MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型血管内皮生长因子和核因子κB1的表达

背景：恶性肿瘤耐药研究中发现核因子κB1及血管内皮生长因子基因可能与肿瘤耐药密切相关。目的：观察MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型中血管内皮生长因子和核因子κB1表达的差异。方法：对数期生长的MG63细胞采用阿霉素浓度递增培养法冲击诱导建立MG63/ADR细胞株。BALB/C裸鼠随机分为2组,分别将含5.0×106个MG63和MG63/ADR细胞的0.2mL细胞悬液采用皮下接种法注入裸鼠的一侧腋部皮下。第6周处死裸鼠取材。结果与结论：注射MG63和MG63/ADR细胞的2组裸鼠成瘤率均为100%;免疫组织化学及RT-PCR方法检测发现MG63/ADR组瘤灶中血管内皮生长因子和核因子κB1基因和蛋白的表达均明显高于MG63组（P〈0.05）。说明血管内皮生长因子和核因子κB1表达的上调可能是导致骨肉瘤耐药的重要原因。     

MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型血管内皮生长因子和核因子κB1的表达

背景:恶性肿瘤耐药研究中发现核因子κB1及血管内皮生长因子基因可能与肿瘤耐药密切相关。目的:观察MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型中血管内皮生长因子和核因子κB1表达的差异。方法:对数期生长的MG63细胞采用阿霉素浓度递增培养法冲击诱导建立MG63/ADR细胞株。BALB/C裸鼠随机分为2组,分别将含5.0×106个MG63和MG63/ADR细胞的0.2mL细胞悬液采用皮下接种法注入裸鼠的一侧腋部皮下。第6周处死裸鼠取材。结果与结论:注射MG63和MG63/ADR细胞的2组裸鼠成瘤率均为100%;免疫组织化学及RT-PCR方法检测发现MG63/ADR组瘤灶中血管内皮生长因子和核因子κB1基因和蛋白的表达均明显高于MG63组(P<0.05)。说明血管内皮生长因子和核因子κB1表达的上调可能是导致骨肉瘤耐药的重要原因。     

成骨相关分子在成骨肉瘤细胞株MG63中的表达

背景:许多学者在骨肉瘤组织中检测到许多成骨相关分子,并发现这些分子与骨肉瘤的发生发展和转归密切相关.目的:观察骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子及核心结合因子α1在成骨肉瘤细胞株MG63中的表达.设计、时间及地点:分子生物学观察实验,于2007-03/11在上海长海医院中心实验室完成.材料:成骨肉瘤细胞株MG63购自中科院上海生物研究所.方法:MG63细胞株经血细胞计数板计数,以1×104/cm2接种于100 mL培养瓶,置于37℃、体积分数为5%CO2和饱和湿度的培养箱中,以含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液贴壁培养.待细胞生长达到70%～80%汇合时,0.25%的胰酶消化5 min,加入以含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液中止消化,按1:3的比例传代培养.主要观察指标:以RT-PCR和免疫组织化学方法检测骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子、核心结合因子α1在MG63中的表达.结果:RT-PCR及免疫组织化学方法均从MG63细胞中检测到骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子、核心结合因子α1的阳性表达.结论:从转录和翻译的水平证实MG63细胞表达骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子、核心结合因子α1,提示这些成骨相关分子在骨肉瘤的发生发展过程中可能起着重要作用.     

低频电磁场对骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移的生物学特性

目的:研究低频电磁场对骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移的生物学特性。方法:以不同强度(0.8、1.6及3.2 mT)的50 Hz低频电磁场对骨肉瘤MG63细胞进行干预后,检测MG63细胞的增值,体外侵袭和迁移能力,裸鼠体内肺转移等指标。结果:经过磁场干预的实验组MG63细胞与对照组比较,其增殖能力下降,体外侵袭和迁移能力变弱,裸鼠体内肺转移形成时间晚,转移灶数目少。结论:低频电磁场能抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移。     

