温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。     

醒脑通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织谷氨酸、天门冬氨酸的影响

目的:观察醒脑通脉胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织谷氨酸及天门冬氨酸的影响。方法:建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,醒脑通脉大、小剂量组分别按1 000mg/kg、250mg/kg的剂量给药,尼莫地平组予2mg/kg的剂量。正常组及模型组予等容积生理盐水灌胃。用药组均于造模前给药2天,每天1次;在脑缺血2h再灌注48h后灌胃1次;末次给药后约1h取脑组织应用高效液相色谱法测定谷氨酸(Glu)及天门冬氨酸(Asp)的含量。结果:缺血2h再灌注48 h后,与正常组大鼠比较,模型组大鼠脑组织G1u及Asp含量明显升高(P<0.01);与模型组大鼠比较,醒脑通脉大、小剂量组及尼莫地平组脑组织中Glu、Asp含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:醒脑通脉胶囊抗缺血性脑损伤的作用机理可能与其对抗脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸(EAA)的升高有关。     

益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠脑组织海马CaMPK-Ⅱ及突触蛋白表达的影响

目的探讨益肺宣肺降浊方治疗血管性痴呆的可能作用机制。方法 165只SD大鼠造模前随机选出24只作为假手术组,其余141只大鼠采用结扎双侧颈总动脉阻断血流法建立血管性痴呆模型,将造模成功的96只大鼠随机分为中药高、中、低剂量组和模型组、石杉碱甲组、脑复康组,每组16只。造模第15天开始灌胃给药,中药高、中、低剂量组分别给予益肺宣肺降浊方24.36、12.18、6.09 g/(kg·d),石杉碱甲组、脑复康组分别给予石杉碱甲片、脑复康片0.15 mg/(kg·d),模型组及假手术组均予等体积双蒸水。各组均灌胃30天后采用Western blot法检测大鼠脑组织海马钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MPK-Ⅱ)及突触蛋白水平。结果模型组大鼠脑组织海马Ca MPK-Ⅱ、突触蛋白表达均明显低于假手术组(P0.05),石杉碱甲组、脑复康组和中药中、高剂量组Ca MPK-Ⅱ、突触蛋白表达均较模型组升高(P0.05),并且以中药高剂量组Ca MPK-Ⅱ升高最明显(P0.05)。结论益肺宣肺降浊方可能通过上调脑组织海马Ca MPK-Ⅱ、突触蛋白表达,改善学习和记忆功能,从而治疗血管性痴呆。     

参龙健脑胶囊对脑缺血大鼠脑组织谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的观察参龙健脑胶囊对脑缺血损伤大鼠脑组织谷氨酸（Glu）、N-甲基D-天冬氨酸受体（NMDAR）表达的影响,探讨其神经保护机制。方法结扎双侧颈总动脉制备缺血性脑损伤大鼠模型,模型成功后随机分为假手术组、模型组、脑复康组及参龙健脑胶囊低、高剂量组,参龙健脑胶囊低、高剂量组和脑复康组分别按照0.40、1.20、0.45 g/kg剂量给药,每日灌胃1次,连续28 d。采用比色法观察Glu在大鼠脑组织中的含量,免疫组化方法观察NMDAR亚单位NR1在海马区的表达。结果与模型组大鼠比较,参龙健脑胶囊组大鼠脑组织中Glu含量明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,海马区NR1表达减少（P〈0.01）。结论参龙健脑胶囊对缺血性脑损伤的保护作用可能与其抑制脑缺血后脑组织中Glu的释放、减少NR1的表达密切相关。     

