姜黄素对雄激素依赖性前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

目的:探讨姜黄素对雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)的诱导凋亡作用。方法:分别用10、25、50、75、100μmol/L浓度的姜黄素作用于LNCaP细胞,5、12、24 h后MTT法检测细胞生长活性;24 h后流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;5 h后W estern印迹法检测细胞内IκBα的表达。结果:姜黄素能显著抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度姜黄素组之间与不同作用时间组之间的差异均有显著性意义(P均<0.05)。姜黄素诱导LNCaP细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01),各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P均<0.05),差异有显著性意义;姜黄素作用24 h后LNCaP细胞出现凋亡的形态学改变;不同浓度姜黄素作用后,LNCaP细胞内IκBα的表达无变化。结论:姜黄素能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,并促进其凋亡。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的:研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:分别用0、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞,12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGFmRNA的表达;ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果:姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖,呈剂量与时间依赖性,不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01),且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P<0.01),差异有统计学意义;姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变;PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论:姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其G2/M期阻滞和凋亡,VEGFmRNA及蛋白的表达也明显降低,可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。     

基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR及Western印迹验证STIM1抑制表达有效性,并采用Western印迹检测PC-3细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,survivin、激活型Caspase-3的表达水平。结果:倒置显微镜观察发现PC-3细胞病毒转染效率80%。转染1周后,RT-PCR及Western印迹显示STIM1被有效抑制。抑制STIM1表达后,对照组Bcl-2/Bax比率为1.24,干扰组PC-3细胞Bcl-2/Bax比率为0.31,比率显著下降;干扰组PC-3细胞survivin表达明显降低,相对表达量为对照组的0.14倍;Caspase-3裂解激活相对表达量为对照组的1.52倍(P0.05)。结论:STIM1在前列腺癌PC-3细胞中可视为致癌基因,抑制其表达可通过下调Bcl-2/Bax比率,降低survivin表达,激活Caspase-3级联通路,诱导细胞凋亡。     

沙利度胺对前列腺癌PC3细胞的体外作用及机制研究

目的 研究沙利度胺对激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞株PC-3体外生长的抑制作用及其可能的机制.方法 将不同浓度的沙利度胺作用于AIPC细胞株PC-3,采用CCK-8法检测沙利度胺对PC-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测凋亡率;通过RT-PCR法检测沙利度胺处理前后PC-3细胞中低氧诱导因子-1(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达水平;Western blot检测沙利度胺作用后HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.结果 不同浓度的沙利度胺作用于PC-3细胞后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05),且沙利度胺对PC-3细胞增殖的抑制作用呈浓度-时间依赖性.流式细胞仪检测结果表明不同浓度的沙利度胺诱导PC-3细胞发生凋亡,和对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).随着沙利度胺浓度的增加,PC-3细胞中HIF-1 α、VEGF mRNA的表达逐渐下调;HIF-1α、VEGF和Bcl-2蛋白的含量逐渐下降,而Bax蛋白的含量逐渐增加.结论 沙利度胺可能通过诱导AIPC细胞的凋亡和抑制肿瘤血管的生成而发挥双重抗肿瘤生长的作用.     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的：研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：分别用0、6．25、12．5、25、50μmol／L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞，12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长活性；24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化，透射电镜观察细胞超微结构变化；半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGF mRNA的表达；ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果：姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖，呈剂量与时间依赖性，不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2／M期阻滞（P〈0．01），且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组（P〈0．01），差异有统计学意义；姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变；PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论：姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长，并促进其G2／M期阻滞和凋亡，VEGF mRNA及蛋白的表达也明显降低，可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

索拉非尼对前列腺癌PC3细胞的抑制作用的研究

目的 观察索拉非尼(Sorafenib)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞的抑制作用.方法 用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌PC3细胞24h、48h和72h后,用MTT法检测Sorafenib对PC3细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Western blot检测不同浓度Sorafenib处理72h后PC3细胞内ERK和Bcl-2的表达.结果 Sorafenib能显著抑制PC3细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性.PC3细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系(P<0.01);Sorafenib处理PC3细胞72h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论 Sorafenib抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长.     

Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响及相关机制。方法将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染原代培养的大鼠成骨细胞并且进行阳性克隆筛选。用30 ng/ml TNF-α刺激转染组和对照组细胞24 h,流式细胞术、透射电镜检测细胞凋亡,应用免疫组化结合计算机图像分析技术检测转染组和对照组细胞Bcl-2蛋白及TNF-α刺激前后Caspase-3蛋白表达。结果 Bcl-2蛋白表达在转染加压筛选组显著高于对照组(P<0.05)。TNF-α刺激后转染组细胞亚二倍体凋亡峰比例为6.6％,对照组为16.1％。TNF-α刺激后转染组细胞.超微结构大多正常,对照组细胞出现明显凋亡征象。TNF-α刺激后两组细胞 Ciaspase-3蛋白表达均升高;TNF-α刺激前Caspase-3蛋白表达转染组与对照组比较差异无显著性(P>0.05),TNF-α刺激后Cas-pase-3表达对照组较转染组显著高(P<0.05)。结论 Bcl-2过表达对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡有抵抗作用,Bcl-2过表达的抗凋亡作用可能部分通过抑制TNF-α刺激引起的Caspase-3蛋白表达升高实现,有望作为抑制成骨细胞凋亡的侯选基因。     

选择性COX-2抑制剂NS398对前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对前列腺癌细胞PC-3增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测不同浓度和不同时间NS398对PC-3细胞增殖的影响;RT-PCR法检测不同浓度NS398作用PC-3细胞24h后COX-2 mRNA的表达;酶联免疫测定法(ELISA)检测不同浓度NS398作用PC-3细胞24h后PGE2释放水平;流式细胞仪检测不同浓度NS398作用PC-3细胞24h后细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制PC-3细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;RT-PCR和ELISA法检测结果显示,随着NS398浓度增高,PC-3细胞COX-2 mRNA表达和PGE2释放水平呈下调趋势;细胞凋亡检测结果显示100、200μmol/LNS398对PC-3细胞具有诱导凋亡的作用。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

姜黄素诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞周期阻滞和凋亡研究

目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的生长抑制作用。方法10～100μmol姜黄素作用PC3细胞5～24h后,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相及细胞凋亡变化,透射电镜观察细胞超微结构变化,Western印迹法检测细胞内IκBα的表达。结果姜黄素能显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的体外生长(P<0.05),呈时间与剂量依赖性;姜黄素将PC3细胞周期阻滞于G2/M期;不同浓度姜黄素诱导PC3细胞凋亡率分别为(6.33±0.88)%、(7.53±2.32)%、(12.74±3.02)%、(18.09±2.51)%与(27.54±2.63)%(P<0.05);细胞内IκBα的表达随姜黄素剂量的增加而逐步升高(P<0.05)。结论姜黄素通过抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长。     

环加氧酶抑制剂对缺血再灌注大鼠肾脏的保护作用

目的：本实验研究了环加氧酶抑制剂对缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury,I/R）所致大鼠肾脏组织细胞凋亡、Bcl-2蛋白和超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达的影响。方法：将36只大鼠随机分为3组：对照组,I/R模型组,罗非昔步治疗组,每组12只。I/R大鼠模型采取夹闭双侧肾动脉60min,恢复再灌注24h的方法建立。对照组大鼠除不钳夹双侧肾蒂外,余步骤与手术组同。观察肾组织病理改变,检测肾组织中Bcl-2蛋白、SOD和MDA含量的表达,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果：组织学检查发现对照组肾小管排列整齐,间质无充血水肿,I/R组可见明显损害,肾小管上皮细胞肿胀变性,肾小管扩张,可见管型和坏死脱落细胞,间质充血水肿,炎细胞浸润。治疗组组织损伤较I/R组明显减轻。免疫组化结果半定量分析显示模型组Bcl-2蛋白明显增多,给药组Bcl-2的水平较模型组明显减低（P〈0.05）。模型组细胞凋亡明显增多,给药组细胞凋亡水平较模型组明显减低（P〈0.05）。模型组肾组织SOD的活性明显降低,MDA含量增高,给药组比模型组有所改善。结论：罗非昔步能抑制I/R肾脏组织Bcl-2蛋白的表达,减轻细胞凋亡,抑制脂质过氧化产物MDA的产生,并提高抗氧化酶SOD的活性,减轻肾脏缺血再灌注损伤。     

