槲皮素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对肺癌A549/DDP细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究槲皮素联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞增殖与凋亡的影响,并探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的作用机制.方法 将对数生长期人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP分为槲皮素+顺铂组(给予160μmol/L浓度的槲皮素和25μmol/L浓度的顺铂)、顺铂组(给予25μm...     

白蛋白结合型紫杉醇联合顺铂同期放射治疗对初治局部晚期食管鳞状细胞癌的疗效及安全性

目的：探究白蛋白结合型紫杉醇联合顺铂同期放射治疗(以下简称“放疗”)对初治局部晚期食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的疗效及安全性。方法：纳入2019年1月至2020年12月于南通大学附属肿瘤医院初次治疗的100例局部晚期ESCC患者作为研究对象。接受顺铂联合白蛋白结合型紫衫醇(cisplatin plus albumin bound taxol,TP)+同期放疗方案治疗的50例患者入选TP组,接受顺铂联合5-氟尿嘧啶(cisplatin plus5-fluorouracil,FP)+同期放疗方案治疗的50例患者入选FP组。治疗后,通过计算客观缓解率(objective response rate,ORR)和疾病控制率(disease control rate,DCR)评价2组短期疗效。测定和比较治疗前后2组患者血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma antigen,SCC)抗原的水平变化。观察和记录2组患...     

IQ结构域GTP酶激活蛋白3对HepG2细胞顺铂耐药的影响

目的 探讨IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ domain GTPase-activating protein 3,IQGAP3)对人肝癌HepG2细胞顺铂耐药的影响及作用机制.方法 冻存HepG2细胞株,其中对照组细胞正常培养,IQGAP3组细胞转染IQGAP3,shIQGAP3组细胞转染shIQGAP3,采用Wes...     

血清miR-25和miR-100作为食管鳞状细胞癌诊断和预后标志物研究

目的探讨血清miR-25和miR-100对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的诊断和预后价值。方法收集2011年6月～2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院63例ESCC患者术前、术后及随访血清,并收集63例年龄、性别匹配的非癌健康人血清作为对照;实时荧光定量PCR法检测血清miR-25和miR-100含量。用非参数Mann-Whitney U检验ESCC患者组和对照组血清miR-25和miR-100表达水平的差异,配对t检验分析ESCC患者术前术后血清中miR-25和miR-100的表达量变化,受试者工作特征曲线(ROC)评估血清miR-25和miR-100对ESCC的诊断价值,单因素Kaplan-Meier法分析对ESCC患者生存的影响。结果与健康对照相比,ESCC患者血清miR-25(0.40 ± 0.20 vs 0.02 ± 0.01)和miR-100的相对含量(0.10±0.02 vs 0.04±0.00)显著升高,差异具有统计学意义(U值分别为885.0和1 006.0,P值均<0.01);血清miR-25和miR-100 的ROC曲线下面积AUC均明显大于癌胚抗原;ESCC患者术后血清miR-100含量较术前明显降低(0.07±0.01 vs 0.10±0.02),差异具有统计学意义(t=2.367,P=0.021);单因素Kaplan-Meier法分析显示血清miR-25和miR-100表达阴性的ESCC患者的生存期明显高于阳性患者(P<0.05)。结论血清miR-25和miR-100可作为ESCC诊断及预后评估的潜在标志物。     

血清p53抗体、miR-451及CEA在食管鳞状细胞癌诊断中的应用价值

目的 探讨血清p53抗体、微小RNA-451(miR-451)及癌胚抗原(CEA)在食管鳞状细胞癌诊断中的应用价值.方法 选取2019年1月—2020年1月收治的食管鳞状细胞癌89例作为观察组,另选取同期健康体检者89例作为对照组,比较两组血清p53抗体、miR-451及CEA水平,采用Spearman相关性分析探讨食...     

