HPLC法测定不同来源黄芪中黄芪甲苷的含量

目的：比较不同来源黄芪中黄芪甲苷的含量。方法：加热回流提取，采用高效液相色谱法，使用C18柱，水—甲醇(50：50)为流动相，检测波长为205nm。结果：方法线形关系良好(r=0．9987)，平均回收率为99．10％，RSD为0．94％，不同来源黄芪中黄芪甲苷的含量有显著性差异。结论：本法可有效测定不同来源黄芪中黄芪甲苷的含量，方法准确可靠。     

高效液相色谱法测定全营养混合液中黄芪甲苷的含量

目前,临床上住院病人的营养不良问题越来越受到广大医药工作者的重视,特别是肿瘤患者,及时给予良好的营养支持,可以明显改善患者的生活质量,降低死亡率[1].黄芪注射液为黄色或淡棕黄色的澄明液体,药理实验证明,黄芪能加强心脏心缩,扩张冠状血管和肾脏血管以及全身末梢血管,使皮肤血液循环旺盛,增强机体免疫功能,其主要有效成分为黄芪甲苷,本实验旨在建立全营养混合液中黄芪甲苷的含量测定方法.     

高效液相色谱法测定全营养混合液中黄芪甲苷的含量

目前,临床上住院病人的营养不良问题越来越受到广大医药工作者的重视,特别是肿瘤患者,及时给予良好的营养支持,可以明显改善患者的生活质量,降低死亡率[1].黄芪注射液为黄色或淡棕黄色的澄明液体,药理实验证明,黄芪能加强心脏心缩,扩张冠状血管和肾脏血管以及全身末梢血管,使皮肤血液循环旺盛,增强机体免疫功能,其主要有效成分为黄芪甲苷,本实验旨在建立全营养混合液中黄芪甲苷的含量测定方法.     

HPLC法测定古汉养生精中淫羊藿苷的含量

[目的]建立RP-HPLC方法测定古汉养生精中淫羊藿苷的含量.[方法]采用Agilent 1100系列高效液相色谱仪,以Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）为分析柱;流动相比例：甲醇-1.5%冰醋酸溶液=58∶42（v/v）;流速1.0 mL/min;检测波长：270 nm;柱温30 ℃.[结果]色谱峰分离良好,无干扰.淫羊藿苷在4.4～88.0 μg/mL范围内线性关系良好,线性方程为：Y=56.92×X-85.80,r=0.9991,平均加样回收率大于96%,RSD小于0.91%.[结论]本方法是一种可靠、快速灵敏的检测方法,适用于古汉养生精中淫羊藿苷的测定.     

HPLC法测定黄芪粉针剂中黄芪甲甙的含量

目的：测定黄芪甲甙的含量。方法：本实验采用高效液相法。结论：本方法操作简单，干扰小，重现性好。     

薄层扫描法测定母乳多口服液中黄芪甲苷的含量

母乳多口服液由黄芪、党参、当归等中药组成 ,能促进乳汁的生成和分泌 ,具有通乳排乳增乳作用。作者用薄层扫描法对母乳多口服液中的主要成分黄芪甲苷进行定量分析。该法在０．９８μｇ～４．９０μｇ范围内有较好的线性关系 ,ｒ＝０．９９８３ ,平均回收率９８．９０% ,ＲＳＤ为２．８２%。１仪器与试药岛津ＣＳ -９３０薄层扫描仪 ,日本岛津公司 ;硅胶Ｇ ,青岛海洋化工厂 ;黄芪甲苷对照品购自中国药品生物制品检定所 ;母乳多口服液 ,胡庆余堂药业有限公司生产 ;所用试剂均为分析纯。２方法与结果２．１对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对…     

HPLC法测定复方炎消颗粒中盐酸小檗碱的含量

【目的】建立测定复方炎消颗粒中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法。【方法】采用Diamonsil C18柱,以乙腈-水（含0．05％磷酸和0．1％三乙胺）（42：58）为流动相,检测波长266nm。【结果】该色谱条件下盐酸小檗碱在4．08～81．6mg／L浓度范围内呈良好的线性关系。平均回收率为98．5％,相对标准偏差（RSD）为1．16％。【结论】本法简便可行、重复性好,可用于该制剂中盐酸小檗碱的含量测定。     

