透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的影响

目的研究透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的作用机制。方法成年健康6月龄新西兰兔40只,采用抽签法随机分为正常组、造模组,造模组用4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射建立骨性关节炎模型;造模成功后造模组采用抽签法随机分为模型组、对照组、实验组,实验组用透骨消痛胶囊水溶液100 mL/d灌胃,对照组用壮骨关节胶囊水溶液100 mL/d灌胃,Western Rlot检测MAPK信号通路p—ERK1/2、p—JNK的蛋白表达。结果实验组治疗后,关节软骨中p-ERK1/2蛋白表达高于模型组、对照组（P<0.05）,p—JNK蛋白表达低于模型组、对照组（P<0.05）。结论透骨消痛胶囊可通过上调兔骨性关节炎软骨细胞p—ERK1/2蛋白的表达,下调p-JNK蛋白的表达,促进软骨细胞增殖、分化,抑制其凋亡。     

Effect of Serum Containing Tougu Xiaotong Capsule on Activity of Chondrocyte

目的 观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞活性的影响. 方法 SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞同步化后进行干预,分别确定含药血清的有效干预时间及干预浓度.各组合药血清在有效浓度作用下干预软骨细胞,在有效干预时间点采用MTT法. 结果 干预后,软骨细胞OD值干预72 h明显高于干预24 h、48 h、96 h(P＜0.05);10％含药血清浓度组明显高于5％、20％含药血清浓度组(P＜0.01).确定72 h为有效作用时间,10％为有效作用浓度.在10％含药血清浓度的作用下干预72 h,第3代软骨细胞OD值,透骨消痛胶囊实验组明显高于空白组(P＜0.01),实验2组增殖效果最明显(P＜0.05). 结论 透骨消痛胶囊含药血清能加速软骨细胞增殖,维持软骨细胞活性,其促进软骨细胞增殖作用与药物浓度有关,以中剂量药物浓度(含透骨消痛胶囊29 mg/d)为最佳.     

磷酸化p38MAPK及ANK在终板软骨细胞退变模型中表达的变化

目的:探讨终板软骨细胞退变后磷酸化p38MAPK和ANK的表达变化。方法:取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板细胞,建立终板软骨细胞体外自然退变模型。采取甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色法,对该模型进行鉴定。以western-blot检测原代及第四代磷酸化p38MAPK及ANK的表达;RT-PCR检测原代及第四代Ank基因mRNA表达。结果:与原代相比第四代终板软骨细胞磷酸化p38MAPK表达量明显增加(P<0.01);ANK表达量明显下调(P<0.05)。结论:终板软骨细胞的退变伴随p38MAPK表达增强和ANK蛋白的表达减弱,两者与终板软骨细胞的退变存在明显关联,提示通过调控p38MAPK和ANK的表达可能影响终板软骨细胞的退变,可能有助于阻止终板软骨的退变。     

透骨消痛胶囊对TNF-α诱导关节软骨细胞Rho/Rock信号通路的影响

目的观察透骨消痛胶囊对TNF-α诱导体外培养大鼠关节软骨细胞Rho/Rock信号通路的影响,探讨其防治骨性关节炎的作用机制。方法采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,选取第3代软骨细胞进行实验,20 ng/mL的TNF-α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,诱导成功后,给予透骨消痛胶囊(500、100、20μg/mL)孵育24 h后,用流式细胞仪检测软骨细胞Annexin-Ⅴ观察细胞凋亡情况,采用RT-PCR和Western Blot测定各组软骨细胞RhoA、Rock1和PKN等mRNA和蛋白表达。结果 TNF-α组细胞凋亡明显增多,透骨消痛胶囊各组能减少软骨细胞的凋亡,TNF-α组的RhoA、Rock1、PKN、MKK3、ERK6、Cbfα1等mRNA和蛋白表达较空白组上升,而透骨消痛胶囊各组对RhoA/Rock信号传导通路关键信号分子RhoA、Rock1、PKN及Cbfα1等的mRNA和蛋白的表达有抑制,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊可减轻TNF-α所致的软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制软骨细胞的RhoA/Rock信号通路有关。     

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的 探讨透骨消痛颗粒舍药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制. 方法 从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响. 结果 透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富.在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒舍药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化.     

透骨消痛胶囊干预膝骨性关节炎早期COX-2炎症途径的实验研究

目的探讨透骨消痛胶囊对膝骨性关节炎早期COX-2炎症途径的影响,从炎症途径阐明透骨消痛胶囊治疗膝OA的作用机制。方法改良Hulth法建立骨关节炎动物模型,随机分为6组,模型组、对照组(壮骨关节丸组)、实验Ⅰ组(透骨消痛胶囊低剂量组)、实验Ⅱ组(透骨消痛胶囊中剂量组)、实验Ⅲ组(透骨消痛胶囊高剂量组)及正常组,灌胃给药4周后处死动物取材,行关节内COX-2、PGE2浓度检测。结果骨性关节炎关节局部表达COX-2,透骨消痛胶囊可降低关节液中PGE2含量以及滑膜、软骨中COX-2水平,其中透骨消痛胶囊中剂量组及高剂量组作用更明显,与透骨消痛胶囊低剂量组及对照组比较有显著差异(P<0.05),但两者之间无显著差异。结论关节局部COX-2是引起膝骨性关节炎的重要介质。透骨消痛胶囊通过抑制OA早期滑膜和软骨细胞中COX-2的表达及其诱导产物PGE2的生成,从而达到控制OA早期炎症、缓解疼痛、减轻症状的目的 。     

