人巨细胞病毒p52蛋白基因的克隆及表达

目的制备人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ｐ５２蛋白特异性抗原。②方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｐ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱分析法筛选阳性克隆，经温控诱导其表达。③结果重组克隆能有效表达天然蛋白ｐ５２，ＥＬＩＳＡ检测重组ｐ５２蛋白具良好的抗原特异性。④结论通过基因工程制备的重组ｐ５２蛋白可作为ＨＣＭＶ血清学诊断的良好抗原。     

人巨细胞病毒活动性感染的分析

目的：调查人类巨细胞病毒（HCMV）活动性感染人群的分布及流行病学特征，为预防和诊治HCMV活动性感染提供证据。方法：用ELISA法测定血清中HCMV活动性感染的特异性抗体HCMV-IgM，并对HCMV-IgM检测人群进行分析。结果：90例健康人群血清HCMV活动性感染率为0，5315例孕妇血清HCMV-IgM检测中有303例为阳性，HCMV活动性感染率平均为5.70%,但孕妇HCMV活动性感染率有逐年下降趋势；51例不明原因的黄疸患者，16例器官移植患者、3例发热待查患者，HCMV活动性感染率分别为3.92%，12.5%。结论：移植患者、孕妇、不明原因的黄疸患者易受HCMV活动性感染，临床上应将其作为高危人群常规筛查HCMV-IgM。     

检测人巨细胞病毒抗原的原位免疫PCR技术

目的：建立用于诊断ＨＣＭＶ活动性感染的原位免疫ＰＣＲ方法。方法：ＨＣＭＶ ＡＤ１６９株感染的人胚肺成纤维细胞或先天畸形胎儿肾组织石蜡切片,依次加入抗ＨＣＭＶ单抗,生物素化二抗,链霉亲合素以及作为指示元件的生物素化ＤＮＡ,随后进行原位ＰＣＲ扩增,经酶显色反应判断结果。结果：应用本法检测ＨＣＭＶ感染的细胞可于感染后８ｈ清晰检出阳性信号;检测先天畸形胎儿肾组织ＨＣＭＶ感染,阳性率显著高于免疫组化法。结论     

孕妇及新生儿感染人巨细胞病毒的检测和临床意义

孕妇感染人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）后，可造成流产、早产、死胎、胎儿宫内发育迟缓、婴儿先天畸形及新生儿病毒性肝炎等。采用ＥＬＩＳＡ法对５５例孕妇及其新生儿进行巨细胞病毒特异性ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体检测。结果表明孕妇血清ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体阳性率分别为２７．３％和９４．５％；新生儿脐血ＩｇＭ和ＩｇＧ阳性率分别为１０．９％和４５．５％；异常产儿６例中其母亲ＨＣＭＶ特异性ＩｇＭ抗体均为阳性，表明孕妇有ＨＣＭＶ近期感染对新生儿有一定影响。     

人巨细胞病毒p52蛋白基因的克隆及表达

制备人巨细胞病毒Ｐ５２蛋白特异性抗原。方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶＰ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆表达载体ＰＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱分析法筛选阳性克隆，经温控诱导基表达。     

人巨细胞病毒IE1真核表达载体的构建与表达

目的构建人巨细胞病毒（HCMV）IEl真核表达载体，观察其在真核细胞内的表达，为HC—MVIEl核酸疫苗的相关研究奠定基础。方法将质粒pNEBl93-IEl用Sal I、BamH I双酶切与载体pEGFP—C1连接构建重组载体pEGFP—C1-IEl；双酶切鉴定后，取重组载体pEGFP—C1-IEl用EcoR I 、Hind Ⅲ／双酶切与载体pcDNA3．1（-）连接构建重组质粒pcDNA3．I（-）-IEl，双酶切和测序鉴定；将重组质粒pcDNA3．1（-）-IEl转染HeLa细胞，RT—PCR检测IElmRNA的表达。结果重组载体pEGFP—C1-IEl和pcDNA3．1（-）-IEl双酶切后均可切出约1476bp目的片段；重组载体pcDNA3．1（-）-IEI测序结果登录C,enBank，作BLAST分析，含有1476bp目的基因片段，无碱基错配和移码突变，与读码框完全-致；转染重组载体pcDNA3．1（-）-IEl的细胞中可扩增出约1476bp的目的条带。结论成功地构建了真核表达载体pcDNA3．1（-）-IEl，且其能在真核细胞内袁达。     