高效液相色谱法测定补元合剂中黄芪甲苷含量

补元合剂是一种治疗因放、化疗所致白细胞减少常用的中药复方制剂,由黄芪、生地、枸杞、白术、山药、杜仲、牛膝等组成,具有补中益气、扶正固本的功效。黄芪为补气药（合剂中含黄芪50g/1000ml）,性甘温,归肺、脾经,具有补气固表、利尿、收敛之功效,是补元合剂中的君药。黄芪的主要有效成分是甲苷,保证黄芪甲苷的含量才能提高补元合剂的药效。所以,测定黄芪甲苷含量有重要临床意义。作者采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷含量,方法简便,结果准确,重复性好。报告如下。     

养血固冲合剂中黄芪甲苷的含量测定

目的：建立养血固冲合剂中黄芪甲苷含量测定的方法。方法应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法进行检测,色谱柱为DiamonsilC18（250 mm ×4．6 mm ,5μm）,流动相为乙腈-水（32∶68）,流速1 mL/min ,柱温25℃,漂移管温度60℃。结果黄芪甲苷进样浓度在0．01252～0．20032 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0．9966,平均加样回收率为92．56％,RSD为1．13％（n＝6）。结论本方法简便、准确、重现性好,可用于养血固冲合剂的质量控制。     

高效液相色谱法检测人血清游离和总肉毒碱水平

目的 研究人血清中游离和总肉毒碱HPLC测定方法,建立成年体检人群血清中游离和总肉毒碱水平参考值.方法 血清样品经乙腈沉淀蛋白、衍生化反应后,以Lichrospher SiO2为固定相,乙腈-柠檬酸-三乙胺为流动相进行色谱等度分离,260 nm波长下定量检测,并对347名成年体检人群进行血清中游离和总肉毒碱水平测定.结果 在所建立的分析条件下,肉毒碱衍生化产物的色谱保留时间约为10 min,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确.肉毒碱在0～400 μmol/L浓度范围线性良好.血清中游离肉毒碱和总肉毒碱批间(n=7)及平均批内(n=5)测定的相对标准偏差分别为3.04%、3.36%和1.77%、1.97%,测定平均回收率分别为98.2%和96.3%.对347名成年体检人群血清中肉毒碱水平测定结果显示:男182名总肉毒碱(52.2±8.6)μmol/L,游离肉毒碱(42.3±8.3)μmol/L,酯酰肉毒碱(9.9±2.9)μmol/L;女165名,总肉毒碱(48.2±9.9)μmol/L,游离肉毒碱(37.9±8.7)μmol/L,酯酰肉毒碱(10.3±3.5)μmol/L.统计学分析显示,男性血清中游离肉毒碱及总肉毒碱水平与女性组相比明显偏高,差异具有统计学意义(t=4.88、3.98,P<0.01).两组间酯酰肉毒碱浓度相比,差异无统计学意义(t=-1.32,P>0.05).结论 HPLC方法可同时检测血清游离和总肉毒碱含量,且灵敏度、特异性、重复性好,为有关肉毒碱在临床的合理应用及相关疾病的研究建立了有效的参考指标和检测方法.     

