黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z生长的抑制作用

[摘要] 目的 观察黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖和细胞周期的作用。方法 MTT法、凋亡检测试剂盒检测不同浓度黄连以及小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z生长抑制作用以及凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的改变;裸鼠实验进行进一步的体内实验。结果 黄连及其小檗碱能够抑制CNE-2Z细胞增殖,且随药物浓度增加抑制效应增强,呈现浓度依赖性,不同浓度的黄连和小檗碱分别处理细胞24,48,72 h 时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50黄连分别为(13.70±2.46) ug/ml、(10.02±3.41) ug/ml、(8.94±2.45) ug/ml,小檗碱分别为(3.59±1.24) ug/ml、(2.84±1.02) ug/ml、(1.47±0.45) ug/ml,各IC50间的差异有非常显著性(p<0.01)。不同浓度黄连和小檗碱作用细胞24 h 后,G0/G1期细胞明显下降,S期细胞明显升高(p<0.05,p<0.01)。两者对CNE-2Z 细胞周期具有阻滞作用,可以阻滞在S期。动物实验显示肿瘤体积减小,具有统计学意义。结论 黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;一定剂量的黄连和小檗碱可能通过阻滞CNE-2Z于S期而抑制其增殖;对鼻烟癌细胞接种的裸鼠肿瘤体积有抑制作用。 [关键词] 黄连 小檗碱 鼻咽肿瘤 细胞增殖     

小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用

目的观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响,探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法MTT法测定小檗碱对CNE-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测小檗碱对CNE-2细胞凋亡和周期的影响;透射电镜观察CNE-2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化;Westernblotting法检测小檗碱对CNE-2细胞的细胞周期相关蛋白(cyclin)B1、CDK1、cdc25c表达的影响;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)和3H-亮氨酸(3H-Leu)标记前体掺入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响;利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤作用。结果小檗碱能抑制CNE-2细胞生长,48h的半数抑制浓度(IC50)为(49.5±5.8)μmol/L,72h的IC50为(13.3±2.0)μmol/L;小檗碱能抑制CNE-2细胞DNA和蛋白质合成;小檗碱能诱导CNE-2细胞凋亡,细胞经过25.0μmol/L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48.9±10.4)%;50.0μmol/L小檗碱能诱导CNE-2细胞G2/M期阻滞,并且下调细胞周期相关蛋白B1、CDK1、cdc25c表达;小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,30mg/kg剂量组的肿瘤体积中位数为317.9mm3,明显低于对照组(P<0.05)。结论小檗碱体内外均能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与其诱导细胞周期阻滞和凋亡,下调相关细胞周期蛋白有关。     

不同浓度的盐酸千金藤碱对人鼻咽癌细胞的抑制作用实验研究

目的研究探讨不同浓度盐酸千金藤碱对人鼻咽癌细胞CNE-1/CNE-2和5-8F的抑制作用。方法选用鼻咽癌高分化鳞癌细胞株CNE-1和鼻咽癌低分化鳞癌细胞株CNE-2、5-8F作为实验组,人脐静脉内皮细胞株EVC-304为正常细胞对照组,利用MTT法检测不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的增殖影响;利用Hoechst 33342染色法检测不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的凋亡影响;利用流式细胞术检测盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的细胞周期影响。结果不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞有量效相关的抑制增殖作用,EC50分别为9.924μg/ml(CNE-1),7.068μg/ml(CNE-2),9.905μg/ml(5-8F),浓度为50μg/ml时抑制率达到95%以上,与对照组正常细胞相比差异均有统计学意义(P<0.01);不同浓度的盐酸千金藤碱3种鼻咽癌细胞有量效相关的诱导凋亡的作用,到12.5μg/ml时,处理组肿瘤细胞与阴性组相比染色质浓缩成斑块状,差异显著(P<0.05);同时,12.5μg/ml终浓度的盐酸千金藤碱处理不同的鼻咽癌细胞48 h后,与阴性对照组相比,可见实验组G0/G1期鼻咽癌细胞显著增多,S期及G2/M期明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明盐酸千金藤碱能抑制其DNA合成,改变细胞周期。结论盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞均有抑制作用,可能机制包括诱导其凋亡并且改变其细胞周期。     

