镉对人胚肾细胞凋亡和血红素氧合酶-1表达的影响

目的探讨镉对人胚肾细胞(HEK239T)凋亡和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响。方法 MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测镉诱导人胚肾细胞凋亡,应用逆转录多聚酶链反应 (RT-PCR)及Western免疫印迹法检测镉对人胚肾细胞HO-1 mRNA及蛋白表达的影响。结果 5．0、 10．0、20．0、40．0μmol／L CdCl2诱导人胚肾细胞后,凋亡率分别为11．90％±0．28％、9．27％±1．73％、 9．79％±0．67％、8．97％±1．60％,均明显高于对照组(6．69％±0．46％),差异有统计学意义(P< 0．01)。10～40μmol／L CdCl2均可高度诱导人胚肾细胞HO-1表达,随着剂量增高缓慢上升并达到平台期,随时间的延长略有降低。结论镉可诱导人胚肾细胞凋亡,上调HO-1的表达。     

镉诱导人胚肾细胞金属硫蛋白基因亚型的表达

[目的]研究镉对人胚肾细胞（HEK293T）金属硫蛋白（MT）各基因亚型表达的影响。[方法]以10μmol/LCdCl2染毒HEK 293T0、2、4、8、12、16、20、24h,2.5、5、10、20、40μmol/LCdCl2染毒HEK293T24h后,采用MTT法测定HEK 293T增殖活性;采用RT-PCR检测镉对HEK 293T MT-1A、MT-1B、MT-1E、MT-1F、MT-1G、MT-1H、MT-1X及MT-2A mRNA表达的影响。[结果]CdCl2染毒HEK 293T 24h后,经10μmol/LCdCl2诱导后,随时间MT-1A、MT-1F、MT-1G、MT-1H及MT-2A mRNA表达水平均呈先升高后降低趋势。MT-1X mRNA水平在8h明显升高（P〈0.05）,16h达到峰值并持续到24h。5μmol/L以上CdCl2均可明显抑制HEK293T活力,与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。MT-1A、MT-1F、MT-1G、MT-1H及MT-2A mRNA在2.5μmol/LCdCl2诱导表达水平均达到峰值,随着剂量增加,MT-1F、MT-1G、MT-1H维持在较高水平,40μmol/L剂量水平仍明显高于对照组（P〈0.05）,MT-1A、MT-2A在40μmol/L降低到基础表达水平。MT-1X mRNA表达水平与染毒剂量呈线性正相关（r=0.75,P〈0.01）。MT-1X的表达与镉对HEK 293T毒性呈负相关关系（r=-0.88,P〈0.01）。[结论]镉可以诱导MT-1F、MT-1G、MT-1H、MT-1X及MT-2A mRNA表达水平明显升高,并表现出特定的剂量-效应和时间-效应关系。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉所致人胚肾(human embryonic kidney,HEK)细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测不同CdCl₂浓度(0,10,20,40,80μmol/L)处理以及不同浓度NAC(1,2,4,8 mmol/L)和镉联合作用对HEK细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组(0μmol/L)比较,20,40,80μmol/L CdCl₂3组HEK细胞相对存活率明显降低(P<0.01),HEK细胞凋亡率明显升高(P<0.01);NAC与镉联合作用时,与40μmol/L CdCl₂比较,40μmol/L CdCl₂+4,8 mmol/L NAC2组HEK细胞相对存活率明显提高,40μmol/L CdCl₂+2,4,8 mmol/L NAC3组HEK细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度氯化镉可引起HEK细胞凋亡增加,NAC可以拮氯化镉引起的细胞凋亡。     