MG-132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化与凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化和凋亡的影响及其机制。方法：体外培养HK-2细胞,随机分组：对照组,TGF-β1刺激组（5ug／L）,MG-132组（2．5μmol／L）,MG-132＋TGF-融组（MG-132 2.5μmol／L孵育30min后再加TGF-β1 5μg／L）。培养24h后收集细胞,RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达;Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IκB-α和IκB-α蛋白表达;免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达;Hoechst 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高（P〈0．05）,但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低（P〈0．05）,且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高（P〈0．05）。MG-132＋TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较,Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低（P〈0．05）,Smad7 mRNA略升高（P〉0．05）,而Srnad7蛋白明显升高（P〈0．05）,胞浆中Fn和α-SMA表达减少。MG-132组、MG-132＋TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较,P-IκB-α和IκB-α蛋白浓度升高,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MG-132可抑制TGF-132诱导的HK-2 Smurf1、Smurf2的表达,促进Smad7表达,抑制其降解,减轻FN和α-SMA的表达,从而抑制HK-2转分化;另-方面,MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-κB活化促进HK-2细胞凋亡。     

葡萄籽提取物对前列腺癌LNCaP与PC-3细胞VEGF和三种性激素的影响

目的：研究葡萄籽提取物（GSE）对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子（VEGF）和三种性激素睾酮（T）、孕酮（P）、雌二醇（E2）的影响.方法：实验分为四组：A1组：LNPCa细胞应用正常细胞培养液培养;A2组：LNCaP细胞应用含30μg/ml GSE的培养液培养;B1组：PC-3细胞应用正常细胞培养液培养;B2组：PC-3细胞应用含300 μg/ml GSE的培养液培养.常规培养48 h后收集四组细胞的上清液,用定量酶联榆测法和化学发光酶免疫检测法检测VEGF和三种性激素T、P、E2的浓度变化.结果：与A1组相比,A2组VEGF含量降低（P〈0.05）,T含量升高（P＜0.05）,E2含量无明显变化（P〉0.05）,P未检测到;与B1组相比,B2组VEGF含量显著降低（P〈0.01）,E2含量升高（P〈0.05）,T和P含量无明显变化（P〉0.05）.结论：GSE在体外能降低前列腺癌LNCaP与PC-3细胞VEGF的含量,提示其可能具有抑制前列腺癌侵袭转移的作用.     

姜黄素与LY294002联合应用对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响

【摘要】 目的〓探讨姜黄素与PI3K/Akt抑制剂LY294002联合应用对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响。方法〓根据给药不同将实验分为对照组、姜黄素组、LY294002组和姜黄素组+LY294002联合组,分别加入等量的培养基、25 μmoL/L姜黄素、25 μmoL/L的LY294002和两种混合液。采用MTS法检测各组细胞的增殖情况、流式细胞仪术检测各组细胞凋亡情况、q-PCR测定各组细胞中NF-κB、P53及caspase-9的表达情况。结果〓姜黄素组、LY组和联合组的细胞增值率均较对照组明显降低,且联合组明显低于两个单独用药组(P<0.05)。姜黄素与LY294002联合作用前列腺癌PC-3细胞后,细胞总凋亡率较姜黄素及LY294002单独使用后明显增加(P值均<0.05)。联合用药组的NF-κB表达量明显低于两单独用药组(P<0.05),而P53和caspase-9的表达量均明显高于两单独用药组(P<0.05)。结论〓姜黄素与LY294002联合使用较两种药物单独使用更能有效抑制前列腺癌PC-3细胞的体外生长,作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达从而抑制细胞增殖,并增加P53和caspase-9的表达从而促进细胞凋亡来实现的。     

