三种抗肿瘤中药有效成分对人脐静脉内皮细胞生长的影响

目的探讨蜂毒素、去甲斑蝥素、蟾毒灵3种抗肿瘤中药提取物的抗血管生成作用,并检测其量效关系,比较其抑制血管生成所需浓度与抑瘤浓度的关系。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3种药物在不同浓度、时间对人肝癌细胞ECV304生长的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50),观察量效、时效关系。结果 3种药物对ECV304细胞的生长有不同程度抑制作用(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间的依赖性。蜂毒素在24、48和72h抑制ECV304细胞的IC50分别为7.64、4.25和2.64μg/ml,去甲斑蝥素为271.52、108.83和80.76μg/ml,蟾毒灵为1.104、0.355和0.0905μg/ml。结论蜂毒素、去甲斑蝥素、蟾毒灵有明确的抑制血管内皮细胞增殖、抗血管生成的作用。     

广西尖吻蝮蛇毒K组分抗血管生成活性研究

目的探讨广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分（K组分）对血管生成的抑制作用。方法采用噻唑蓝法检测K组分对培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304的生长抑制情况,结晶紫法测定K组分对ECV304细胞的黏附抑制作用,鸡胚尿囊实验观察K组分对血管生成的影响。结果K组分对人脐静脉内皮细胞株ECV304的增殖有抑制作用并呈明显的时 效及量 效关系,能够抑制ECV304细胞与纤维连接蛋白的黏附和鸡胚尿囊血管生成。结论广西尖吻蝮蛇毒K组分对血管生成有抑制作用。     

吡格列酮对血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的观察吡格列酮对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法四唑盐比色试验(M TT法)检测吡格列酮对正常血管内皮细胞(ECV 304)生长的抑制作用。结果吡格列酮在终浓度为1×10-8mm o.lL-1-1×10-4mm o.lL-1时对ECV 304细胞的增殖具有抑制作用,而且此作用呈浓度依赖性。结论吡格列酮对ECV 304细胞具有浓度依赖性的抑制增殖作用。     

苦参碱对人HepG2细胞与人ECV304细胞的增殖抑制活性比较研究

目的:研究苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响.方法:购买纯度高达99％的苦参碱纯品,通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察苦参碱时人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响.结果:MTT实验和生长曲线实验显示在不同浓度苦参碱作用不同时间后,人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为487.86μg/ml和1815.34μg/ml,且呈剂量、时间依赖性.HE染色后人肝癌HepG2细胞实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显.结论:苦参碱可抑制人肝癌HepG2细胞生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用较弱.     

人白介素18(IL-18)插入突变体抗血管新生作用的研究

目的构建IL-18的定点突变体,并研究其对血管新生的抑制作用。方法利用基因重叠延伸剪接技术,在人白细胞介素18(IL-18)的cDNA序列中插入一个GGC序列,使IL-18第39位精氨酸和第40位天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基,从而构建了RGD模体。将此cDNA序列构建入表达质粒pPIC9K,并在酵母PichiaPastorisGS115中得到高效表达。结果IL-18-RGD仍保存对PBMC诱导产生IFN-γ能力外,对ECV304细胞的增殖(IC50=7.80μmol/L)和对ECV304向Fn的黏附均具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖关系;而野生型IL-18对ECV304细胞向Fn的黏附则没有作用。结论与野生型IL-18相比,IL-18-RGD增加了抗血管生成作用,从而增强其抗肿瘤能力。     

T-7-RGD肽对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)的影响

目的:研究改造后肿瘤抑素7肽(T-7-RGD肽)对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响.方法:采用生物合成技术合成了T-7-RGD肽,高效液相和质谱分析显示纯度为98.67％;通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察T-7-RGD肤对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响.结果:由MTT实验和生长曲线实验得出,人非小细胞肺癌细胞A549和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为150.34μg/ml和420.81 μg/ml,且呈剂量、时间依赖牲.T-7-RGD肽对A549作用明显,改变了其生长曲线的基本走势,而对人脐静脉内皮细胞只是产生了数量上的改变,生长曲线基本走势没有改变.HE染色后人非小细胞肺癌A549实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显.结论:T-7-RGD肤可抑制人非小细胞肺癌细胞A549生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用不明显.     