微小RNA在肝癌耐药Bel-7402/5-FU细胞中的表达分析

目的:通过对比肝癌亲本Bel-7402细胞及其5-FU耐药Bel-7402/5-FU细胞中微小RNA(microRNA, miRNA)的表达差异,探讨miRNA在肝癌细胞多药耐药中的作用。方法:体外培养Bel-7402细胞及其耐药株Bel-7402/5-FU细胞,MTT法检测Bel-7402/5-FU细胞对不同化疗药物的敏感性,miRNA表达芯片检测Bel-7402细胞和Bel-7402/5-FU细胞miRNA的差异表达,qPCR验证差异表达的miRNA。结果:Bel-7402/5-FU细胞对不同的化疗药物均具有耐药性;miRNA芯片检测结果发现,耐药株Bel-7402/5-FU细胞与亲本Bel-7402细胞中,差异表达的miRNA有29个,其中上调14个,下调15个;qPCR验证结果发现,和亲本Bel-7402细胞比较,耐药株Bel-7402/5-FU细胞中miR-10a-5p、-371a-3p、-371a-5p、-372,-373-3p、-146-5p、-6723-5p显著下调,miR-4497、-3148显著上调。结论:肝癌多药耐药的发生与miRNA表达异常有关。     

槐耳浸膏对骨肉瘤 MG63细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨槐耳浸膏对体外骨肉瘤MG63细胞的凋亡、转移和侵袭的影响。方法不同浓度的槐耳浸膏（0、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和4.0 mg/ml）作用于体外培养的骨肉瘤MG63细胞24 h、48 h和72 h。采用细胞增殖与毒性检测方法（ CCK-8法）,测定槐耳对细胞活力的影响;通过流式细胞仪检测槐耳对细胞周期及凋亡的影响;采用细胞划痕实验观察槐耳对细胞迁移能力的影响;通过Transwell实验检测槐耳对细胞侵袭能力的影响。结果和对照组相比,2.0 mg/ml和4.0 mg/ml浓度的槐耳作用于骨肉瘤MG63细胞24 h、48 h、72 h后可以抑制细胞的活力（ P均＜0.01）;流式细胞仪分析结果显示,槐耳可以将大鼠MG63细胞周期阻滞于G2期（ P均＜0.01）,可以促进大鼠MG63细胞凋亡（ P均＜0.01）;细胞划痕实验显示,槐耳可以抑制MG63细胞的迁移能力（ P均＜0.01）;Transwell实验结果显示,槐耳可以抑制MG63细胞的侵袭能力（ P均＜0.01）。结论槐耳可以促进骨肉瘤MG63细胞的凋亡,抑制细胞的迁移和侵袭能力。     

Circ0066629促进结直肠癌细胞活力的体外研究

目的探讨环状RNA circ0066629促进结直肠癌细胞活力作用及其调控的分子机制。方法 35例结直肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)及伊立替康耐药和不耐药患者组织来源于南京医科大学附属上海市松江中心医院,不同结直肠癌细胞系来源于美国菌种保藏中心,利用RT-q PCR测定circ0066629在结直肠癌组织及细胞系中的表达水平。Circ0066629过表达质粒、siRNA质粒、miR-219a-2-3p过表达质粒(miR-219a-2-3p mimics)及miR-219a-2-3p干扰质粒(miR-219a-2-3p inhibitor)用于调控circ0066629和miR-219a-2-3p的表达。RT-q PCR用于测定转染效率。随后,应用CCK-8和细胞划痕实验测定LOVO细胞活力。荧光素酶报告基因实验用于评估circ0066629与miR-219a-2-3p以及p53与miR-219a-2-3p的靶向关系。蛋白免疫印迹实验用于测定p53和鼠双微体基因2(MDM2)在LOVO细胞中的蛋白表达水平。结果 circ0066629在结直肠癌5-Fu及伊立替康耐药患者组织中表达下调,但在不同结直肠癌细胞系中表达上调。过表达circ0066629明显促进了5-Fu和伊立替康处理下的LOVO细胞活力。MiR-219a-2-3p被预测为circ0066629的靶基因,并且miR-219a-2-3p过表达对LOVO细胞活力的作用与circ0066629相反。另外,p53是miR219a-2-3p的预测靶向基因,p53特异性抑制剂(PFT-α)明显抑制LOVO细胞活力。结论 circ0066629通过调控miR-219a-2-3p/P53/MDM2轴促进结直肠癌细胞活力。     