人巨细胞病毒特异性IgM和IgA检测

人巨细胞病毒(HCMV)是人类普遍易感的病毒之一,是导致各种先天性胎儿畸形的主要病毒,有些受感染胎儿在出生时虽无症状,但在学龄前可出现智力降低、神经和精神性运动并发症,严重危害儿童身体健康,作者采用间接ELISA法对88例正常孕妇和94例患儿活动性CMV感染情况进行调查研究,现将初步研究结果报告如下。     

人巨细胞病毒pp150基因的原核表达及抗原性分析

①目的 构建人巨细胞病毒（HCMV）PP150的原核高效表达系统，制备用于急性，活动性HCMV感染血清学诊断的基因工程抗原。②方法 PCR扩增HCMV PP150抗原决定簇（840-1048aa）编码基因片段，分别插入原核表达载体PMAL-p2,pet-28a，转化宿主菌E.coli.诱导表达，经麦芽糖亲和层析树脂纯化，以WesternBlot及间接ELISA法鉴定及其抗原性。③结果 重组表达质粒PMAL-P2-PP150可在E.coli.5DH5a中有效表达，表达产物经SDS-PAGE电泳后，凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为6.4万，约占菌体蛋白的10%。而重组质粒pET-28a-pp150未见明显表达带，Western-Blot检测，阳性识别率为80%（12/15）。用此蛋白包被ELISA板，检测正常孕妇血清，阳性率为6.5%(17/263)。与本室制备的全病毒抗原的ELISA的诊断符合率为96%。④结论此重组蛋白具有良好的抗原性，进一步完善后可用于HCMV急性和活动性感染的诊断。     

尿素酶基因在枸橼酸杆菌中的表达

目的:研究尿素酶基因在枸橼酸杆菌中的表达情况.方法:通过PCR检测枸橼酸杆菌中是否存在尿素酶基因,而后运用尿素酶诊断试剂对其是否表达进行分析.结果:39株实验枸橼酸杆菌的尿素酶基因均为阳性,只有5株菌株尿素酶表达为阳性.结论:尿素酶基因阳性的枸橼酸杆菌不一定都能表达尿素酶.     

TTV病毒ORF1抗原的基因克隆及原核表达

目的 扩增和克隆TTV-ORF1 DNA,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达.方法 从TTV病毒感染者外周血中提取DNA,用PCR从中扩增出TTV-ORF1 DNA,插入载体pGEM-T Easy中;测序正确后,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-4T-1-ORF1,转化大肠杆菌BL21株进行表达.结果 成功获得TTV-ORF1编码基因并构建原核表达载体,测序结果与GenBank收录序列相一致.诱导表达得到51kD的TTV-ORF1融合蛋白,占细菌总蛋白量的27.2%.Western blot证实为目的蛋白.结论 成功获得TTV-ORF1 DNA,构建得原核表达载体并获得高效表达.为TTV的ELISA检测和疫苗提供抗原.     

冠心病与巨细胞病毒初期感染的相关性研究

目的探讨人类巨细胞病毒初期感染与冠心病发生发展的关系。方法用捕获ELISA法检测血清HCMV—IgM,酶法检测血脂4项,免疫比浊法检测C-反应蛋白（CRP）,并进行比较。结果冠心病组（61例）、健康对照组（44例）和其他疾病组（48例）的HCMV—IgM阳性率分别为8．20％、2．27％和4．17％,冠心病组与对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;冠心病组血脂4项和CRP均高于健康对照组,有统计学差异（P〈0．05）。结论尚不能认为冠心病与巨细胞病毒初期感染有关。     

胰岛素前体基因克隆及其原核表达载体的构建

目的：构建胰岛素前体基因的原核表达载体。方法：以重叠PCR方法扩增获得胰岛素前体基因片段,并将片段克隆入zero pCR4 Blunt-TOPO载体内,获得胰岛素前体中间载体;随后将胰岛素前体克隆到Pet23表达载体中。结果：双酶切鉴定结果显示,成功构建了胰岛素前体基因的原核表达载体。结论：本实验成功构建了胰岛素前体基因的原核表达载体,为后续实现大规模的实验室表达和胰岛素的工业化生产奠定了坚实的基础。     