IRE1a与miR-346相互调节维持内质网应激强度促进宫颈癌细胞顺铂耐药

目的 研究IRE1a和miR-346相互调节维持内质网应激(edoplasmic reticulum stress,ERS)强度,在宫颈癌细胞顺铂耐药中的作用.方法 通过逐渐增加药物浓度的方法筛选顺铂耐药的宫颈癌细胞,通过基因芯片技术、实时荧光定量PCR技术、流式细胞术和双荧光素酶报告基因等方法检测顺铂耐药宫颈癌细胞m...     

RNA干扰Livin基因联合顺铂对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰Livin基因联合顺铂对喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 取人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株1株进行体外培养,取对数生长期细胞随机分为对照组(细胞未经任何处理)、干扰组(细胞经RNA干扰Livin转染)、顺铂组(细胞经6μmol/L顺铂处理)、联合组(细胞经RNA干扰Livin转染+6μmol/L顺铂处理),每组设置6个复孔。处理48 h后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡率和细胞周期分布,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达。结果 联合组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均高于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组G₀/G₁期细胞占比均高于干扰组、顺铂组,S期和G₂/M期细胞占比均低于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组Bcl-2 mRNA水平低于干扰组、顺铂组,Bax mRNA水平高于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义...     

PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤多药耐药研究进展

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt),PI3K/Akt]信号传导通路作为细胞生存重要通路之一,在促进细胞生长、增殖,促进细胞运动、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗等方面起重要作用.近年来,关于PI3K/Akt 信号通路与药物耐药性关系的研究越来越多,并被认为是化疗耐药治疗的新靶点.Akt是PI3K/Akt 通路中的关键性效应分子,多种肿瘤组织中都有Akt 的过度表达和活化.多项实验表明,化疗药物可增加Akt 磷酸化水平,使肿瘤细胞产生化疗耐受,深入研究其作用机制,可能为肿瘤的基因治疗、抗肿瘤药物开发提供新靶点.     

Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂作用下K562细胞凋亡的影响

为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1／2反义寡核苷酸转染K562细胞后对顺铂诱导凋亡的影响，采用流式细胞术检测顺铂作用下K562细胞周期变化；以脂质体作为载体，转染Chk1／2反义寡核苷酸于K562细胞，用Western blot和共聚焦显微镜检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后Chk1／2蛋白表达；用流式细胞术检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后顺铂作用下细胞凋亡率。结果发现，10μmol／L顺铂作用下K562细胞出现S期阻滞，Chk1／2反义寡核苷酸对K562细胞中Chk1／2蛋白表达有明显抑制作用，转染Chk1／2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K562细胞凋亡率，Chkl和Chk2联合转染作用优于单独转染。结论：Chk1／2可作为白血病增敏治疗的有效靶点。     

血清中肝细胞生长因子含量对食管鳞状细胞癌的影响

目的探讨血清中肝细胞生长因子（HGF）含量对食管鳞状细胞癌的影响。方法用ELISA方法研究6例食管良性疾患和42例食管鳞状细胞癌患者血清中肝细胞生长因子（HGF）含量。结果12例正常健康体检和6例食管良性疾患病人血清中都有一定量的肝细胞生长因子（HGF）,而食管鳞状细胞癌患者血清中HGF含量（397．4±339．9pg／ml）明显高于正常健康人和食管良性疾患患者（P〈0．05）,其含量与病理类型、病理组织分级和临床病理分期、淋巴结转移情况无关。3年随访36例病例中死亡（23例）,其血清HGF含量明显高于生存（30例）者（P〈0．05）。结论增高的血清HGF在食管鳞状细胞癌中预示了一种更具有侵袭性的生物学行为。血清HGF含量水平可作为食管鳞状细胞癌的高危因素指标。     