自噬基因Beclin1与骨肉瘤发生和发展的相关性研究

目的 探讨自噬基因Beclin 1在骨肉瘤发生、发展中的作用,并分析其过表达对人骨肉瘤细胞株MG63体外生长的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法对人成骨肉瘤细胞MG63及成骨细胞hFOB1.19中Beclin l mRNA及蛋白表达水平进行检测;构建表达融合蛋白的真核表达载体pEGFP/Beclin 1,并用脂质体转染人骨肉瘤细胞MG63.用MTT法分析外源性Beclin 1过表达对MG63增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况.结果 人成骨肉瘤细胞MG63中Beclin 1mRNA及蛋白表达水平显著低于人成骨细胞hFOB1.19(0.17±0.06与0.43±0.11,t=29.493,P＜0.01;0.13±0.05与0.25±0.08,t=6.325,P＜0.01).pEGFP/Beclinl转染人成骨肉瘤细胞MG63后使其mRNA水平表达升高(5.34±0.50)倍,转染成功.正常培养的MG63细胞及空质粒转染的MG63细胞内,凋亡细胞很少,均为(0.10±0.05)％;而转染Beclin 1编码序列后凋亡细胞的比例明显升高,为(4.3±0.8)％,差异有统计学意义(t=5.752,P＜0.05).结论 Beclin1在骨肉瘤细胞中表达下降,可能与骨肉瘤的发生、发展密切相关,其过表达可抑制人成骨肉瘤细胞MG63的增殖并诱导其凋亡.     

长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞的增殖抑制和凋亡促进作用及其机制

目的 观察长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的抑制及凋亡促进作用,探讨其作用的分子机制.方法 以0、5、10、20、50、100 μg·L-1不同浓度长春新碱处理的MG63细胞,分别经CCK-8及Hoechest 33342检测细胞增殖和细胞凋亡水平,用实时定量RT-PCR分析mRNA表达水平.结果 长春新碱可抑制MG63细胞增殖;长春新碱可以促进细胞凋亡;长春新碱可以下调c-myc及上调caspase9基因表达（P〈0.05）.结论 长春新碱从较低浓度起即有抑制细胞增殖及促进细胞凋亡作用,其作用机制是通过下调c-myc及上调caspase9的基因表达实现的.     

实时荧光定量PCR技术诊断人骨肉瘤MG63细胞系中β-catenin基因表达的临床分析

目的分析实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)诊断人骨肉瘤MG63细胞系中β-catenin基因表达。方法培养人骨肉瘤MG63细胞系,对其进行分组,对照组细胞使用10%的胎牛血清以及含有青霉素和链霉素的DEME高糖培养基培养。而刺激组则在此基础上用100ng/mL的wnt3a细胞进行培养。分别在第0、1、2、3、4天分别采集3个孔的细胞,采用细胞消化的方式计算细胞个数,采用FQ-PCR检测人骨肉瘤MG63细胞系中β-catenin基因表达。结果在细胞生长的第0、1天,两组MG细胞数量对比差异无统计学意义(P0.05);而在第2、3、4天两组的细胞个数对比差异有统计学意义(P0.05)。β-catenin基因表达与wnt3a的蛋白刺激浓度呈非正相关关系,在各个浓度中,以100ng/mL的wnt3a蛋白刺激β-catenin基因表达最高,其他几个浓度的β-catenin基因表达对比差异无统计学意义(P0.05)。100ng/mL的wnt3a蛋白刺激在培养6h时β-catenin基因表达最高,并且在6h前,β-catenin基因表达会随时间延长而增加。6h后β-catenin基因表达对比差异无统计学意义(P0.05)。结论FQ-PCR能够反映人骨肉瘤MG63细胞中β-catenin基因表达。     

