p300诱导的乙酰化修饰参与脂多糖诱导的炎症介质合成

目的探讨辅助激活因子p300诱导的乙酰化修饰介入脂多糖（LPS）诱导的炎症介质合成过程及其作用机制。方法Agilent Sureprint G3 Mouse Gene Expression V2微阵列芯片以及蛋白免疫印迹（WB）技术联合于小鼠巨噬细胞（RAW246.7）中筛选表达水平与LPS刺激强度相关的分子；凝胶电泳迁移实验（EMSA）以及染色质免疫共沉淀（chip-qpcr）方法验证相关分子与炎症基因IL-6以及TNF-α启动子部位的结合现象；相关分子过表达或干扰质粒转染RAW246.7后，WB法检测转染质粒的作用效果，ELISA方法检测IL-6以及TNF-α合成水平，染色质免疫沉淀-测序技术（chip-seq）分析炎症基因启动子部位相关分子的结合以及H3K27的乙酰化修饰水平。结果微阵列芯片以及WB技术共同证实p300的表达与LPS刺激强度存在较好关联。免疫共沉淀证实了p300与c-myb存在结合现象。EMSA证实c-myb可与炎症基因启动子序列结合，而p300不能直接结合；chipqPCR表明当c-myb被干扰时，p300不能与炎症基因启动子序列结合。WB检测显示过表达或干扰质粒均能够干预相关分子的表达，且p65、p300以及c-myb 3者在表达上无相互影响。ELISA联合chip-seq显示与对照组比较，p300过表达以及LPS刺激均可导致炎症基因启动子部位结合的p300和H3K27乙酰化修饰水平增加，从而促进p65与启动子的结合和炎症基因转录（P < 0.05）；而c-myb表达被干扰时，p300过表达以及LPS刺激诱导的p300与p65在启动子的结合、H3K27乙酰化修饰和炎症介质合成均被遏制（P < 0.05）。在p65干扰相关组别中，p65与启动子的结合以及炎症基因转录均被抑制（P < 0.05），但未对p300的结合以及H3K27乙酰化水平造成影响。结论LPS刺激可诱导p300合成，后者在c-myb介导下结合于炎症基因启动子区域，并通过乙酰化H3K27易化启动子与p65结合，从而促进炎症基因表达。     

二氢杨梅素可逆转SKBR3细胞对赫赛汀的耐药：基于上调miR-98-5p抑制IGF1R/HER2二聚体形成

目的探索二氢杨梅素对SKBR3细胞miR-98-5p表达影响及在赫赛汀耐药发生中的机制。方法通过TargetScan在线数据库对IGF2和miR-98在乳腺癌中的表达及相互作用进行生信分析。细胞实验培养SKBR3细胞并构建耐曲妥珠单抗的SKBR3-R细胞和裸鼠异种移植瘤模型，免疫印迹法和免疫组化法检测细胞和组织内关键信号蛋白表达及其磷酸化水平。shRNA慢病毒载体构建转染细胞系，RT-qPCR检测细胞内RNA表达水平，MTS法检测细胞增殖，Transwell法检测细胞侵袭。荧光素酶实验验证RNA间的相互作用，免疫共沉淀法分析IGF-1R/HER2异源二聚体含量。结果在SKBR3-R细胞中IGF2、p-IGF1R、p-Akt、p-S6K水平高于SKBR3细胞，而PTEN蛋白表达正好相反（P < 0.05）；SKBR3-R细胞中IGF1R/HER2异源二聚体含量升高（P < 0.01）；转染miR-98-5p的SKBR3-R细胞内IGF2 mRNA表达水平变化无统计学意义（P > 0.05），但IGF2表达水平降低，细胞侵袭能力降低（P < 0.05）；经二氢杨梅素饲养后耐药裸鼠肿瘤组织中miR-98-5p表达上调，IGF2表达下降，对赫赛汀敏感性升高（P < 0.05）。结论二氢杨梅素通过诱导SKBR3-R细胞内miR-98-5p表达，使其结合IGF2 mRNA降低IGF2水平，进一步抑制IGF-1R/HER2异源二聚体形成，从而逆转细胞对赫赛汀耐药。     

