种植期单次给予GnRHa增加胚胎的发育潜能[英]／Tesank J…／／Hum Repmd.

为证实黄体期由于疏忽给予GnRH激动剂(GnRHa)对于辅助生育的继续妊娠并无影响，对产妇进行前瞻性对照研究探讨GnRHa的影响。     

小鼠半克隆胚胎的发育潜能

目的:探索体细胞移入未去核成熟卵母细胞后单倍体化的能力。方法:直接把小鼠体细胞(卵丘细胞)注射入未去核的卵母细胞胞浆内。在注射后的不同培养时间,对重构卵予以Sr2+激活,观测第二极体和类极体的形成,同时对重构胚进行染色体计数,并将发育良好的重构胚进行输卵管移植。结果:核移植后不同培养时间进行Sr2+激活,其结果随着培养时间的增加,被激活的效率也随之增加。染色体正常的比例在重构胚中相当低(15.38%)。移植的58枚正常激活的重构胚,均未发生妊娠现象。结论:在小鼠半克隆过程中,体细胞正确单倍体化的能力很低,染色体分离异常,从而影响半克隆胚胎的发育潜力。     

影响冻融胚胎种植潜能的相关因素分析

目的:探讨冻融胚胎移植(FET)周期中影响胚胎种植潜能的相关因素。方法:回顾性分析165例进行冻融胚胎并实施单胚胎移植(SET)的患者,按患者年龄、冷冻前胚胎质量、冷冻方式、复苏后卵裂球存活状态、复苏后是否进行辅助孵化分组,分析不同分组各组间的胚胎种植能力差异。结果:年龄≥36岁组的胚胎种植率(17.4%)低于年龄<36岁组(26.1%),但两者比较无统计学差异;冷冻前胚胎质量评分≥20组的胚胎种植潜能优于胚胎质量评分<20组(29.4%vs13.0%,P<0.05);玻璃化快速冷冻法和程序慢速冷冻法对胚胎种植能力的影响无明显差异(25.6%vs24.6%,P>0.05);复苏后卵裂球完整存活的胚胎种植率为29.8%,优于复苏后卵裂球部分损伤者(13.7%)(P<0.05);激光辅助孵化对胚胎种植能力无明显影响(21.4%vs25.2%,P>0.05)。结论:冷冻前胚胎质量及冷冻后胚胎存活状态是影响冻融胚胎种植潜能的重要因素。     

胚胎自分泌IGF-Ⅱ对胚胎质量及其种植潜能的预测

目的 :探讨胚胎自分泌IGF II水平对胚胎质量及其种植潜能的预测价值。方法 :将小鼠 2 细胞期胚胎在四种不同培养条件下培养至囊胚期 ,在胚胎发育的 4～ 8细胞期及囊胚期分别测定微滴培养液中IGF II含量 ,观察两个时期培养液中IGF II水平与囊胚形成率和植入率之间的关系。结果 :①体内发育组胚胎IGF II水平均高于 3个体外培养组胚胎 (P <0 .0 5 ) ,序贯组IGF II水平也较共培养组和单纯培养组为高 (P <0 .0 5 ) ,单纯培养组最低 ;囊胚期分泌IGF II水平均高于 4～ 8细胞期。②两个时期IGF II含量与囊胚形成率和植入率均呈正相关。结论 :胚胎自分泌IGF II对胚胎质量及其种植潜能可能具有预测价值。     

小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球体外发育潜能的实验研究

目的:探讨小鼠4-细胞期胚胎的单卵裂球(4-cell stage mice embryo derived-blastomeres, 4c-MEDB)的全能性。方法:将小鼠4-细胞期胚胎分割产生单个卵裂球,在体外无透明带培养条件下,不加外源性细胞因子,观察其发育潜能及特性,并将得到的囊胚与正常囊胚进行形态学、免疫学鉴定比较,同时将4c-MEDB来源囊胚(individual blastomere derived-blastocysts,IBDB)移植到假孕母鼠子宫,观察其发育情况。结果:①体外无透明带培养条件下,4c-MEDB较正常胚胎发育滞后,囊胚获得率低;②4c-MEDB具有发育成为完整囊胚的潜能;③IBDB移植入假孕小鼠子宫后具有一定发育能力,能发育到原条期,但未获得足月妊娠。结论:在未添加外源性细胞因子的体外无透明带培养条件下,小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球具有发育为完整囊胚的能力,所获囊胚移植入假孕小鼠子宫后可以发育到原条期。     