紫杉醇与常规化疗药物对人骨肉瘤细胞的毒性比较

目的:比较紫杉醇与阿霉素、甲氨蝶呤及顺铂对人骨肉瘤细胞的毒性作用强度及多药耐药特性,并研究其相互作用。方法:应用细胞计数、形态学观察、AO/EB染色、流式细胞术等方法比较紫杉醇与上述3种常规化疗药物对MG-63、新鲜骨肉瘤组织块及荷瘤裸鼠的作用;原位杂交及western blot研究紫杉醇和阿霉素分别诱导的MG-63多药耐药细胞模型中MDR-1的表达;比较维拉帕米逆转其耐药倍数。结果:紫杉醇与常规化疗药物有一定协同作用,单独应用时对人骨肉瘤细胞的抑制率稍低于其他3种药物,但诱导的凋亡率最高;紫杉醇与阿霉素诱导的多药耐药对MDR-1的依赖程度不同。结论:紫杉醇与阿霉素、甲氨蝶呤及顺铂对骨肉瘤细胞有协同作用,且对耐阿霉素的骨肉瘤细胞有杀伤作用。     

miR-142-2p通过TCF7调控骨肉瘤细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的研究miR-142-2p对骨肉瘤细胞迁移、侵袭、凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用Western blot检测癌旁组织、骨肉瘤组织或U-2OS细胞中TCF7的蛋白表达;将miR-142-3p组(转染miR-142-3p mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con)均用脂质体法转染至U-2OS细胞; qRT-PCR法检测各组细胞中miR-142-2p的表达; Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-142-3p表达显著降低,TCF7表达显著升高(P 0. 05);过表达miR-142-3p、敲减TCF7可抑制U-2OS细胞的迁移侵袭,促进凋亡; miR-142-3p可靶向负调控TCF7的表达。结论 miR-142-3p可抑制骨肉瘤细胞迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与靶向TCF7有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

羟基磷灰石纳米颗粒对骨肉瘤MG63抑制作用的体外实验研究

目的探讨羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HAP）纳米颗粒对骨肉瘤MG63的作用及相关机制。方法 MTT法观察不同浓度HAP纳米颗粒对MG63的抑制作用,测定HAP纳米粒子对MG63的时效曲线,丫啶橙/溴化已啶细胞荧光染色及流式细胞术检测HAP纳米颗粒对MG63细胞凋亡的影响。结果 MTT法检测发现HAP纳米颗粒浓度在10-400 mg/L范围内,随着浓度的增高HAP纳米颗粒对MG63的抑制作用在72 h内逐渐增强,以后逐渐达到平台期。形态学观察和流式细胞术检测可见HAP纳米粒子有诱导细胞凋亡的趋势,实验组和对照组的细胞凋亡率（%）分别为19.03±5.80和12.32±3.84,两组间差别显著（P〈0.05）;实验组G0/G1期细胞明显多于对照组,而S期细胞明显少于对照组,两组间差别显著（P〈0.05）。结论 HAP纳米颗粒可以诱导肿瘤细胞凋亡,对骨肉瘤MG63有明显的抑制作用。     

人骨肉瘤细胞株MG63功能性N-甲基-D-天冬氨酸受体的表达

目的:研究人骨肉瘤细胞株MG63上功能性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的表达。方法:利用钙离子成像系统检测NMDA或谷氨酸对MG63细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。结果:仅6.4%MG63细胞对NMDA产生[Ca2+]i升高反应,对谷氨酸则没有反应。多数MG63细胞呈现自发性的钙离子震荡现象,且该现象不能被MK801所阻断。结论:MG63细胞表达的功能性NMDA受体很少。     

miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究

目的　检测骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达，探究其对骨肉瘤（ osteosarcoma，OS）细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法　选取 2018年 1月～ 2020年 12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科 30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本，采用实时荧光定量 PCR实验（ qRT-PCR）法检测组织中 miR-146b-5p表达水平；通过介导转染 miR-146b-5p mimics和 miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低 miR-146b-5p表达，探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测 miR-146b-5p的潜在靶基因，荧光素酶实验验证两者结合关系，分析 miR-146b5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与 miR-146b-5p的相关性，通过细胞增殖实验验证两者的调控作用，以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达（ 4.096±1.237）显著低于邻近正常组织（ 5.895±0.834），差异有统计学意义（ t=6.605，P＜ 0.001）。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力（ t=13.233～ 34.599，均 P＜ 0.01）。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目（ 48.912±2.032）较对照组（160.834±9.031）明显降低，差异有统计学意义（ t=20.942，P＜ 0.001）。DUSP16是 miR-146b-5p的潜在靶基因， miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶（ dual speci.city phosphatase 16, DUSP16）表达。骨肉瘤组织中 DUSP16表达（5.683±0.457）较邻近正常组织（ 4.665±0.531）显著升高，差异有统计学意义（ t=7.959，P＜ 0.001），与 miR-146b5p表达呈负相关（ r=-0.667，P<0.05）。共转染过表达 DUSP16逆转了 miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。 miR-146b-5p过表达组 P21水平（ 4.995±0.214）较对照组（ 1.001±0.002）显著升高，差异有统计学意义（ t=32.325，P＜ 0.001）；当共转染 DUSP16过表达后， P21表达（ 0.986±0.012）较单独过表达 miR-146b-5p组（4.995±0.214）显著降低，差异有统计学意义（ t=32.398，P＜ 0.001）。结论　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p显著低表达，其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆形成； miR-146b-5p通过靶向负调控 DUSP16表达参与 P53信号通路从而在骨肉瘤发生发展起重要作用。     