活性氧与铁死亡通路相互作用在丙酮醛引起的小鼠胚胎成骨细胞损伤中起重要作用

目的探讨活性氧和铁死亡在丙酮醛诱导小鼠胚胎成骨细胞（MC3T3-E1）损伤中是否存在相互作用。方法应用丙酮醛损伤MC3T3-E1细胞建立模拟糖尿病骨质损伤的细胞模型。应用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定MC3T3-E1细胞的存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位；双氯荧光素（DCFH-DA）荧光显微镜照相法检测胞内活性氧水平；碱性磷酸酶试剂盒检测定碱性磷酸酶活性；茜素红染色观察成骨细胞晚期标志物-矿化结节的形成；铁离子试剂盒检测铁离子水平；Western blot检测成骨细胞的抑制铁死亡的标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的表达水平。结果0.6 mmol/L丙酮醛处理MC3T3-E1细胞24 h可明显减少GPX4的表达（P < 0.001），同时可使胞内铁离子浓度升高，细胞存活率降低，线粒体膜电位丢失，胞内活性氧水平升高，碱性磷酸酶活性降低和矿化结节减少（P < 0.001）。应用2 mmol/L活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸和丙酮醛共处理MC3T3-E1细胞24 h可增加GPX4的表达（P < 0.01），应用4 μmol/L铁死亡抑制剂铁抑素-1与丙酮醛共处理成骨细胞24 h可使胞内活性氧水平降低（P < 0.001）；应用N-乙酰半胱氨酸或铁抑素-1与丙酮醛共处理成骨细胞24 h均能对抗丙酮醛引起的上述其他细胞损伤（P < 0.001）。结论活性氧与铁死亡通路相互作用在丙酮醛引起MC3T3-E1成骨细胞损伤中起重要的作用。     

TSPAN8参与小鼠非酒精性脂肪性肝病的脂质代谢

目的探讨四跨膜蛋白8（TSPAN8）在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发生发展中的变化及其在脂质代谢中的作用。方法将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为普通饲料组（ND，n=15）和高脂饲料组（HFD，n=15）。Western blot检测1、3、6月末各组小鼠肝脏组织中TSPAN8的表达水平。HepG2细胞分成6组：完全培养基培养，无其他处理的命名为对照组（CON）；游离脂肪酸（FFA）处理以构建NAFLD细胞模型的命名为FFA组；TSPAN8过表达细胞命名为PCDNA-TSPAN8组，其对照为PCDNA3.1组；FFA处理后的PCDNA-TSPAN8命名为PCDNA-TSPAN8+FFA组，其对照为PCDNA3.1+FFA组；qRT-PCR及Western blot检测CON组和FFA组细胞中TSPAN8表达水平；油红O染色法和全自动生化仪检测PCDNA-TSPAN8+FFA和PCDNA3.1+ FFA组细胞内脂质蓄积情况。qRT-PCR检测与脂质代谢相关基因mRNA的表达情况。结果Western blot显示，与同喂养时间ND组相比，HFD喂养3、6月的小鼠肝组织中TSPAN8的表达下降（P < 0.05）。qRT-PCR与Western blot显示，与CON组比较，TSPAN8在FFA组中的表达下降（P < 0.01）。与PCDNA3.1+FFA组相比，PCDNA-TSPAN8+FFA组中细胞内甘油三酯（TG）水平下降（P < 0.001）。qRT-PCR示，与PCDNA3.1组比较，脂肪酸转运蛋白5（FATP5）在PCDNA-TSPAN8组中表达降低（P < 0.01），与CON组相比，FATP5在FFA组表达上调（P < 0.001）。结论TSPAN8参与NAFLD的脂质代谢，细胞过表达TSPAN8可能通过降低FATP5的表达来抑制细胞内脂质的沉积，可能具有潜在的临床价值。     

基于时空图卷积神经网络的蛋白质复合物识别方法

目的探讨利用时空图卷积神经网络在动态蛋白质网络中挖掘复合物的新方法。方法文中首先定义了边强度、节点强度和边存在概率等指标对动态蛋白质网络进行建模，然后结合图上的时间序列信息和结构信息，基于希尔伯特-黄变换、注意力机制和残差连接等技术设计了2种卷积算子来对网络中蛋白质的特征进行表示学习，构建得到动态蛋白质网络特征图。最后采用谱聚类来识别复合物。结果在多个公开生物数据集上的仿真实验结果表明，所提算法在DIP数据集和MIPS数据集上的F值都达到了90%以上，相比于DPCMNE、GE-CFI、VGAE和NOCD等4种识别算法而言，识别效率分别平均提高了约34.5%、28.7%、25.4%和17.6%。结论运用深度学习技术来处理动态蛋白质网络的性能表现良好，具有普适意义。     

