胃癌组织中EphB2受体胞外区结构域的克隆和序列测定

目的对胃癌组织中酪氨酸蛋白激酶EphB2受体胞外区结构域进行克隆.方法从胃癌患者手术切片标本中提取RNA,进行RT-PCR,将扩增片段克隆入pUC19质粒,进行测序及酶切鉴定.结果克隆片段序列正确.结论为进行表达、筛选与之相互作用的蛋白,阐明其生理功能打下基础.     

酪氨酸蛋白激酶EphB2受体在几种癌组织中的表达

目的:检测酪氨酸蛋白激酶EphB2受体在不同癌组织中的表达情况,探讨其与恶性肿瘤形成的关系。方法:从各组织中提取总RNA,设计目的基因引物和内参照GAPD引物。采用RT-PCR方法,分别检测胃癌、结肠癌、肺癌、肝癌、肾癌、脾癌、腹壁癌7种肿瘤组织及相应邻近正常组织中EphB2受体的表达,应用Bio-RAD凝胶成像系统及在QuantityOne软件辅助下分析测定表达结果。结果:EphB2在7种癌组织中均有表达,以胃癌组织中表达最高,其余依次为结肠癌、肺癌、肝癌、肾癌、脾癌、腹壁癌。在正常组织中未见表达。结论:酪氨酸蛋白激酶EphB2受体在恶性肿瘤的发生中扮演重要角色。     

survivin在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨survivin在胃癌诊断、预后等方面的意义。方法利用RT-PCR技术检测38例胃癌组织标本和38例相应癌旁组织标本中survivin mRNA表达情况。结果38例胃癌组织标本中有20例survivin基因表达阳性，高、中、低分化胃腺癌的阳性表达率分别为0％、45．5％和60％；发生淋巴结及远处转移的胃癌组织标本中72％表达survivin，明显高于无转移组。38例癌旁组织标本均无该基因的阳性表达。结论survivin在胃癌组织中有较高的表达率。且表达具有高度肿瘤特异性；survivin的表达与胃癌的侵袭性和预后有关。     

EphB2受体在结直肠癌发生发展中的表达

目的探讨EphB2受体在结直肠癌发生发展中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学的方法检测24例正常肠黏膜组织、33例结直肠腺瘤性息肉组织、24例结直肠非典型增生组织、20例早期大肠癌组织、118例进展期结直肠癌组织中的EphB2受体的表达情况，并对进展期结直肠癌组织有无转移（转移组52例，未转移组66例）进行分组比较。结果（1）EphB2受体在正常肠黏膜、息肉、不典型增生、早期癌、进展期结直肠癌中的表达呈递减趋势，具有统计学差异；（2）EphB2受体在非转移性结直肠癌组织和转移性结直肠癌组织中的表达具有统计学差异（59．1％ vs. 40．4％，P=0．044）；（3）EphB2受体在不同分期的结直肠癌组织中的表达具有统计学差异（Duke’s A期、B期与Duke’s C期、D期比较）（60．0％ vs. 39．7％，P=0．018）；（4）EphB2受体在结直肠癌中的表达与年龄、性别、肿瘤大小、发生部位、分化程度、浸润深度等临床病理参数均无关。结论EphB2受体在结直肠癌的发生发展中可能起到了重要的抑制作用。     

胃癌者血清可溶性白介素-2受体测定

胃癌者血清可溶性白介素－２受体测定张仙森金月生赵硕（黄岩第一人民医院检验科，浙江黄岩３１８０２０）关键词ＳＩＬ－２Ｒ胃癌血清可溶性白介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）水平与淋巴细胞性白血病、艾滋病、移植排斥反应和某些自身免疫性疾病有关，还和一些恶性实体瘤，...     