小檗碱对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的观察小檗碱对人鼻咽癌CNE2细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用。方法以人鼻咽癌细胞株CNE2作体外试验,以MTT法检测小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE2生长抑制作用。结果在体外抗癌细胞增殖试验中,小檗碱对CNE2的浓度分别为6 0 0μg/ml、4 0 0μg/ml、2 0 0μg/ml、1 0 0μg/ml,作用7 2 h后以MTT法进行检测,对CNE2增殖抑制率分别为8 5.0%、74.4%、67.3%、59.0%。结论小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE2有生长抑制作用,与药物浓度有依赖性。     

口虾蛄抗鼻咽癌活性成分的筛选及其对细胞周期的影响

目的筛选口虾蛄乙醇提取物抗鼻咽癌活性成分,并探讨其对细胞周期的影响。方法采用系统溶剂法,对口虾蛄乙醇提取物进行分离,以MTT法筛选出对人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞作用最明显的活性成分,然后应用流式细胞术进一步检测其对细胞周期的影响。结果3种提取物对CNE-2Z细胞均有不同程度的抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,作用48小时后的乙酸乙酯提取物IC50（239μg/ml）明显低于其余2种（正丁醇提取物IC50：833μg/ml,石油醚提取物：1550μg/ml）;流式细胞术检测结果显示,随着乙酸乙酯提取物浓度的增加,G1期和G2/M期细胞所占的百分比逐渐降低,S期细胞所占百分比逐渐增加（P〈0.01）。结论口虾蛄抗鼻咽癌活性成分主要存在于乙酸乙酯提取物中,其作用机制可能与引起细胞周期阻滞于S期有关。     

塞来昔布对鼻咽癌细胞株CNE-2Z作用的研究

目的:探讨塞来昔布对鼻咽癌细胞株CNE-2Z的生长抑制作用及可能机制.方法:以人鼻咽癌细胞株CNE-2Z为研究对象,体外药物敏感试验(MTT)观察不同浓度和作用时间的塞来昔布对细胞的生长抑制作用;免疫细胞化学染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)和环氧化酶-2(COX-2)的表达;流式细胞术(FCM)检测药物作用后细胞周期分布.结果:MTT试验显示塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点;流式细胞术表明塞来昔布可引起CNE-2Z细胞GO/G1期阻滞;免疫组织化学检测显示塞来昔布下调PCNA、COX-2蛋白表达.结论:CNE-2Z细胞中存在COX-2表达,塞来昔布可抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖,可能成为鼻咽癌化疗的有效药物.     

口虾蛄总生物碱对人鼻咽癌CNE-2Z细胞周期与凋亡的影响

提取口虾蛄总生物碱并观察其对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖、凋亡的影响。方法 酸提碱沉法处理口虾蛄,沉淀部分以乙酸乙酯萃取;不同浓度的口虾蛄总生物碱处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期分布的影响;蛋白免疫印迹实验检测Caspase8蛋白表达的变化。结果 口虾蛄总生物碱能明显抑制CNE-2Z细胞的增殖,降低克隆形成能力,使细胞周期阻滞于S期;Caspase8蛋白表达水平随着口虾蛄总生物碱浓度增高而降低,有一定的剂量依赖。结论 口虾蛄总生物碱抗CNE-2Z细胞的作用可能通过抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡等发生。     

