非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究

本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注(DLI)是否能在促进形成完全供者嵌合(CC)的同时减轻移植物抗宿主病(GVHD)。以C57BL/6小鼠(H-2b,B6)为受者,于第0天接受60Coγ线全身照射(TBI),总剂量为5.5Gy,照射当天移植经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的BALB/c小鼠(H-2d,BA)外周血干细胞(2×107个),移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示,致敏后DLI的受鼠(黑色)无1例出现GVHD,60天时转变为完全供者嵌合,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平;未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率稍有上升,仍表现为混合嵌合体(MC),CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平。结论:经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率,CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。     

非清除性异基因骨髓移植治疗小鼠白血病的实验研究

目的　研究非清除性异基因骨髓移植 (BMT)及其加供者淋巴细胞输注 (DLI)治疗小鼠白血病是否在保留移植物抗白血病效应 (GVL)的同时 ,又能减轻移植物抗宿主病 (GVHD)及移植相关并发症。方法　采用L6 15淋巴细胞白血病小鼠模型 ,非清除性预处理后移植BALB c小鼠骨髓细胞和脾细胞。分 4组 :清除性BMT对照组 (A组 )、非清除性预处理组 (B组 )、非清除性BMT组 (C组 )、非清除性BMT +DLI组 (D组 )。通过受鼠生存期、外周血白细胞和L6 15细胞计数、死亡鼠尸解观察GVL效应 ;通过体重改变、弓背、翘毛、腹泻等表现和肝脏、小肠、皮肤病理学检查观察GVHD ;通过染色体检查和PCR检测嵌合状态。结果　A、B、C、D组生存时间分别为 (2 0 .3± 13.4 )d、(15 .9± 1.1)d、(2 1.6± 1.7)d和 (37.8± 2 .0 )d ,C组和A组生存时间无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,C组生存时间长于B组 (P <0 .0 1) ,D组长于C组 (P <0 .0 1) ;A组有 6 0 %出现GVHD表现及病理学改变 ,而C组和D组均无典型GVHD表现和病理学改变 ;A组有 4 0 %在 2周内死于移植相关并发症 ,C组和D组均无移植相关死亡发生 ;A组一直保持异基因嵌合 ,C组渐被排斥。结论　非清除性BMT有一定的GVL效应 ,加DLI能增强GVL效应 ;非清除性BMT能减轻GVHD及移植相关并发症。     

氢化可的松和环孢素处理异基因骨髓后移植的检测及意义

目的探讨用氢化可的松(HC)和环孢菌素A(CsA)处理异基因骨髓后移植的检测及是否能减轻移植物抗宿主病(GVHD)的发生率与严重程度。方法C57BL/6(H2b)小鼠,移植当天接受60Coγ射线全身照射(TBI8.5Gy),实验组移植物为经HC和CsA处理供鼠BALB/C(H2d)小鼠的骨髓细胞(5×107)和脾细胞(2×107),移植后2d腹腔注射环磷酰胺(200mg/kg),观察小鼠的存活及GVHD的发生情况。结果未移植的对照组小鼠在12d内死亡,生存时间(8.9±1.7)d;接受未经药物处理移植物的小鼠均在移植后18d内死亡,生存时间(16.1±1.8)d,均死于GVHD;接受药物处理的骨髓细胞和脾细胞组小鼠生存时间(45.1±12.8)d,30d存活率90%,50d存活率60%,未观察到GVHD表现。结论采用HC和CsA两药联合处理异基因骨髓和脾细胞后再输注,可有效的减轻GVHD,同时避免了其毒副作用,为临床提供了可供借鉴的实验依据。     

TBI和环磷酰胺选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞的研究

本研究用全身照射(TBI)和环磷酰胺(CY)选择性去除同种异基因反应的供者淋巴细胞,为预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生探索新的手段。以(BALB/c×C57BL/6)F1雌性小鼠(H-2d/b)为受鼠,于第0天接受亚致死量的60Co-γ射线全身照射,总剂量为4Gy,第1天接种P388D1白血病细胞,第2天输注由C57BL/6雄性小鼠(H-2b)为供鼠提供的MHC不匹配的供者脾淋巴细胞,在造血干细胞移植前诱导移植物抗白血病效应(GVL)。第6天腹腔注射环磷酰胺(CY)200mg/kg或再次TBI9Gy,选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞,第7天输注(BALB/c×C57BL/6)F1雄性小鼠(H-2d/b)提供的骨髓造血干细胞。结果显示:以CY和TBI选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生,生存期超过了210天,于移植后第21天出现完全供者嵌合,然后嵌合率下降,第90天表现为混合嵌合体(MC)。对照组的小鼠出现了白血病和GVHD,出血、感染明显,生存期短,为20-36天(P<0.01)。结论:同基因骨髓移植前输注不相匹配的供者脾细胞诱导GVL效应,然后再通过TBI和CY选择性去除同种异基因反应的供者淋巴细胞来预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生是可能的。     