人可溶性gp 130(sgp 130)分子的克隆与表达

在成功克隆表达人膜型gp130分子的基础上，构建人可溶性gp130的重组表达质粒pKCR5／sgp130，并在CHO细胞中进行表达．经纯化鉴定和生物学检测，证实所表达的sgp130具有生物学活性．     

胺碘酮对家兔在体心脏心室复极及复极离散度影响的研究

为探讨胶碘酮抗心律失常的细胞电生理机制，采用同步记录心室外股不同部位单相动作电位的方法，观察健康家兔静注胶碘酮前后心室复极及复极离散度的变化。结果显示：胺碘酮对正常心肌可延长心室复极，但对其复极离散度则无显著影响。结论：胺碘酮能同步均一地延长心室复极，可以提高心电稳定性。     

苦参查尔酮异构酶的基因克隆与表达分析*

目的为明晰苦参查尔酮异构酶（sfCHI）的结构基因信息及其在苦参黄酮类化合物生源路径中的表达调控机理。方法 本实验以苦参为研究对象,基于其转录组学数据,克隆sfCHI基因并针对该cDNA序列展开生物信息学分析,采用半定量PCR方法检测安徽产苦参不同组织中sfCHI基因表达情况。结果 结果显示苦参sfCHI基因的cDNA序列长度为1 265 bp,含有630 bp的开放式阅读框(ORF),编码209个氨基酸;序列分析表明sfCHI与狭叶羽扇豆查尔酮异构酶基因相似性最高,达89.95%;进化树分析该基因与大豆、野大豆等植物的亲缘关系较近;半定量PCR结果显示sfCHI基因在苦参根中表达量最低,在叶、叶柄与茎中的表达未见明显差异。结论 本研究通过对苦参查尔酮异构酶的基因克隆与不同组织间的表达分析,初步明确了该基因的序列信息与理化特征,这对进一步研究苦参黄酮类物质生物合成机制将起到积极的推动作用。     

恶性疟原虫Pf332基因片段的克隆及表达

【目的】构建含恶性疟原虫Pf332抗原基因片段的重组质粒 ,并检测在大肠杆菌BL2 1/DE3中的表达情况。【方法】应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pf332基因 (Pf332 )片段 ,P332 R0、P332 R1、P332 R2 ,并分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,阳性克隆的重组质粒DNA经酶切及PCR扩增鉴定。用DNAstar软件对FCC1/HN株与 3D7株Pf332的P332 R1、P332 R2片段进行同源性比较。由IPTG诱导在大肠杆菌BL2 1/DE3中表达重组蛋白。【结果】PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf332片段 ,P332 R0、P332 R1、P332 R2 ,大小分别为 489、42 9和 393bp。酶切及PCR鉴定获得了正确的 pGEX P332 R0、pGEX P332 R1、pGEX P332 R2重组质粒。序列分析结果显示 ,与 3D7株相比 ,FCC1/HN株P332 R1、P332 R2片段编码多肽分别缺少 2、4个相应的重复单元。在大肠杆菌BL2 1/DE3中表达出 3个重组蛋白 ,相对分子质量分别为 46、44和 42。【结论】扩增、克隆了恶性疟原虫Pf332片段 ,P332 R0、P332 R1、P332 R2 ,并在大肠杆菌BL2 1/DE3中成功表达。FCC1/HN株与 3D7株的P332 R1、P332 R2片段编码多肽所包含的重复单元数目不同。     

婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较

目的:探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测,其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果:血和尿HCMV DNA同时检测,尿检出率明显高于血;血和尿HCMVDNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论:两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本,采用尿标本更方便,且阳性率高。     

大肠杆菌色氨酸酶基因的克隆与表达

应用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０５中扩增出长约１．４Ｋｂ的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体ｐＥＴ３ａ的ＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩ位点,转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）,构建高产色氨酸酶基因工程菌。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和薄层扫描表明,工程菌色氨酸酶的表达量占细胞总可溶性蛋白的６９．８％。酶活测定结果表明,７株工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高,其中ＷＷ－１１号比宿主菌高１６倍。