siRNA阻抑Survivin基因表达对肝癌细胞周期的影响

应用RNA干扰技术(RNAi)对siRNA抑制肝癌细胞株内源Survivin基因的表达进行研究。笔者通过Western blot和半定量RT-PCR技术来检测Survivin蛋白的表达和mRNA转录水平的变化,观察小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞细胞周期的影响,并对RNAi技术的作用机制及在肿瘤基因治疗方面的实验研究做一综述。     

siRNA联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达的影响。方法 在肺癌A549细胞中转染survivin基因的siRNA,分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting方法检测survivin基因mRNA和蛋白的表达。将肺癌A549细胞分为单纯放射组、单纯转染组、转染+放射组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖情况,采用CCK8测细胞生长曲线。结果 siRNA能抑制肺癌细胞survivin基因mRNA和蛋白的表达。siRNA联合预照射较单纯转染和单纯放射能显著增加细胞凋亡率,降低细胞的集落形成,抑制细胞生长。结论 预照射可以增强siRNA对肺癌细胞survivin基因的抑制作用。     

Survivin siRNA抑制人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤血管生成

目的 观察siRNA抑制生存素survivin基因对裸鼠皮下人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤血管生成的影响.方法 裸鼠15只完全随机分为3组(n=5):①干扰质粒组,皮下接种survivin RNA干扰质粒转染的ACC-2细胞;②瘤体注射组,皮下接种正常ACC-2细胞15 d成瘤后,将针对survivin的siRNA真核表达载体脂质体法作瘤体内及瘤周注射;③肿瘤细胞组,皮下接种正常ACC-2细胞.25 d后处死全部裸鼠,剥离瘤体,测量瘤体体积,RT-PCR检测瘤体组织VEGFmRNA表达,HE染色和免疫组化染色法观察VEGF阳性染色及其微血管参数.结果 干扰质粒组和瘤体注射组VEGF电泳条带的相对光密度比值(0.698±0.023、0.612±0.038)及总体微血管密度[(4.98.±1.43)、(5.08±1.29)个]、有腔微血管密度[(2.98.±1.05)、(3.10.±1.23)个]、有腔血管周长[(68.60.±15.98)、(70.12±14.19)μm]及管腔面积[(4 119.14±698.12)、(4339.67±599.76)μm2]较肿瘤细胞组VEGF电泳条带的相对光密度比值(0.912 ±0.039)及总体微血管密度[(8.90.±1.36)个]、有腔微血管密度[(5.89.±1.68)个]、有腔血管周长[(129.48.±25.68)μm]及管腔面积[(6952.74.±1 298.54)μm2]低(P<0.05),而干扰质粒组和瘤体注射组无明显差别(P>0.05).结论 survivin siRNA能够抑制腺样囊性癌瘤体生长,并在体内通过抑制腺样囊性癌VEGF表达有效减少肿瘤血管生成.     

Survivin siRNA对甲状腺乳头状癌细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的探讨凋亡抑制基因Survivin的小干扰RNA(Small interfering RNA,si RNA)对甲状腺乳头状癌细胞株K1裸鼠移植瘤血管生成的影响。方法将表达特异性Survivin si RNA序列的质粒载体,与表达无关序列si RNA的质粒载体分别转染K1细胞;G418筛选出稳定表达Survivin si RNA和表达无关序列si RNA的K1细胞,与未转染的K1细胞分别注射于裸鼠皮下,观察三组移植瘤的生长速度。SP免疫组化法检测各组移植瘤中的微血管密度(MVD)。结果 Survivin si RNA组比无关序列si RNA组肿瘤平均质量减少56%,比未转染组肿瘤平均质量减少63%;Survivin si RNA组MVD明显低于无关序列si RNA组及未转染组(P<0.05);无关序列si RNA组与未转染组MVD值差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Survivin si RNA可抑制甲状腺乳头状癌细胞K1裸鼠移植瘤的微血管生成及肿瘤生长。     

Survivin基因siRNA表达载体的构建及其在食管癌EC109细胞中的表达

目的 为研究survivin基因的功能及食管癌的基因治疗，构建针对survivin基因的siRNA的表达载体，转染细胞EC109后观察其对survivin基因表达的抑制作用。方法 利用网站选择适当位点设计并合成针对survivin基因mRNA的寡核苷酸序列，插入质粒pBAsi-hU6中形成重组载体pBAsi-survivin。重组载体经测序鉴定后转染食管癌细胞EC109，western blot检测转柒前后survivin蛋白的表达情况。结果 测序结果与所合成的寡核苷酸完全一致，证实成功构建了针对survivin基因的siRNA表达载体。Western blot检测显示转染食管癌细胞EC109后有效抑制了survivin基因的表达。结论 针对surivivin基因的siRNA表达载体成功构建，并能有效抑制食管癌细胞EC109中survivin基因的表达。     