口虾蛄总生物碱提取及其对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖影响

目的筛选口虾蛄总生物碱的提取方法,并研究口虾蛄总生物碱在体外对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用。方法口虾蛄乙醇提取物及新鲜口虾蛄分别以酸提碱沉,继以乙酸乙酯萃取,取得上清提取物(简称L)和沉淀提取物(简称S);以薄层色谱法探讨各提取物的分离条件及初步化学性质鉴定;继用CCK-8法观察各提取物体外对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长增殖的影响。结果以新鲜口虾蛄酸提碱沉后萃取所得总生物碱较多;氯仿-环乙烷系统分离各提取物效果最佳;沉淀提取物(S)的显色反应及色谱显色结果显示其可能为生物碱类物质;口虾蛄总生物碱S1和S2均对人鼻咽癌CNE-2Z细胞有明显的抑制作用,而上清提取物L1及L2则不明显;口虾蛄总生物碱S1和S2作用于人鼻咽癌CNE-2Z细胞48 h后,其IC_(50)分别为(71.18±0.56)μg/mL和(49.31±0.65)μg/mL。结论以新鲜口虾蛄酸提碱沉后萃取总生物碱的方法,简便、稳定、高效;口虾蛄总生物碱体外可明显抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长,显示有较好的开发应用前景。     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10μmol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16μmol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

姜黄素对鼻咽癌CNE—1细胞增殖和周期的影响

目的讨论姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测增值抑制率,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的姜黄素作用细胞48h时,抑制率随浓度的增加而增加,流式细胞仪分析证实姜黄素能使CNE-1细胞阻滞在G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。结论 姜黄素对CNE-1细胞具有增殖抑制作用,并阻滞细胞于G2/M期和诱导细胞凋亡。     

黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的 研究黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法 用倒置显微镜观察细胞形态学改变和计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测凋亡。结果 黄芩苷作用后,癌细胞生长延缓并萎缩,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显;黄芩苷对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪和荧光双染法结果提示黄芩苷可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论 黄芩苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

蟾蜍毒素粗提物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞M期阻滞

目的:探讨蟾蜍毒素粗提物对卵巢癌细胞的抑制作用及对细胞周期的影响.方法:采用台盼蓝拒染色法,集落形成实验测定细胞增殖能力,采用流式细胞仪解析细胞周期.结果:蟾蜍毒素粗提物作用细胞24,48,72h,半数抑制浓度分别为0.62,0.24,0.09μg/ml.细胞经0.5,5μg/ml蟾蜍毒素粗提物处理1,6 h,细胞生存率均＞95%,集落抑制率分别为(43.1±6.4)%,(78.2±4.9)%,(89.8±2.2)%,(95.0±2.6)%,与对照组相比有显著差异(P＜0.05).经蟾蜍毒素粗提物作用后,细胞阻滞于M期.结论:蟾蜍毒素粗提物能够抑制OVCAR-3细胞增殖,同时诱导M期阻滞.     

参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制的体外实验

目的观察参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用,为其临床应用提供理论依据。方法将不同浓度的参芪扶正注射液与CNE-2细胞作用24、48、72和96h,用MTT法检测参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大。流式细胞仪分析显示参芪扶正注射液将CNE-2细胞明显阻滞于G1期。参芪扶正注射液浓度为8.0g/L作用48h,CNE-2细胞的凋亡率为39.3%,荧光显微镜下观察有凋亡细胞存在。结论参芪扶正注射液能够抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖,能使CNE-2细胞阻滞于G1期,可诱导CNE-2细胞发生一定程度的凋亡。     

顺铂不同给药方式对鼻咽癌细胞毒性以及细胞周期影响体外研究

目的:采用细胞培养方法研究顺铂不同给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1的细胞毒性以及细胞周期的影响.方法:MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量.细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96 h;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h;C组为IC70作用3h后间隔93 h;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96 h.采用流式细胞仪进行细胞周期的检测.结果:顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72 h的IC50值为0.26 μg/ml,1/5IC50为0.05 μg/ml,IC70为0.72 μg/ml.顺铂为0.05μg/ml剂量时对CNE-1细胞无明显毒性,但细胞周期研究发现,当其连续作用96 h时,与阴性对照组相比可引起明显G2/M期阻滞(P＜0.05);而顺铂剂量为0.72 μg/ml连续作用3h后间隔24 h以及93 h时检测细胞周期变化也出现显著G2/M期阻滞(P＜0.05);但在0.72 μg/ml的顺铂作用3h后立即检测细胞周期变化,与相应阴性对照组相比无统计学意义(P＞0.05).结论:体外低毒性的小剂量顺铂连续给药可诱导鼻咽癌细胞株CNE-1细胞周期G2/M期阻滞.     

