高压液相色谱法检测梗阻性黄疸大鼠肠道通透性

目的 用高压液相色谱方法快速准确测量肠道通透性,探讨正常和阻塞性黄疸大鼠的肠道通透性状态.方法 24只SD大鼠被随机平均分成2组:健康对照组和梗阻性黄疸组.胆总管完全结扎后获得梗阻性黄疸动物模型.测定所有SD大鼠第6天尿中乳果糖和甘露醇溶液的排出率.所有SD大鼠在第5天晚10时起禁食;第6天早8时灌胃2 ml乳果糖和甘露醇溶液(含100 mg乳果糖和50 mg甘露醇),收集之后24 h内的全部尿液.尿样经离心和预处理后,用带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定,样本分析时间为10 min.结果 甘露醇和乳果糖标准曲线线性良好,线性的相关系数r分别为0.998 823和0.999 943;方法学的重复性误差(CV％,n=12):乳果糖(L)3.52,甘露醇(M)1.61;回收率:乳果糖(L)98％.4±3％,甘露醇(M)101.1％±3％.第1组和第Ⅱ组尿中的乳果糖(L)和甘露醇(M)排出平(％)的比值(L/M)分别为0.33±0.04和2.00±0.16,第Ⅱ组L/M值显著比第1组大(P＜0.001).结论 带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定尿中乳果糖和甘露醇的排出率,方法准确、重复性和回收率满意.梗阻性黄疸SD大鼠L/M比值的测定可反映肠黏膜的通透性和肠道屏障功能.     

脓毒症患者肠道黏膜通透性的临床研究

目的探讨脓毒症患者肠道黏膜通透性的变化。方法前瞻、随机抽取符合入选条件的脓毒症患者和健康志愿者各20例。入选的患者和健康志愿者均给予口服含乳果糖10g、甘露醇5g的测试液,用高效液相色谱仪示差折光检测器测定6h后尿中乳果糖和甘露醇水平,计算出它们的比值(L/M);留取尿液的同时抽取血液标本测定血浆D-乳酸和血清前降钙素(PCT)水平。观察并对比脓毒症患者和健康志愿者以上指标,并对尿L/M比值、血浆D-乳酸和PCT进行相关分析。结果脓毒症患者的尿L/M比值、血浆D-乳酸和PCT水平较健康志愿者明显偏高(P<0.001);而脓毒症患者的尿L/M比值、血浆D-乳酸和PCT呈正相关(P<0.01或P<0.001)。结论脓毒症患者的肠道黏膜通透性明显增加,肠道黏膜通透性的增高程度与脓毒症的严重程度有密切关系。     

早期肠内营养对SAP患者肠通透性及血清炎症因子的影响

目的探讨早期肠内营养(EN)对急性重症胰腺炎(SAP)患者肠通透性及血清炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8]的影响。方法选取2017年1月至2018年1月于该院急诊科住院治疗的70例SAP患者作为研究对象。将研究对象随机分为两组:肠外营养组(PN组,35例)、EN组(35例)。主要评价指标为血清内毒素、尿乳果糖/甘露醇比值、血清炎症因子。比较两组以上指标在治疗前,治疗后1周及2周的差异。结果治疗前两组血清内毒素水平、尿乳果糖/甘露醇比值、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。治疗后1、2周,PN组血清内毒素水平及尿乳果糖/甘露醇比值显著高于EN组,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后1周EN组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平明显低于PN组,差异有统计学意义(P0.05)。结论对于SAP患者早期进行EN干预,不仅可以降低肠道通透性、减少肠源性感染的发生,亦可抑制SAP的炎性反应。因此,对于无绝对禁忌证的SAP患者,应早期进行EN支持。     

一氧化氮对肝硬化门静脉高压大鼠肠道通透性的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对肝硬化门静脉高压大鼠肠黏膜通透性的影响.方法:10只正常大鼠为对照组腹腔注射生理盐水2周,腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)制成大鼠肝硬化模型30只,随机分为3组,分别给予腹腔注射生理盐水(NS组),左旋精氨酸(L-Arg)(L-Arg组)、左硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)(L-NAME组)各10只,各2周.测定门静脉压力(PVP)、血浆NO、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)和内毒素(ETX)含量,观察回肠膜病理改变.结果:NS组大鼠肠黏膜损伤指数、PVP、NO、DAO、D-LA和ETX较对照组显著增高(P＜0.05),L-Arg组上述指标较NS组显著升高(P＜0.05),L-NAME组上述指标较NS组显著下降(P＜0.05),各指标存在正相关关系.结论:门静脉压力升高是导致肝硬化大鼠肠道通透性升高的直接因素,而ETX和NO的升高维持了门静脉的高动力循环,降低NO水平可改善高动力循环,对肠黏膜通透性有一定的保护作用.     