葛根素对大鼠肝缺血再灌注损伤脑组织c-fos和Bcl-2表达的影响

目的：观察肝缺血再灌注损伤时c-fos、Bcl-2与脑细胞凋亡的关系及葛根素对其影响的可能机制。方法：建立肝缺血再灌注损伤动物模型。选健康雄性SD大鼠56只,随机分为对照组、缺血30min组（I组）、缺血30min即刻再灌注组（I/R组）、缺血30min再灌注1h组（I/R1h）、缺血30min再灌注2h组（I/R2h）、30min再灌注4h组（I/R4h）及葛根素预处理组（PUE＋I/R4h组）,每组8只。观缺血察各组肝、脑HE染色;应用免疫组织化学方法测定各组大鼠脑组织c-fos、Bcl-2的表达;应用原位细胞凋亡法测定脑细胞凋亡。结果：I/R2h组、I/R4h组肝组织中散在分布大量炎症细胞,肝细胞明显肿胀,有的呈空泡状变性,肝脏结构紊乱;PUE＋I/R4h组上述改变明显改善。I/R2h、I/R4h组脑组织水肿明显,PUE＋I/R4h组明显改善。与对照组比较,其余各组脑组织c-fos表达均增高﹙P〈0.01）,I/R4h组水平最高,PUE＋I/R4h组较I/R1h组、I/R2h组、I/R4h组明显降低（P〈0.01）。与对照组比较,其余各组脑组织Bcl-2表达增高（P〈0.01）,I/R4h组与I/R2h组差异无统计学意义﹙P〉0.05）,PUE＋I/R4h组较对照组、组表达增多（P〈0.01）,较I/R1h组、I/R2h组、I/R4h组明显降低（P〈0.01）。I组、I/R组细胞I凋亡指数较对照组明显增加（P〈0.01）,随着再灌注时间的延长细胞凋亡指数逐渐增加。PUE＋I/R4h组较I/R2h组、I/R4h组明显降低（P〈0.01）。结论：肝缺血再灌注损伤可引起脑组织的损伤及脑细胞凋亡。随着再灌注时间的延长,脑组织中c-fos表达增高,脑细胞凋亡与c-fos的表达有关。Bcl-2在缺血期发挥了抑凋亡的作用,随着再灌注时间的延长,其作用减弱,脑细胞凋亡指数增加。葛根素可能通过抑制c-fos的表达、增加Bcl-2的表达发挥减轻肝缺血再灌注损伤所致脑细胞凋亡的作用。     

基质细胞衍生因子-1α对人前列腺癌PC-3细胞系失巢凋亡的影响

目的：探讨基质细胞衍生因子-lα（stromal cell-derived factor-lα,SDF-lα）对人前列腺癌PC-3细胞失巢凋亡的影响。方法：悬浮培养诱导细胞失巢凋亡,使用0μg／L、50μg／L、100μg／L的SDF-1α作用于悬浮培养的PC-3细胞;天后,采用CCK8法检测PC-3细胞增殖活性变化;Western-blot方法检测促凋亡蛋白Bmf及抗凋亡蛋白Bcl-xl表达变化。结果：PC-3细胞悬浮培养3天后,细胞存活率为（25．19±0．43）％,提示大部分悬浮培养的细胞发生失巢凋亡;50μg／L、100μg／L的SDF-α处理后,与对照组相比,细胞存活率提高,分别为（37．60±6．24）％（P〈0．05）和（33．66±5．51）％（P〉0．05）;悬浮培养的PC-3细胞经SDF-lα处理后,其促凋亡蛋白Bmf表达减低;抗凋亡蛋白Bcl-xl表达增高。结论：SDF-lα可抑制人前列腺癌PC-3细胞发生失巢凋亡,其机制可能与下调Bmf和上调Bcl-xl蛋白表达相关。     

槲皮素对前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的:研究槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)的槲皮素处理,MTT法检测槲皮素对细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:槲皮素能抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,浓度由低到高,其24 h的抑制率(%)分别为3.01±1.32、4.84±1.73、20.35±1.30、16.78±1.89、27.25±4.01,48 h的抑制率(%)分别为10.18±1.16、6.22±0.04、24.29±4.19、22.4±4.26、41.42±5.43,当药物浓度>150μmol/L时P<0.05,具有统计学意义;流式细胞术显示PC-3细胞凋亡率随槲皮素浓度升高和作用时间延长而增加(P<0.05),其中浓度150μmol/L和200μmol/L组,24 h的凋亡率(%)分别19.10±0.28、26.55±0.78,48 h的凋亡率(%)分别为27.65±1.06、38.30±5.96;电镜观察到细胞的典型凋亡形态学变化。结论:在适当的条件下,槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,同时可诱导PC-3细胞凋亡,其具体作用机制有待进一步深入研究。     