黄芪浸膏粉诱导Jurkat clone E6-1细胞凋亡

目的利用黄芪浸膏粉(黄芪)诱导白血病细胞JurkatcloneE6-1(Jurkat)凋亡并探讨其作用机理。方法不同浓度(0~12.5mg/ml)黄芪与Jurkat孵育120小时后流式细胞仪上检测细胞凋亡;黄芪10mg/ml与Jurkat孵育120小时后,流式细胞仪上检测细胞中caspase3、9活性变化及Bcl-2含量改变。结果①黄芪诱导Jurkat凋亡,随剂量的增加,活细胞逐渐减少。在12.5mg/ml时凋亡达高峰,为(80.55±1.82)%,并出现坏死细胞,为(12.49±1.88)%。②黄芪诱导Jurkat凋亡伴有caspase3、9的激活,caspase3由(0.57±0.16)%升至(84.53±4.85)%;caspase9由(0.25±0.16)%升至(20.72±4.87)%,caspase抑制剂zVAD-fmk在抑制caspase3、9激活的同时抑制细胞凋亡发生。③黄芪对Jurkat中Bcl-2含量无影响,黄芪作用前后Bcl-2含量分别为(21.20±0.12)%、(24.81±0.14)%。结论黄芪通过不依赖Bcl-2的途径诱导Jurkat凋亡,在此过程中,caspase39、的激活十分重要。     

高效液相色谱法测定人血清甜菜碱方法的建立

目的 采用柱前衍生高效液相色谱法-紫外检测法建立一种测定人血清甜菜碱浓度的方法.方法 以对溴苯乙酰溴和18-冠醚-6溶于乙腈制成衍生液,将其与甜菜碱反应形成的衍生物用Supelcosil LC-SCX色谱柱进行分离.流动相为乙腈∶水体积比90∶10,含16 mmol/L的氯化胆碱,等度洗脱,流速为0.8 ml/min,检测波长为259 nm,利用甜菜碱标准品绘制标准曲线,外标法定量检测20名健康大学生志愿者血清甜菜碱.结果 甜菜碱的测定线性范围为6.25～200.00 μmol/L,回归方程Y=1 568.1X-2 747.5,R2=0.999 8.最低检测限为3.0 μmol/L.批内不精密度为1.88%～3.79%(平均3.24%),批间不精密度为3.14%～6.76%(平均4.39%).方法 回收率为95.89%～102.86%(平均99.16%).结论 成功建立一种检测人血清甜菜碱浓度的方法,适用于实验室及临床常规检测.     

高效液相色谱法同时测定血浆同型半胱氨酸及其相关硫醇物浓度方法的建立

目的建立一种柱前衍生反相高效液相色谱-荧光检测法同时测定血浆同型半胱氨酸（homocysteine，Hey）、半胱氨酸（cysteine，Cys）、半胱氨酰甘氨酸（cysteinylglycine，CysGly）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）的方法。方法 以tris-（2-carboxylethyl）-phosphine（TCEP）为还原剂，7-fluorbenzo-2-OX8-1，3-diazole-4-sulfonate（SBD-F）为衍生剂，N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcystine，NAC）为内标，C8柱分离。流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（25 mmo/L，pH 3．0），梯度洗脱，激发波长（kex）380nm，发射波长（hem）510 nm，内标标准曲线法定量。结果Hey、Cys、CysGly、GSH的线性范围分别为1．0—160．0μmol／L，30．0—1 040．0μmol／L，2．0—300．0μmol／L，1．0—130．0μmol／L，具有良好的相关性，r为0．999 4—0．999 9。最低检测限为0．1—2．0μmol/L。日内精密度不超过3．0％，日间精密度除GSH为13．21％外均小于6．0％。平均回收率为87．24％-114．99％。结论本方法准确、灵敏、快速、特异，适合于实验室研究和临床常规检测。     

HPLC法测定精浆L-肉毒碱的研究及其临床意义

目的 研究建立人精浆中L-肉毒碱HPLC测定方法,分析正常生育男性及弱精症不育患者精浆中L-肉毒碱水平差异及其临床意义.方法 精浆样品经乙腈沉淀蛋白、衍生化反应后,以Lichrospher SiO2为固定相,乙腈-柠檬酸缓冲液(内含三乙胺12 mmol/L;pH 5.0)为流动相进行色谱等度分离,260 nm波长下定量检测,并对30例正常生育男性和87例不育患者进行精浆中L-肉毒碱水平分析.结果 在所建立的分析条件下,L-肉毒碱衍生化产物的色谱保留时间约为13 min,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确.L-肉毒碱在0～1 000 μmol/L浓度范围线性良好.样品测定批间(n=6)及平均批内(n=5)测定的相对标准偏差分别为1.36%和1.23%,回收率为91.6%～96.5%.对30名正常生育男性及87例不育患者精浆中L-肉毒碱含量测定结果显示:正常生育组(n=30)为(392.7±107.2) μmol/L;弱精不育组(n=29)为(270.0±83.9) μmol/L;少精不育组(n=19)为(187.9±43.9) μmol/L;弱、少精不育组(n=39)为(175.7±67.1) μmol/L.统计学分析表明正常生育组与各不育组之间的差异均有统计学意义(P＜0.01);各不育组组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 精浆L-肉毒碱水平与精液中精子活力、精子密度等参数以及生育状况密切相关.其含量测定可作为男性不育症检查时一项有用的生化指标,为临床诊治和进行相关男性生殖功能机制研究提供参考.     