高压液相色谱检测糖尿病患者尿白蛋白的应用

目的探讨高效液相色谱法（HPLC）测定糖尿病（DM）患者尿白蛋白的应用。方法收集85例DM患者及40名健康体检者（正常对照组）尿液,分别用HPLC和免疫比浊法检测尿白蛋白,并将检测结果使用回归和Bland—Ahman进行一致性分析。结果HPLC线性方程为Y=2．9482X＋38．601,r2=0．9944;标准品和样本的保留时间（RT）均为2．42min;尿白蛋白浓度为40．1和152．6mg／L的样本其批内和批间变异系数（CV）分别为4．1％、4．8％和5．6％、6．5％;最低检测限为2mg／L。DM组尿白蛋白HPLC结果为2t．0（3．4～678．9）mg／L,高于免疫比浊法[8．2（2．0—442．2）mg／L]（P〈0．01）,但偏高的倍数不一致（1．3～6．1倍）;但正常对照组2种方法测定结果差异无统计学意义（P〉0．05）。将2种方法的测定结果用回归分析和Bland—Ahman进行一致性分析,显示2种方法的一致性较差。85例DM患者中用HPLC和免疫比浊法检测达到微量蛋白尿诊断标准[尿白蛋白排泄率（AER）〉30mg／24h]的阳性例数分别为48例（56．5％）和27例（31．8％）。结论HPLC能检测尿中的包括免疫性和非免疫性的总的尿白蛋白,与免疫比浊法相比更能早期检出尿白蛋白。     

高效液相色谱检测胆红素及其临床应用

由于常规的血清胆红素检测方法不能灵敏、准确的测定结合胆红素。笔者参考国外文献采用国产填料和试剂建立了敏感和特异的高效液相色谱胆红素测定法，结果表明本法可对血清胆红素作出较为灵敏和准确的测定，未结合胆红素批内和批间变异系数（ＣＶ）值分别为９．８％～１０．９％和７．３％～１２．７％，结合胆红素批内和批间ＣＶ值分别为２．５％～９．２％和９．７％～１１．０％；未结合和结合胆红素的最低检出浓度分别为０．０５μｍｏｌ／Ｌ和０．０２μｍｏｌ／Ｌ。同时采用本法分析了部分肝病患者和健康人血清胆红素，并对其临床意义进行了初步探讨。     

高效液相色谱检测胆红素及其临床应用

由于常规的血清胆红素检测方法不能灵敏，准确的测定结合胆红素。笔者参考国外文献采用国产填料和试剂建立了敏感和特异的高效液相色谱胆红素测定法，结果表明本法可对血清胆红素作出较为灵敏和准确的测定，未结合胆红素批内和批间变异系数（Ｖ）值分别为９．８％～１０．９％和７．３％～１２．７％，结合胆红素批内和批弹ＣＶ值分别为２．５％～９．２％和９．７％～１１．０％；未结合和结合胆红素的最低检出浓度分别为０．０５μ     