小檗碱对人鼻咽癌CNE-2细胞内钙含量的影响

研究表明，小檗碱对鼻咽癌细胞有明显的抑制作用。细胞内线粒体参与了肿瘤细胞增殖、凋亡的过程，线粒体的功能与线粒体膜的通透性即跨膜电位差密切相关。有实验证实，细胞内大量钙离子储存于线粒体内，钙离子在诱导细胞凋亡中起重大作用。本研究小檗碱作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞，观察CNE-2细胞内钙离子浓度水平变化，探讨小檗碱对鼻咽癌CNE-2瘤株抑制的分子机理。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人鼻咽癌细胞的生长机制

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epi-gallocatechin-3 gallate,EGCG]抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点.方法:用EGCG处理人鼻咽癌CNE-2Z细胞,应用MTT试验观察不同浓度的EGCG对癌细胞生长增殖的影响;流式细胞仪检测用药前后细胞周期的变化;用逆转录聚合酶链反应分析ras相关区域家族1A(RASSF1A)mRNA表达情况.结果:从CNE-2Z细胞生长曲线判定EGCG对细胞生长均有抑制作用;流式细胞分析结果显示,G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;经EGCG处理后,细胞中均有RASSF1AmRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强.结论:EGCG对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的RASSF1A基因再转录,诱导该基因重新表达的结果.     

汉黄芩素对多发性骨髓瘤细胞周期及P-Wee1和P-Akt蛋白表达的影响

目的探讨汉黄芩素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制作用及其可能的机制。方法以不同浓度的汉黄芩素(5～100μg/ml)作用于RPMI8226细胞24h,使用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞的增殖活性和细胞周期的变化;运用Western-blot法检测汉黄芩素作用前后细胞内P-Wee1、P-Akt蛋白表达的变化。结果汉黄芩素对RPMI8226细胞具有增殖抑制作用,并有剂量依赖性,IC50为43.71μg/ml;汉黄芩素浓度为50μg/ml时,用药组的G2/M%为(25.4333±2.35433)%,明显高于溶剂对照组的(6.8333±1.52753)%;Western-blot检测结果显示,用药组汉黄芩素浓度≥50μg/ml时,与对照组相比,P-Wee1、P-Akt蛋白表达明显减少。结论汉黄芩素能明显抑制RPMI8226细胞的增殖,可能是通过Akt/Wee1途径使肿瘤细胞发生G2/M期阻滞,从而发挥增殖抑制作用。     

白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用

探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-2细胞的生长具有较强的抑制作用,并具有明显的量-效关系;白杨素可诱导CNE-2细胞凋亡,使G0/G1期细胞明显增多,S期明显减少,使细胞周期被阻滞于G0/G1期;白杨素可升高CNE-2细胞caspase-3的活性。白杨素对CNE-2细胞生长有明显的抑制作用,其机制可能与白杨素诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

斑蝥素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的:研究斑蝥素(CTD)对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CTD对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析Hela细胞周期及CTD对细胞周期的影响。结果:CTD对Hela细胞24、48和72h的IC50值分别为3.2、2.5和1.4μg/ml。CTD浓度为3.2μg/ml时,细胞周期滞留在G2期。结论:CTD对Hela细胞的增殖有抑制作用;流式细胞仪显示细胞周期出现明显的G2/M期阻滞。     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞周期的影响

目的：探讨薏苡仁酯(coixenolide,CXL)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞周期的作用。方法：采用微量细胞克隆形成法检测CNE-2Z细胞的增殖能力和对药物的敏感性,用流式细胞仪分析细胞周期时相。结果：CXL以量效方式抑制CNE-2Z细胞的克隆形式,ID50-10^-5.003mol／L。小剂量、短时问使细胞阻滞于S期,大剂量、长时间则停留在G2／M期。结论：CXL通过作用于S期或G2／M期而抑制CNE-2Z细胞生长。