胃癌和相应癌旁组织中PTEN基因表达的临床研究

目的研究胃癌组织中抑癌基因第10号染色体缺失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tension homologydeleted on chromosome ten,PTEN)的表达情况及探讨PTEN基因与胃癌临床病理因素的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(semi-quantitative RT-PCR)方法检测45例胃癌组织及相应癌旁组织中PTEN基因1-8、5-85、-9 mRNA的表达情况。结果45例胃癌组织中PTEN mRNA表达水平为:外显子1-8为0.71±0.21;外显子5-8为0.90±0.11;外显子5-9为0.83±0.15;45例相应癌旁组织中PTEN mRNA表达水平为:外显子1-8为1.29±0.18;外显子5-8为1.51±0.27;外显子5-9为1.38±0.22;两者相比差别显著(P<0.05);而45例相应癌旁组织中PTEN mRNA全部阳性表达,与相应胃癌组织相比差别显著(P<0.05)。胃癌组织中PTEN mRNA表达水平无性别、年龄特异性(P>0.05),但随临床分期的增高和组织学分化的降低,其表达水平明显降低(P<0.05)。结论PTEN基因在胃癌中表达降低和缺失与胃癌的发生密切相关,并与临床分期与病理分级的进展密切相关,提示PTEN mRNA的表达有望作为胃癌诊断的一项客观指标。     

献血者中SEN病毒部分基因的克隆和序列分析

目的　了解我国献血者中是否存在SEN病毒 (SENV)感染 ,并分析SENV国内分离株的部分基因序列。方法　根据SENVORF1区保守序列设计引物 ,采用套式PCR方法 ,从献血者血浆标本中分离SENV基因片段 ,对分离的DNA片段进行基因重组和核苷酸序列分析。结果　从 32 9名献血者中分离出 6株SENV基因片段 ,其核苷酸推导氨基酸序列与SENVA～H基因型序列比较 ,同源性在 5 2 %～ 10 0 % ;系统进化树分析发现 ,分离的 6株SENV属SENV H基因型。结论　国内献血者中存在SENV H基因型感染 ,输血可能成为传播SENV途径之一。     

人脂联素基因的克隆构建及其序列分析

背景:脂联素已经成为缺血性疾病基因治疗的新靶点,而成功进行脂联素基因治疗的关键是脂联素基因的克隆.基因克隆主要有定向克隆法和T-A克隆法,定向克隆法操作较复杂;而T-A克隆法操作简便,成功率高.目的:应用T-A克隆法克隆人脂联素基因编码区,对其进行测序验证,并与GenBank比对.设计、时间及地点:基因水平的验证实验,于2006-061/2008-12在福建医科大学附属第一医院高血压研究所及福建中医学院中西医结合研究院完成.材料:脂肪组织取自福建医科大学第一附属医院外科患者术中切除的大网膜脂肪垫,液氮中冻存.Trizol为Invitrogen公司产品:M-MLV,Gel Extract Kit为PROMEGA公司产品;Taq酶为TIANGEN公司产品;限制性内切酶BamH Ⅰ,Sal Ⅰ,pMD18-T载体为TAKARA公司产品.方法:从人大网膜脂肪组织提取总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增出人脂联素编码区基因,再将人脂联素基因编码区克隆入载体pMD18-T中,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与GenBank比对.主要观察指标:人脂联素克隆质粒酶切鉴定结果,人脂联素基因克隆序列与GenBank比对结果.结果:扩增得到人脂联素基因编码区,获得人脂联素的正向和反向克隆,与GenBank中人脂联素基因编码区序列比对均为完全一致.结论:成功地克隆出人脂联素基因编码区.     

胃癌组织中诱捕受体3和抑癌基因Smad4的表达及其临床意义

目的探讨诱捕受体3（D cR3）和抑癌基因Sm ad4在胃癌组织中的表达及其潜在的临床价值。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定胃癌组织D cR3 mRNA和Sm ad4 mRNA水平,并分析两者与胃癌患者各项临床病理指标间的关系。结果D cR3 mRNA在胃癌组织中的阳性表达率为55.81%,明显高于正常胃组织（6.98%,P〈0.05）,Sm ad4 mRNA在胃癌组织中的阳性表达率为32.56%,明显低于正常胃组织（86.05%,P〈0.05）。D cR3 mRNA和Sm ad4 mRNA与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移与否、TNM分期有关（P〈0.05）。胃癌组织中D cR3 mRNA和Sm ad4 mRNA表达呈负相关（r=-0.273 9,P〈0.05）。结论D cR3和Sm ad4共同调节胃癌的发生、发展及其生物学行为。     

诺瓦克病毒ORF1-ORF2序列核酸片段克隆的构建

目的构建诺瓦克病毒核酸片段克隆。方法选取诺瓦克病毒阳性标本,应用RT-PCR方法扩增目标片段,将其克隆到质粒,通过酶切、测序鉴定。结果成功构建诺瓦克病毒核酸片段克隆。结论成功地获得了可作为核酸检测阳性对照的诺瓦克病毒核酸片段克隆,为该病毒的分子生物学检测和进一步研究奠定了基础。     