Livin基因特异性siRNA对肝癌细胞增殖、转移的影响

目的 应用PNA干扰技术抑制人肝癌细胞株SMMC-7721中凋亡抑制因子livin表达,研究livin基因对肝癌细胞生物学行为的影响.方法 构建针对hvin β基因的siRNA真核表达栽体pU-livinβ-siRNA,将其表达栽体经脂质体LipofectamineTM2000转染至肝癌细胞株SMMC-7721细胞,采用RT-PCR、Western blot方法检测转染后的SMMC-7721细胞中livin β基因的mRNA和蛋白质表达,了解转染效率.通过流式细胞仪分析细胞周期的分布,并应用Transwell侵袭小室模型观察转染后SMMC-7721细胞恶性生物学行为的变化.结果 在pU-livinβ-siRNA转染后的SMMC-7721细胞中,livinβ基因的mRNA和蛋白质表达显著下降(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G1期,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降.结论 通过RNAi技术阻断livin的表达,可抑制SMMC-7721细胞的生长、增殖、迁徙,提示Livin基因在肝癌的发生、发展过程中起重要作用.     

靶向survivin的siRNA表达载体的构建和表达及对HeLa细胞的影响

目的应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡。方法构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA阴性非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少;通过PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞的凋亡分别达(36.02±2.12)%(P<0.01)和(35.29±2.02)%(P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制Hela细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进Hela细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础。     

siRNA对HeLa细胞膀胱癌相关蛋白基因表达的抑制作用

目的:构建抑癌基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因高效真核siRNA载体,转染人宫颈癌细胞系HeLa,构建BLCAP基因沉默细胞系,以观察靶向siRNA对BLCAP基因的表达抑制作用。方法:设计并重组靶向siRNA各3条,分别命名为pRNA-U6.1-B1,B2,B3-siRNA,重组体经脂质体转染细胞,通过荧光显微镜...     

独角莲水提取物对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响

独角莲是一味传统中药,在中医临床中被广泛用于治疗多种恶性肿瘤疾病,显示出较好的临床疗效。不仅动物模型的研究显示独角莲可明显抑制肿瘤生长[1,2],研究还发现独角莲具有阻滞肝癌细胞SMMC-7721生长于S期,并诱导肿瘤细胞发生凋亡[3]。为进一步研究独角莲这一作用的分子机制,本实验利用肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列,对独角莲作用于肝癌细胞SMMC-7721后基因表达的变化进行了探讨。1材料与方法1.1药材及其处理:本实验所用药材为河北迁西人工种植,一年生根茎,经本室陈瑞阳教授鉴定为天南星科犁头尖属植物独角莲Typhon…     

非小细胞肺癌Survivin基因表达与细胞增殖的相关性研究

目的 探讨非小细胞肺癌Survivin基因表达与细胞增殖的相互关系。方法 应用免疫组织化学方法检测了76例非小细胞肺癌组织、12例癌旁组织和12例肺良性病变组织中Survivin基因和核增殖相关抗原Ki-67的表达水平，并分析两者的相互关系。结果 非小细胞肺癌患者Survivin基因和Ki-67的蛋白表达水平分别为80、26％(61／76)和69、74％(53／76)，极明显高于对照组(P＜0．01)。两者间的表达呈明显的正相关(r=0．42，P＜0．01)。结论 不同性质的肺病变组织Survivin基因的表达水平不同，可以用作非小细胞肺癌临床诊断的可靠指标和基因治疗的目的基因。Survivin基因的过度表达与非小细胞肺癌的细胞增殖活性明显相关，Survivin基因可能具有促进肺癌细胞增殖的活性。     

siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究

目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepC2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列，中间间隔9个核苷酸序列，通过定向克隆至载体Psilencer2．1，构建siRNA真核表达载体，经稳定转染HepG2细胞后应用RT-PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT-PCR及流式细胞术检测，siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Survivin基因表达分别达73％和75％。结论 构建的：Psilencer( )-Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。     

Survivin siRNA提高人结肠癌HT-29细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

目的 以siRNA抑制结肠癌HT-29细胞内survivin的表达,探讨HT-29细胞对顺铂(cisplatin,cDDP)的增敏效果.方法 转染siRNA于HT-29,检测survivin siRNA处理对survivin、Bax、Bcl-2蛋白表达及胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响.cDDP处理后,...     

Survivin基因在大肠癌中的表达

目的探讨Survivin基因在大肠癌中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测20例大肠癌及其癌旁组织survivin mRNA表达情况。结果65％大肠癌组织表达survivin mRNA，而癌旁组织25％表达。Survivin基因表达与肿瘤大小、侵袭深度、淋巴结转移及分化程度无明显关系。结论Survivin基因在大肠癌发生发展中可能起作用，Survivin表达上调和端粒酶激活可能通过各自不同的信号途径在大肠癌变中发挥协同作用。     