卒中患者肠道宏病毒组的组成和菌群特征

目的探究卒中患者和健康志愿者之间肠道宏病毒组和肠道菌群的差异。方法选取2014年2月~2016年2月在南方医院神经内科就诊的急性缺血性卒中患者15名，同时招募15名年龄性别匹配的健康志愿者，对所有志愿者的粪便样本进行宏病毒组测序和16S rRNA测序，分析卒中患者和健康志愿者肠道宏病毒组和肠道菌群组成和结构的差异。结果宏病毒组测序结果显示卒中患者肠道宏病毒组的整体多样性与健康志愿者无差异（α多样性：P=0.320，β多样性：P=0.169, R²=0.037），但两者宏病毒组的组成不同，LEfSe分析提示Bacteroides phage B40_8和Cronobacter phage CS01的相对丰度在卒中患者中升高。16S rRNA测序结果显示卒中患者肠道菌群的结构和组成与健康志愿者存在显著差异（α多样性：P=0.950，β多样性：P=0.005, R²=0.117），LEfSe分析提示卒中患者中Megasphaera等菌属的相对丰度增加，而Bifidobacterium等菌属的相对丰度下降。此外，相关性分析显示在卒中患者的肠道宏病毒组中Streptococcus的噬菌体的相对丰度与其宿主呈正相关（r=0.550, P=0.036）；而在健康志愿者的肠道宏病毒组中Faecalibacterium、Bilophila和Roseburia的噬菌体的相对丰度分别与其宿主呈正相关（Faecalibacterium: r=0.520, P=0.049; Bilophila: r=0.541, P=0.040; Roseburia: r=0.526, P=0.046）。结论卒中患者肠道宏病毒组的整体多样性与健康志愿者相似，但宏病毒组的组成及其与菌群的相互作用模式不同；卒中患者肠道菌群的结构与健康志愿者存在差异，机会致病菌的相对丰度在卒中患者中升高，但共生菌的相对丰度降低。     

比较两种改良式印章法辅助后牙树脂[... formula ...]贴面修复的形态准确性

目的对比评价两种改良式印章法辅助后牙直接法复合树脂贴面修复的形态准确性。方法采用标准树脂牙右下第一磨牙54颗，制作硬质硅橡胶和透明硅橡胶两种印章复制牙冠外形，并进行贴面预备及复合树脂贴面修复。试验共分为9组：按照不同印章(硬质硅橡胶或透明硅橡胶)、面预备量(1 mm或2 mm)和不同复合树脂材料(通用型复合树脂或整块充填复合树脂)分为8个实验组，对照组为CAD/CAM生物复制方法进行间接修复。贴面修复完成后进行模型扫描，并与修复前原始牙冠形态的扫描数据进行3D比较，按面及轴面分别计算均方根(root mean square, RMS)值。采用方差分析比较各组RMS值。结果面RMS值硬质硅橡胶印章法组为(0.136±0.031) mm，透明硅橡胶印章法组为(0.130±0.024) mm，对照组为(0.130±0.009) mm，组间差异无统计学意义；轴面RMS值分别为(0.135±0.020) mm、(0.147±0.021) mm及(0.153±0.014) mm，硬质硅橡胶印章法组最小(P < 0.05)。两种改良式印章法在2 mm厚的通用型树脂组面平均RMS值最大，显著大于对照组(P < 0.05)。结论使用两种改良式印章法辅助进行直接法贴面修复具有较高的形态准确性，硬质硅橡胶印章法所得修复体的轴面形态更佳。当修复体面厚度为2 mm时，使用整块充填复合树脂具有更准确的面形态。     

NDRG2通过调控肝癌细胞磷脂和甘油三酯代谢抑制肝细胞癌的生长：基于代谢组学分析

目的观察抑癌基因N-Myc下游调控基因2（NDRG2）对人肝癌细胞脂类物质代谢的调控方式及调控特征，阐述NDRG2在肝癌脂质代谢中的作用。方法基于TNMplot数据库分析抑癌基因NDRG2在809例肝细胞癌组织和379例正常肝组织中的表达差异，应用人类蛋白质图谱（THPA）分析NDRG2在肝细胞癌的表达水平与患者生存期的关系，以及NDRG2在肿瘤细胞株的表达丰度并筛选肝癌细胞系。利用携带NDRG2 cDNA慢病毒及其对照组慢病毒分别感染人肝细胞癌细胞系HepG2，采用实时荧光定量PCR法检测慢病毒感染后两组细胞中NDRG2基因的mRNA含量；Western blot检测慢病毒感染后两组细胞中NDRG2的蛋白含量，建立NDRG2过表达及其对照组细胞系。利用脂质代谢组学分析NDRG2表达增强对肝癌细胞脂质代谢的调控效应，利用酶联免疫分析试剂盒验证NDRG2表达增强对肝癌细胞磷脂代谢物的影响，利用油红染色验证NDRG2表达增强对肝癌细胞甘油三酯的影响。结果TNMplot数据库结果统计分析发现NDRG2在肝癌组织中表达量对比普通肝组织明显下降（P < 0.001）；THPA数据库生存分析发现NDRG2 mRNA水平高的患者比NDRG2 mRNA水平低的患者存活时间更长；THPA数据库细胞系RNA表达分析显示在多种肿瘤细胞中，肝细胞癌HepG2中NDRG2表达丰度较高。代谢组学研究发现NDRG2表达增强能够显著调控肝癌细胞HepG2磷脂的含量。其中甘油三酯TG、卵磷脂PC、磷脂酰甘油PG、磷脂酰乙醇胺PE、鞘磷脂酰丝氨酸SM、神经酰胺Cer等变化明显。酶联免疫分析发现NDRG2表达增强能够显著抑制肝癌细胞HepG2内多种磷脂代谢物的含量。油红染色分析发现NDRG2表达增强能够显著抑制肝癌细胞HepG2内甘油三酯的含量。结论抑癌基因NDRG2可以通过调控肝癌细胞磷脂和甘油三酯含量，抑制肝细胞癌的发生与发展。     