人废弃胚胎单卵裂球体外发育潜能研究

目的:探讨体外受精治疗周期废弃胚胎来源的单卵裂球体外发育潜能。方法:收集21例患者授精培养后第3日不适于移植和冷冻的废弃胚胎共60枚,其中2-细胞期胚胎10枚,3-细胞期胚胎8枚,4-细胞期胚胎26枚,5-细胞期胚胎12枚,6-细胞期胚胎4枚。采用化学法去除透明带并分割胚胎获得单卵裂球,继续体外培养,每24h观察卵裂球发育情况。结果:60枚胚胎共获得229枚单卵裂球。以分割取得单卵裂球日作为第1日(d1),继续培养,其发育似乎遵循d2分裂、d3紧密化、d4出现囊胚腔、d5扩张,延续分割前的程序,但提前进入紧密化期,致使囊胚细胞数少,囊胚期体积亦比正常胚胎小。其中,4-细胞期废弃胚胎来源的卵裂球分裂率、紧密化率、囊胚形成率显著高于来自其它细胞数的单卵裂球(P<0.05),且其大部分内细胞团(ICM)细胞的碱性磷酸酶(AKP)表达呈阳性。结论:废弃胚胎来源的单卵裂球能在体外继续发育至囊胚,发育潜能与供体胚胎发育质量密切相关,其发育似乎延续原有供体卵裂球的节律,而形成囊胚所需时间明显缩短,细胞数亦明显减少,但囊胚ICM细胞显示AKP阳性,深信其利用价值会得到进一步证实。     

人类胚胎源性hCG与胚胎发育潜能和种植

人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)是一种早期胚胎滋养球细胞和胎盘滋养层合体细胞分泌的、由α及β2个亚基以非共价健结合的糖蛋白激素。本研究发现在受精后第3日70.8%(34/42)和第5日98.1%(53/54)的单个胚胎培养液中均可检测到胚胎源性hCG,其浓度与第5天囊胚评分呈正相关(r=0.525,P<0.001)。胚胎源性hCG妊娠组显著高于非妊娠组,分别为2.110±0.435 mIU/ml及1.706±0.445 mIU/ml(P=0.044),提示培养液中胚胎源性hCG水平与胚胎发育、评分及着床潜能正相关。     

极体和卵裂球结合活检不会影响胚胎的发育潜能

~~极体和卵裂球结合活检不会影响胚胎的发育潜能@陆小溦     

卵裂期活检对胚胎体外发育能力的影响

目的　探讨不同的活检方法、活检时机和活检细胞数对胚胎体外发育能力的影响。方法　选取体外受精 胚胎移植剩余的形态学分级为Ⅰ级的胚胎 1 54个 ,对其中第 1阶段的 66个胚胎分别行化学法 (2 6个 )、机械法 (2 0个 )取出 1个卵裂球 ,并设对照 (2 0个 ) ;对第 2阶段的 88个胚胎分为用化学法取出 2个卵裂球 (44个 )和对照 (44个 )。观察记录活检时胚胎细胞数、活检时间、活检后卵裂球是否退化、活检后胚胎体外发育情况及囊胚总细胞数。结果　 (1 )化学法的活检时间为 (2 31±2 0 )s,明显短于机械法的 (2 62± 2 3)s(P <0 0 1 ) ;而囊胚形成率为 65 % ,高于机械法的 35 % (P<0 0 5)。(2 ) 6 细胞胚胎的囊胚总细胞数为 (44± 4)个 ,低于 7～ 8 细胞胚胎的 (49± 5)个和≥ 9 细胞胚胎的 (50± 6)个 (P <0 0 5) ;细胞融合的≥ 9 细胞胚胎活检后不仅囊胚形成率 (2 0 % )低于对照 (67% ,P<0 0 5) ,且活检后卵裂球退化率 (50 % )高于无细胞融合的胚胎 (1 7% ,P <0 0 5)。 (3)取出 1个或 2个卵裂球胚胎的囊胚形成率和囊胚总细胞数与对照比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5) ,而 6 细胞胚胎取出 2个卵裂球后囊胚形成率 (1 /8)低于对照 (5/8,P <0 0 5)。结论　化学法活检比机械法更为快速、安全 ;合适的活检时     