液－固萃取高效液相色谱测定全血环孢菌素A

为了达到省时经济、简便敏感、准确快速的检测全血汗孢菌素Ａ，我们根据液－固萃取的原理，用自制Ｃ＿（１８）小柱进行样本的预处理，乙睛、水、三氟乙酸体系为洗脱剂、Ｃ＿（１８）分析柱（柱温７０℃），检测波长２１０ｎｍ，以环孢菌素Ｄ为内标的全血环孢菌素反相高效液相色谱测定法。本方法的线性范围为５０～１５００ｎｇ／ｍｌ，回收率为９９％～１０４％，批内变异系数＜４．７％，批间变异系数＜６．５％，临床上与ＣｙｓＡ常同时使用的３５种药物的病人全血按上述前处理，再使用ＨＰＬＣ分析表明在ＣｙｓＡ和ＣｙｓＤ的保留时间内均未见干扰峰；本方法使用了自制Ｃ＿（１８）小柱替代了进口小柱，效果满意，因而适合在国内临床上推广使用。     

四种钙离子拮抗剂的高效液相色谱测定

介绍采用ＢｏｎｄＥｌｕｔＣ１８小柱提取以反相高效液相色谱法同时测定尼弗地平、尼卡地平、尼群地平和尼莫地平４种钙离子拮抗剂的方法。应用Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪，Ｃ１８分析柱及乙腈／ＫＨ＿２ＰＯ＿４＝４６／５４流动相，在１．５ｍ１／ｍｉｎ流速下分离上述４种药物。回收率分别为１０１％～１０９％，９５％～１０１％，９９％～１０４％和１０３％～１０８％，批内变异系数（ＣＶ）＜７．４％，批间ＣＶ＜８．７％。本方法特异性好，操作简便、迅速，适合于临床和药代动力学研究应用。     

高效液相色谱法测定兔玻璃体内美罗培南浓度的方法研究

目的:建立一种反相高效液相色谱法--紫外线检测法,测定玻璃体内的美罗培南浓度。方法:应用Agilent1100系列型高效液相色谱仪,色谱柱为EclipseXDB-C8,流动相为乙腈-水(乙腈:水=10∶90),检测波长298nm,参比波长:400nm,加入乙腈自然沉淀,提取剂为乙腈,内标物为对乙酰氨基酚,流速为0.8mL/min。结果:本方法测定的线性范围为0.05～2.5mg/mL,最低检测浓度是0.05mg/mL,回收率为98.93%,日内精密度≤3.03%,日间精密度≤5.49%。结论:该方法简单,准确,适合于玻璃体腔注射美罗培南的药物浓度测量。     