芸香宁碱抑制血管生成作用的研究

目的：研究芸香宁碱对血管生成的抑制作用,并研究其初步的作用机制。方法用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的生长、迁移实验及体内动物模型－鸡胚绒毛尿囊膜法（CAM 法）研究化合物的体内外抗血管生成作用;用酶联免疫吸附法检测芸香宁碱在非凋亡剂量时对肿瘤细胞培养上清液中 VEGF 蛋白分泌量的影响。结果芸香宁碱对血管内皮细胞具有优先抑制作用,对 HUVEC 的半数抑制剂量为（33．2±0．4）μmol·L －1,而对其他肿瘤细胞的 IC50值均大于这一数值;芸香宁碱在体外能够明显抑制内皮细胞的迁移和对细胞外基质黏附作用,并呈剂量依赖性,体内实验显示30μmol·L －1剂量浓度时显著抑制 CAM新生血管形成;芸香宁碱在15μmol·L －1和30μmol·L －1的浓度剂量时显著抑制人肝癌 HepG2细胞培养上清液中VEGF 蛋白的分泌,具有显著性差异。结论芸香宁碱在非凋亡浓度剂量具有抑制新生血管形成作用,其机制与抑制血管内皮细胞增殖以及抑制肿瘤细胞表达 VEGF 有关。     

多肽AP25抗肿瘤活性研究

目的 研究多肽AP25在组织水平和整体动物水平的抗肿瘤作用,为临床试验提供依据.方法 采用大鼠动脉环和鸡胚尿囊膜实验检测AP25对血管新生的抑制作用,采用动物体内实验评价AP25抗肿瘤活性.结果 大鼠动脉环实验表明多肽AP25可以抑制大鼠动脉环微血管生成,并且在0.25 mg·L-1时抑制率达到62.19%;鸡胚尿囊膜实验表明多肽AP25对血管新生有明显的抑制作用,且具有剂量依赖关系,20 mg·L-1抑制率达到80.37%;动物体内实验表明多肽AP25在裸鼠移植瘤模型上可以明显地抑制HCT116细胞的生长.结论 多肽AP25对新生血管具有明显的抑制作用,主要通过抑制新生血管达到抑制肿瘤的生长,进而发挥抗肿瘤的活性.     

阿司匹林对胃癌细胞株的作用研究

目的观察阿司匹林对人胃癌细胞株SGC7901生长及人胃癌裸鼠移植瘤生长的作用,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响;建立人胃癌裸鼠移植模型,给予阿司匹林30天,观察肿瘤大小。结果阿司匹林对胃癌细胞的增殖具有抑制作用,且呈一定的时间和剂量依赖性;阿司匹林对裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用。结论阿司匹林对胃癌细胞及裸鼠移植瘤均具有一定的抑制作用,其机制可能是通过环氧化物水解酶（COX）途径生成的相关因子抑制新生血管而起作用。     

白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用

目的比较白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用。方法白藜芦醇和紫檀芪5～50μmol·L-1分别与小鼠黑色素瘤细胞B16F1和内皮细胞ECV304作用48 h,再分别用磺基罗丹明B染色法测定细胞增殖率。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1与细胞作用48 h,用划痕实验评价B16F1和ECV304细胞体外迁移能力,用明胶酶电泳和ELISA测定B16F1细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)的活性和含量。用重建基底膜法观察白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用24 h对ECV304细胞拟管腔形成的抑制作用。结果白藜芦醇和紫檀芪作用48 h均能显著抑制B16F1和ECV304细胞增殖,抑制B16F1细胞增殖的IC50分别为119.7μmol·L-1和37.3μmol·L-1,抑制ECV304细胞增殖的IC50分别为72.2μmol·L-1和37.2μmol·L-1。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用48 h,B16F1细胞愈合率分别为58.0%和36.8%,ECV304细胞愈合率分别为61.8%和28.9%,明显低于正常对照组的67.7%和88.4%(P<0.01),而且紫檀芪组明显低于白藜芦醇组(P<0.01)。与正常对照组相比,白藜芦醇和紫檀芪10μmo·L-1作用48 h使B16F1细胞MMP-2蛋白表达分别降低7.4%和13.9%(P<0.01),MMP-2活性分别降低19.3%和78.9%(P<0.01)。白藜芦醇和紫檀芪作用24 h均可使ECV304细胞管腔样结构破坏,且紫檀芪的作用较白藜芦醇更加明显。结论白藜芦醇和紫檀芪均具有抑制B16F1和ECV304细胞增殖和转移的作用,并能抑制ECV304细胞拟管腔形成;浓度为10μmol·L-1时紫檀芪的抑制作用强于白藜芦醇。     