胃癌组织中PTEN和P-ERK的表达及相互关系

目的 :检测PTEN和P ERK蛋白在胃癌中的表达 ,并探讨其相互关系。方法 :应用免疫组化方法检测5 7例胃癌及其癌旁正常组织中PTEN和P ERK蛋白的表达情况。结果 :( 1)PTEN蛋白在胃癌中表达的阳性率( 61 4% )明显低于相应正常组织 ( 10 0 % ) (P <0 0 1) ,其表达水平与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关 (P <0 .0 5 )。 ( 2 )P ERK蛋白在胃癌中表达的阳性率 ( 84 2 % )明显高于相应正常组织 ( 12 3 % ) (P <0 0 1) ,其表达水平与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关 (P <0 0 5 ) ,与分化程度无关 (P >0 0 5 )。 ( 3 )胃癌组织PTEN和P ERK蛋白表达之间呈明显负相关 (P <0 0 1)。结论 :提示PTEN和P ERK蛋白表达与胃癌生物学行为密切相关 ;在胃癌发生、发展过程中 ,可能是由于PTEN蛋白的低表达或失表达 ,不能有效抑制Ras/Raf/MEK /ERK信号通路的异常激活 ,使细胞发生癌变 ,并促进癌变细胞的浸润、转移     

胃癌组织中MACC1基因的表达及意义

摘要:目的：探讨胃癌组织中结肠癌转移相关基因（MACC1）的表达,评价其在胃癌进展、侵袭和转移中的作用。 方法：用RT-PCR检测60例胃癌患者癌组织和癌旁组织中MACC1 mRNA的表达情况,分析其与临床病理参数的相关性。 结果：MACC1 mRNA在胃癌组织中阳性率为70.0%(42/60),显著高于癌旁组织［13.3%(8/60),χ²=37.34,P＜0.01］,和正常胃黏膜组织［0%(0/20),χ²=26.73,P＜0.01］。MACC1 mRNA表达与胃癌浸润深度、TNM分期、分化程度及有无淋巴结转移呈正相关(P均＜0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小无关。 结论: MACC1 mRNA高表达与胃癌进展、侵袭及转移相关,可作为胃癌诊断和预后评估的分子标志物。     

进展期胃癌组织中p53与bcl-2表达的关系及其生物学意义

胃癌是一种常见的恶性肿瘤，已成为危害人们健康的主要疾病之一，本研究旨在探讨胃癌组织中p53与bcl-2的表达情况及其生物学意义。     

TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应在强直性脊柱炎白细胞介素2受体mRNA检测中的应用价值

目的利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）检测强直性脊柱炎（AS）患者外周血单个核细胞白细胞介素2受体α（IL-2Rα）mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析.方法根据GenBank提供的序列设计一对引物和一条TaqMan探针.提取外周血单个核细胞（PBMC）总RNA,加入FQ-RT-PCR反应体系,产物切胶回收与pUCm-T载体连接,用T7RNA聚合酶转成cRNA,制备系列浓度参照物.对其特异性、线性、精密度和探针稳定性进行评价.定量HLA-B27阳性组与阴性组AS患者PBMC的IL-2Rα mRNA基因表达并探讨与血浆可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）的相互关系.结果成功构建了IL-2Rα mRNA的cRNA参照物.线性范围7～107 cells/ml,批内CV 8.4%,批间CV 9.6%.对各30例HLA-B27阳性与阴性AS的IL-2Rα mRNA检测表明,与正常对照组结果比较,阳性组与阴性组IL-2Rα mRNA和sIL-2R有明显差异（P〈0.01）.IL-2Rα mRNA对炎症活动评价的灵敏度为96.7%.结论 FQ-RT-PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点;IL-2Rα mRNA比sIL-2R更能反映强直性脊柱炎患者的炎症活动程度.     