供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗GVL)效应的影响。建立BALB/c→C57BL/6小鼠EL4白血病骨髓移植模型,体外磁珠分离纯化供鼠CD4+CD25+T细胞,在骨髓移植的同时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞。以移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理形态等为观察指标并进行组间比较。结果显示:白血病对照组小鼠平均生存时间为(17.9±0.7)天,均存在白血病细胞浸润;移植对照组及效应T细胞组平均生存时间为(23.2±1.6)天和(22.3±1.9)天,肝脏、皮肤和小肠病理切片显示均存在GVHD病理改变;Treg细胞组小鼠平均生存时间为(47.3±6.5)天,70%的受鼠获得长期存活,病理显示无GVHD及白血病细胞浸润,其GVHD评分较移植对照组及效应T细胞组明显降低(p0.05)。结论:在小鼠allo-BMT中联合输注供体CD4+CD25+T细胞可减少及减轻GVHD,并保留GVL效应。     

sTNFR Ⅰ基因修饰的未成熟树突细胞对异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病和移植物抗白血病作用的研究

目的 探讨可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ (sTNFR Ⅰ)基因修饰的未成熟树突细胞(DC)对白血病小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响及其机制.方法 以BALB/c(H-2d)小鼠为供鼠,C57 BL/6( H-2b)小鼠为受鼠,建立小鼠T细胞白血病BMT模型.受鼠全身照射(TBI)后4h内,将供鼠骨髓细胞和脾细胞按1:1混合,经尾静脉输注于受鼠体内,同时输注T细胞白血病/淋巴瘤细胞株EL4细胞.实验分组:①A组:单纯照射组;②B组:白血病发病组;③C组:allo-BMT组(移植物未做任何处理);④D组:pXZ9-DC组(未经修饰的未成熟DC组);⑤E组:sTNFR Ⅰ -DC组(sTNFR Ⅰ修饰的未成熟DC组).观察移植小鼠GVHD典型症状、病理分级、白血病细胞浸润情况、存活时间、生存率等,采用ELISA法测定IFN-y和IL-4浓度,采用流式细胞术( FCM)检测异基因嵌合率.结果①A组小鼠均于10 d内死于骨髓衰竭.B组小鼠均死于淋巴瘤/白血病.C组小鼠出现明显急性GVHD表现,而D组和E组小鼠只有部分出现GVHD表现,且GVHD评分及病理表现均较C组明显减低或减轻(P值均＜0.05),其中E组小鼠GVHD评分较C和D组均降低(P值均＜ 0.05),病理学改变最轻.C、D和E组小鼠存活时间分别为(11.50±3.50)、(21.70 ±5.80)和(25.80±5.20)d,D、E组小鼠存活时间均较C组明显延长(P值均＜0.05),其中E组小鼠平均存活时间最长.B组小鼠18 d内均死于白血病,C、D和E组小鼠白血病的发病率分别为10％、20％、10％,各组发病率比较差异无统计学意义(P＞0.05).②移植后C、D和E组小鼠血清IFN-y浓度在+12 d时达高峰,后逐渐下降,+18 d时IFN-(y)的浓度E组较C和D组降低(P＜0.05),D组较C组低(P＜0.05).C组小鼠血清IL-4降低,而D和E组浓度渐升高,+12 d达高峰,三组间两两比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05).③+30 d,C、D和E组存活受鼠骨髓异基因嵌合率为95％ ～ 100％,证实为完全供鼠型植入.结论 未成熟DC可诱导allo-BMT免疫耐受,输注sTNFR Ⅰ基因修饰的未成熟DC可延长移植小鼠的存活时间,在一定程度上减轻GVHD的同时又保留GVL效应.     

