Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

姜黄素单体影响肝癌BEL-7402细胞凋亡及其周期蛋白D表达的研究

目的 采用细胞学实验观察3种姜黄素单体对肝癌细胞株BEL-7402的抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用强度和机制.方法 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Annexin Ⅴ-FITC双标记及流式细胞术(FCM)实验观察3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用与细胞周期变化,采用 Western blot实验分析3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402细胞周期蛋白D表达的影响.结果 (1)3种姜黄素均可通过诱导肝癌细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞生长增殖,存在时间与剂量效应,以姜黄素Ⅲ抑制效果最强.(2)3种姜黄素通过影响细胞周期生长的调控信号、降低细胞周期蛋白D表达量致使肝癌细胞停滞于G1/S期.结论 3种姜黄素均可通过抑制肝癌细胞周期蛋白D表达而诱导细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长增殖,具有很高的临床治疗价值.     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL－7402,从多个角度探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透谢电镜、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组BEL－7402细胞的存活。形态学改变,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0.5、1、2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株BEL－7402细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0／G1期细胞减少,S期细胞增多;电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器, 0.5、1、2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡。     

人参皂苷肠道代谢物诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的探讨一种新的人参稀有皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH-901)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法以0、6.25、12.5、25、50、75、100μmol/L的IH-901作用于体外培养的BEL-7402细胞,通过MTT法检测IH-901对细胞生长的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB的荧光核染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果MTT实验显示IH-901抑制BEL-7402细胞的生长,呈时间及浓度依赖的方式;显微镜下观察到典型的凋亡形态变化和生化特征:细胞固缩,核染色质凝聚,出现凋亡小体;AO/EB的荧光核染色后,观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在G0/G1期。结论IH-901能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,稀有人参皂苷IH-901可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

利用流式细胞术研究榄香烯对肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3的抗肿瘤作用

采用小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3,利用流式细胞术(Flowcytometry,FCM)研究了榄香烯对肿瘤细胞的作用、对Hca-F25/CL-16A3细胞周期的影响、DNA含量的分析以诱导细胞凋亡.结果表明:榄香烯可以明显抑制Hca-F25/CL-16A3细胞的增殖,有效地杀伤肿瘤细胞;榄香烯对GO/G1期细胞无明显作用,主要作用于S期,阻止由S期进入G2/M期,从而抑制肿瘤生长;可在GO/G1期前出现一个凋亡特异的AP峰.     

硒蛋氨酸对食管癌细胞株环氧合酶-2表达影响

目的:探讨硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC9706环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:采用MTT比色法、细胞生长曲线描绘观察硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC9706增殖的影响,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA ladder,细胞免疫化学方法检测EC9706COX-2的表达。结果:硒蛋氨酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增殖,抑制食管癌细胞系EC9706COX-2的表达,诱导细胞凋亡。结论:硒蛋氨酸可能通过抑制食管癌细胞系EC9706COX-2的表达从而抑制EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

低氧诱导对人肝癌SMMC7721细胞生物学行为的影响

目的研究低氧对体外培养的人肝癌细胞株SMMC7721增殖、细胞周期、凋亡和黏附、迁移能力的影响,探讨其中可能存在的分子机制.方法通过氯化钴诱导人肝癌SMMC7721细胞低氧,MTT法、流式细胞术、细胞黏附试验、transwell小室迁移实验观察低氧对肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期以及细胞黏附和迁移能力的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测低氧对细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP2）mRNA和蛋白表达的影响.结果 MTT法显示氯化钴诱导的低氧对肝癌细胞生长起抑制作用;低氧24 h,流式细胞术显示细胞凋亡、坏死增加,细胞周期G0/G1期、S期细胞比例减少,G2/M期比例增加;黏附试验显示低氧后细胞黏附力增强（P〈0.01）,transwell小室实验显示,低氧后细胞迁移能力较常氧时明显增加（P〈0.05）;RT-PCR和细胞免疫化学检测显示低氧条件下HIF-1α、VEGF、MMP2的mRNA和蛋白表达均较常氧时增加（P〈0.05）.结论氯化钴诱导低氧可抑制SMMC7721细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡、坏死增加,同时细胞黏附、迁移能力增强;低氧时HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,并通过调节及其下游靶基因VEGF、MMP2的表达参与了这一生物学行为的转变.     

亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖的影响

目的：研究亚硒酸钠对SGC-7901增殖的影响.方法： 应用集落形成试验研究了亚硒酸钠对SGC-7901细胞集落形成的影响;应用流式细胞仪检测了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长周期的影响;应用电镜及流式细胞仪观察了亚硒酸钠诱导SGC-7901细胞凋亡的作用.结果： 亚硒酸钠对SGC-7901细胞的集落形成有明显的抑制作用,其抑制作用与其作用浓度和作用时间呈正相关.流式细胞仪检测显示亚硒酸钠作用SGC-7901细胞24 h后,细胞周期发生改变,G1期细胞百分率减少,S期细胞百分率增加,DNA直方图上出现典型的亚二倍体细胞的“凋亡峰”;电镜下可见细胞核固缩,染色质凝集呈新月形紧贴于核膜周边,核膜扭曲等特征.结论： 亚硒酸钠对SGC-7901细胞的增殖具有抑制作用,抑制作用程度与作用浓度和时间呈正相关;亚硒酸钠抑制SGC-7901细胞生长的机理之一是诱导细胞凋亡.     

白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果:ChR40μmol/L、rhsTRAIL 100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%。ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。     

榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用及下调Bcl—2蛋白表达

目的 研究中药榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的体外抑瘤效应及其作用机制。方法 应用MTT比色法观察榄香烯对细胞的生长抑制作用;荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡、周期变化及Bcl-2蛋白表达情况。结果 榄香烯对7402和Hela细胞有较强的体外增殖抑制作用。榄香烯能诱导7402和Hela细胞凋亡,同时伴随有Bcl-2蛋白表达下调。结论 榄香烯对7402、Hela细胞有较强的抗瘤效应,其可能与Bcl-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。     

Antineoplastic mechanism of Octreotide actionin human hepatoma

Objectives To investigate whether apoptosis can be induced by Octreotide in human hepatoma cells in vitro and elucidate the antineoplastic mechanism of Octreotide in hepat oma. Methods A cultured human hepatoma cell line, BEL-7402, was exposed to Octreotide and ap optosis was evaluated by cytochemical staining (Hochesst 33 258), transmiss ion electron microscopy, agarose gel electrophoresis and flow cytometry (FCM).Results After exposure to 0.2 μg/ml Octreotide, apoptosis with nuclear chromatin cond ensation as well as fragmentation, cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies was observed using cytochemical staining and transmission electron micros copy. A DNA ladder in agarose gel electrophoresis was also displayed. FCM show ed that the apoptotic cell number rose with an increase in the concentration of Octreotide (0-2 μg/ml). There was a positive correlation between Octreotide concentration and apoptotic rate in BEL-7402 cells (r=0.809, P<0.05) .Conclusion Apoptosis in human hepatoma cells can be induced by Octreotide, which may be rel ated to the mechanism of antineoplastic action ofOctreotide in hepatoma.     

表皮生长因子受体单抗诱导人肺癌SPC A1细胞凋亡

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体是否可诱导人肺癌SPCA1细胞凋亡,以进一步说明EGFR单抗所具有的抗肿瘤作用。方法以不同浓度的EGFR单克隆抗体干预培养人肺腺癌SPCA1细胞株72h,收集癌细胞并提取DNA,采用凝胶电泳法和流式细胞仪分析细胞凋亡现象。结果凝胶电泳显示,单抗浓度为1.0μmol/L时,可见明显的凋亡梯状条带出现。流式细胞仪分析发现,在EGFR单抗干预培养的各SPCA1细胞样本存在低荧光的亚G1细胞群,而在空白对照和正常非相关IgG对照样本均未见低荧光细胞群存在。结论表皮生长因子受体单克隆抗体可诱导人肺癌SPCA1细胞出现凋亡。     