丝裂霉素诱导肝癌细胞Survivin基因表达的研究

目的　研究肝癌细胞HepG2 内凋亡抑制基因Survivin在化疗药物丝裂霉素作用下的表达变化 ,探讨肝癌细胞可能的耐药机制。方法　在培养的肝癌细胞株HepG2 中加入低浓度丝裂霉素 ,于不同时间点收集细胞后应用RT PCR以及免疫印迹法检测Survivin的表达变化。结果　加入丝裂霉素 12h未见Survivin表达明显改变 ,2 4h、4 8h后可检测到SurvivinmRNA表达较加药前分别增加 1.33、1.93倍 ,蛋白质表达增加 1.2 5、2 .10倍 ,均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　丝裂霉素诱导肝癌细胞Survivin表达升高具有时间效应 ,Survivin表达升高可能在肝癌细胞耐药过程中发挥了一定作用     

靶向Survivin的siRNA联合表阿霉素对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的采用RNA干扰技术阻断Survivin基因的表达,观察其诱导乳腺癌细胞凋亡及对表阿霉素的化疗增敏作用。方法构建靶向Survivin的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,采用lipofectamine^TM2000转染乳腺癌细胞MCF-7,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞Survivin基因表达的变化;采用TUNEL法检测其诱导MCF-7细胞凋亡及对表阿霉素的化疗增敏作用。结果靶向Survivin的序列特异性的siRNA可以有效地抑制MCF-7细胞Survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为64．91％;在蛋白质水平其表达抑制率为79．72％;转染靶向Survivin的siRNA真核表达载体48h后可以诱导8．75％的细胞凋亡;阻断Survivin基因的表达。可以显著提高MCF-7细胞对表阿霉素的敏感性,靶向Survivin的siRNA联合表阿霉素可以诱导24.21％的细胞凋亡。结论本研究所构建的靶向Survivin的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断Survivin基因的表达,阻断Survivin基因的表达可以诱导一定程度的MCF-7细胞自发凋亡,并显著增强其对表阿霉素的敏感性。     

RNAi技术沉默VEGF-C基因对小鼠4T1细胞生物学行为的影响

目的体外观察siRNA靶向干扰VEGF-C基因对4T1小鼠乳腺癌细胞的生物学行为影响。方法选用HifectinII真核转染试剂将化学修饰的针对小鼠VEGF-C基因的siRNA转染4T1小鼠乳腺癌细胞株,设立空白对照组(只加培养基),脂质体组(每孔加培养基与0.5μL Hifectin II真核转染试剂),SCR组(100 nM),siRNA组(100 nM)。蛋白印迹试验检测转染前后细胞中VEGF-C的蛋白水平表达的变化;半定量RT-PCR检测VEGF-C、Survivin、BCL-2、BAX的mRNA水平表达的变化;MTT比色法检测细胞的增殖;Transwell小室方法检测肿瘤细胞的侵袭性改变;Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡。结果转染VEGF-C siRNA 48 h后4T1细胞的VEGF-C基因的mRNA和蛋白水平表达明显降低,空白对照组、脂质体组和siRNA SCR组各指标差异无显著性(P>0.05);4T1细胞生长受到抑制,Transwell小室方法检测肿瘤细胞的侵袭性降低,Hoechst 33258荧光染色显示细胞内可见凋亡小体。结论化学修饰siRNA介导的RNA干扰能下调靶基因VEGF-C的表达并能够促进4T1细胞的凋亡,抑制4T1细胞的增殖与侵袭性。     

Survivin基因和热休克蛋白在膀胱癌中的表达以及相互关系临床分析

目的探究Survivin基因和热休克蛋白在膀胱癌中的表达及其相互关系在临床上的应用分析。方法采用免疫组织化学的方法检测我院150例膀胱移形细胞癌和12例正常膀胱组织中的Survivin基因和热休克蛋白的表达,检测两者在病理分级、临床分期和初发、复发中的表达。结果膀胱癌患者中Survivin基因和热休克蛋白表达均为阳性70例,表达均为阴性的有19例,但在正常组织中Survivin基因和热休克蛋白几乎没有表达。结论 Survivin基因和热休克蛋白在膀胱癌患者的组织中的特异表达增加,会随着临床病理分级和肿瘤的复发的增加而增加,但在正常的组织中的基本没有表达,因此在膀胱癌患者中的表达具有正相关性。     

siRNA靶向抑制PDGFRB对人恶性脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的应用微小RNA干涉从mRNA靶向抑制PDGFRB基因/产物对人恶性神经胶质瘤细胞T98G、U87MG增殖作用的影响。方法脂质体转染法转染PDGFRB特异性siRNA;以传统半定量RT-PCR法及实时定量PCR观察应用特异性siRNA阻断PDGFRB的表达变化;采用MTT法检测恶性脑胶质瘤细胞的体外增殖。结果siRNA(PDGFRB-HSS107758和PDGFRB-B12)可明显抑制PDGFRB的表达(抑制率70%);PDGFRB特异性siRNA可抑制恶性胶质瘤细胞的体外增殖,对U87MG细胞增殖抑制作用显著(P<0.05)。结论PDGFRB特异性siRNA可以抑制恶性脑胶质瘤细胞的体外增殖。