移植前供鼠口服受鼠脾细胞对脾细胞移植后GVHD的影响研究

本研究探讨经口服受鼠脾细胞诱导耐受的供鼠细胞输注是否能减轻移植物抗宿主病（GVHD）,并保留的GVL效应。以雄性DBA-2（H-2d）小鼠为供者。供鼠分别用BALB/c鼠脾细胞、DBA-2鼠脾细胞、牛血清蛋白和普通饲料喂养,隔天1次。应用单向混合淋巴细胞反应（MLR）评估诱导耐受状态。以雌性BALB/c小鼠（H-2d）为受者,给予6.0Gy^60Coγ射线全身照射,同一天输注3×10^3鼠白血病细胞,尾静脉输注源于DBA-2小鼠的2×10^7脾细胞。对照组不给予鼠白血病细胞输注。结果显示,接受已耐受供鼠脾细胞输注的受鼠发生GVHD较其他组轻,流式细胞术检测表明CD4^＋/CD8^＋比值增加。接种白血病细胞的受鼠活存率各组间无差别。结论：口服受鼠脾细胞耐受的供鼠,其脾细胞输注给受鼠后GVHD明显减轻,且对GVL效应无影响。     

异基因造血干细胞移植后白血病复发伴活动性移植物抗宿主病患者的临床研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后白血病复发伴活动性移植物抗宿主病(GVHD)患者GVHD与GVL效应的分离.方法 分析11例接受allo-HSCT后在白血病复发时存在活动性GVHD的患者其原发病、疾病状态、复发时GVHD类型、供者淋巴细胞输注(DLI)疗效及转归等对GVL效应的影响.结果 11例患者包括急性淋巴细胞白血病5例,急性髓系白血病6例,其中5例曾行预防性DLI,复发时伴有活动性DLI后GVHD,包括2例Ⅱ度急性GVHD(aGVHD),1例原局限型慢性GVHD(cGVHD)加重+新发Ⅱ度aGVHD,2例广泛型cGVHD;这5例患者复发后,2例行化疗+治疗性DLI,DLI后在广泛型cGVHD反复加重情况下,1例达完全缓解(CR)后再次复发,1例未达CR.另6例患者复发前未行预防性DLI,白血病复发时亦均存在活动性GVHD,包括3例广泛型cGVHD、1例Ⅰ度aGVHD及2例Ⅲ～Ⅳ度aGVHD,复发后行化疗+治疗性DLI,之后2例达CR后再次复发,4例未达CR.结论 allo-HSCT后活动性GVHD不一定伴随可抑制白血病复发的有效GVL效应.     

同种异基因Th2细胞移植对GVHD和GVL效应的作用

为探讨同种异基因Th2细胞移植是否可以减低移植物抗宿主病(GVHD)的发生和保留移植物抗白血病(GVL)效应的作用,在体外用rmIL-4,Con A和离子霉素把供鼠(C57BL/6H-2b)T细胞优势化诱导培养为Th2细胞,再把Th2细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给红白血病受鼠模型(EL9611H-2d).结果表明未处理的对照组,受鼠平均存活时间为(10.6±1.3)天,10只均死于白血病;环磷酰胺化疗组,小鼠平均存活(18.7±4.2)天,10只小鼠最终均死于白血病;骨髓细胞和脾T淋巴细胞移植组,小鼠平均存活(22.7±7.4)天,9/10只均死于GVHD;骨髓细胞和Th2细胞移植组,3/10只在28天内死于GVHD,其余7/10只无GVHD发生,白血病发病时间明显推迟,平均存活(36.9±10.8)天,在50天时检查有2只鼠无白血病证据.研究证明体外极向化诱导培养的Th2细胞移植可减低GVHD发生的同时保留了抗白血病的能力.     

优化H-2半相合造血干细胞移植物治疗急性白血病的实验研究

目的　探讨H 2半相合造血干细胞移植物中分离移植物抗宿主病 (GVHD)与移植物抗白血病 (GVL)作用的T淋巴细胞阈值。方法　建立 (C5 7BL 6× 6 15 )F1(H 2 b)白血病鼠模型作为受者 ,以C5 7BL 6 (H 2 b)小鼠为供鼠 ,应用免疫磁珠 (MiniMACS)纯化供鼠的CD34+ 和CD3+ 细胞 ,纯度分别为 ( 81.5± 2 .4) %和 ( 95 .4± 2 .9) %。 6 9只受鼠分为 7组 ,A为白血病自然生存组 ,其余各组均经6 0 Co 9GyTBI,除B组单纯TBI外 ,其余各组均经尾静脉输注供鼠CD34+ 细胞 10 5 只 ,D、E、F、G组移植物中还分别混合CD3+ 细胞每只 10 7,5× 10 7,10 8和 1.5× 10 8,饲养 6 0d ,根据病理确定死因。结果　E组 10 0 %存活 >6 0d ,明显长于其它组 (P <0 .0 0 0 1) ;生存 >6 0d者异性染色体为 10 0 %,D、E组因白血病复发死亡者明显少于C组 (P <0 .0 0 1) ,G组因GVHD死亡者明显高于E、F组 (P <0 .0 0 1)。结论　单纯CD34+ 细胞移植组白血病复发率最高。移植物中CD3+ 细胞 >10 8时因GVHD死亡者最多 ;5× 10 7 只时能够分离重度GVHD和GVL。     