亚硫酸钠对人胚肾293细胞炎性因子表达的影响

目的探讨亚硫酸钠(Na2SO3)对人胚肾293(HEK293)细胞炎性因子表达的影响。方法采用改进的单溶液噻唑兰(MTS)比色法观察0、0.0025、0.01、0.039、0.156、0.625、2.5、10mmol/L亚硫酸钠对人胚肾293细胞株(HEK293)的毒性作用,并观察0、0.039、0.156、0.625、2.5、10mmol/L亚硫酸钠染毒致HEK293细胞的形态学改变,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HEK293细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和白介素8(IL-8)的mRNA水平的改变。结果细胞毒性实验显示,当亚硫酸钠浓度为0.625、2.5、10mmol/L时,OD值分别为(0.35475±0.02124),(0.60050±0.01277),(0.78475±0.00985),均低于对照组(2.5145±0.202265),差异有统计学意义(P<0.05);当亚硫酸钠浓度≤0.156mmol/L时,OD值范围为(2.47375±0.06999)～(2.62500±0.12029),与对照组比较,差异无统计学意义。形态学观察发现,当接触亚硫...     

亚硫酸钠对人胚肾293细胞APP蛋白表达影响

目的研究食品添加剂亚硫酸钠(Na₂SO₃)对β-淀粉样物质(Aβ)前体蛋白(APP)表达的影响。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测人胚肾293(HEK293)中APP基因的mRNA表达水平,用蛋白印迹法(West-ern-blotting)检测HEK293中APP蛋白水平。结果RT-PCR检测显示,HEK293接触0.039~10 mmol/L Na₂SO₃24 h后细胞内APP基因的3个亚型APP695、APP751、APP770的mRNA水平均未见明显改变。蛋白印迹分析发现,10mmol/L Na₂SO₃可明显降低细胞内APP蛋白水平,为阴性对照组的0.908倍;而较低剂量组0.039~2.5 mmol/LNa₂SO₃却可以明显增加细胞内APP蛋白的水平,分别达到阴性对照组的1.596,1.630,1.556和1.446倍。结论亚硫酸钠在一定剂量范围内影响HEK293细胞内APP蛋白水平,可能对老年性痴呆的发生有一定影响,但是细胞内APP蛋白水平的增加不是由该基因转录水平增加所致。     

镉诱导人胚肾细胞金属硫蛋白基因亚型的表达

为了研究镉对人胚肾细胞（HEK293T）金属硫蛋白（MT）各基因亚型表达的影响。研究人员使用10μmol／L CdCl2染毒HEK293T0、2、4、8、12、16、20、24h,2．5、5、10、20、40μmol／L CdCl2染毒HEK293T24h后,MTT法测定HEK293T增殖活性;RT-PCR检测镉对HEK293TMT-1A,MT-1B,MT-1E,MT-1F,MT-1G,MT-1H,MT-1X及MT-2AmRNA表达的变化。     

肾综合征出血热病毒对人胚肾原代细胞感染作用的研究

近年来对该病进行了广泛研究,但其发病机理尚不清楚.为了搞清肾综合征出血热病毒(HFRSV)对肾组织的损伤机理,本文首次选用易饲养、敏感、高效的人胚肾原代细胞直接攻击HFRSV.为确保结果的准确性,改用了胶原酶温和消化法,取得令人满意的结果.现将结果报告如下.     

汉坦病毒感染人胚肾细胞诱导凋亡的研究

目的探讨汉坦病毒在人胚肾细胞(HEK-293)内的增殖及诱导凋亡的机制。方法采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原,用westen blot方法测定汉坦病毒作用后bcl-2、bax、Cyt-c及caspase-3的表达。结果汉坦病毒感染细胞后用间接免疫荧光法可在感染的HEK-293胞浆内检测出汉坦病毒抗原;Western blot-ting结果显示,随着汉坦病毒浓度增加,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Cyt-c蛋白及caspase-3酶原活化片段表达升高。结论汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,可能通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡。     