原发性醛固酮增多症肾上腺切除术后慢性肾功能不全1例

We report one case of estimated glomerular filtration rate (eGFR) decline after taking unilateral adrenalectomy due to aldosterone adenoma. A 60-year-old male with 23-year history of hypertension was reported to the endocrinologist due to hypokalemia (serum potassium 3.01 mmol/L). Urine microalbumin/creatinine (ALB/CR) was 70.15 mg/g, serum creatinine was 82 μmol/L and eGFR was 89.79 mL/(min·1.73 m²). Random serum aldosterone was 172.2-203.5 ng/L, and random plasma rennin activity was 0-0.17 μg/(L·h). His captopril challenge test suggested that his aldosterone le-vels were suppressed by 8% (< 30%) and the adrenal enhanced computed tomography scan revealed a left adrenal tumor. The patient was diagnosed with primary hyperaldosteronism (PA), aldosterone adenoma and underwent left laparoscopic adrenalectomy. Histological examination confirmed adrenal cortical adenoma. One week after the operation, his serum creatinine was increased to 127 μmol/L compared with preoperative level; eGFR was 32.34 mL/(min·1.73 m²). His systolic blood pressure (SBP) was 110 mmHg and diastolic blood pressure (DBP) was 60 mmHg (hypotensive drugs discontinued), and serum potassium level was 5.22 mmol/L. At the end of the 2-year follow up, the serum creatinine of this patient remained at 109-158 μmol/L and eGFR fluctuated from 63.28-40.12 mL/(min·1.73 m²). PA is one of the most common causes of secondary hypertension. Several studies have reported renal function deterioration of PA patients after unilateral adrenalectomy, like the patient in this article. Age, preoperative plasma aldosterone concentration, albuminuria and preoperative potassium level might be significant predictors of a decrease in the eGFR. Growing evidence suggests that aldosterone could contribute to structural kidney damage, arterial injury and hemodynamic disorder. At the same time, patients with PA exhibit glomerular hyperfiltration and glomerular vascular hypertension, leading to the misinterpretation of renal function in PA patients as subtle kidney damage may be masked by the glomerular hyperfiltration before treatment. After a unilateral adrenalectomy, glomerular hyperfiltration by aldosterone excess is resolved and renal damage can be unmasked. In conclusion, kidney function deterioration after adrenalectomy can be detected in some patients with PA. Thus, accurate evaluation of kidney function in patients with PA may be essential, especially for those with preoperative risk factors for postoperative renal impairment. After unilateral adrenalectomy, close monitoring of renal function and adequate management are required for PA patients.     