Effect of Compatibility of Two Parts from Tougu Xiaotong Capsule on Inflammatory Factors Expression in Rats with Knee Osteoarthritis

目的 探讨透骨消痛胶囊2个有效部位不同配比对骨性关节炎炎症因子表达的影响.方法 清洁级SD大鼠90只,采用关节腔注射木瓜蛋白酶复制大鼠膝骨性关节炎模型,随机分为9组,正常组、模型组(生理盐水)、实验1-7组(苷类部位:生物碱部位分别为10∶0,10∶1,10∶3,10∶6,10∶10,1∶10,0∶10),分别干预4周后,采用放射免疫法测定关节液IL-1、IL-6、TNF -α、MMP-3、HA、NO含量. 结果 透骨消痛胶囊苷类部位与生物碱部位不同配比均能有效降低骨性关节炎关节液中IL-1、IL-6、TNF-α、MMP-3、NO含量,提高骨性关节炎关节液中HA含量. 结论 透骨消痛胶囊的苷类部位与生物碱部位不同配比均能有效抑制膝骨性关节炎的炎症反应,其中苷类部位与生物碱部位为10∶6的效果较好.     

透骨消痛胶囊对KOA大鼠关节软骨uPA系统相关调节因子的影响

目的观察透骨消痛胶囊对膝骨性关节炎(KOA)大鼠软骨中尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)系统相关调节因子基质金属蛋白酶3(MMP-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的作用机制。方法清洁级SD大鼠144只,分为空白组(24只)与造模组(120只)。造模组采用关节腔注射4%木瓜蛋白酶复制KOA模型,造模成功后随机分为模型组、壮骨关节丸组和透骨消痛胶囊低、中、高剂量组,空白组与模型组分别给予相应剂量的生理盐水灌胃,壮骨关节丸组和透骨消痛胶囊低、中、高剂量组分别给予相应药物灌胃。免疫组化反应观察MMP-3、IL-1β和TNF-α阳性表达;Western blot检测MMP-3、IL-1β和TNF-α蛋白表达情况。结果免疫组化反应显示,透骨消痛胶囊组和壮骨关节丸组MMP-3、IL-1β和TNF-α阳性率均明显降低,透骨消痛胶囊中剂量组和壮骨关节丸组两组间比较无显著性差异;Western blot检测结果与免疫组化具有相同的趋势。结论透骨消痛胶囊治疗KOA的部分作用机制是有效抑制u PA系统相关调节因子MMP-3、IL-1β和TNF-α的表达。     

透骨消痛颗粒对兔软骨细胞周期的影响

目的 观察透骨消痛颗粒对兔软骨细胞周期的影响. 方法 采用流式细胞仪检测透骨细胞颗粒干预后兔软骨细胞周期的变化. 结果 含药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,干预48 h后,G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白组比较有显著性差异(P＜0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清能有效地促进软骨细胞的增殖.     

透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的化学空间分析

目的从化学空间角度探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法运用计算机方法对透骨消痛胶囊中分子组成的数据集及药物分子/类药分子数据集进行化学空间分析,对一些特征描述符的分布进行了描述,同时采用主成分分析方法将多维化学空间映射到二维空间以得到更直观的图像。结果透骨消痛胶囊中分子与药物分子/类药分子在化学空间有较好的重叠。结论本方法直观地揭示了透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的重要意义。     

独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞PERK/Bip通路关键调控蛋白的影响

目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测退变软骨细胞中PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达变化。结果随着干预时间的延长,空白血清组和含药血清组PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达均逐渐降低,含药血清组降低更明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,抑制软骨细胞凋亡,从而起到治疗膝骨关节炎的作用。     

绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞中p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达的抑制作用

目的：观察绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白和Jun基因（c-Jun ）mRNA表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷含药血清抗皮肤光老化的作用机制。方法：采用中波紫外线(UVB)照射建立光老化HaCaT细胞模型,加低、中、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清于光老化HaCaT细胞模型培养液中培养,并设空白对照组、空白血清组和UVB模型组。采用Western blotting和RT-PCR方法检测各组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA的表达水平。结果：与空白对照组比较,UVB模型组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与UVB模型组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与空白血清组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达下降(P<0.01)。结论：绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达抑制皮肤光老化。     

p38MAPK通路在健骨颗粒促成骨细胞早期分化中的作用

目的观察p38MAPK信号转导通路在健骨颗粒促进体外培养成骨细胞早期分化过程中的作用。方法采用酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,分4组进行干预:对照组(加入生理盐水血清)、阻断剂组(加入p38MAPK的阻断剂SB202190)、中药组(加入健骨颗粒含药血清)和中药加阻断剂组(加入健骨颗粒含药血清和SB202190),运用化学比色法检测上清液中碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测成骨细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。结果在AKP活性、HYP含量及ColⅠmRNA表达3项指标上,中药组>中药加阻断剂组>对照组>阻断剂组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养大鼠成骨细胞的早期分化与p38MAPK信号转导通路有关;健骨颗粒含药血清能促进成骨细胞的早期分化,但这一作用仅部分通过p38MAPK信号通路实现。     