应用time-lapse技术探讨7～10细胞D3优质胚胎的发育潜能

目的:探讨人体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中第3天细胞数目为7、8、9、10优质胚胎的发育潜能。方法:选取2014年11月至2015年10月于山东大学附属生殖医院行IVF-ET患者的D3(授精后第三天)胚胎,利用time-lapse(延时摄像)技术分析7~10细胞优质胚胎的早期分裂行为,进而探讨胚胎早期分裂行为对囊胚形成率和临床结局的影响。结果:(1)四种细胞数胚胎早期的分裂行为不同:大多数8细胞胚胎为发育正常(NB)的胚胎;9细胞和10细胞中发生直接分裂(DC,一种异常分裂)的胚胎比例高于发育正常胚胎;所有7细胞胚胎均存在异常分裂,其中主要为逆分裂(RC,一种异常分裂)和同步分裂延迟(t8-t5,S3,胚胎由5细胞分裂为8细胞的时间)。(2)与NB相比,每一种异常分裂(DC,RC,S3)的发生均不同程度降低了胚胎的发育潜能。(3)四种细胞数胚胎的发育结局显示,8细胞胚胎有最高的囊胚形成率和胚胎着床率,其次为9细胞和10细胞胚胎,7细胞胚胎的囊胚形成率和着床率最低。结论:7、8、9、10四种细胞数胚胎早期发育过程中异常分裂的类型和所占比重不同,最终导致其发育潜能的差异。8细胞胚胎的发育潜能最高,其次为9细胞和10细胞胚胎,7细胞胚胎发育潜能最低。     

卵裂期发育延缓胚来源的人类胚胎干细胞系的建立

目的观察体外受精（IVF）周期中24h内不发生卵裂的第3天（D3）发育延缓胚的体外发育潜能,为建立人胚胎干细胞库提供新的材料来源。方法通过囊胚序贯培养法将卵裂期发育延缓胚培养至囊胚,观察囊胚形成率及囊胚质量。用逐步logistic回归分析囊胚形成率与卵裂球数、卵裂球对称性及卵裂球碎片比率的相关性。用免疫外科法去除滋养细胞,将得到的原代克隆接种于小鼠胚胎成纤维细胞上,体外传代并鉴定。结果120枚卵裂期发育延缓胚培养出囊胚22枚（囊胚形成率18．7％）。第6天早期囊胚、囊胚、满囊胚、扩张胚、孵化胚及孵化后囊胚的比率分别为5．9％、23．5％、35．3％、23．5％、5．9％及5．9％。内细胞团分级及滋养外胚层分级均仅有1个为A级,其余均为B或C级。发育延缓胚的囊胚形成率与卵裂球数、卵裂球对称性相关,而与卵裂球碎片比率无关。获得内细胞团7个,原代克隆3个,成功培养出2株人类胚胎干细胞系（hESC）,并具有hESC的生物学特性：碱性磷酸酶（AKP）、阶段特异性胚胎抗原（SSEA）4、肿瘤排斥抗原（TRA）1-60、TRA-1-81呈阳性;悬浮培养可形成拟胚体;在严重免疫缺陷（SCID）小鼠体内可形成畸胎瘤;分别传45及35代后核型正常。结论部分发育延缓胚可以发育为囊胚,从而可为建立人胚胎干细胞系提供新的材料来源。     

超排卵对小鼠胚胎着床潜能的影响

目的:比较超排卵对小鼠胚胎着床潜能的影响。方法:建立超排卵周期胚胎和自然周期胚胎受体妊娠小鼠模型,比较妊娠率和胚胎着床率的差异。结果:超排卵周期受体组的妊娠率(20.00%)和胚胎着床率(8.33%)显著低于自然周期组的妊娠率(55.00%)和胚胎着床率(35.00%)。结论:超排卵可能降低胚胎的着床潜能。     