屎肠球菌QH06能减轻溃疡性结肠炎大鼠的结肠黏膜损伤

目的探讨屎肠球菌QH06对溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠道菌群与肠道免疫的影响及其机制。方法36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、UC模型组和屎肠球菌组（12只/组）。除正常对照组外，其余2组以5% TNBS/乙醇灌肠法建立UC模型。造模成功后屎肠球菌组用屎肠球菌QH06灌胃干预，剂量为0.21 g/kg，正常对照组和UC组用等体积的蒸馏水灌胃干预。干预14 d后用HE染色法观察各组大鼠结肠病理改变并评分，用RT-qPCR和ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ的mRNA和蛋白表达水平，用免疫组化和ELISA法检测TLR2蛋白表达量。利用IlluminaMiseq平台对各组大鼠肠道菌群测序同时进行生物信息学分析。最后肠道菌群和TLR2蛋白表达量、细胞因子等指标进行相关性分析。结果与正常对照组相比，UC组大鼠体质量下降（P < 0.01），结肠组织损伤严重，病理学评分显著升高（P < 0.01）；ELISA和RT-qPCR结果显示，IFN-γ（P < 0.01），IL-12（P < 0.01），TLR2（P < 0.01）的蛋白表达水平和IFN-γ（P < 0.05），IL-12（P < 0.05），IL-10（P < 0.05）的mRNA表达水平上调。Illumina Miseq测序和分析显示，UC组大鼠肠道菌群多样性Shannon指数（P < 0.05）、Ace指数（P < 0.01）和Chao指数（P < 0.05）降低。Enterobacteriaceae（P < 0.01）增多，Burkholderiaceae（P < 0.05）减少。与UC组相比，屎肠球菌组大鼠体质量增加（P < 0.05），损伤减轻，病理学评分下降（P < 0.05），结肠组织中IFN-γ（P < 0.01），IL-12（P < 0.05）、TLR2蛋白表达量（P < 0.01）下调，IL-4蛋白表达量上调（P < 0.05），IFN-γ（P < 0.05）、IL-12（P < 0.05）的mRNA表达量下调，肠道菌群多样性Shannon指数（P < 0.05）、Ace指数（P < 0.05）和Chao指数（P < 0.05）升高。Enterobacteriaceae（P < 0.05）减少，Burkholderiaceae（P < 0.05）和Rikenellaceae（P < 0.01）增多；肠道菌群、细胞因子含量和TLR2蛋白表达量相关性分析结果显示，IFN-γ与Enterobacteriaceae呈正相关、而与Prevotellaceae，Desulfovibrionaceae、norank_o__Mollicutes _RF39，Clostridiales _vadinBB60 _group呈负相关；TLR2表达水平与Clostridiales_ vadinBB60_ group，norank_o__Mollicutes_RF39和Prevotellaceae呈负相关。结论屎肠球菌QH06能减轻TNBS诱导的UC大鼠的结肠黏膜损伤，其机制可能与普氏菌科等短链脂肪酸产生菌丰度的升高，TLR2介导的异常免疫反应的抑制有关。     

类风湿关节炎患者足踝部体征和超声下病变的一致性

目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者踝部和跖趾(metatarsophalangeal, MTP)关节的体征与超声下炎性病变的一致性。方法纳入查体发现双踝和跖趾关节中至少1个部位有压痛和/或肿胀、且接受双足踝关节灰阶(greyscale, GS)和能量多普勒(power Doppler, PD)超声检查的RA患者，分析各关节部位压痛、肿胀的体征和超声病变的发生率，研究体征和超声下关节腔积液、滑膜炎或腱鞘炎三种炎性病变的一致性。结果纳入113例RA患者，平均年龄(52.5±12.6)岁，中位病程60(13，129)个月，基于红细胞沉降率的28个关节计数的疾病活动度评分[disease activity score in 28 joints based on erythrocyte sedimentation rate, DAS28(ESR)]为5.1±1.7，基于C反应蛋白的28个关节计数的疾病活动度评分[disease activity score in 28 joints based on C reactive protein, DAS28(CRP)]为4.6±1.5。查体发现在双踝和MTP 1~5关节中，踝关节压痛和肿胀最常见，分别为52.7%和31.9%；而超声发现GS阳性滑膜炎最多见于MTP2关节(34.1%)，其次为踝关节(32.7%)和MTP1关节(27.9%)；PD阳性滑膜炎最易出现在MTP1关节(14.2%)，其次为踝关节(12.4%)和MTP2关节(10.6%)。腱鞘炎的总体发生率为41.1%，其中超过半数为胫骨后肌腱鞘炎，GS和PD的阳性率分别为22.1%和17.6%。关节腔积液最多见于踝关节(9.7%)，骨侵蚀最多见于MTP5关节(19%)。踝和MTP关节的临床体征与超声下三种炎性病变的总体一致性均较差(κ＜0.2，P＜0.05)。一致性相对最好的是踝关节肿胀与超声下炎性病变(κ=0.225，P＜0.05)，其中与滑膜炎的一致性一般(κ=0.231，P＜0.05)，与腱鞘炎的一致性较差(κ＜0.20，P＜0.05)。关节腔积液与各关节的压痛或肿胀无一致性(P＞0.05)。结论RA患者中足踝部体征与超声下所见炎性病变的总体一致性较差，体格检查发现踝关节压痛/肿胀最多见，然而超声下所见病变更多见于MTP关节；超声可以额外发现足踝部关节的异常病变，有助于临床更准确地判断病变类型和程度。     

褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移

目的探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组，Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时，添加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h，并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照，CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间，筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响；流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况；Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1，凋亡相关蛋白Bcl2、Bax，上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果CCK-8结果显示，与对照组相比，褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖（P < 0.05）；集落形成实验显示，3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组；褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度（P < 0.01），并诱导细胞凋亡率增加（P < 0.01）；且与对照组相比，褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加（P < 0.05），抗凋亡蛋白Bcl2表达下调（P < 0.05），Bcl2/Bax的比值逐渐减低（P < 0.01）；转录因子Snail减少，上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加；单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1表达增加，P62表达减少（P < 0.05）以及Beclin1蛋白阳性着色增强，P62蛋白阳性着色减弱；3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1（P < 0.001）、LC3-ΙΙ/LC3-（ΙP < 0.05）以及凋亡蛋白Bax（P < 0.01）、上皮细胞标志蛋白E-cadherin（P < 0.001）明显低于褪黑素组，抗凋亡蛋白Bcl2（P < 0.05）、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值（P < 0.01）高于褪黑素组。结论褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬，抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡，而减少自噬，可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。     

