异性PCR法（n-MSP）、DNA序列分析、RT-PCR、细胞生长曲线、流式细胞仪DNA含量分析法检测5-Aza-CdR对U266细胞 p16基因去甲基化作用及其对U266细胞的生长、增生及细胞周期的影响。结果 （1）5-Aza-CdR能够逆转U266细胞 p16 基因异常甲基化；（2）5-Aza-CdR能激活p16基因沉默的再转录；（3）5-Aza-CdR能下调U266细胞甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B 的表达并呈浓度依赖性；（4）5-Aza-CdR作用的U266细胞被阻滞于G0 ~ G1期。结论 5-Aza-CdR可能通过抑制甲基转移酶直接对p16 基因去甲基化，逆转U266 细胞DNA 异常甲基化，并有效地激活因高甲基化所致p16基因沉默的再转录     

miR-32-5p靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的:探究miR-32-5p靶向CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteins α,CEBPA）调控表皮生长因子/β联蛋白（EGFR/β-catenin）信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制。方法:qRT-PCR、Western blot检测细胞中miR-32-5p、CEBPA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测miR-32-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证miR-32-5p与CEBPA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测miR-32-5p与CEBPA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响。结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RPMI-8226中miR-32-5p表达水平显著增高,CEBPA mRNA和蛋白水平显著降低（P＜0.05）;与NC、anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组miR-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;TargetScan生物信息学预测显示,miR-32-5p与CEBPA 3' UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实miR-32-5p可与CEBPA直接结合负向调控CEBPA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBPA组CEBPA 表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;与anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组CEBPA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-miR-32-5p+si-con组比较,anti-miR-32-5p+si-CEBPA组CEBPA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高（P＜0.05）。结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受miR-32-5p和CEBPA的双重调控,miR-32-5p可靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。     

维甲酸导致多药耐药的机制初探

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)导致瘤细胞多药耐药(MDR)的可能机制.方法以ATRA和IL-4分别处理肝母细胞瘤系HepG2细胞,观察瘤细胞增殖活性、甲胎蛋白分泌及细胞周期分布等生长特性改变;通过流式细胞仪检查p53、bcl-2及P-糖蛋白(P-gp)表达,用原位杂交观察c-jun及c-mycmRNA表达;以四氮甲基唑蓝(MTT)生物活性检查药物敏感性.结果ATRA及IL-4均能诱导HepG2细胞分化ATRA处理可导致HepG2细胞对多种化疗药物耐受(耐药倍数1.6～3.1倍),IL-4处理则增加瘤细胞对化疗药物的敏感性(逆转倍数4～17倍).ATRA处理使瘤细胞P-gp表达从(54.2±8.6)%增加到(98.5±1.4)%,P＜0.01;IL-4降低P-gp表达(25.4±7.3)%,P＜0.01.IL-4和ATRA处理均能降低瘤细胞c-jun及c-mycmRNA表达.IL-4处理增加瘤细胞p53表达,降低bcl-2表达,而ATRA处理对二者的表达无影响.结论IL-4和ATRA诱导HepG2细胞分化过程中,药物敏感性变化与分化程度、原癌基因c-jun、c-myc表达无关;ATRA所致的P-gp表达增加可能为MDR的直接作用因素;p53(或bcl-2)可以参与调节分化过程中药物敏感性变化.     

miR－451靶向调控c－Myc抑制多发性骨髓瘤RPMI－8226细胞的增殖侵袭和迁移

目的探讨miR-451对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法将体外培养的RPMI-8226细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染miR-451模拟物阴性对照)和miR-451组(转染miR-451模拟物), 采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-451的表达, 采用四甲基偶氮唑蓝法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况, Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移情况, Western blot检测c-Myc、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达, 双荧光素酶报告基因实验检测miR-451和c-Myc的靶向关系。结果 miR-451组和空白对照组细胞中miR-451的表达水平分别为2.85±0.27和1.02±0.06, 细胞存活率分别为(47.28±3.15)%和(93.65±6.52)%, 克隆形成率分别为(15.03±1.34)%和(28.48±2.12)%, 侵袭细胞数分别为(86.65±5.58)个和(135.47±9.85)个, 迁移细胞数分别为(106.36±6.48 )个和(165.28±11.05)个, c...     

神经节苷脂GM3对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察神经节苷脂GM3对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞增殖和细胞周期的影响.方法 各试验组分别加入20、40、80、160μmol/L GM3,同时设置不加GM3的空白对照组.培养U266细胞48 h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期.结果 GM3可以抑制U266细胞增殖,并且随着GM3浓度增加抑制作用增强;不同浓度GM3组(20、40、80、160μmol/L)中U266细胞增殖抑制率依次为(13±4)%、(26±4)%、(47±6)%、(55±10)%,各浓度组与对照组比较差异有统计学意义(F=93.063,P<0.05).GM3处理48 h后,U266细胞中S期细胞比例增高,由(22.6±3.7)%上升到(71.5±3.8)%(P<0.01);G2/M期细胞比例降低,由(42.6±2.5)%降为(0.8±0.6)%(P<0.05);而G0/G1期细胞比例无明显变化(P>0.05).结论 GM3可以阻滞多发性骨髓瘤U266细胞于S期,抑制其增殖.     