重组人可溶性血管内皮细胞

血管内皮细胞生长抑制因子（Vascular Endothelial GrowthInhibitor,VEGI）是从人脐静脉内皮细胞（HUVEC）cDNA文库筛选到的一个TNF超家族新成员。为研究重组可溶性人VEGI对新生血管形成抑制活性,检测了重组可溶性人VEGI对建株人脐静脉内皮细胞（ECV304）增殖抑制活性以及对兔角膜诱生血管、鸡胚尿囊膜（CAM）血管的抑制活性。表明可溶性人VEGI可以直接抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制兔角膜诱生血管、CAM血管形成。VEGI是一种新的血管内皮细胞生长抑制因子,强烈抑制新生血管形成,有望应用于肿瘤的治疗。     

腺病毒介导的TSP1f基因转移对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响

目的探讨腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白1（TSP1）抗血管新生衍生物（TSP1f）基因转移对人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响。方法应用RTPCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP1f cDNA序列构建TSP1f重组腺病毒（ADV-TSP1f）;Western blot方法检测ADV-TSP1f介导TSP1f在K562细胞中的表达;台盼蓝拒染检测经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基对ECV304细胞增殖的抑制作用。结果K562细胞经ADV-TSP1f感染可高效表达／分泌TSP1f多肽;经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基可显著抑制ECV304细胞增殖,以ADV-LacZ及PBS作对照,抑制率分别为51．6％和53．8％。结论ADV-TSP1f可显著抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖,可望成为有效的恶性肿瘤血管新生抑制剂。     

重组人内抑素的抗肿瘤活性

目的观察重组人内抑素抗肿瘤活性及对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法用人癌裸鼠移植性肿瘤及小鼠移植性肿瘤模型对重组人内抑素进行抗肿瘤药效学观察,用MTT法观察其对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果重组人内抑素,可明显抑制人胃癌BGC803和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长,对小鼠肝癌H22实体瘤亦呈一定的抑制作用。MTT试验结果显示重组人内抑素可抑制人胎脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖,对人结肠癌HCT-8等肿瘤细胞的增殖无影响。结论重组人内抑素具有较强的抗肿瘤作用,其作用机理可能与抑制血管内皮细胞增殖、抑制肿瘤新生血管形成有关。     

氧化吲哚类化合物Z24抑制ECV304细胞增殖及迁移的实验研究

目的探讨氧化吲哚类化合物Z24对血管内皮细胞增殖及迁移的抑制作用.方法利用3H-TdR掺入DNA方法来检测Z24对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响;扫描电镜方法测定Z24对细胞骨架系统的影响;体外细胞迁移实验测定它对内皮细胞迁移的抑制效应;用免疫沉淀几Western印迹法检测它对ERK信号通路的影响.结果Z24能抑制EGF刺激后ECV304细胞的增殖,能显著抑制ECV304的骨架形成;ECV304的迁移减少;p-ERK水平下调.结论Z24能够抑制血管内皮细胞的增殖和迁移.这种抑制效应可能阻断MAPK信号通路发挥作用的.     

哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响

目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。     

何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L^-1)或LPC与ST I共孵24 h，收集各组条件培养基，用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量；用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGF mRNA的表达及ST I的影响。结果ECV304细胞暴露于LPC后，VEGF蛋白分泌明显增加；加入ST I后VEGF蛋白含量明显降低; LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高, 并使VEGF165 mRNA的表达升高；ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达。结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGF mRNA，1×10^-5 mol·L^-1 ST I可抑制LPC的作用，降低VEGF的高表达。     

溶血磷脂酰胆碱对ECV304细胞中血管内皮生长因子表达的影响(英文)

目的:研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对内皮细胞(EC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:在人脐静脉内皮细胞株ECV04培养基中加入不同浓度的LPC,培养不同时间,用基础酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组EC条件培养基中VEGF蛋白含量;用免疫组织化学法检测EC中VEGF蛋白及其受体的表达;用原位杂交检测VEGF信使核糖核酸(VEGF mRNA)的表达。结果:培养的ECV304能表达VEGF受体,在胞浆内呈棕色颗粒,当LPC刺激后,阳性增强。原位杂交结果显示,培养的ECV304中未见VEGF mRNA的表达,当LPC刺激后可见VEGF mRNA的高表达,在胞浆内呈棕色颗粒。ELISA结果显示LPC可使ECV304条件培养基中VEGF蛋白含量明显增加,且具有时间和剂量依赖性。结论:LPC能诱导ECV304表达高水平的VEGF。 (责任编辑 吕静)     

Anti-inflammatory activities of aqueous extract from Radix Ophiopogon japonicus and its two constituents

To provide some pharmacological evidence for its clinical use in inflammatory diseases, anti-inflammatory effect of the aqueous extract from Radix Ophiopogon japonicus (ROJ-ext), a traditional Chinese herb, was examined in mouse and rat models. ROJ-ext significantly inhibited xylene-induced ear swelling and carrageenan-induced paw edema in mice when given orally at doses of 25 and 50 mg/kg. Moreover, ROJ-ext also remarkably suppressed carrageenan-induced pleural leukocyte migration in rats and zymosan A-evoked peritoneal total leukocyte and neutrophil migration in mice, while had no obvious effect on pleural prostaglandin E2 level. Furthermore, two active compounds were isolated from ROJ-ext and identified as ruscogenin and ophiopogonin D. As the results, ROJ-ext, ruscogenin and ophiopogonin D dose-dependently reduced phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA)-induced adhesion of HL-60 cells to ECV304 cells, with IC50 of 42.85 microg/ml, 7.76 nmol/l and 1.38 nmol/l, respectively. However, they showed no inhibitory effect on PMA-induced cyclooxygense-2 (COX-2) mRNA expression in ECV304 cells. Ruscogenin and ophiopogonin D also notably decreased zymosan A-induced peritoneal leukocyte migration, in comparison with ROJ-ext. These results demonstrate that ROJ-ext presents remarkable anti-inflammatory activity and ruscogenin and ophiopogonin D are two of its active components, which supported its traditional use in the treatment of various diseases associated with inflammation.     

五柱五桠果的化学成分及其体外抗肿瘤抗缺氧活性

目的 研究五柱五桠果的化学成分及其抗肿瘤抗缺氧活性。方法 利用各种色谱技术分离化学成分,根据理化性质与光谱数据鉴定结构,利用MTT法测试抗肿瘤活性。结果 从五柱五桠果果实中分离鉴定了白桦酸 (1)、白桦醇 (2)、羽扇豆醇 (3)、谷甾醇 (4)、没食子酸 (5)、没食子酸乙酯 (6)、原儿茶酸 (7)、原儿茶酸甲酯 (8)。化合物1~3、5和6对K562细胞增殖有抑制活性,其中1、2、5的作用较强,IC50分别为31 μg&;#8226;mL-1、29 μg&;#8226;mL-1、23 μg&;#8226;mL-1;3和6次之,在100 μg&;#8226;mL-1浓度下增殖抑制率分别为26.1 %和31.3 %。化合物5和6在无细胞毒的浓度下对 ECV304 细胞的缺氧损伤有保护作用。结论 化合物1~8系首次从该植物分离得到,其中1~3、5和6为该植物生物活性成分的首例报道。