PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法组织层面上，应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平；根据PFN2表达量，将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组（46例）、低表达（48例）组，以及癌旁组织中PFN2高表达组（26例）、低表达（49例）组；采用χ²检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier生存分析法，分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系；细胞功能上，敲低MKN-45细胞中PFN2，将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组；过表达MKN-45细胞中PFN2，将其分为control-vector组与PFN2-vector组，选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织（P < 0.01）；PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关（P < 0.05）；在胃癌组织中，PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系（P < 0.01）；PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差（P < 0.01），并且是胃癌预后的独立预测因子（P < 0.05）；MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强（P < 0.001）。结论PFN2蛋白在胃癌组织中高表达，并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。     

活化的Mir-30a-wnt/β-catenin信号轴通过上调组织蛋白酶K的表达促进牙周膜干细胞向成牙骨质细胞分化

目的探讨牙周膜干细胞（PDLSC）成牙骨质向分化过程中mir-30a-wnt/β-catenin信号轴调控组织蛋白酶K（CTSK）表达的功能作用。方法极限稀释法分离培养PDLSC，釉基质蛋白衍生物（EMD）诱导细胞成牙骨质向分化。在细胞分化过程中，通过microRNA芯片筛选差异表达的microRNA。首先，给予不同分组细胞EMD诱导和/或抑制microRNA表达等处理，无干预组细胞作为对照。利用qPCR和Western blot技术首先验证差异表达的microRNA是否能够调控CTSK的表达。之后，将细胞膜片复合陶瓷支架材料植入裸鼠皮下，利用免疫组织化学方法观察成牙骨质细胞标记蛋白CAP和CEMP-1的表达变化，明确受microRNA调控的CTSK表达变化是否参与了PDLSC成牙骨质分化。在此基础上，从蛋白学水平观察wnt信号通路在microRNA调节CTSK表达过程中是否发挥了相应功效。结果EMD诱导PDLSC成牙骨质向分化过程中，多种microRNA表达发生变化，其中miR-30a表达出现特异性上调（P＜0.05）。表达上调的miR-30a进一步调节CTSK的表达（P＜0.05），促进PDLSC异位形成类牙骨质样结构，高表达成牙骨质细胞标记蛋白CAP和CEMP-1。抑制wnt/β-catenin信号通路，miR-30a对CTSK的表达调控作用出现相应减弱。结论EMD可能通过上调miR-30a的表达激活wnt/β-catenin信号通路从而经mir-30a-wnt/β-catenin信号轴调控CTSK诱导PDLSC向成牙骨质细胞方向分化。     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响；将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组，分别采用0.4 g/L Mat及10 μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后，应用光学显微镜观察细胞形态变化，流式细胞术annexin Ⅴ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡，PI单标记检测细胞周期变化，Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示，不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖，具有时间和浓度依赖性，且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P＜0.01）。形态学检查显示，联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示，与对照组及单药组相比，联合组显著促进细胞凋亡（[42.50±2.63）%，P＜0.01]，显著增加了细胞周期G₀/G₁期细胞比率（[57.23±1.44）%，P＜0.01]。Western blot结果表明，两药联合后K562细胞p-mTOR、CyclinD1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平明显增高（P＜0.01），Caspase-9蛋白表达水平下降（P＜0.01）。结论Mat和LY294002联合应用可以增强对K562细胞生长抑制的协同作用，其机制可能是通过有效下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt表达，使p-mTOR、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达下调，Caspase-9蛋白表达上调来实现的。     

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549，通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平；CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响；利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA；通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平；Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况；CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响；在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒，CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果HOXB13促进了A549细胞的增殖（P＜0.05）；生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p；在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后，HOXB13蛋白表达量降低（P＜0.05）；而干扰miR-20a-5p表达后，HOXB13蛋白的表达量升高（P＜0.05）；细胞增殖实验结果显示，miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反，miR-20a-5p及HOXB13同时过表达，细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a- 5p及单独过表达HOXB13组之间（P＜0.05）。结论miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。     