高效液相色谱法检测精浆辅酶Q10水平及氧化应激研究

目的建立人精浆中辅酶Q10高效液相色谱测定方法,探讨正常生育男性及不育症患者精浆中辅酶Q10含量水平差异及其与男性不育氧化应激反应的关系.方法精浆样品经甲醇沉淀蛋白后,用正己烷提取辅酶Q10组分,45℃下氮气流吹干后溶解,以Lichrospher C18化学键合硅胶为固定相,异丙醇～甲醇～四氢呋喃(55∶ 39∶ 6)为流动相进行色谱等度分离,在275 nm波长下以辅酶Q9为内标定量检测,并对195例不育症患者和23名正常生育对照男性进行分析.结果在所建立的分析条件下,辅酶Q10及内标辅酶Q9色谱保留时间分别约为5.83 min及4.97 min,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确.辅酶Q10浓度在0.01 ～10.00 mg/L范围线性良好.批间(n=5)及平均批内(n=6)测定的相对标准偏差分别为0.80%和1.81%.样品测定回收率为94.1%～99.0%.对23例正常生育男性及195例不育症患者精浆中辅酶Q10含量测定结果分别为(37.1±12.2) μg/L和(48.5±20.4) μg/L,统计学分析表明两组之间的差异有统计学意义(P<0.01),随着精液中精子数量越少,这种差异性越显著.结论精浆CoQ10水平可作为男性不育研究时一项有用的生化参考指标,其升高或降低能反映生殖系统氧化应激反应状况,为临床治疗和有关男性生殖功能机制研究提供参考指导.     

变性高效液相色谱法检测单核苷酸多态性的研究进展

单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)是指某一人群的正常个体基因组内特定核苷酸位置上存在不同碱基,且其最低的基因频率>1%,即在基因组核苷酸水平上单碱基突变引起的DNA序列多态性[1-2]。通常说的SNPs包括单个碱基的转换、颠换,以及单个碱基的缺失和插入。在人类DNA多态性中,SNPs大约占90%。人类基因组中每千个核苷酸就有一个以上的SNPs,因此整个人类基因组30亿对碱基中共有300万以上的SNPs。其中约有25~40万个为基因编码区的突变(coding region SNPs,cSNPs),cSNPs中又有20%~30%可引起蛋白质编码序列改变并导…     

高效液相色谱法测定HbF的临床实验评价

目的对高效液相色谱法(HPLC)测定HbF进行临床实验评价。方法用日本TOSOH公司生产的HLC723G7(简称G7)全自动糖化血红蛋白分析仪(分析原理为HPLC)的β模式测HbF,与抗碱变试验法测得HbF含量进行比较;并对该方法精密度、线性、抗干扰性等指标进行实验。结果共测定标本77份,其中成人及儿童标本42份,检出HbF高于正常值(含量>3.1%)的标本17例。该方法精密度测定CV在1.9-3.2%之间;线性良好,回归方程y=0.9915x-0.03704,与碱变性试验的相关性良好γ=0.9900;HbF的线性范围可达35.8%;胆红素浓度在250μmol/L,甘油三脂浓度在22.0mmol/L以下时对测定结果无影响。但是对35例新生儿标本的检测表明,HbF与碱变性试验结果不符,仪器测定结果均为0,碱变性试验结果为65.02±11.69%。结论高效液相层析法测定HbF,对成人及儿童β地中海贫血检查有良好的效果,能很好地分辨出增高的HbF,重复性好,不受脂浊、黄胆标本的干扰,且检测速度快。但G7对新生儿HbF的测定尚存在不足之处,如果对仪器分析软件进行调整,则对新生儿的HbF含量也可以定量。     

高效液相色谱法测定人血浆中同型半胱氨酸浓度

目的建立柱前衍生化反相高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy)浓度的方法。方法以tris-(2-carboxylethyl)-phosphine hydrochloride(TCEP)为还原剂,以7-fluorbenzo-2-oxa-1,3-diazole-4-sulfonate(SBD-F)为衍生剂,色谱柱为Xterra RP18柱,柱温35℃,流动相为甲醇︰磷酸二氢钠缓冲液(pH值3.0)=3︰97,激发波长380 nm,发射波长510 nm,外标法定量。结果 Hcy浓度在1.95～125μmol/L范围内线性关系良好(r=0.999 8)。日内和日间相对标准偏差均<7%,方法回收率为103.2%～111.9%。结论此方法准确、灵敏、快速,是一种适合于实验室研究和临床检测血浆中Hcy浓度的方法。     

高效液相色谱法测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量

目的:建立一种高效液相色谱法直接测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量。方法:色谱柱为alltimaC18 (250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇:水(0.1%磷酸)=6:94,流速为0.9mL/min,检测波长为273nm。结果:没食子酸在15.2～152μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.8%(RSD =0.73%)。结论:本法操作简便,重现性好,结果准确,快速,可作为猴耳环消炎胶囊的质量控制方法。     