Growth Inhibition and Apoptosis Induction in Human Hepatoma Cells by Tanshinone Ⅱ_A

Summary:In order to study the effect of tanshinone Ⅱ_A on growth and apoptosis in human hepatomacell line BEL-7402 in vitro,the human hepatoma cell line BEL-7402 was treated with tanshinone Ⅱ_Aat various concentrations for 72 h.Growth suppression was evaluated by MTT assay;apoptosis-relat-ed alterations in morphology and biochemistry were ascertained under cytochemical staining(Hoechst33258),transmission electron microscopy(TEM),and DNA agarose gel electrophoresis.Apoptoticrate was quantified by flow cytometry(FCM).The results showed thst Tanshinone Ⅱ_A could inhibitthe growth of hepatoma cells in a dose-dependent manner,with IC_(50) value being 6.28μg/ml.Aftertreatment with 1—10 μg/ml tanshinone Ⅱ_A for 72 h,BEL-7402 cells apoptosis with nuclear chro-matin condensation and fragmentation as well as cell shrinkage and the formation of apoptotic bodieswere observed.DNA ladder could be demonstrated on DNA electrophoresis.FCM analysis showedhypodiploid peaks on histogram,and the apoptotic rates at 5     

Effect of tanshinone IIA on the growth behavior of human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro and its mechanism]

OBJECTIVE: To investigate the effect of tanshinone IIA on the growth behavior of human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro and explore the mechanism. METHODS: Human hepatoma cell line BEL-7402 was exposed to tanshinoneIIA at different concentrations for 72 h, and the suppression of the cell growth was observed under inverted-phase contrast microscope. Apoptosis-related alterations in the cell morphology and biochemistry were examined under fluorescence microscope and transmission electron microscope (TEM) and by DNA agarose gel electrophoresis, and the apoptotic rate was quantified by flow cytometry (FCM). RESULTS: After treatment with 0-10 microg/ml tanshinone IIA for 72 h, the proliferation of BEL-7402 cells was significantly suppressed, and cell apoptosis occurred characterized by cell shrinkage, nuclear chromatin condensation and fragmentation, formation of membrane blebs and apoptotic bodies as observed under fluorescence microscope and TEM. DNA ladder was presented in DNA electrophoresis. FCM analysis yielded the cell apoptotic rates of (20.78+/-2.17) %, (24.64+/-2.07) %, (31.47+/-3.86) %, (43.65+/-4.04) % and (52.36+/-3.75) % at tanshinone IIA concentrations of 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 and 10.0 microg/ml respectively, all significantly higher than those of the control group [(2.37+/-0.29)%]. CONCLUSION: Tanshinone IIA can inhibit the growth of human hepatoma BEL-7402 cells possibly through the mechanism of apoptosis induction.     

Growth inhibition and apoptosis induction in human hepatoma cells by tanshinone II A.

In order to study the effect of tanshinone II A on growth and apoptosis in human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro, the human hepatoma cell line BEL-7402 was treated with tanshinone II A at various concentrations for 72 h. Growth suppression was evaluated by MTT assay; apoptosis-related alterations in morphology and biochemistry were ascertained under cytochemical staining (Hoechst 33258), transmission electron microscopy (TEM), and DNA agarose gel electrophoresis. Apoptotic rate was quantified by flow cytometry (FCM). The results showed that Tanshinone II A could inhibit the growth of hepatoma cells in a dose-dependent manner, with IC50 value being 6.28 micrograms/ml. After treatment with 1-10 micrograms/ml tanshinone II A for 72 h, BEL-7402 cells apoptosis with nuclear chromatin condensation and fragmentation as well as cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies were observed. DNA ladder could be demonstrated on DNA electrophoresis. FCM analysis showed hypodiploid peaks on histogram, and the apoptotic rates at 5 micrograms/ml concentration for 12 h, 24 h, 36 h, 48 h and 72 h were (2.32 +/- 0.16)%, (3.01 +/- 0.35)%, (3.87 +/- 0.43)%, (6.73 +/- 0.58)% and (20.85 +/- 1.74)% respectively, which were all significantly higher than those in the control group (1.07 +/- 0.13)%. It is concluded that Tanshinone II A could induce human hepatoma cell line BEL-7402 apoptosis, which may be related to the mechanism of growth inhibition.     