双夏汤对肝郁型失眠大鼠行为学和脑内单胺类神经递质的影响

目的观察双夏汤对肝郁型失眠大鼠行为学及脑内单胺类神经递质的作用。方法将70只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、安定组、泻肝安神丸组及双夏汤高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余组均采用束缚和夹尾激怒轮流刺激叠加对氯苯丙氨酸(PCPA)致肝郁型失眠模型。造模第8天,安定组给予4.2 mg/kg安定灌胃,泻肝安神丸组给予1.4 g/kg泻肝安神丸灌胃,双夏汤高、中、低剂量组分别给予7 g生药/kg、3.5 g生药/kg、1.7 g生药/kg双夏汤灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,均每天1次,连续2周。观察各组大鼠的体征、体重及进食量,大鼠在敞箱中自主活动情况,戊巴比妥钠诱导睡眠的入睡潜伏期和睡眠时间,并用高效液相色谱-电化学检测法测定各组大鼠脑组织中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、5-羟色胺(5-HT)含量。结果模型组大鼠造模第7,14,21天的体重、进食量、水平运动和垂直运动得分均明显低于正常组(P均0.05);造模第21天,双夏汤高剂量组大鼠的体重、进食量和双夏汤中、低剂量组大鼠的水平运动和垂直运动得分均明显高于同期模型组(P均0.05),其余组各项指标与同期模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。模型组大鼠入睡潜伏期明显长于正常组(P0.05),各药物组大鼠的入睡潜伏期均明显短于模型组(P均0.05);安定组和双夏汤高剂量组大鼠睡眠时间均明显长于模型组(P均0.05),其余组大鼠睡眠时间与模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。大脑皮质中,模型组大鼠NE、DA、5-HIA、5-HT含量及5-HT/NE、5-HT/DA均明显低于正常组(P均0.05),各给药组大鼠各指标与模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05);下丘脑中,模型组大鼠DA、5-HIAA、5-HT含量及5-HT/NE、5-HT/DA均明显低于正常组(P均0.05);双夏汤高剂量组和双夏汤低剂量组NE、5-HT含量及5-HT/NE、5-HT/DA,双夏汤中剂量组5-HIAA、5-HT含量及5-HT/NE均明显高于模型组(P均0.05)。结论双夏汤能改善肝郁型失眠大鼠的活动状态,促进睡眠,可能与调节下丘脑内单胺类神经递质稳态有关。     

补肾醒脑方对实验性血管性痴呆大鼠脑组织中谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的影响

目的:探讨血管性痴呆(VD)病理机制并研究补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠模型脑组织兴奋性氨基酸(EAA)和抑制性氨基酸(I从)含量的影响.方法:采用反复夹闭双侧颈总动脉伴低血压造成血管性痴呆大鼠模型,通过氨基酸自动分析仪检测脑组织谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量.结果:补肾醒脑高剂量组和补肾醒脑低剂量组均可以降低脑组织中Glu的含量,增加脑组织中GABA的含量.结论:补肾醒脑方能抑制脑组织兴奋性氨基酸的释放,调节Glu/GABA系统平衡而减轻其兴奋性毒性,从而保护大脑神经细胞,这可能是补肾醒脑方治疗VD的作用机制之一.     

雄黄亚慢性染毒对未成年大鼠脑组织内Glu和Gln水平的影响

目的:通过研究雄黄对大鼠脑组织中Glu和Gln水平的影响,探讨雄黄对大鼠神经系统的毒性。方法:将48只Wistar大鼠随机分为对照组(0.5%CMC)及雄黄低(0.3 g/kg)、中(0.9 g/kg)、高(2.7 g/kg)剂量染毒组,连续灌胃给予雄黄混悬液6 w。采用氢化物发生-冷阱捕集-原子吸收法测定脑组织中无机砷(iAs)、一甲基胂(MMA)、二甲基胂(DMA)含量,高效液相色谱法测定脑组织中Glu和Gln含量。结果:雄黄染毒组大鼠脑组织中MMA、DMA含量随染毒剂量增加而增加,二甲基化率(SMI)降低。与对照组比较,雄黄染毒组大鼠脑组织中Glu含量显著降低(P0.05);Gln含量也有降低趋势,其中低剂量组与对照组比降低有统计学差异。结论:雄黄染毒后可引起MMA、DMA在大鼠脑组织中蓄积,SMI水平降低,脑组织中Glu和Gln含量减少。     

醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织学习记忆能力的保护作用

目的:探讨醒脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆能力及额叶、海马、胼胝体、视束组织学的影响。方法:将大鼠按随机数字表法随机分为假手术组、模型组、脑复康组及醒脑方小、中、大剂量组。采用双侧颈总动脉闭塞法建立大鼠慢性脑灌注不足诱发的VD模型。给药14天后,Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力;HE染色观察大鼠额叶、海马CA1区组织病理学改变;LFB染色观察大鼠胼胝体、视束组织病理学改变。结果:与模型组比较,醒脑方0.84 g组第3、4天逃避潜伏期缩短(P0.05),醒脑方0.42 g组第4天逃避潜伏期缩短(P0.05),醒脑方高、中剂量组第4天逃避潜伏期缩短程度与脑复康组比较无明显差异(P0.05)。此外,与模型组相比,醒脑方大、中、小剂量组穿台次数均增加(P0.05),与脑复康组比较无明显差异(P0.05)。醒脑方能改善大鼠海马CA1区神经元及胼胝体、视束组织病理学形态。结论:醒脑方对慢性脑灌注不足大鼠学习、记忆能力的改善作用与脑复康相当,其作用靶点可能与额叶、海马、胼胝体及视束有关。     

益气化瘀醒脑汤对急性脑缺血模型大鼠脑组织病理学、神经细胞凋亡及氧化应激损伤的影响

目的:探讨益气化瘀醒脑汤对急性脑缺血模型大鼠脑组织病理学、神经细胞凋亡及氧化应激损伤的影响.方法:采用改良闭塞线栓法栓塞大脑中动脉法建立急性脑缺血大鼠模型,60只大鼠随机分为6组,每组10只.造模24 h后正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,益气化瘀醒脑汤低、中、高剂量组给予益气化瘀醒脑汤(5、10、15 g/kg)灌...     