镉对MCF-7细胞生长和雌激素受体表达影响

目的 观察镉对MCF-7人乳腺癌细胞生长和雌激素受体表达的影响。方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法筛选镉促进MCF-7细胞增殖的最佳作用时间和剂量,用流式细胞术观察细胞死亡情况,划痕实验评价细胞迁移能力,western-blot检测雌激素受体α、雌激素受体β蛋白表达,同时加入雌激素受体阻断剂氟维司群观察细胞增殖和2种雌激素受体表达的变化情况。结果 1 μmol/L镉处理24 h和1 nmol/L镉处理72 h对MCF-7细胞的促增殖效应最明显,增殖率(PR)分别为133%、138%;1 nmol/L镉处理72 h能明显抑制MCF-7细胞死亡,死亡细胞比例为28.5%,低于对照组的44.5%(t=4.557,P<0.05);增强细胞迁移能力,划痕伤口愈合率为25.7%,与对照组比较差异有统计学意义(t=5.696,P<0.05);增加雌激素受体α蛋白的表达;雌激素受体阻断剂能够抑制镉对MCF-7细胞的促增殖作用和拮抗镉对雌激素受体α蛋白表达增加的效应。结论 长时间低剂量处理镉对MCF-7乳腺癌细胞生长有促进作用并可能与激活雌激素受体α表达有关。     

人Kv1.5通道基因转染人胚胎肾细胞的研究

目的建立表达人Kv1.5通道的细胞模型。方法采用Lipofactamine 2000脂质体将人Kv1.5通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.5通道基因的表达。结果pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞2d后,荧光显微镜可观察到人Kv1.5通道表达;3d后全细胞膜片钳技术记录到人Kv1.5通道基因编码的通道电流。结论pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞为人Kv1.5通道的研究提供了良好的真核细胞表达系统和细胞模型。     

几种化合物对石棉诱发人胚肺细胞非程序DNA合成的影响

目的探讨几种化合物对温石棉诱发人胚肺（ＨＥＬ）细胞非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）的影响。方法用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉１小时后，再将其与ＨＥＬ细胞共同孵育，通过３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，测定了ＨＥＬ细胞的ＵＤＳ。结果温石棉可使ＨＥＬ细胞的ＵＤＳ显著增高，并呈明显的剂量－反应关系。与未处理温石棉组相比，经三种化合物处理的温石棉所致ＵＤＳ量均明显下降。结论采用适当化合物溶液浸泡温石棉，有可能减轻温石棉对人类的致癌危害性。     

镉、镍对小鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

目的探讨镉、镍单独及联合作用的发育毒性特点。方法应用小鼠胚胎肢芽细胞微团培养法观察ＣｄＣｌ２、ＮｉＣｌ２单独及联合染毒对胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果０．１～１．２μｇ／ｍｌＣｄＣｌ２或５．５～２７．５μｇ／ｍｌＮｉＣｌ２对胚胎肢芽细胞的增殖均有明显的抑制作用；０．４～１．２μｇ／ｍｌＣｄＣｌ２或５．５～２７．５μｇ／ｍｌＮｉＣｌ２也可明显抑制胚胎肢芽细胞的分化，但ＣｄＣｌ２在０．１和０．２μｇ／ｍｌ时可促进细胞分化。ＣｄＣｌ２和ＮｉＣｌ２联合染毒对胚胎肢芽细胞的增殖和分化的抑制分别表现为相加和加强作用。结论Ｃｄ和Ｎｉ可能通过某种共同机制而对胚胎肢芽细胞的增殖和分化的抑制产生协同作用。     

氯化镉对大鼠肾细胞内MAPK基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氯化镉(CdCl2)对大鼠肾(NRK)细胞MAPK基因mRNA表达的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度CdCl2(0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol/L)染毒24 h后对NRK细胞存活率的影响;应用带有SYBR Green Ⅰ的实时荧光定量PCR技术观察不同浓度CdCl2(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)对NRK细胞内MAPK基因(ERK1/2、p38MAPK、JNK1/2)mRNA表达的影响.结果 以阴性对照组(CdCl2 0μmol/L)NRK细胞存活率为100%,各染毒组(CdCl25.0、10.0、20.0和40.0μmol/L)NRK细胞存活率分别为72.28%、39.95%、15.66%、10.39%,且与对照组之间差异有统计学意义(P<0.01),并存在剂量-效应关系,经CdCl2染毒后,各实验组(CdCl2 2.5、5.0和10.0μmol/L)NRK细胞的ERK1/2、p38MAPK、JNK1/2基因的mRNA的相对表达量均低于阴性对照组(P<0.05或P<0.01).结论 CdCl2可能引起NRK细胞内MAPK基因mRNA的表达水平发生改变.     