CD40LG是与浸润性乳腺癌肿瘤微环境中免疫和基质相关的预后标志物

目的旨在寻找与浸润性乳腺癌（BRCA）发生相关的肿瘤微环境（TME）相关基因，以预测其预后并为临床提供治疗靶点。方法从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中检索到RNA转录组数据和临床相关数据。利用ESTIMATE算法计算基质评分和免疫评分。然后通过取交集筛选出差异表达基因（DEGs）。利用蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络和单变量COX回归分析来确定DEGs中的核心基因。选取一个核心基因进行GSEA集富集分析和CIBERSORT分析，以分别区分核心基因表达的功能和肿瘤浸润免疫细胞（TICs）的比例。最终用Western blot和qRT-PCR对CD40LG的表达水平进行临床验证。结果从TCGA中提取了1222个样本（124个正常样本和1098个肿瘤样本）进行分析，共获得了487个DEG。这些基因主要富集在与免疫相关的途径中。进一步的交叉分析揭示了11个关键基因，包括CD40LG、ITK、CD5、CD3E、SPN、IL7R、CD48、CCL19、CD2、CD52和CD2711，这些基因被证明与乳腺癌TME状态相关。挑选了CD40LG进行进一步研究，结果表明，CD40LG高表达BRCA患者的总生存期（OS）比低表达BRCA患者更长（P=0.002），并且CD40LG表达在TNM分期、肿瘤大小方面的差异也具有统计学意义（P＜0.05）。GSEA和CIBERSORT分析表明CD40LG的表达与TME中的免疫活性有关。Western blot和qRT-PCR结果显示CD40LG在乳腺癌细胞及癌组织中的蛋白及mRNA表达量均低于乳腺正常细胞及癌旁组织（P＜0.05）。结论CD40LG在TME中高表达与BRCA患者的生存呈正相关，所以CD40LG可能是一种新的用于预后预测的生物标志物。其生物学行为可能促进我们对肿瘤进展的分子机制和靶向治疗的理解。     

腹膜透析相关的混合菌感染的发生和治疗失败的危险因素——814例多中心回顾性研究

目的明确混合菌腹膜透析相关性腹膜炎（PDAP）发生和治疗失败的危险因素。方法回顾性收集2013~2019年期间，在吉林省4家三甲医院腹膜透析（PD）中心随访的PDAP患者临床资料，将其分为混合菌PDAP组和对照组。比较两组患者的临床资料与治疗结果，应用多因素回归分析探讨影响混合菌PDAP发生和当次治疗失败的独立危险因素。结果共纳入814例次PDAP，分为混合菌PDAP组（79例次PDAP）和对照组（735例次PDAP）。与对照组相比，混合菌PDAP组老年人（>65岁）和难治性PDAP占比更高，第1天透出液白细胞计数更多，抗生素治疗天数更长（P < 0.05）。混合菌PDAP组拔管和发生治疗失败（拔管+PDAP相关性死亡）的风险分别是对照组的2.972倍（OR=2.972，95% CI 1.634~5.407，P < 0.001）和2.692倍（OR=2.692, 95% CI1.578~4.591，P < 0.001）。老年人（>65岁）发生混合菌PDAP的风险是中青年人的1.937倍（OR=1.937，1.207~3.109，P=0.006）；合并糖尿病（OR=5.554，95% CI 1.021~30.201，P=0.047）、致病菌类型为混合真菌（OR=343.687，95%CI 21.554~5480.144，P < 0.001）或铜绿假单胞菌感染（OR=11.518，95% CI 1.632~81.310，P=0.014）分别可使混合菌PDAP患者治疗失败（拔管+PDAP相关性死亡）的风险增加4.554倍、342.687倍、10.518倍。结论本地区近3年混合菌PDAP在整体PDAP中的占比较以往升高，混合菌感染是当次PDAP治疗失败的独立危险因素。老年人是发生混合菌PDAP的独立危险因素，合并糖尿病与致病菌混合真菌感染或混合铜绿假单胞菌感染是混合菌PDAP当次治疗失败的独立危险因素。     