补肾活血中药治疗血管性痴呆的实验研究

在MID动物模型上,以西药脑复康为对照,采用水迷宫和放免法观察了醒脑胶囊主要成份补肾活血药物对痴呆大鼠学习记忆能力及脑组织(海马、皮质)中神经肽AVP、SS含量的影响。结果:中药组和脑复康组大鼠游迷宫所需时间和错误次数均明显少于模型组(P<0.05或P<0.01),其中中药组大鼠游全程时间显著少于脑复康组(P<0.05或P<0.01),错误次数与脑复康组无显著性差异(P>0.05)。同时中药组与脑复康组大鼠血浆、脑组织(海马、皮质)中AVP、SS含量均显著高于模型组(P<0.01),且中药组AVP、SS含量又明显高于脑复康组(P<0.05或P<0.01)。提示补肾活血中药能明显改善VD大鼠学习记忆能力,疗效与脑复康相近。同时补肾活血中药能显著提高VD大鼠血浆、脑组织(海马、皮质)中神经肽AVP、SS含量,且优于脑复康。推测血浆及脑组织中神经肽AVP、SS含量的提高可能是中医补肾活血法治疗VD的神经生化基础之一。     

Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid

Oleanolic acid and ursolic acid are triterpenoid compounds that exist widely in food, medicinal herbs and other plants. This review summarizes the pharmacological studies on these two triterpenoids. Both oleanolic acid and ursolic acid are effective in protecting against chemically induced liver injury in laboratory animals. Oleanolic acid has been marketed in China as an oral drug for human liver disorders. The mechanism of hepatoprotection by these two compounds may involve the inhibition of toxicant activation and the enhancement of the body defense systems. Oleanolic acid and ursolic acid have also been long-recognized to have antiinflammatory and antihyperlipidemic properties in laboratory animals, and more research is warranted to develop a therapy for patients. Recently, both compounds have been noted for their antitumor-promotion effects, which are stimulating additional research in this field. Oleanolic acid and ursolic acid are relatively non-toxic, and have been used in cosmetics and health products. The possible mechanisms for the pharmacological effects and the prospects for these two compounds are discussed.     

高效毛细管电泳同时测定板蓝根中水杨酸、丁香酸、苯甲酸和邻氨基苯甲酸

目的:建立同时测定板蓝根药材中水杨酸、丁香酸、苯甲酸和邻氨基苯甲酸含量的高效毛细管电泳方法.方法:采用重力进样,进样高度10 cm,进样时间30 s,正极进样,负极柱上220nm检测.操作电压11.5kV,运行缓冲溶液为乙腈.硼砂(15%乙腈,25 mmol·L~(-1)硼砂,15 mmol·L~(-1)β-CD),pH 9.10.对电压、缓冲液pH、缓冲液浓度、乙腈、β-CD浓度等因素对分离的影响做了系统的研究.水杨酸、丁香酸、苯甲酸和邻氨基苯甲酸分别在3.0～90,4.0-120,2.0～60,5.0～100 mg·L~(-1)线性关系良好(r=0.999 4,0.999 5,0.999 8,0.999 2);回收率分别为95.9%～102.6%,98.6%～103.4%,98.7%～104.1%,96.1%～104.3%,基于3倍信噪比(S/N=3),4种有机酸的检出限分别为0.7,1.1,1.2,1.5 mg·L~(-1).     