镉对诱导成熟人树突状细胞的毒性作用

目的探讨镉化合物对人树突状细胞(DC)的细胞毒性作用。方法应用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人外周血单核细胞获得DC,流式细胞仪(FACS)检测细胞表面标记鉴定;给予CdCl2处理进行剂量-效应和时间-效应分析,采用甲基四氮唑盐(MTS)颜色反应法检测细胞毒性作用。结果诱导获得的DC呈悬浮生长,部分细胞聚集成簇。细胞表面标志分子表达阳性CD14为2.7%,HLA-DR为96.3%,CD1a为83.9%,CD80为88.3%,CD83为58.8%,CD86为42.4%。不同剂量(1.25~80.00μmol/L)和作用时间(24~48h)CdCl2染毒组细胞增殖抑制率不同程度增高,呈剂量-和时间-依赖性关系。结论诱导获得成熟的人DC;镉作用可致成熟DC的细胞毒性效应。     

混合稀土和柠檬酸铝对温石棉致人胚肺细胞谷胱甘肽含量改变的影响

目的寻求一种适宜的石棉表面改性剂。方法用不同浓度的混合稀土或柠檬酸铝溶液浸泡温石棉１小时后,再将其与人胚肺（ＨＥＬ）细胞共同孵育,测定ＨＥＬ细胞的谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量。结果随着石棉剂量的增加或染毒时间的延长,ＨＥＬ细胞的ＧＳＨ含量明显降低。经混合稀土或柠檬酸铝预处理的石棉,其所诱导的ＨＥＬ细胞ＧＳＨ下降的程度明显减弱。结论用混合稀土或柠檬酸铝预处理温石棉,均可降低温石棉对ＨＥＬ细胞的毒性作用。     

锌影响镉对人未成熟树突状细胞毒性作用

目的探讨锌对镉诱导的人未成熟树突状细胞(iDC)毒性的影响。方法分离人周围血单核细胞(PBMC)并诱导为iDC后,分组给予生理氯化钠溶液(对照组)、氯化镉(CdCl2组)、硫酸锌(ZnSO4组)、锌预处理后加氯化镉(Zn+Cd组)、锌离子特异性螯合剂(TPEN)预处理后加氯化镉(TPEN+Cd组)处理。噻唑蓝(MTT)颜色反应法检测细胞活力;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA链断裂损伤;吖啶橙(AO)与碘化丙啶(PI)核双染观察细胞凋亡并通过流式细胞仪检测凋亡细胞中染色体断裂的亚二倍体(SubG1)。结果 CdCl2组iDC活力抑制率随CdCl2呈剂量依赖性显著增高(P<0.05);与ZnSO4组或CdCl2组相比,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞活力抑制率明显升高(P<0.05);相同CdCl2剂量(20μmol/L)时,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞的彗星尾长和尾矩明显增大(P<0.05);各处理组出现凋亡细胞核染色和SubG1阳性细胞比例明显增加。结论镉化合物暴露导致iDC活力降低,其诱导的细胞毒性明显高于锌;细胞内锌稳态干预可增加镉介导的iDC内DNA损伤相关的毒作用敏感性。     

氯化镉诱发人支气管上皮细胞恶性转化中hMSH2基因mRNA表达变化

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化过程中hMSH2基因mRNA动态变化的规律。方法用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)技术检测16HBE、氯化镉恶性转化16HBE系不同阶段(第5、15、32代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因mRNA的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA的表达逐渐降低,到第32代细胞后表达明显下降(P<0.01)。结论氯化镉诱发16HBE系恶性转化过程中hMSH2基因表达逐渐下降,hMSH2基因水平的改变可能是氯化镉的致癌机制之一。