PLCE1和RFT2表达与食管鳞状细胞癌的相关性及对预后的影响

目的分析PLCE1和RFT2表达与食管鳞状细胞癌的相关性及对预后的影响。方法选取90例食管癌患者,采用免疫组化SP法检测食管鳞状细胞癌组织中和癌旁正常食管组织中PLCE1和RFT2的表达,分析PLCE1和RFT2在食管鳞状细胞组织及正常食管组织中的表达、PLCE1和RFT2的表达与临床病理特征的关系以及PLCE1和RFT2的表达相关性。结果PLCE1和RFT2在食管鳞状细胞组织及正常食管组织中的阳性率分别为86.67%、16.00%及80.00%、18.00%,差异有统计学意义(P0.05);PLCE1和RFT2表达与食管癌临床T分期、淋巴结转移及肿瘤最长径相关(P0.05);食管癌组织中的PLCE1与RFT2表达呈明显正相关(rs=6.544 8,P0.05)。结论 PLCE1和RFT2在食管鳞状细胞癌中呈高表达,且与肿瘤最长径、淋巴结转移及临床分期关系密切。     

食管鳞状细胞癌患者血清miR-1246、miR-146a表达水平与预后和细胞免疫功能的关系研究

目的 探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清微小RNA(miR)-1246、miR-146a表达水平与预后和细胞免疫功能的关系,分析miR-1246、miR-146a预测ESCC患者预后的价值。方法 选择2017年2月至2019年1月该院收治的91例ESCC患者(ESCC组)和90例体检健康者(对照组)作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清miR-1246、miR-146a表达水平。比较不同临床病理特征和细胞免疫功能的ESCC患者血清miR-1246、miR-146a表达水平差异,分析miR-1246、miR-146a表达与ESCC患者预后的关系以及miR-1246、miR-146a预测ESCC患者预后的价值。结果 ESCC组血清miR-1246表达水平高于对照组,miR-146a表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。TNM分期为Ⅲ期、CD4⁺/CD8⁺降低者miR-1246表达水平高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、CD4⁺/CD8⁺正常患者,差异有统计...     

PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞株MBA-MB-231/ADR的多药耐药逆转作用

目的探讨PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用及其与PI3K/Akt信号转导关系。方法采用MTT法测定三阴性乳腺癌细胞系MBA-MB-231及其多药耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对经典化疗药物阿霉素的半数抑制浓度(IC50),以及MBA-MB-231/ADR细胞株在PI3K抑制剂LY294002给药前后对阿霉素的敏感性差异。Western Blot检测MDA-MB-231/ADR细胞株LY294002给药前后,P-Akt、Akt、IκBα、NF-κB、P-gp和cleaved-caspase-3表达水平差异。结果 1MBA-MB-231和耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对阿霉素的IC50分别为(0.36±0.03)μmol/L和(16.77±1.57)μmol/L,耐药倍数为46.58倍。2LY294002给药后,耐药细胞株MBAMB-231/ADR对阿霉素的IC50降至(2.59±0.07)μmol/L,耐药倍数降至6.475,对药物敏感性显著增加。3耐药细胞株MBA-MB-231/ADR中PI3K/Akt和NF-κB通路被激活,细胞耐药相关蛋白P-gp处于高表达水平;LY294002处理之后,MBA-MB-231/ADR细胞中PI3K/Akt和NF-κB通路被抑制,P-gp表达水平下调,细胞凋亡相关的cleaved-caspase-3表达上调。结论 PI3K抑制剂LY294002能有效逆转耐药细胞株MBA-MB-231/ADR的耐药性,从而增强耐药细胞MBA-MB-231/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。该研究结果提示LY294002通过阻断PI3K/Akt通路抑制下游NF-κB通路的活化和P-gp表达上调,从而参与MBA-MB-231/ADR耐药性的逆转。     