复制缺陷性慢病毒介导的双自杀基因在小鼠异基因骨髓移植中的应用

目的　探讨复制缺陷性慢病毒介导的胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase,CD)和胸苷激酶(thymidinekinase ,TK)双自杀基因在异基因骨髓移植 (allo BMT)时控制移植物抗宿主病 (GVHD)的可行性及其有效性。方法　将携带双自杀基因的复制缺陷性慢病毒通过脂质体转染入T细胞中。将经6 0　Coγ射线照射后的荷瘤小鼠分组进行骨髓移植 ,观察骨髓移植后荷瘤鼠CFU S、CFU GM、Y染色体整合、T细胞中CD TK基因整合、生存率和生存期、体重及病理组织学等指标。结果　复制缺陷性慢病毒载体可将双自杀基因高效稳定转染入T细胞。在allo BMT中 ,除空白对照组外 ,各组小鼠的CFU S的数目和CFU GM产率差异无显著性 ,且均有Y染色体整合。使用前体药物治疗的小鼠未发生明显的GVHD ,其生存率和生存期明显高于其它各组 ;双自杀基因的效果优于单自杀基因。结论　复制缺陷性慢病毒介导的双自杀基因系统可在不影响移植物存活的情况下有效控制GVHD的发生 ,显著提高allo BMT的成功率。     

Ly49A转基因小鼠脾细胞对半相合异基因骨髓移植后GVHD和GVL的作用

目的　观察Ly4 9A基因转染的C5 7BL 6小鼠脾细胞对半相合异基因骨髓移植 (allo BMT)后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法　经由逆转录病毒介导将Ly4 9A基因转染至C5 7BL 6小鼠的脾细胞 ;流式细胞仪检测Ly4 9A受体在转染后脾细胞上的表达率 ;以亲代C5 7BL 6H 2 b 小鼠为供者 ,以接种EL96 11红白血病细胞的 (BALB c×C5 7BL 6 )F1H 2 d b(CB6F1)小鼠为受者 ,预处理条件为全身照射 (TBI,6 0 Co照射 10 .5Gy) ,进行脾细胞混合骨髓细胞移植 ,建立半相合异基因急性GVHD模型并在该模型基础上观察Ly4 9A基因转染的脾细胞对GVHD和GVL的作用。结果　Ly4 9A基因转染的C5 7BL 6小鼠的脾细胞 2 4h后蛋白表达率为 (42 .2 0± 4 .87) % ,空载体转染组为(18.6 7± 2 4 8) % ,未转染对照组为 (18.73± 3.82 ) % ,在半相合异基因移植中 (C5 7BL 6 H 2b →CB6F1H 2d b) ,未进行移植的单纯照射组生存期为 (7.80± 3.36 )d ;环磷酰胺治疗组生存期为 (2 1.70±2 87)d ;脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (2 9.4 0± 6 .4 3)d ;空载体转染的脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (2 9.10± 7.39)d ;Ly4 9A转染的脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (45 .0 0± 12 .38)d ,较上述各组生存期明显延长 (P     