血管抑制素-2通过调控上皮细胞间质化促进宫颈癌细胞的增殖和转移

目的探讨血管抑制素-2（VASH2）能否促进宫颈癌细胞在体外的增殖和转移及其可能的分子机制。方法在外源性过表达和干扰内源性flotillin-1表达的宫颈癌细胞中，通过公共数据库结合RNA-seq挖掘分析差异表达基因；在宫颈正常上皮细胞（HcerEpic细胞）和宫颈癌细胞（HeLa、C-33A、Ca ski、SiHa和MS751）以及不同淋巴结转移状态的新鲜宫颈癌组织中检测VASH2的表达；运用慢病毒稳定表达载体构建外源性过表达VASH2和干扰内源性VASH2表达的宫颈癌细胞及对照细胞，并检测其增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成的情况；在上述细胞模型中检测上皮细胞间质化（EMT）过程关键分子及TGF-β的表达水平。结果RNA-seq发现在外源性过表达flotillin-1的宫颈癌细胞中VASH2的表达上调（P < 0.05），而在抑制内源性flotillin-1表达的细胞中VASH2表达下调（P < 0.05），并在公共数据库中证实VASH2在有淋巴结转移的宫颈癌组织中相对于无淋巴结转移的癌组织呈高表达（P < 0.01）。相对于HcerEpic细胞和淋巴结未转移的宫颈癌组织，VASH2在Ca Ski、SiHa、MS751细胞和有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达上调（P < 0.05）；相对于对照细胞，外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成能力增强，而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞上述能力则受到抑制（P < 0.05）；相对于对照细胞，外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中EMT过程的关键分子E-cadherin下调，N-cadherin、Vimentin和VEGF-C上调，而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中E-cadherin上调，N-cadherin、Vimentin和VEGF-C下调（P < 0.05）；外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平上调，而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平下调（P < 0.001）。结论flotillin-1可能通过下游靶基因VASH2参与TGF-β信号通路诱导EMT过程在体外促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成。     

MiRNA-26a通过调控结缔组织生长因子缓解血管平滑肌细胞的钙化

目的探究miRNA-26a调控结缔组织生长因子对血管平滑肌细胞钙化的作用。方法将细胞分为对照组、模型组、模型+ {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960组、{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960+miR-26a mimic组和miR-26a mimic组。对照组细胞正常培养基培养，模型组VSMC细胞诱导钙化，模型+{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960组的VSMC细胞诱导钙化后加入{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960激动剂干预，{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960+miR-26a mimic组的VSMC细胞诱导钙化后用{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960激动剂和miR-26a mimic处理，miR-26a mimic组的VSMC细胞诱导钙化后转染miR-26a mimic。茜素红染色测定各组细胞钙化沉积；试剂盒检测各组细胞碱性磷酸酶（ALP）活性；荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-26a、OPG、OPN、BMP-2、Collagen Ⅱ基因和蛋白表达情况。双荧光素酶基因验证miR-26a与CTGF的结合。结果平滑肌A7r5细胞钙化后，miR-26a的表达随着钙化时间的增加而降低（P＜0.05），而CTGF的表达随钙化时间的增加而增加（P＜0.05）。茜素红染色结果显示，{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960能够增加细胞的钙化程度，而miR-26a mimic能够减轻细胞钙化。与对照组相比，模型组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen Ⅱ mRNA和蛋白的表达显著升高（P＜0.05），OPG mRNA和蛋白的表达显著降低（P＜0.05）；与模型组相比，模型+{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960组上述指标均无显著差异（P＞0.05），而miR-26a mimic组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen Ⅱ mRNA和蛋白的表达显著降低（P＜0.05），OPG mRNA和蛋白的表达显著升高（P＜0.05）；与miR-26a mimic组相比，{"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"AR234960","term_id":"27277916","term_text":"AR234960"}}AR234960+miR-26a mimic组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen Ⅱ mRNA和蛋白的表达显著升高（P＜0.05），OPG mRNA和蛋白的表达显著降低（P＜0.05）。双荧光素酶基因检测结果显示，miR-26a-inhibitor组CTGF 3''-UTR野生型中相对荧光素酶活性较miR-26a-mimic组显著升高（P＜0.05）。结论miRNA-26a能够有效降低细胞中ALP活性及OPN、BMP-2、Collagen Ⅱ的表达，同时增加钙化细胞中OPG水平，为miRNA-26a通过调控CTGF水平进而对缓解血管平滑肌细胞钙化提供了理论依据。     