葛根素对大鼠肝缺血再灌注损伤心肌组织c-fos、Bcl-2表达的影响及意义

目的：研究肝缺血再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在心肌组织中的表达与心肌细胞凋亡的关系及葛根素对其影响的可能机制。方法：建立肝缺血再灌注损伤动物模型,选健康雄性SD大鼠32只,每组8只,随机分为对照组、缺血再灌注组（I/R组）、葛根素预处理组（PUE组）和生理盐水预处理组（N组）。应用免疫组织化学方法分别测定各组大鼠心肌组织c-fos、Bcl-2的表达,应用原位细胞凋亡法测定心肌细胞凋亡情况,应用常规HE染色观察各组肝脏及心肌组织形态改变。结果：c-fos、Bcl-2表达及心肌细胞凋亡指数I/R组较对照组明显增加（P〈0.01）;PUE组c-fos表达与I/R组比较明显降低（P〈0.01）,Bcl-2表达及心肌细胞凋亡指数与对照组及I/R组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;N组与PUE组各指标比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。心肌组织HE染色切片观察显示I：/R组心肌细胞部分横纹不清楚,有炎性细胞浸润,间质出血,心肌嗜酸性增强及肌纤维肿胀,心肌水肿;PUE组心肌组织水肿明显减轻。肝组织HE染色切片观察显示I,/R组炎性细胞在肝组织中大量散在分布,肝细胞明显肿胀,有的呈空泡状变性,肝脏结构紊乱;PUE组上述改变明显改善。结论：肝缺血再灌注损伤可引起心肌组织的损伤及心肌细胞凋亡。葛根素可能通过抑制c-fos蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达起到抑制肝缺血再灌注损伤所致心肌细胞凋亡作用。     

Smac基因诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察Smac基因对前列腺癌细胞凋亡的影响。方法：前列腺癌细胞株（PC-3）在含小牛血清的DMEM-F12培养基中培养、传代。通过脂质体介导将Smac基因导入前列腺癌细胞株，通过RT-PCR法检测SmacmRNA的表达，同时用SABC免疫组化法分析Smac的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果：转染Smac基因后，RT-PCR可检测出Smac的特异条带，SABC结果转染组Smae蛋白表达显著性增强，前列腺癌细胞的生长明显受抑制（P〈0．05）。细胞周期分析可见凋亡峰，凋亡率35．2％。结论：转入Smac基因可显著促进前列腺癌细胞细胞的凋亡。     

SLP-2对前列腺癌PC-3细胞增殖和早期凋亡的影响

目的探讨SLP-2（stomatin-like protein2）基因对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法合成和构建SLP-2沉默和过表达载体,用Lipofectamine TM2000分别转染5组人前列腺癌PC-3细胞：pcDNA3．1-SLP-2组,空质粒pcDNA3-1组,siRNA—SLP-2组,siRNA阴性对照组以及空白对照组。采用Q-PCR和Western-Blot分别检测PC-3细胞中SLP-2的mRNA和蛋白表达量;用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测PC-3细胞增殖;采用细胞线粒体膜电位JC-1试剂盒检测PC-3细胞的早期凋亡情况。结果转染pcDNA3．1-SLP-2质粒和siRNA-SLP-2后PC-3细胞SLP．2基因mRNA表达水平分别为（324．884±16．508）和（0．195±0．016）,蛋白表达水平分别为（5．013±0．284）和（0．296±0．011）,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;转染pcDNA3-1-SLP-2基因48h、72h、96h后Pc。3细胞增殖吸光度值（OD值）分别为（0．714±0．007）、（1．103±0．018）、（1．348±0．018）,均显著高于空白对照组（P〈0．05）。采用siRNA沉默SLP．2基因48h、72h、96h后PC-3细胞增殖率分别为（0．571±0．004）、（0．875±0．010）、（1．044±0．008）,均显著低于空白对照组（P〈0．05）;细胞凋亡结果显示,转染pcDNA3．1-SLP．2和siRNA-SLP-2的PC-3细胞早期凋亡率分别为（2．433±0．577）和（9．197±0．602）,与空白对照组（4．993±0．710）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论SLP-2可促进人前列腺癌PC-3细胞的增殖,并抑制细胞的早期凋亡。