异基因骨髓移植小鼠供体骨髓细胞在受体内的分布及淋巴细胞供受体来源比例分析

目的观察小鼠异基因骨髓移植(alloBMT)后供体骨髓细胞在受体内的分布以及嵌合体内T、B淋巴细胞增殖分化规律。方法以绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H2b)小鼠为供体,以137Cs5.5Gy×2照射的BALB/c(H2d)小鼠为受体,分别于移植后3天(+3天)、+7天、+21天、+35天和+70天取外周血、骨髓、胸腺、脾脏、肠集合淋巴结及肝脏,用流式细胞仪和荧光显微镜观察供体来源的骨髓细胞分布。用藻红蛋白标记的抗CD4、抗CD8、抗B220抗体检测+21天小鼠体内骨髓、外周血及其他免疫器官中T、B淋巴细胞的构成比例。结果①+3天、+7天供体骨髓细胞在受体脾脏中分布最多,分别为(1.06±0.02)%、(76.60±1.80)%;骨髓中分别为(0.37±0.06)%、(39.70±5.38)%。②+21天受体骨髓、脾脏、淋巴结、胸腺及外周血中供体细胞达60%～90%。③+3天受体肠集合淋巴结中供体骨髓细胞达(0.36±0.04)%,与受体骨髓中供体骨髓细胞的比例相当。结论①alloBMT后早期供体骨髓细胞可分布到受体的骨髓、脾脏、肠集合淋巴结中,脾脏中最多。②+21天受体内骨髓及其他免疫器官以供体细胞为主。③受体肠道集合淋巴结也是移植后供体骨髓细胞的早期寄居点和B淋巴细胞增殖后的迁移部位。     

化学修饰物甲氧基聚乙二醇对异基因骨髓移植影响的研究

为了探讨经甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰的骨髓移植物对异基因移植并发症———移植物抗宿主病(GVHD)的影响,将BALB/cH2d小鼠经60Coγ线8.0Gy照射后随机分3组。A组经尾静脉注射RPMI1640,B组注射615H2k小鼠的骨髓及脾细胞混合悬液,C组注射等量的mPEG修饰后的骨髓及脾细胞混悬液。通过小鼠外观的观察、存活率和存活时间的测定及组织病理检查研究GVHD程度,通过染色体检查研究植入情况。研究结果表明:B组出现脱毛等表现较C组早,程度重,重症病例多(P≤0.05)。B组死亡小鼠30天存活率20%,平均存活时间为12.1±2.4天,C组为50%,平均存活时间为16.1±2.9天(P≤0.05);B组出现Ⅲ度GVHD比例为59%,C组为20%(P=0.050),B组和C组的异基因骨髓成功植入。结论:mPEG修饰的骨髓移植物可减轻GVHD程度,有望延长生存时间,提高生存率。     

移植物化学修饰与阻断 OX40-OX40L途径预防异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病的研究

目的 观察甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(mPEG-SPA)与抗OX40L单抗预处理移植物对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响及其机制.方法 供、受鼠的脾淋巴细胞体外混合培养,加入抗OX40L单抗孵育培养后,再用mPEG-SPA化学修饰,与C57BL/6供鼠骨髓细胞混合后移植给经致死量全身照射的BALB/c受鼠.同时设相应的对照组.观察移植后受鼠aGVHD的临床表现、病理学改变、存活时间及生存率等,检测移植鼠T淋巴细胞亚群,细胞因子的变化及异基因嵌合体.结果 ①单纯骨髓移植对照组小鼠均出现aGVHD临床表现,17 d内全部死于aGVHD,存活时间为(12.1±5.5)d;而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠一般状态较好,部分出现aGVHD表现,且较单纯骨髓移植对照组症状轻,皮肤、肝脏、小肠病理表现均较单纯骨髓移植对照组明显减轻,mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠存活时间分别为(36.2±24.9)、(32.0±24.8)和(44.3±23.2)d,均较单纯骨髓移植对照组明显延长(P＜0.05),其中抗OX40L mPEG-SPA联合预处理组小鼠平均存活时间最长(P＜0.05),mPEG-SPA单独预处理组和抗OX40L单独预处理组牛存率分别为50.0%、41.7%,明显高于单纯骨髓移植组,OX40L mPEGSPA联合预处理组生存率最高,为66.7%.②移植后对照组小鼠血清IFN-γ浓度升高,在+10～+15d时达高峰;而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组降低,+10 d时降至最低,OX40LmPEG-SPA联合预处理组降低最明显(P＜0.01).移植后对照组IL4、IL-10浓度轻度降低,而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组均明显升高(P＜0.05),+10～+15 d达高峰,以联合组升高最明显(P＜0.01).③mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组+60 d时异基因嵌合率为95%～100%,证实为完全供者型植入.结论 mPEG-SPA与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,协同抑制T细胞的增殖活性,促进Th0细胞向Th2细胞分化,从而明显减轻小鼠骨髓移植中aGVHD的发生.     

骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后aGVHD和GVL的影响

为了观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响，以急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠为动物模型，对其进行allo-BMT的同时，静脉输注体外培养的供鼠BMMSC，同时设立单纯allo—BMT对照组。记录受鼠存活时间；观察受鼠发生aGVHD一般反应及病理学变化；用流式细胞术检测受鼠CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的差异；采用性染色体检查检测嵌合状况。结果显示：BMMSC推迟aGVHD发生的时间；降低CD4^ T细胞的同时增加CD8^ T细胞的数量；明显延长受鼠allo—BMIT后的生存时间。结论：BMMSC与allo-BMT联合进行具有一定的GVL效应；BMMSC能抑制allo—BMT后aGVHD的发生，但同时具有一定的GVL效应。     

非清髓性单倍体骨髓移植后输注供体免疫细胞治疗白血病的研究

本研究在小鼠非清髓性单倍体骨髓移植模型上,观察移植后早期输注供体免疫细胞对促进植入及改善疗效的作用。以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前4 d经尾静脉注射小鼠红白血病细胞1×106个/只,移植前2 d和1 d分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015 g/只,移植前1d予450 cGy全身照射（TBI）,移植当天给予供鼠骨髓及脾细胞混合物6×107个/只,移植后15 d输注供体免疫淋巴细胞6×107个/只,移植后定期监测受鼠外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态和供鼠性别决定基因（SRY）,观察小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）、疾病复发及生存情况。结果表明：经尾静脉注射小鼠红白血病细胞1×106个/只,不予治疗,小鼠平均生存期为15±1 d;混合骨髓移植组移植后供者细胞获得植入,SRY基因在移植后30和60 d时检测PCR结果均阳性,移植后14、30、60 d外周血供鼠CD3＋细胞嵌合率分别为（17.95±12.03）%、（37.34±2.78）%,（47.06±6.1）%;DLI组移植后30、45、60 d嵌合率为（69.78±12.62）%、（75±15.97）%、（83.41±16.07）%;小鼠移植后平均生存期分别为66.66±1.47 d、78.2±7.82 d。结论：移植前高肿瘤负荷影响供体细胞植入及预后,移植后早期行供体免疫淋巴细胞输注可以进一步改善治疗效果,延长生存期。     

异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复

探讨用逆转录病毒载体转入IL 3和IL 6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用。用逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA ,人IL 6cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6。供体小鼠BALB/c(H 2 d)骨髓去除骨髓中T细胞 ,受体小鼠C57BL/6(H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入去除T细胞的供体骨髓 (1× 1 0 7/鼠 )的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 3/IL 6(5× 1 0 5/鼠 )。在骨髓移植后 2 0和 40天 ,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果 :异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL 3/IL 6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC数明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM明显增加。基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建。结论 :基质细胞转入细胞因子IL 3或IL 6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建 ,联合转导IL 3和IL 6有协同作用     

异基因骨髓移植混合嵌合体小鼠模型的构建及影响因素分析

目的:构建小鼠异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT)混合嵌合体(mixed chimerism,MC)模型,分析影响移植后嵌合水平的相关因素并建立数学模型。方法:通过非清髓allo-BMT联合移植后大剂量环磷酰胺构建MC模型,对构建过程中的123只小鼠进行回顾性研究,对影响其嵌合状态的相关因素进行单因素及多因素Logistic回归分析,并通过R语言进行多元线性回归获得以相关影响因素预测嵌合水平的数学模型。结果:该模型在移植后第14天呈现混合嵌合,第15天供者淋巴细胞(donor lymphocyte infusion,DLI)输注可显著促进后期供体细胞的植入,而PBS对照组植入失败。123只小鼠中,MC和非MC分别有47只(38.21%)、76只(61.79%);单因素分析结果显示,小鼠的基线体重(P=0.001,17.84±1.19 vs 18.50±0.94 g)、预处理条件全身照射(total body irradiation,TBI;P=0.048)及是否加用环磷酰胺(P=0.16)会影响小鼠的嵌合状态,而移植的细胞数及检测时间对其无明显影响。多因素回归分析结果显示,在一定条件下,小鼠基线体重是影响后期嵌合水平的独立因素(OR=0.493,95%CI 0.307-0.791,P=0.003)。经R语言多元线性回归得数学模型:chimerism=6.09-12×weight(g)+80.03×TBI(Gy)-4.4×cell-counts(×10⁷)+0.38×CTX(mg/kg),R²=0.5841,P<0.001。结论:本研究建立了移植后混合嵌合体小鼠模型的构建方法;并建立了影响因素的数学模型。