巨噬细胞移动抑制因子介导MPP+/MPTP诱导的小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）/κb（NF-κB）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）/1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶（MPTP）激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的影响和机制，进而对神经元的影响。方法慢病毒MIF-shRNA感染Bv-2细胞，敲低MIF表达。Western blot检测MPP+干预的Bv-2 NLRP3和MIF表达水平、转染病毒后细胞NLRP3、p65、caspase-1表达水平及细胞核、浆蛋白p65表达水平。ELISA检测细胞培养上清液IL-1β、IL-18表达水平。将细胞培养上清液作为条件培养基培养MN9D细胞，Western blot检测TH蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型，向中脑黑质致密部立体定位注射腺相关病毒MIF-shRNA（AAV-MIF-shRNA）敲低MIF表达。对小鼠进行旷场实验、爬杆实验、悬挂实验行为学评估，组织免疫组化检测小鼠多巴胺能神经元细胞数目和小胶质细胞活化情况，Western blot检测小鼠黑质MIF、NLRP3及TH表达情况。结果感染病毒的细胞MIF mRNA（P < 0.001）和MIF蛋白（P=0.014）明显降低。Western blot显示，0.2 mmol MPP+使Bv-2细胞NLRP3（P=0.012）和MIF（P=0.019）表达增高。与MPP组比较，MIF-shRNA组NLRP3（P=0.042）和caspase-1（P=0.003）表达减少，细胞总蛋白中p65表达没有差异（P=0.978）。ELISA检测细胞上清液发现MIF-shRNA组较MPP组IL-1β（P < 0.001）、IL-18（P=0.002）水平降低。与MPP组比较，MIF-shRNA组核蛋白p65表达降低（P=0.016），浆蛋白p65表达升高（P < 0.001）。相较于MPP+的条件培养基，MN9D细胞在MIF-shRNA条件培养基中TH（P=0.01）表达增加。与MPTP组比较，注射MIF-shRNA的小鼠爬杆实验（P=0.024）和旷场实验（P=0.026）评分显著降低，悬挂实验评分显著升高（P=0.001）。组织免疫组化结果显示，相较于MPTP组，AAV-MIF-shRNA组小鼠TH阳性神经元细胞数量增多（P=0.004），小胶质细胞数量减少（P=0.049）。MIF（P=0.033）、NLRP3表达减少（P=0.045），TH蛋白明显增多（P=0.043）。结论抑制MIF表达可以减少MPP+/MPTP干预所引起的小胶质细胞NLRP3炎症小体表达和炎症因子释放，减轻小胶质细胞激活，减轻炎症反应，改善MPTP引起的黑质多巴胺能神经元损伤，在帕金森病神经炎症方面具有保护作用。     

TGF-β1通过上调Shh信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组：分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组（TGF-β1组）、10 ng/mL TGF-β1联合20 μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力；细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力；免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白（Fn）的表达；Western blotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh蛋白的表达；q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖（P < 0.05）；TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移（P < 0.05）。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌（P < 0.05）。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达（P < 0.05），TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌（P < 0.05）。结论TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达，诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。     