卡托普利试验在醛固酮腺瘤无创诊断中的临床价值

目的分析原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism，PA)中醛固酮腺瘤(aldosterone-producing adenoma，APA)亚型的临床特点及卡托普利试验(captopril challenge test，CCT)在APA诊断中的应用价值，尝试寻找从PA中识别APA的临床特异性无创指标。方法回顾性收集因高血压住院患者的临床资料，确诊PA者90例，其中手术证实为APA者34例。对两组患者临床指标，包括CCT前后的血浆醛固酮浓度(plasma aldosterone concentration，PAC)、醛固酮/肾素比值(aldosterone to renin ratio，ARR)以及CCT后的醛固酮抑制率(%)进行比较，并绘制CCT前后相关指标的受试者工作特征曲线，比较曲线下面积(area under the curve，AUC)。结果与PA组相比，APA患者确诊时高血压病程较短，低血钾发生率更高，血钾平均水平更低，两者的血压水平、性别分布、血钠水平、体重指数差异无统计学意义。APA组CCT前ARR及CCT后PAC、ARR、醛固酮抑制率均较PA组高，其中CCT前后ARR均对APA有诊断价值CCT前ARR临界点为7.12时，灵敏度为35.85%，特异度为77.78%；CCT后ARR临界点为4.23时，灵敏度为71.43%，特异度为62.22%；两者对PA分型的诊断价值相当。CCT前ARR>7.12联合低血钾的诊断特异度高达80%。结论CCT前后ARR对APA的诊断均具有临床价值，当联合低血钾时诊断特异度增高。     

过表达miR-607通过下调TRPC5表达抑制肝细胞癌的生长和转移

目的研究miR-607异常表达在肝细胞癌（HCC）中的临床意义及对肝癌细胞生长转移的影响。方法荧光定量PCR检测45对HCC及癌旁组织中miR-607表达，分析miR-607表达与患者临床病理特征间的相关性。通过转染miR-607 mimics提高HCC细胞（Huh-7和HCCLM3）内miR-607的表达水平。采用CCK-8、流式细胞仪、划痕愈合实验及transwell小室模型分别检测过表达miR-607对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因系统检测miR-607是否与潜在靶点TRPC5的mRNA 3''-非翻译区直接结合。Western blot检测过表达miR-607对HCC细胞内TRPC5、CCND1、MMP2表达及Akt磷酸化的影响。结果MiR-607在HCC组织及HCC细胞中的表达水平均降低（P < 0.05）；miR-607低表达与肿瘤直径>5 cm、血管侵犯及较晚TNM分期（Ⅲ+Ⅳ）密切相关（P < 0.05）。过表达miR-607抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡（P < 0.05）。双荧光素酶报告基因系统证实miR-607与TRPC5 mRNA 3''-非翻译区直接结合（P < 0.05）。过表达miR-607抑制HCC细胞内TRPC5、CCND1及MMP2表达并下调Akt的磷酸化水平（P < 0.05）。结论miR-607低表达与肝细胞癌恶性临床特征密切相关，miR-607可能通过下调TRPC5表达进而抑制Akt通路激活来发挥抗HCC生长转移作用。     

新型温敏性重组人釉原蛋白载体与传统丙二醇藻酸酯载体的体外测试效果比较

目的评价新型温敏性重组人釉原蛋白（rhAm）载体和传统丙二醇藻酸酯（PGA）载体的体外表征和对人牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法分别利用3.3%PGA与rhAm混合制备PGA-rhAm，2%的壳聚糖（CS）和rhAm混合并使用质量分数60%的β-甘油磷酸钠溶液（βGP）作为交联剂制备CS-βGP-rhAm凝胶；表征通过检测黏度、凝固时间、pH值、溶胀率、体外生物降解率和缓释性能来评估；通过观察金黄色葡萄球菌生长状况比较材料的抗菌效果；生物相容性评估是在人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）上利用CCK8检测各组细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-qPCR检测成骨基因mRNA表达，Western blot检测蛋白的表达水平，碱性磷酸酶（ALP）染色检测各组细胞成骨分化情况。结果PGA-rhAm具有黏度值3.262±0.055 Pa.s，CS-βGP-rhAm在37 ℃下具有6 min凝固成型能力、接近口腔环境的pH值、约90%的溶胀率，同时缓释rhAm可维持2周以上，自身降解时间维持3周以上。CS-βGP负载rhAm相比PGA负载rhAm更有效抑制金黄色葡萄球菌生长（P < 0.001）。细胞水平上，CS-βGP是否负载rhAm都可促进细胞增殖（P < 0.001），PGA促进细胞增殖效果不显著。划痕实验显示，CS-βGP和PGA负载rhAm后均可促进细胞迁移（P < 0.01）。RT-qPCR和Western blot结果显示，CS-βGP负载rhAm能促进RUNX2、OCN mRNA水平（P < 0.001），上调Ki67（P < 0.001）、RUNX2（P < 0.001）、Collagen Ⅰ（P < 0.01）、β-catenin（P < 0.05）蛋白表达。PGA负载rhAm促进RUNX2（P < 0.05）、OCN（P < 0.01）mRNA水平表达，蛋白水平变化无统计学意义。CS-βGP组ALP染色蓝紫色颗粒数增加，PGA组无明显变化。结论CS-βGP具有能缓释rhAm的性能，同时相比传统的PGA载体，CS-βGP具有温度成型的特点、抑制金黄色葡萄球菌生长的性能、显著提高hPDLFs的生物活性并且负载rhAm后不影响其生物活性。     