雷公藤内酯醇对脂多糖刺激的人成骨肉瘤细胞MG-63血管生成和炎性反应的抑制作用

目的探索雷公藤内酯醇(TPL)对脂多糖(LPS)刺激的人成骨肉瘤细胞MG-63血管生成和炎性细胞因子释放的抑制作用和机制。方法采用LPS(10μg/mL)刺激人成骨肉瘤细胞MG-63建立骨肉瘤疾病炎症模型,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测TPL对人成骨肉瘤细胞MG-63的细胞毒性,实时定量聚合酶链反应检测TPL对LPS刺激的人成骨肉瘤细胞MG-63血管生成和炎性细胞因子表达的抑制作用,酶联免疫吸附试验检测TPL对LPS刺激的人成骨肉瘤细胞MG-63血管生成和炎性细胞因子分泌的影响,Western-blot法检测TPL对LPS刺激的人成骨肉瘤细胞MG-63磷酸化p38蛋白表达的影响。结果 50～200μg/mL TPL能显著抑制LPS诱导人成骨肉瘤细胞MG-63肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、低氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子的表达和释放。结论 TPL能抑制人成骨肉瘤细胞MG-63血管生成和炎性细胞因子的表达和释放,其机制可能是通过抑制丝裂原活化蛋白激酶p38信号通路而发挥效用。     

miR-145-3p通过下调CDK1抑制骨肉瘤MG-63细胞系的增殖、侵袭与凋亡

目的研究mircoRNA-145-3p(miR-145-3p)对骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭与凋亡的调控作用。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定miR145-3p在MG-63细胞与人成骨细胞系hFOB1.19细胞中的表达水平。将MG-63分成实验组和对照组,通过人工合成miR145-3p-mimic(miR-145-3p类似物),使用慢病毒载体将miR-145-3p-mimics转入实验组MG-63细胞内,同时使用慢病毒载体将空质粒转入对照组细胞内。通过CCK-8方法检测两组细胞增殖能力;流式细胞仪分析两组细胞的细胞周期及凋亡情况; Transwell实验测定细胞侵袭能力; RT-PCR测定两组细胞miR-145-3p和周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)的表达情况;通过Targetscan数据库和荧光素酶实验确定CDK1是否为miR-145-3p的靶基因; Western印迹法检测基因的表达水平。结果 miR-145-3p在骨肉瘤细胞系MG-63细胞中的表达量为(0. 59±0. 24),较人成骨细胞系hFOB1. 19细胞中的表达量(1. 46±0. 21)明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。CCK-8结果显示,在48 h、72 h、96 h、120 h时,实验组细胞增殖能力较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。流式细胞周期结果显示,处于G1期细胞数量为(69. 92±0. 13)%,较对照组(49. 43±0. 09)%明显增多(P 0. 05),而处于S期细胞数量(26. 01±0. 08)%,较对照组(40. 67±0. 11)%明显减少,差异具有统计学意义(P 0. 05)。凋亡实验结果显示,实验组细胞的凋亡比率为(31. 3±4. 7)%,较对照组(9. 35±1. 9)%明显增高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。转染野生型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05);而转染突变型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组无明显变化,差异无统计学意义(P 0. 05)。Western印迹实验结果显示,实验组中CDK1的表达量较对照组明显降低,且表达水平较对照组也明显降低(P 0. 05)。结论 miR-145-3p通过下调节CDK1表达,抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭能力,并促进其凋亡。     

槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌细胞凋亡的影响研究

目的 探讨槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌(HCC)细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法 利用梯度浓度槐耳颗粒处理HCC细胞,分析槐耳颗粒对索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭的效果。采用生物信息学手段分析微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与sprouty相关EVH1域蛋白1(SPRED1)的可能互作关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HCC细胞中miR-31-5p、SPRED1的表达;采用CCK-8、克隆形成、划痕愈合、Transwell以及流式细胞术实验分别检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡;采用RNA免疫沉淀(RIP)实验和双荧光素酶实验验证miR-31-5p与SPRED1的结合关系。结果 槐耳颗粒可以显著抑制索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。生物信息学分析发现miR-31-5p在HCC中高表达,而槐耳颗粒可以下调miR-31-5p的表达,抑制索拉非尼耐药的HCC细胞的增殖和转移,并诱导细胞凋亡;miR-31-5p可靶向抑制SPRED1的表达。SPRED1在HCC中表达下调,过表达SPRED1可以逆转miR-31-5p过...     

原发性免疫性血小板减少症患者外周血microRNAs的表达及与Th1/Th2失衡的关系

目的:探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血micoRNAs的表达量与Th1/Th2失衡的关系。方法:纳入30例ITP患者(ITP组)及15例健康人(对照组),采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测2组外周血中6种miRNA(miR-107、miR-205-5p、miR-138-5p、miR-326、miR-1827、miR-185-5p)和Th1特异性转录因子T-bet、Th2特异性转录因子GATA-3的表达水平,采用流式细胞术检测Th1、Th2细胞,Aim Plex流式细胞术高通量技术检测Th1细胞因子TNF-α、IFN-γ以及Th2细胞因子IL-4、IL-10含量。比较2组间miRNAs、mRNA、Th1、Th2细胞及其分泌的主要细胞因子的差异,分析ITP患者miRNAs与Th1、Th2细胞及其分泌的主要细胞因子的相关性。结果:与对照组相比,ITP组miRNA(miR-107、miR-205-5p、miR-138-5p、miR-326、miR-1827、miR-185-5p)和Th2细胞特异性转录因子GATA-3的表达水平均显著降低(P0.05); Th1细胞、Th1细胞特异性转录因子T-bet及Th1细胞因子TNF-α表达水平均显著升高(P0.05),T-bet/GATA-3和Th1/Th2比值均显著升高(P0.05)。ITP患者miR-107、miR-205-5p、miR-138-5p相对表达量与Th2细胞均呈负相关(P0.05,r=-0.411; r=-0.593; r=-0.403); miR-1827相对表达量与TNF-α呈负相关(r=-0.390)。结论:ITP患者外周血6种miRNAs表达水平显著降低,导致T-bet mRNA/GATA-3mRNA比值升高,Th1/Th2失衡。     

伊马替尼耐药K562/G的microRNA表达谱分析及与FOXO3/Bcl-6信号通路关系的研究

目的:探讨CML耐药细胞株K562/G耐药相关的FOXO3/Bcl-6信号通路及相关microRNA(miRNA)机制。方法:采用MTT法检测伊马替尼对K562/G的耐药性;采用Western blot法检测耐药株和敏感株细胞中FOXO3和Bcl-6蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR检测FOXO3及Bcl-6 mRNA的表达。运用miRNA芯片技术筛查K562与K562/G细胞之间差异表达的miRNA,进一步筛选FOXO3/Bcl-6信号通路的靶向miRNA。结果:K562/G较K562细胞株的FOXO3及Bcl-6蛋白表达均明显升高(P<0.01);Bcl-6 mRNA的表达水平无明显差异,而K562/G细胞中FOXO3 mRNA表达明显升高(P<0.05)。miRNA芯片结果显示,K562/G与K562细胞之间有109条miRNA存在显著的差异,其中上调miRNA为81个,下调miRNA有28个。经生物信息学反向预测,其中miR-6718-5p、miR-5195-5p、miR-4711-3p、miR-4763-5p、miR-4664-5p和miR-3176与该信号通路相关。结论:伊马替尼耐药与FOXO3/Bcl-6信号通路相关,并且K562/G与K562细胞存在miRNA表达显著差异。