神经调节蛋白2高表达于不同级别胶质瘤组织并通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达

目的探讨神经调节蛋白2（NRG2）在胶质瘤中的表达及其在胶质瘤发生发展中的作用。方法通过GEPIA数据库比较分析与人正常对照组相比，低级别胶质瘤（LGG，n=518）和胶质母细胞瘤（GBM，n=163）样本中NRG2和GFAP基因表达水平变化，并分析LGG和GBM样本中两个分子与患者生存率的关系，以及两个分子表达相关性。获取人胶质瘤组织芯片样本，包含癌旁正常组织10个、LGG组织48个、GBM组织20个；使用免疫组织化学染色观察不同级别人胶质瘤组织芯片样本中NRG2表达水平变化情况，并使用免疫荧光双标法观察NRG2与GFAP的共定位情况。采用Western blot检测Akt抑制剂Perifosine对NRG2调控GFAP表达的影响。结果 NRG2在LGG和GBM样本中均存在高表达，以LGG较为显著（P < 0.01）。GBM样本中，低NRG2水平患者的总体生存率在30月之后略高于高NRG2水平患者。在LGG样本中，NRG2与GFAP基因表达水平呈负相关（P < 0.01），而在GBM样本中则呈正相关（P < 0.01）。免疫荧光染色显示LGG样本中NRG2与GFAP多共定位于同一肿瘤细胞，而在GBM样本中则多表达于不同肿瘤细胞。NRG2促进U-87 MG胶质母细胞瘤细胞中GFAP表达，该作用可被Akt抑制剂Perifosine显著抑制（P < 0.01）。结论 NRG2可高表达于不同级别胶质瘤组织中，可能部分通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达，影响患者生存率。     

甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

目的探究甘草查尔酮A（LCA）对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC₅₀）；不同浓度LCA（0、10、20及40 μmol/L）处理H226细胞48 h，通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响，通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1，以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响，并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况；选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型，随机分为两组（对照组和LCA处理组），腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量，从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果MTT实验结果表明，与空白组比较，随着LCA浓度的增加，细胞存活率明显降低，48 h的IC₅₀为28.3 μmol/L；流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期（P < 0.05），Western blot的结果显示，LCA处理后，CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低（P < 0.05）；PI3K和Akt的表达无明显变化，但是它们的磷酸化水平（p-PI3K和p-Akt的表达）显著降低（P < 0.05）；裸鼠荷瘤实验表明，LCA可使肿瘤体积和质量明显减小（P < 0.05）。结论LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞，其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。     

TRAF6通过内源性凋亡通路促进卡介苗诱导的巨噬细胞凋亡

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对卡介苗（BCG）诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞，在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组：对照组（未感染，C）、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组；感染复数试验处理组分为5组：对照组（未感染，C）、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后，通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达，并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组：阴性对照组（NC）、BCG单独感染组（BCG）、TRAF6小干扰RNA单独处理组（siRNA）和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组（siRNA+BCG）。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2，BAX的表达。使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达。结果与健康人群相比，活动性结核患者外周血中TRAF6高表达（P＜0.001）。BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达，且当感染时间为18 h（P=0.03，P=0.04），感染复数为15时二者表达量最高（P＜0.001，P＜0.001）。敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量（P=0.05）。与BCG单独处理组相比，敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率（P＜0.001），并显著下调Caspase 3（P=0.002）和PARP的表达（P＜0.001）。同时，BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升（P＜0.001），而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位（P＜0.001）。敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达（P=0.005）的同时上调Bcl-2的表达（P=0.04）。结论TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡。     

ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

目的探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法利用逆转录病毒载体系统，构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4，以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector各组细胞的生长情况。采用0.1 μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后，检测细胞凋亡相关指标，采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9，caspase-8和PARP切割带的表达水平；采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector细胞中Akt磷酸化水平。结果免疫印迹法检测结果显示，BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BONVector（P=0.013），稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快（P < 0.05）。相比较于载体对照组BON-Vector，BON-ELF4细胞在0.1 μmol/L表阿霉素处理24 h后caspase-8，caspase-9的蛋白前体降低，而caspase-8，caspase-9切割成熟体升高（P < 0.05）；同时，相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低（P < 0.05）；流式细胞术检测结果显示，22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果，6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高（P < 0.05），而Akt总蛋白的水平基本未受影响（P>0.05）。结论ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤细胞增殖和抗凋亡。     

miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织，采用qRT-PCR法检测肝癌组织中miR-424-5p，ATG14的表达。培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2，qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达，选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象，Huh-7细胞实验分组（n=3）：干扰miR-424-5p表达阴性对照组（in-NC组），干扰miR-424-5p表达组（in-miR-424-5p组）；HCCLM3细胞实验分组（n=3）：过表达miR-424-5p组（mi-miR-424-5p组），另设过表达miR-424-5p阴性对照组（mi-NC组）；过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组（mi-NC+NC组）；过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组（mi-NC+ ATG14组）；过表达miR-424-5p+过表达ATG14阴性对照组（mi-miR-424-5p+NC组）；过表达miR-424-5p+过表达ATG14组（mi-miR-424-5p+ATG14组）。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平，Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平，双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果在肝癌组织和细胞中ATG14高表达，miR-424-5p低表达。与相应对照组相比，过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡（P < 0.05）；干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡（P < 0.05）；miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P < 0.05），降低自噬受体蛋白P62的表达水平（P < 0.05）；过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/ LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P < 0.05），提高自噬受体蛋白P62的表达水平（P < 0.05）。结论miR-424调控ATG14表达影响自噬，从而抑制肝癌细胞增殖。     

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的探讨miR-125b-5p调控RAB3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达，通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化；通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D；通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中RAB3D的表达水平；骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达，通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平；并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达，通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化；随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量，通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达明显下调（P < 0.05）。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示，miR-125b-5p表达量升高，骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P < 0.05）；miR-125b-5p表达量降低，骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P < 0.05），而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示，miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反，而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量，RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断（P < 0.05）。结论miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

Bax抑制因子1可抑制体外培养的大鼠血管平滑肌细胞的钙化

目的探讨Bax抑制因子1（BI-1）对血管平滑肌细胞钙化的具体作用机制。方法使用β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞建立钙化模型。将模型分为对照组（使用常规培养基）、BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用常规培养基）、钙化组（使用钙化培养基）、钙化+BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用钙化培养基）4组。运用茜素红S染色测定血管平滑肌细胞钙沉积，酶联免疫吸附法测定细胞碱性磷酸酶活性和钙含量，Western blot法测定Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平。结果（1）随着钙化诱导时间的延长，BI-1蛋白表达明显下降，结果具有明显差异性（P=0.001）；（2）使用质粒转染方法过表达BI-1蛋白后，细胞钙含量、碱性磷酸酶活性明显降低（P=0.0006），Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达明显下降（P=0.0001），血管钙化减轻；（3）钙化诱导后血管平滑肌细胞凋亡率增加，而过表达BI-1后细胞凋亡率明显减少（P=0.01），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平下降（P=0.0003）。结论BI-1抑制细胞凋亡、钙磷沉积和细胞骨型分化起到减轻血管钙化作用。     

Numb通过上调V1G1的表达激活近端肾小管细胞mTORC1信号通路

目的探讨Numb对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）复合物1（mTORC1）信号通路活性的影响及潜在的分子机制。方法建立Numb-siRNA转染和/或顺铂诱导的雄性BALB/c小鼠急性肾损伤模型，分为4组：NC-siRNA、Numb-siRNA、NC-siRNA+顺铂、Numb-siRNA+顺铂。免疫组化检测肾脏Numb、Megalin的表达与分布；Western blot检测各组动物肾脏中Numb、S6、p-S6、S6K1、p-S6K1、4EBP1、p-4EBP1的蛋白表达。分离培养Numb-siRNA转染的小鼠原代近端肾小管上皮细胞。体外建立Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞模型，分为NC-siRNA组、Numb-siRNA组、NC-siRNA+ 氨基酸刺激组和Numb-siRNA+氨基酸刺激组。Western blot检测各组细胞Numb、S6、p-S6的蛋白表达，检测沉默Numb表达前后的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及原代近端肾小管上皮细胞中AMPK、p-AMPK的蛋白表达。V1G1过表达及空白对照慢病毒感染、Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激NRK-52E细胞，分为NC-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组、Numb-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组及Numb-siRNA+V1G1过表达慢病毒+氨基酸刺激组；Western blot检测V1G1、S6、p-S6的蛋白表达。结果与NC-siRNA组相比，Numb-siRNA组小鼠肾脏近端肾小管上皮细胞Numb及p-S6的蛋白表达均下调（P < 0.05），但不影响近端小管标记蛋白Megalin的表达与分布；与对照组小鼠相比，顺铂处理组小鼠肾脏p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达均上调（P < 0.05），而Numb-siRNA处理组小鼠抑制顺铂介导的p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达水平的上调（P < 0.05）。在NRK-52E细胞中，与氨基酸饥饿组相比，氨基酸刺激组细胞p-S6的蛋白表达上调（P < 0.05），而转染Numb-siRNA的细胞中Numb及p-S6的蛋白表达较对照组均下调（P < 0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及小鼠原代近端肾小管上皮细胞中，p-AMPK的蛋白表达均下调（P < 0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞中，V1G1的蛋白表达下调（P < 0.05），上调NRK-52E细胞中V1G1的蛋白表达，可以逆转Numb沉默介导的p-S6的降低（P < 0.05）。结论Numb可通过上调V1G1的蛋白表达促进近端肾小管上皮细胞mTORC1信号通路的活化。     