高效液相色谱-荧光检测法在慢性肾功能不全患者血清芳香族氨基酸检测中的临床价值

目的 建立同时测定血清AAA含量的HPLC-FLD法,探讨CRI患者血清AAA含量变化及其临床应用价值。方法血清标本来自于100名健康体检者和80例CRI患者。将CRI患者按2002年美国肾脏基金会(NKF)诊断分期标准进行分期：CKD 2期4例、CKD 3期12例、CKD 4期12例和CKD 5期52例;按CRI不同病因分组：慢性肾炎型32例、糖尿病型36例和高血压型12例。血清经高氯酸去蛋白后,离心取上清液测定,外标法定量。采用Megres C18色谱柱,流动相为乙腈：水（体积比为1∶9）,流速为1.0 ml/min,荧光检测器在不同时间段设定特定波长对血清AAA进行测定。对健康对照组和CRI患者组血清中AAA总量、Tyr、Phe和Trp含量及不同分期和不同病因CRI患者血清Tyr、Phe和Trp含量进行比较,同时评价血清AAA总量诊断CRI的敏感度与特异度。结果Tyr、Phe和Trp线性范围分别为0.550～275.000、3.050 ～1 220.000和0.049～49.000 μmol/L,最低检测限分别为0.014、0.500和0.005 μmol/L,平均回收率分别为100.9％、101.3％和98.5％,日内精密度为2.32％～3.92％（平均为3.13％）,日间精密度为3.18％ ～4.20％（平均为3.58％）。CRI患者组血清AAA总量、Tyr、Trp含量及Tyr/Phe比值分别为(135.74±12.23)、(52.27±8.25)、(21.49±4.25) μmoL/L和[0.87（0.68 ～1.05）],低于健康对照组的(174.47±11.57)、（63.53±4.68）、(44.22±3.67) μmol/L和[0.97（0.94～1.00）],差异均有统计学意义（t=- 14.709、4.452、22.100,U=266.000,P均＜0.05）。不同分期CRI患者Tyr、Phe和Trp含量差异无统计学意义;Tyr含量在慢性肾炎组、高血压组和糖尿病组间差异无统计学意义,Phe在慢性肾炎组与高血压组、慢性肾炎组与糖尿病组间差异有统计学意义（U= 114.00、395.00,P均＜0.05）,Trp在慢性肾炎组与糖尿病组间差异有统计学意义(U=349.00,P＜0.05)。血清AAA总量诊断CRI的敏感度、特异度分别为90％ (72/80)和100％ (100/100)。结论HPLC-FLD法测定血清AAA简便、快速,敏感度高及特异度好,同时测定血清AAA含量对CRI患者的诊断和评价有一定价值。     

HPLC-UV检测法同时测定血浆色氨酸和犬尿氨酸的方法学研究

目的 建立一种同时测定血浆中Trp和Kyn浓度的HPLC-UV检测法.方法 以3-硝基酪氨酸(3-N-Tyr)为内标,采用Agilent Hypersil ODS色谱柱进行分离.流动相中醋酸缓冲液( 15 mmol/L,pH 5.5):乙腈为94∶ 6(v/v);流速为0.8 ml/min;柱温:25℃;紫外程序化检测波长:0～4 min,360 nm;4～5 min,302 nm.选取2010年9-12月重庆市九龙坡区第一人民医院15例慢性乙型肝炎患者、8例慢性肾炎患者、10例血小板减少性紫癜患者以及15名健康体检者,用该方法检测其血浆Trp、Kyn水平并计算Kyn/Tp比值;各指标在上述4组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 Kyn与Trp的保留时间分别为2.9 min和4.4 min,线性范围分别为0.44～18.30μmol/L和3.67～470.00 μmol/L,检测限分别为0.014 μmol/L和0.122 μmol/L.Kyn与Trp的日内变异均小于3％,日间变异均小于4％.平均回收率均在92.29％～104.40％之间.用该方法测定临床标本,健康对照组、慢性肾炎组、血小板减少性紫癜组以及慢性乙型肝炎组血浆中Kyn浓度分别为(1.59±0.28)、(2.73±0.56)、(2.69±0.44)和(1.54±0.48) μmol/L,Trp浓度分别为(59.8±10.0)、(46.1±11.7)、(58.5±8.0)和(41.4±13.1)μmol/L,Kyn/Trp比值分别为(0.027 4±0.007 5)、(0.061 6±0.0165)、(0.0467±0.0091)和(0.038 3±0.007 5),差异均有统计学意义(F值分别为23.734,8.463和20.921,P均＜0.01).结论 所建立HPLC-UV检测法可同时测定血浆中Kyn和Trp浓度,适合于临床检测.