胃癌组织中p16和Rb蛋白表达的意义

p16和Rb是重要的抑癌基因，在细胞周期调控过程中起重要的作用，其缺失或失活可导致肿瘤的发生。我们用免疫组化方法检测30例胃癌中p16、Rb蛋白的表达情况，旨在探讨二者在胃癌发生、发展中的作用及其相互关系。     

乙型肝炎核心抗体阳性与阴性慢性乙型肝炎患者血清可溶性白介素2受体检测

目的　分析比较慢性乙型肝炎核心抗体 (抗 HBc)阳性的患者和抗 HBc阴性的患者血清中可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)和乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)含量的变化及意义。方法　将 10 0例诊断为慢性乙型肝炎肝者分为两组 ,A组为 5 0例 ,HBsAg阳性、HBeAg阳性和抗 HBc阳性 ,B组为 5 0例 ,HBsAg阳性 ,HBeAg阳性和抗 HBc阴性。另选 30例健康体检者 ,HBV标志均为阴性 ,作为对照组。sIL 2R采用双抗体夹心间接酶联免疫吸附测定法 ,HBV DNA采用荧光定量聚合酶链法 ,丙氨酸转氨酶 (ALT)采用赖氏法。结果　乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)阳性、乙型肝炎e抗原 (HBeAg)阳性、抗 HBc阳性组血清中sIL 2R和ALT水平均明显高于HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗 HBc阴性组 ,P <0 .0 5 ,与正常对照组比较 ,P <0 .0 5 ,且年龄偏向于青少年段 ,但比较HBV DNA含量在两组患者差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗 HBc阴性组sIL 2R水平亦高于正常对照组 P <0 .0 5。结论　以上结果表明抗 HBc阴性的慢性乙型肝炎患者机体的免疫系统处于一种免疫耐受的状态 ,而sIL 2R可作为肝炎患者免疫状态的监测指标而用于机体免疫状态的分析     

人血管生成素1的克隆、序列分析和单酶切法构建毕氏酵母表达载体

目的:从人胎盘中克隆血管生成素1基因,并分析其结构特征,单酶切法构建毕氏酵母表达载体pPIC9K/Ang-1,为进一步研究血管生成素1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础。方法:实验于2003-11/2004-06在北京大学医学部细胞系完成。提取人胎盘组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出血管生成素1基因片段,并将其克隆到PGEM-TEasy载体中进行序列分析,用小牛肠碱性磷酸酶法去除线性化的pPIC9K质粒DNA两端磷酸基,以防止质粒自身环化,再亚克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中。结果:①经甲醛变性胶电泳鉴定,成功从胎盘组织中提取出总RNA,RNA的完整性和纯度符合进一步的酶反应要求。②胎盘组织总RNA经oligo-dT引物反转录,用人血管生成素1特异一对引物进行聚合酶链反应扩增,10g/L琼脂糖胶电泳结果显示一条特异片段,大小为1.5kbcDNA片段。③成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致。两者成熟区cDNA的核苷酸和氨基酸同源性分别大于99%和98%,国人血管生成素1基因核苷酸序列的起始密码子ATG,终止密码子为TGA,共1497个碱基对。④成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体。结论:从人的胎盘中克隆血管生成素1基因无突变,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,满足表达蛋白质的需要。     

胃癌组织中过氧化酶增殖因子活化受体y和血管内皮生长因子C的表达及临床意义

目的研究过氧化酶增殖因子活化受体7（peroxisomeproliferatoractivatedreceptorgamma,PPART）和血管内皮生长因子C（vascularendothelialgrowth{actorC,VEGF-C）在胃癌组织中表达的相关性,分析其表达与临床病理因素之间的关系。方法2005年3月-2009年3月间采用逆转录一聚合酶链反应方法检测36例胃癌手术标本中PPAR7和VEGF-CmRNA的表达,同时选取相同患者的胃正常组织作为对照。结果PPAR7mRNA在胃癌中的表达量高于癌旁正常组织,两者的差异有统计学意义（P=0．007）;VEGF-C在胃癌中的表达量高于癌旁正常组织,两者的差异有统计学意义（P=0．004）;PPAR7的表达与VEGF-C表达无关联性（r=0．135,P：0．414）;PPAR7表达与胃癌组织中浸润程度有关（x^2=4．620,P=0．032）、淋巴结转移有关（x^2=15．753,P=0．000）和临床病理分期有关（^2=4．610,P=0．032）;VEGF-C表达与胃癌组织中淋巴结转移有关（x^2=4．729,P=0．030）、远处转移有关（x^2=4．064,P=0．044）和临床病理分期有关（x^2=6．300,P=0．012）。结论PPAR7和VEGF-C可能在胃癌新牛淋巴管形成中起重要作用,两者的表达水平与胃痛患者的病情判断及预后评价密切相关．