诱发排卵前给予GnRHa时间的长短并不影响卵巢对GnH的反应性

GnRHa诱发排卵的作用依赖于开始给药的时间,在刺激周期早卵泡期给药,GnH分泌骤增,对卵泡募集和发育有益;于上周期的黄体期开始给药,则会导致功能性低GnH性腺功能低下状态(降调节),这使开始诱发排卵的时间有很大的伸缩性。GnRHa降调节对下个周期诱发排卵中卵巢反应性的影响问题一直未得解决,本文就此问题进行探讨。 在18个月内对165名年龄<40岁,CC反应正常且已证实有排卵周期妇女进行助孕治疗。在诱发排卵前于黄体期开始用Leuprolide acetate(LA)1mg/日Sc,LA的预治疗期限各患者不一致,有     

ICSI后通过对原核简单、无损伤的形态学评估确定具有高度种植潜能的胚胎

研究包括380个ICSI周期,ICSI后14～17小时检查原核,形态学参数包括核仁前体的数量(NPB)及其在每个原核的分布(有极性或无极性),具有下列特征的被认为是“O”型受精卵;①2个原核的NPB数量相差不超过3个;②2个原核中的NPB分布(随机或有极性)是相同的;③每个原核至少有3个NPB。在观察中需要调整焦点直到观察到所有原核,观察前要转动受精卵,保证能清楚地看到2个原核,原核的重叠会阻碍观察NPB的数目和分布。ICSI后2天进行胚胎移植,胚胎的选择按照传统标准即卵裂速度和形态,上述的观察结果不被考虑,优质胚胎标准为细胞大小均匀一致,细胞碎片<10％,细胞胞质清亮、无颗粒。超声下宫腔内可见胎囊并有胎心跳动被认为临床妊娠。     

冷藏不影响人受精卵的发育潜能

有人认为,如数个卵同时受精,人胚冷藏能增加不孕夫妇通过体外授精—胚胎移植(IVF-ET)而妊娠的机会。然而冷藏的存活率至今仍很低,大概因为低温保护剂影响冻融后胚胎的成活率,或因其(甘油)仅适用于体外培养中存活4～5天胚胎。作者选择1,2-丙二醇作为低温保护剂,对1～2天胎龄胚的冷冻获得了满意的结果,使IVF周期中受精卵均能耐受冻融过程。为了选择生命力强的胚胎,以便立即移植到宫腔中或为以后移植备用冷冻,需要了解预定冻融受精卵的发育潜能与新鲜胚胎移植所得结果的比较。为此,作者比较了120个IVF周期所得的胚胎经冻     

人类卵裂期胚胎sHLA-G表达与种植率和妊娠率的关系

目的:定量测定卵裂期胚胎可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)的表达,探讨sHLA-G分泌与胚胎种植率、妊娠率的关系。方法:收集40例体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80份胚胎培养液样本,用ELISA法定量检测样本中sHLA-G的表达。结果:80份胚胎培养液样本中有35份sHLA-G表达阳性(≥2U/mL),阳性率43.8%,表达阳性组的平均含量为4.68±1.29U/mL;40例患者中27例至少1个移植胚胎培养液中sHLA-G表达阳性,19例妊娠,妊娠率70.4%(19/27),所有患者均移植2枚胚胎,种植率46.2%(25/54);sHLA-G表达阴性(<2U/mL)的13例患者中3例妊娠,妊娠率23.1%(3/13),种植率15.4%(4/26),两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:胚胎培养液中sHLA-G含量与胚胎种植率、妊娠率有关,可用于预测胚胎的发育潜能,将sHLA-G表达水平结合形态学评分可作为选择胚胎的一种临床工具。     

胚胎停止发育病因与机制的研究进展

胚胎停止发育包括生理性和病理性两种,生理性胚胎停止发育是可逆的正常进化过程,病理性胚胎停止发育则可引起胚胎死亡,最终导致流产。病理性胚胎停止发育的病因与机制十分复杂,国内外研究表明它与感染、免疫、内分泌、遗传、子宫病变等多种因素相关,其机制尚不十分明确,进一步研究病理性胚胎停止发育的病因与机制可能有助于监测胚胎停止发育的发生与及早治疗。