Leptin对缺氧状态下大鼠视网膜祖细胞体外增殖和分化的影响

目的探讨Leptin对体外培养的缺氧状态下视网膜祖细胞（RPCs）增殖、分化的影响及细胞中PTEN蛋白表达的变化。方法原代培养大鼠RPCs，不同浓度Leptin作用RPCs细胞，分为：常氧培养组（Control组）、缺氧培养（Hypoxia）+0、0.3、1.0、3.0、10、30 nmol/L Leptin组，分别培养至12、24、48 h，CCK-8法检测细胞增殖活性。将原代培养的RPCs细胞分为：Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组，培养48 h后，转换为分化培养基继续培养6 d，采用免疫荧光染色法对GFAP阳性细胞比例和β- tubulin III阳性细胞比例进行统计分析。Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组细胞培养48 h后，采用Western blot法检测各组RPCs中PTEN蛋白表达水平。结果原代培养的P0代RPCs为圆形悬浮生长，培养2 d后细胞可聚集成神经球。低浓度Leptin（0.3、1.0、3.0 nmol/L）作用RPCs 48 h，细胞增殖活性较Control组及Hypoxia组增强，RPCs细胞增殖活性随Leptin浓度增高呈递增趋势，其中，3.0 nmol/L Leptin作用48 h细胞增殖活性最强（P < 0.05）；高浓度Leptin（10 nmol/L，30 nmol/L）组细胞增殖活性较对照组减弱（P < 0.05）。细胞培养48 h，与Control组及Hypoxia组相比，Hypoxia+Leptin组β-tubulin III阳性细胞比例和GFAP阳性细胞比例均无显著性差异（P>0.05），而PTEN蛋白表达量较对照组显著下调（P < 0.05）。结论低浓度Leptin可促进缺氧状态下大鼠RPCs细胞增殖，抑制细胞中PTEN蛋白表达，对细胞分化无明显影响。     