大鼠膝关节软骨细胞体外培养去分化时间的实验研究

目的:观察大鼠膝关节软骨细胞体外培养后自然退变时间,为骨关节炎研究提供合适靶细胞。方法:大鼠膝关节软骨细胞体外培养,传代,行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,通过Western Blot检测其特征性Ⅱ型胶原的表达情况对传代软骨细胞表型进行鉴定。结果:大鼠膝关节第5代软骨细胞和前4代比较,Ⅱ型胶原表达明显减少(P<0.05),结论:大鼠膝关节软骨细胞体外培养前4代能维持正常的软骨细胞表型,第5代开始发生退变,前4代可以做为软骨细胞研究的靶细胞。     

透骨消痛胶囊调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制骨关节炎炎症反应的机制研究

目的:探讨透骨消痛胶囊调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制骨关节炎炎症反应的作用机制.方法:取4周龄SD雄性大鼠的双侧膝关节软骨,经Ⅱ型胶原酶消化法获得大鼠软骨细胞,并采用Ⅱ型胶原免疫组化法对所得细胞进行鉴定;取第2代软骨细胞分为空白组、模型组(10 ng/mL LPS干预8 h)、抑制剂组(10...     

附桂骨痛胶囊对膝关节骨性关节炎NO及iNOS影响的实验研究

目的 通过观察附桂骨痛胶囊对膝骨性关节炎血清及关节液NO、关节软骨iNOS的影响,探讨其治疗作用机理及膝骨性关节炎的发病机制.方法 按照Hulth造模方法将30只新西兰大白兔造成膝骨性关节炎模型,并随机分为正常组、模型组、壮骨关节丸对照组、附桂骨痛胶囊治疗组,给药8 W后测定血清、关节液NO含量,动物处死后对软骨及滑膜组织的匀浆进行iNOS的测定.结果 附桂骨痛胶囊治疗组关节液NO含量降低的程度与壮骨关节丸对照组比较,差异显著（P＜0.05）,软骨及滑膜组织中iNOS的含量与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）.结论 附桂骨痛胶囊通过抑制iNOS的表达,可降低NO含量,减少软骨细胞凋亡,促进软骨基质合成及抑制其分解,抑制滑膜炎症,延缓关节软骨退变,促进了关节软骨的修复.     

益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞干预大鼠骨性关节炎实验研究

目的:探讨益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对骨性关节炎大鼠的干预作用。方法:取SD大鼠骨髓,筛选、纯化并鉴定BMSCs,分别给予生理盐水与益气汤干预后获取血清。将实验动物分为对照组、生理盐水组、益气汤组。含药血清干预后观察大鼠毛色、食欲及活动情况等,同时测量大鼠体质量,治疗6周后取膝关节病理检查。结果:益气汤血清干预BMSCs电镜下观察细胞形态均一,边界清楚。生理盐水组膝关节炎程度退变明显。骨性关节炎模型大鼠运用益气汤含药血清干预BMSCs治疗后,原发病变缓解,关节组织滑膜病理检查均未见明显异常。结论:益气汤含药血清诱导下BMSCs能有效修复骨性关节炎大鼠软骨的退变和损伤。     

益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞干预大鼠骨性关节炎实验研究

目的:探讨益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对骨性关节炎大鼠的干预作用。方法:取SD大鼠骨髓,筛选、纯化并鉴定BMSCs,分别给予生理盐水与益气汤干预后获取血清。将实验动物分为对照组、生理盐水组、益气汤组。含药血清干预后观察大鼠毛色、食欲及活动情况等,同时测量大鼠体质量,治疗6周后取膝关节病理检查。结果:益气汤血清干预BMSCs电镜下观察细胞形态均一,边界清楚。生理盐水组膝关节炎程度退变明显。骨性关节炎模型大鼠运用益气汤含药血清干预BMSCs治疗后,原发病变缓解,关节组织滑膜病理检查均未见明显异常。结论:益气汤含药血清诱导下BMSCs能有效修复骨性关节炎大鼠软骨的退变和损伤。     

透骨消痛胶囊治疗疼痛性膝骨性关节炎30例

目的观察透骨消痛胶囊内服治疗疼痛性膝骨性关节炎的疗效。方法采用简单随机原则将60例患者分为治疗组和对照组各30例。治疗组口服透骨消痛胶囊,对照组口服壮骨关节胶囊,治疗15 d后比较2组疗效。结果治疗组总有效率为90.0%,对照组为83.33%,2组比较,治疗组优于对照组（P<0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗疼痛性膝骨性关节炎有更好的疗效。