HPLC法测定奈韦拉平的血药浓度

目的:建立高效液相色谱法测定奈韦拉平血药浓度的方法。方法:采用Hypersil C18柱(150 mm×4.6 mm,0.5μm);流动相∶乙腈:0.01 mol/L磷酸二氢钠(含0.01 mol/L三乙胺,磷酸调pH至5.0)=18∶82;流量:1.0mL/min;检测波长:240nm。结果:线性范围0.1~5.0 mg/L(r=0.9996);最低检测浓度为0.1 mg/L;日内、日间相对标准差(RSD%)均小于10%;低、中、高三个浓度的提取回收率分别为99.98%、99.41%和100.53%。结论:该法简便、快速、准确,专属性高,适用于奈韦拉平药动学和生物等效性研究。     

应用变性高效液相色谱技术检测肥大细胞病c-kit基因突变

本研究检测7例肥大细胞病患者c—kit基因激酶编码区突变情况，以探讨该基因变异在肥大细胞病诊断及治疗中的意义。应用PCR测定、变性高效液相色谱技术及DNA测序方法对患者进行c—kit基因外显子17～外显子19突变检测。结果表明：1例患者外显子17扩增产物在DHPLC中出现异常色谱峰，测序结果显示在外显子17出现A→T突变，即D816V；另2例患者外显子18／19经DHPLC检测，结果显示1个额外的色谱峰，测序结果证实在外显子18出现G→C改变，为同义突变L862L。结论：变性高效液相色谱技术是一种高效、可靠的突变检测方法，c—kit基因突变检测对肥大细胞病临床治疗有指导意义。     

高效液相色谱法测定胎盘灌流液中格列苯脲的浓度

目的建立测定胎盘灌流液中格列苯脲浓度的高效液相色谱(HPLC)检测方法。方法采用的色谱柱为Symmetry Shield RP C18(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温40℃,流动相为NaH2PO4缓冲盐(25 mmol/L,pH值5.2)︰乙腈=1︰1;内标为格列齐特,流速1.0 mL/min,检测波长228 nm,采用液-液萃取预处理方法测定胎盘灌流液中格列苯脲的浓度。结果格列苯脲浓度线性范围为2.0～25.0μg/mL,线性方程为:y=0.226x+0.002,r=0.999 9(n=6),日内相对标准偏差(RSD)<3.1%,日间RSD<9.5%,方法学回收率为95.32%～103.35%。结论 HPLC检测方法灵敏、简便,可用于胎盘灌流液中格列苯脲浓度的检测。     

Separation and Detection of Tetracyclines by High-Speed Liquid Chromatography

The high-speed liquid chromatographic behavior of 15 tetracyclines on anion- and cation-exchange columns is described and illustrated by typical separations of a number of tetracycline derivatives on several systems, as well as by the resolution of tetracycline from its degradation products epi-, epianhydro-, and anhydrotetracycline. These serve as a basis for a rapid, convenient, and precise method for the direct detection of the tetracycline antibiotics and their degradation products.     

高效液相色谱法测定疲王按摩乳中阿魏酸的含量

目的建立疲王按摩乳中阿魏酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C18（150mm×4．6mm,5μm,北京迪马科技有限公司）;流动相为甲醇．2％冰醋酸（32：68）;柱温为30℃;检测波长为320nm。结果阿魏酸在4．55～91．00μg／mL范围内呈良好的线性关系（R2=0．9998）,其平均加样回收率分别为98．78％（相对标准偏差为2．668％）。结论该测定方法简便、快速、重现性好,可作为疲王按摩乳的质量控制方法。     

变性高效液相色谱检测少突胶质细胞瘤1p杂合性缺失

目的 建立临床检测少突胶质细胞瘤1p杂合性缺失的手段.方法 提取肿瘤组织及患者外周血DNA,利用聚合酶链式反应扩增微卫星位点后行变性高效液相色谱检测.结果 以患者外周血作对照,可明确显示肿瘤标本微卫星位点杂合性缺失情况,从而判断患者1p杂合性缺失情况.结论 该方法能直观便捷分析出患者1p杂合性缺失情况.