细胞周期蛋白D2和p27^kipl在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨细胞周期蛋白D2(cyclin D2)和p27kipl在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义.方法采用免疫组化S-P法检测63例非小细胞肺癌(NSCLC)组织中cyclin D2和p27kipl的表达情况.结果 63例NSCLC中cyclin D2和p27kipl阳性表达率分别为39.7%和54.0%,与正常支气管黏膜比较差异有显著性(P<0.05).p27kipl的表达与NSCLC的分化程度、淋巴结转移以及临床病理分期相关(P<0.05).cyclin D2与p27kipl的表达呈显著负相关.结论 cyclin D2和p27kipl的异常表达与NSCLC的发生有密切关系.p27kipl还与NSCLC的进展有关,并可作为估计预后的重要指标.     

全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达

目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。     

砷剂诱导骨髓瘤细胞周期改变与SOCS-1基因去甲基化作用的研究

背景与目的:三氧化二砷(As2O3)在治疗多发性骨髓瘤中具有一定价值.有研究认为As2O3,的治疗作用可能与诱导细胞内抑癌基因去甲基化作用相关.本研究旨在探讨体外As2O3,诱导人骨髓瘤细胞周期改变与细胞内SOCS-1基因去甲基化之间可能存在的关系.方法:采用MTT法观察As2O3,对骨髓瘤细胞U266、RPM18226增殖情况的影响,流式细胞技术检测As2O3对骨髓瘤细胞周期的影响.甲基特异性PCR(MSP)法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的改变,实时PCR技术定量检测细胞用药前后SOCS-1基因mRNA的表达变化.结果:与对照组细胞相比,人骨髓瘤细胞U266、RPM18226在较大剂量As2O3(0.5umol/L、1.0 umol/L、2.0 umol/L)作用72 h后,细胞周期分布均发生G0/G1期阻滞,呈现G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞周期改变与As2O3,剂量呈正相关(P均<0.05),骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱(As2O3 0.5 umol/L作用72 h后)或消失(As2O3 1.0 umol/L或2.0 umol/L作用72 h后),SOCS-1基因在mRNA水平上表达明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:As2O3具有剂量依赖的诱导骨髓瘤细胞周期改变的作用,该作用可能与As2O3诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1基因再表达相关,这可能为进一步阐释As2O3,治疗多发性骨髓瘤中的可能机制提供新的思路和方向.     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化分子机制探讨

目的 探讨全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中PADI4的变化与作用机制.方法 ATRA诱导HL-60细胞24、48、72和96 h后,采用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化;采用RT-PCR分析PADI4在基因水平的表达趋势,蛋白质印迹法检测PADI4在蛋白水平的表达变化;RNAi技术干扰PADI4后流式细胞仪检测CD11b变化,蛋白质印迹法检测PADI4、p42/44、p65、p105和p55等蛋白水平变化.结果 HL-60细胞经ATRA诱导后与对照组相比,Wright-Gimesa染色显示核质比明显减小,核有凹陷及分叶,杆状核、分叶核现象明显增多.流式细胞术检测结果显示,细胞表面分子CD11b表达由2.1％升高到48.9％,升高了346.8％,t=411.51,P＜0.01;RT-PCR结果显示,PADI4在mRNA水平表达随时间延长逐渐升高,F＝ 318.046,P＜0.001,r=0.595;PADI4与内参基因GAPDH灰度值的比值从0.122±0.033升高到0.464±0.077,差异有统计学意义,F＝16.002,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果显示,PADI4在蛋白水平表达随时间延长逐渐升高,F=16.002,P＜0.001,r=0.873;PADI4与内参GAPDH灰度值的比值分析从0.077±0.045升高到0.263±0.095,差异有统计学意义,F＝221.8,P＜0.000 1.蛋白质印迹法检测结果显示,P-p44/42与内参GAPDH灰度值的比值分析从0.470±0.023下降到0.320±0.012,差异有统计学意义,F=92.942,P＜0.001.结论 ATRA诱导HL-60细胞定向粒系分化的过程中,PADI4促进HL-60细胞向粒系分化,而且PADI4可能是通过促进MAPK信号通路中的p42/44磷酸化而发挥作用.     

全反式维甲酸对结肠癌Lovo细胞VEGF及其受体表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌Lovo细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体的影响,为其临床应用提供理论依据.方法 MTT法观察不同浓度ATRA对结肠癌Lovo细胞株生长的抑制作用以及对外源性VEGF刺激Lovo细胞生长的抑制作用.流式细胞仪分析ATRA作用后Lovo细胞周期变化以及细胞凋亡情况.ELISA法检测ATRA作用前后细胞培养上清液中VEGF含量变化.流式细胞仪测定Lovo细胞VEGF受体表达.结果 ATRA对Lovo细胞的生长具有抑制作用,呈时间与剂量依赖性.外源性VEGF165能刺激Lovo细胞生长,ATRA能够抑制VEGF165对细胞生长的刺激作用.随ATRA作用浓度增加,细胞周期G0/G1期细胞比例从(60.10±1.27)%增加至(84.80±1.40)%;细胞凋亡率增加至(39.79±3.96)%.ATRA能抑制Lovo细胞表达VEGF及VEGF受体,呈时间与剂量依赖性.结论 ATRA具有抑制结肠癌Lovo细胞株VEGF及其受体表达的作用,抑制肿瘤细胞的生长,可能机制为阻断VEGF自分泌及旁分泌,与促进肿瘤细胞凋亡及阻滞细胞周期有关.