体外瞬时转染野生型PTEN过表达对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：研究野生型FTEN基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：应用携带野生型FTEN的真核表达载体pEGFP-C1-FTEN,以脂质体介导的方法体外瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,利用流式细胞术检测抗凋亡蛋白bcl-2的表达,通过相差显微镜、细胞生长曲线、MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,观察FTEN基因过表达对MCF-7细胞生物学特性的影响。结果：荧光显微镜观察、免疫细胞化学和RT-PCR检测证实,转柒后MCF-7细胞中PTEN呈高水平表达;相差显微镜观察到MCF-7／FTEN细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞生长曲线低平;流式细胞检测显示,G-期细胞比例比空载体组增加14.79％,并出现凋亡峰;DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带;同时还检测到转染PTEN后细胞bcl-2表达下降。结论：外源性FTEN基因过表达可显著抑制MCF-7细胞的周期进程并诱导细胞凋亡。     

锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响

目的:探讨锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响。方法:分别选用不同浓度ZnSO₄•7H₂O（终浓度分别为6.25、15、25、50、100、150、200、250及300 μmol•L^-1）作用于PC-3M细胞24 h,用MTT法筛选对PC-3M细胞增殖抑制的有效浓度,利用吖啶橙/溴化乙锭染色、DNA ladder及流式细胞术检测PC-3M细胞凋亡情况。结果:MTT显示,锌的浓度在250 μmol•L^-1时, PC-3M细胞存活率显著低于对照组（P<0.01）。Zn²⁺浓度达250 μmol•L^-1时,相差显微镜下细胞形态变化明显,细胞变长,并伸出较长的突起,细胞分裂相明显减少,细胞数量较对照组明显减少。吖啶橙/溴化乙锭染色显示,对照组细胞形态为规则的圆形,细胞膜光滑无皱缩和发泡,呈现均匀的绿色,偶可见橙色细胞(自然凋亡细胞);Zn²⁺（250 μmol•L^-1）作用后,相差显微镜下可观察到较多早期凋亡细胞,细胞多为圆形,但细胞膜较对照组粗糙,细胞呈绿色,细胞核中有鲜绿色的斑点;也可观察到较多的晚期凋亡细胞,细胞形状不规则,细胞膜粗糙,有较多突起,被吖啶橙染成橙色,细胞中有鲜亮的橙色斑点。DNA ladder可见梯形条带出现;流式细胞术显示亚二倍体峰的出现,细胞凋亡率为13.3%。上述各项指标均显示PC-3M细胞的凋亡水平明显高于对照组（P<0.05）。结论：高Zn²⁺可以抑制前列腺癌细胞生长并诱导前列腺癌细胞凋亡。     

熊果酸对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨熊果酸（UA）对ER（-）、Her-2过表达的人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响。方法利用噻唑蓝（MTT）比色法观察UA对SK-BR-3细胞增殖的影响。用Hoechst 33258荧光染色及电子显微镜观察凋亡细胞核形态变化。流式细胞仪检测UA对细胞周期的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段的断裂。结果UA明显抑制SK-BR-3细胞的增殖,差异有统计学意义（P〈0.05）,并呈时间和浓度依赖性。经UA处理后的实验组细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光。流式细胞仪检测发现UA作用48h,后SK-BR-3细胞阻滞在G0/G1期,差异有统计学意义（均P〈0.05）。DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA大片段的断裂。结论UA在体外对SK-BR-3细胞具有抗增殖和诱导凋亡的作用。