槟榔碱通过促进巨噬细胞分泌含miR-155-5p外泌体诱导人口腔成纤维细胞的活化

目的探讨槟榔碱（ARE）通过调控巨噬细胞外泌体内miR-155-5p水平诱导人口腔黏膜成纤维细胞向成纤维表型转化的作用机制。方法以人单核细胞系（THP-1）与人口腔黏膜成纤维细胞系（HOMF）为研究对象。实验设为空白对照组、阴性对照组、ARE刺激组、ARE刺激后THP-1培养上清刺激组（CS）、ARE刺激后THP-1外泌体刺激组（EXO）、ARE刺激后THP-1无外泌体上清刺激组（NES）、miR-155-5p过表达组（miR-155-5p mimics）、ARE刺激后EXO处理对照组（NC+EXO-ARE）和miR-155-5p抑制联合ARE刺激后EXO处理（miR-155-5p inhibitor EXO-ARE）组。以流式细胞术检测THP-1细胞极化情况。Transwell细胞迁移实验检测HOMF细胞迁移能力。DCFH-DA检测细胞氧化应激水平。qRT-PCR检测细胞α-SMA、I型胶原和SOCS1的mRNA转录水平。免疫印迹实验检测细胞α-SMA、I型胶原与SOCS1蛋白表达。结果流式检测显示，相较于对照组，ARE组THP-1细胞由M0趋向M1极化。ARE对THP-1和HOMF细胞的刺激结果显示，相较于对照组，CS组与EXO组HOMF细胞迁移能力增强；细胞内氧化应激水平上调；细胞内miR-155-5p水平升高；细胞内α-SMA、I型胶原mRNA转录增多（1.90±0.08 vs 3.17±0.08；3.19± 0.05 vs 5.65±0.01，P < 0.05），SOCS1的mRNA转录减少（1.08±0.06 vs 0.34±0.02，P < 0.05）；α-SMA、I型胶原蛋白表达上调，SOCS1蛋白表达下调。miR-155-5p操纵实验显示，与阴性对照组相比，miR-155-5p mimics组HOMF细胞迁移能力增强，细胞内α-SMA和I型胶原蛋白表达上调；而与NC+EXO-ARE组相比，miR-155-5p inhibitor组HOMF细胞迁移能力减弱，细胞内α-SMA和I型胶原mRNA转录减少（5.84±0.08 vs 2.00±0.98；7.32±0.51 vs 2.33±0.43，P < 0.05）；α-SMA、I型胶原蛋白表达下调。结论ARE可上调THP-1胞内miR-155-5p并经外泌体途径转导和抑制HOMF胞内SOCS1蛋白表达，促进HOMF细胞的纤维化表型转化。     

过表达CLEC5A基因抑制肝细胞癌增殖和转移并逆转上皮-间质转化

目的研究C型凝集素结构域家族5成员A（CLEC5A）对肝细胞癌（HCC）增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化（EMT）特性的影响，探索CLEC5A在HCC发生发展过程中的作用及机制。方法采用免疫组化实验检测CLEC5A在50例HCC组织和癌旁组织中的表达特点，并分析其与HCC肝癌临床病理参数的相关性；通过慢病毒转染构建CLEC5A过表达HCC细胞，分别采用细胞增殖实验（CCK-8法、EdU法）、细胞迁移和侵袭实验（Transwell法）和Western blot实验检测CLEC5A对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力以及EMT标志物表达水平的影响。结果CLEC5A蛋白在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织，其表达水平与患者的肿瘤大小（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.010）、肿瘤分化程度（P=0.016）、BCLC分期（P=0.040）和微血管侵犯（P=0.024）等相关；过表达CLEC5A能够抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力，并逆转HCC细胞的EMT特性。结论CLEC5A是HCC潜在的抑癌基因，有望成为该疾病新的治疗靶点。     

CCN5在子宫内膜异位症患者组织的表达及其作用机制

目的分析CCN5在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的表达情况，探究其对子宫内膜基质细胞（HESCs）增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集并比较卵巢子宫内膜异位症患者组织与正常对照组在位子宫内膜组织中CCN5的表达水平；利用重组腺病毒Ad-CCN5构建过表达CCN5的人子宫内膜基质细胞；采用si-RNA构建敲低CCN5的人子宫内膜基质细胞。利用CCK-8实验检测不同表达水平CCN5对HESCs细胞增殖能力的影响；划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测不同表达水平CCN5对HESCs细胞迁移与侵袭能力的影响；Western blot检测不同处理组HESCs中上皮-间充质转化（EMT）标记物E-cadherin、Ncadherin，snail-1和vimentin的表达水平。结果卵巢子宫内膜异位组织中CCN5的表达水平较正常对照组在位子宫内膜显著降低（P < 0.01）；过表达CCN5可以抑制HESCs的增殖、迁徙及侵袭能力；EMT标记物E-cadherin表达升高，N-cadherin、Snail-1和Vimentin表达降低，EMT受到显著抑制（P < 0.01）。而敲低CCN5的表达可以显著增强HESCs的增殖、迁移及侵袭（P < 0.01），降低E-cadherin表达，升高N-cadherin、Snail-1和Vimentin表达，促进HESCs发生EMT转化。结论CCN5在卵巢子宫内膜异位组织中的表达水平显著降低，可能通过调控HESCs的增殖、迁移与侵袭能力及影响EMT，在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中发挥重要作用。