Srn821798在变异链球菌变链素IV形成中的作用

目的分析srn821798对变链素Ⅳ的影响，探索变链素Ⅳ转录后的规律。方法用靶基因预测软件RNAhybrid、RNAPredator和IntaRNA对srn821798进行靶基因预测，继而采用抑菌圈实验筛选了高表达变链素Ⅳ的变异链球菌菌株和不表达变链素Ⅳ的变异链球菌菌株各10株，并采用qPCR技术检测了这些菌株中srn821798和候选靶基因的表达水平。体外合成srn821798模拟物和抑制剂，采用电转化的方法在变异链球菌UA159标准株中构建了srn821798高表达株和低表达株，分析和比较这些菌株中srn821798和候选靶基因的表达水平。最后通过电泳和双荧光素酶报告基因实验检测了srn821798和候选靶基因sepM预测作用位点的结合能力。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果变异链球菌临床菌株中高表达变链素Ⅳ组中的候选靶基因sepM，comD，comE，nlmA及nlmB的表达水平均显著高于无表达变链素Ⅳ组，而高表达变链素Ⅳ组srn821798的表达水平显著低于无表达变链素Ⅳ组（P < 0.05）。虽然标准株中srn821798上调组和下调组中候选靶基因的表达水平差异不大，但sepM的表达水平存在差异分布的趋势，并且预测的srn821798与sepM作用位点的结合能力较高。结论srn821798可能在变链素Ⅳ的形成中起着一定的调控作用，但机制有待进一步探索。     

上尿路尿路上皮癌组织中脂肪因子表达与临床病理特征及预后的相关性

目的基于生物信息数据分析及免疫组织化学染色，探究上尿路尿路上皮癌(upper tract urothelial carcinoma，UTUC)患者脂肪因子表达水平与临床病理特征及预后的相关性。方法纳入研究的脂肪因子包括脂联素(adiponectin，AdipoQ)、瘦素(leptin，LEP)、白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-10及各脂肪因子的受体(AdipoR1、AdipoR2、LEPR、IL-6R、IL-10RA、IL-10RB)。选取2014年1月至2021年4月在北京大学人民医院接受手术治疗的UTUC患者组织标本进行免疫组织化学染色，使用H-Score评估表达水平，同时回顾性收集患者临床数据并进行随访。从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus database，GEO){"type":"entrez-geo","attrs":{"text":"GSE134292","term_id":"134292"}}GSE134292数据集中下载UTUC患者“转录组测序”数据进行对比。采用t检验比较非肌层浸润肿瘤与肌层浸润性肿瘤组间脂肪因子表达水平的差异，采用Cox回归分析和Kaplan-Meier生存曲线分析两队列中患者预后指标的独立预测因素，双侧P < 0.05为差异有统计学意义。结果共选取UTUC患者的组织切片63例，免疫组织化学染色结果表明AdipoQ(P=0.003 6)、AdipoR1(P=0.006 5)、LEP(P=0.007 7)、IL-10(P=0.006 9)、IL-10RA(P=0.008 9)在肌层浸润性肿瘤中呈高表达。同时纳入了{"type":"entrez-geo","attrs":{"text":"GSE134292","term_id":"134292"}}GSE134292数据集中的57例UTUC患者，AdipoR1(P=0.000 4)、AdipoR2(P=0.000 4)、IL-6(P=0.005 0)、IL-10(P=0.001 7)、IL-10RA(P=0.008 1)在肌层浸润性肿瘤中呈高表达。生存曲线及多因素分析结果显示，IL-10RA高表达是无膀胱复发生存的独立保护因素(P=0.044，HR=0.996，95%CI：0.992~0.998)，{"type":"entrez-geo","attrs":{"text":"GSE134292","term_id":"134292"}}GSE134292队列数据也同样验证了这一点(P=0.014，HR=0.515，95%CI：0.304~0.873)。结论AdipoQ、AdipoR1、IL-10及IL-10RA在肌层浸润性肿瘤中呈高表达，表明AdipoQ和IL-10及其受体参与肿瘤进展过程。IL-10RA高表达是UTUC患者术后无膀胱复发生存的保护性因素，预示其在肿瘤复发中发挥重要作用。