哈萨克族食管鳞状细胞癌中c-myc、bcl-2与PCNA表达及其临床意义的研究

食管癌死亡占全国恶性肿瘤死亡的21．8％，仅次于胃癌，居第二位。据1990～1992年22个省(市、区)抽样地区居民恶性肿瘤死亡及死因构成调查显示，食管癌粗死亡率17．19／107／(中国人口调查死亡率为15．15／107／)，食管癌死亡占全国恶性肿瘤死因构成的16．11％，居于胃癌、肝癌、肺癌之后，列第四位^[1]。比较两组资料，不难发现，食管癌尽管在死因构成比中下降，但其死亡率仍呈上升趋势。     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

miR-802对叉头框转录因子M1抑制A549/DDP细胞顺铂耐药性的靶向调控作用

目的探讨miR-802抑制非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性及其对叉头框转录因子M1(forkhead box protein M1, FoxM1)的靶向调控作用。方法 A549、A549/DDP细胞采用反转录PCR法检测miR-802相对表达量。将A549/DDP细胞分为空白转染组和miR-802过表达组(过表达组),分别转染miR-NC和miR-802类似物(miR-802 mimics),转染24、48、72、96 h后,采用反转录PCR法检测2组细胞miR-802相对表达量,并采用CCK-8法检测2组细胞增殖率;转染48 h后,CCK-8法检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性,采用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率和细胞周期,采用Western blot法检测转染后A549/DDP细胞内FoxM1蛋白相对表达量。结果 A549/DDP细胞miR-802相对表达量(0.21±0.03)低于A549细胞(0.85±0.12)(P<0.05);转染24、48、72、96 h,过表达组细胞miR-802相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于空白转染组(P<0.05);转染48、72、96 h,空白转染组细胞增殖率依次增高(P<0.05),且均高于过表达组(P<0.05);转染48 h,过表达组细胞半数抑制浓度[(35.28±2.17)mg/L]和细胞早期凋亡率[(17.2±1.1)%]均高于空白转染组[(14.22±1.28)mg/L、(9.0±0.8)%](P<0.05),S期和G2/M期细胞比率[(21.30±0.20)%、(8.35±0.33)%]及细胞内FoxM1蛋白相对表达量(0.21±0.04)均低于空白转染组[(27.54±0.52)%、(14.67±0.70)%、0.44±0.06](P<0.05)。结论 miR-802可能通过抑制FoxM1表达而降低非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性。     

eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

Ⅱa型食管鳞状细胞癌胃黏膜下转移1例

患者男,50岁。因吞咽不畅、消瘦伴上腹胀痛1个月于2010年8月3日入院。患者1个月前出现逐渐加重的吞咽困难,发病以来体质量下降10kg。无上消化道肿瘤家族史。体格检查：营养中等,全身皮肤黏膜无黄染,浅表淋巴结无肿大。     

L型钙通道特异性阻滞剂对食管鳞状细胞癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的检测L型钙通道特异性阻滞剂硝苯地平、维拉帕米、地尔硫对食管鳞癌细胞系KYSE410、EC9706增殖和细胞周期的影响。方法选择食管鳞癌细胞系KYSE410、EC9706,将细胞种植于96孔板培养24 h,然后加入不同浓度的L型钙通道特异性阻滞剂硝苯地平、维拉帕米、地尔硫共同孵育0、24、48、72 h,最后加入3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)并进行吸光度检测。采用流式细胞术方法了解L型钙通道特异性阻滞剂硝苯地平、维拉帕米、地尔硫对KYSE410、EC9706细胞周期的影响。结果细胞培养结果表明,硝苯地平、维拉帕米和地尔硫对KYSE410、EC9706细胞株的增殖具有剂量依赖性,组间差异具有明显统计学意义(P 0. 01)。硝苯地平、维拉帕米、地尔硫对于EC9706细胞增殖抑制具有周期特异性特点,可将EC9706细胞停滞于G_0/G_1期,其抗增殖作用与细胞周期G_1期阻滞有关。结论 L型钙通道特异性阻滞剂硝苯地平、维拉帕米和地尔硫可通过阻滞L型钙通道从而抑制食管鳞癌细胞株KYSE410、EC9706的增殖,具有浓度依赖性特点,同时将细胞周期停滞于G_0/G_1期,其抗增殖作用与细胞周期G_1期阻滞有关。