LC-MS/MS法测定升麻中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸含量的研究

[目的]建立LC-MS/MS测定升麻药材中3种苯丙酸类成分含量的方法。[方法]采用ACQUITY UPLC誖BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速为:0.3 m L/min;质谱检测器:采用ESI电离源,负离子检测,MRM监测模式,对升麻药材中苯丙酸类成分咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸进行含量测定。[结果]咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸的线性范围分别为5~100 ng/m L,10~200 ng/m L,50~1 000 ng/m L,线性关系良好,最低定量限分别为5、10和50 ng/m L,加样回收率97.83%~98.40%。[结论]该方法简便,快速,精密度高,重复性好,可用于同时测定升麻中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸的含量。     

高效液相色谱法同时测定复方苯甲酸软膏中的苯甲酸和水杨酸含量

 目的：建立一种快速、准确的高效液相色谱法同时测定苯甲酸和水杨酸的含量。方法：使用阴离子交换色谱柱，流动相为甲醇-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾（30∶70），检测波长为244 nm。结果：样品测定在8 min内完成，苯甲酸在60～480 mg·L^-1范围内，r=0.9995, RSD=0.72%,平均回收率为99.5%；水杨酸在30～240 mg·L^-1范围内，r=0.9995, RSD=0.67%，平均回收率为100.7%。结论：本方法可快速准确地检测复方苯甲酸软膏中的苯甲酸和水杨酸含量。     

HPLC-ELSD法同时测定九香虫中的亚油酸、油酸及软脂酸

目的建立一种同时定量测定九香虫中未甲酯化的亚油酸、油酸及软脂酸方法。方法九香虫石油醚提取物以高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)分析,采用Prevail C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-甲醇(95∶5)为流动相进行洗脱,洗脱时间为15 min。结果亚油酸、油酸及软脂酸峰面积的自然对数与相应质量浓度的自然对数呈良好的线性关系。其中,亚油酸的线性方程为Y=1.211 7X-2.965 6,r=0.999 0,线性范围为0.135~0.450 mg/m L,平均加样回收率为98.1%,RSD为2.5%;油酸的线性方程为Y=1.149 2X-2.757 0,r=0.999 0,线性范围为0.268~0.893 mg/m L,平均加样回收率为99.6%,RSD为2.3%;软脂酸的线性方程为Y=1.104 7X-2.327 6,r=0.999 1,线性范围为0.150~0.500 mg/m L,平均加样回收率为100.1%,RSD为2.8%。结论该方法中的样品不需要甲酯化,而且测定快速、简便、准确,可作为九香虫饮片的质量控制方法。     

UPLC法同时测定胆木注射液中原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸

目的 建立同时测定胆木注射液中原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的方法.方法 采用UPLC法,色谱柱Waters Acquity UPLC BEH C18 (50mm×2.1mm,1.7 μm),流动相为甲醇(A)-0.1％乙酸水溶液(B),梯度洗脱;检测波长为260 nm(原儿茶酸)和325 nm(新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸);体积流量0.4 mL/mim柱温35℃.结果 原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸分别在3.984～159.400、1.440～57.600、1.204～48.160、1.056～42.240 μg/mL内具有良好的线性关系;平均回收率分别98.66％、96.76％、101.1％、103.6％.结论 UPLC分离效果及重复性好,且快速、准确,可作为胆木注射液的质量控制方法.     

甘草酸及其苷元甘草次酸的糖皮质激素样作用

甘草酸在体内水解成甘草次酸,因此甘草酸是甘草次酸的前体药物,而甘草次酸的药理作用强于甘草酸.甘草次酸的化学结构类似于甾体激素.甘草次酸和甘草酸是甾体激素代谢失活酶抑制剂,可提高内源性和外源性糖皮质激素的活性.甘草次酸和甘草酸义町作为配体,与糖皮质激素受体结合,由于甘草次酸和甘草酸的糖皮质激素受体激动活性远低于糖皮质激素,因此足糖皮质激素受体的部分激动拮抗剂.临床上可将甘草酸作为弱糖皮质激素样药物应用,不仪增强糖皮质激素的作用,而且拮抗大剂量糖皮质激素的不良反应.     

气相色谱法快速测定疏血通注射液中乙酸、丙酸、丁酸的含量

[目的] 建立疏血通注射液中短链脂肪酸（乙酸、丙酸、丁酸）的含量测定方法。[方法] 采用气相色谱法（GC）以2-乙基丁酸为内标物,测定疏血通注射液中乙酸、丙酸、丁酸含量。采用DB-FFAP弹性石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）,程序升温,在18 min内实现了成分分析,载气：高纯氮气（N₂）,流速1.0 mL/min,尾吹气：高纯氮气（N₂）,流速25 mL/min,进样口温度：240℃,检测器（FID）温度：240℃。[结果] 对疏血通原料药水蛭及地龙进行气相分析发现,水蛭与地龙药材中均含有乙酸、丙酸、丁酸。通过分析36批次的疏血通注射液发现乙酸、丙酸、丁酸含量分别为382.2~544.6 μg/支、90.92~217.5 μg/支、39.74~64.27 μg/支,不同批次的疏血通注射液乙酸、丙酸、丁酸含量差异较大、总含量相对稳定。[结论] 本研究建立的疏血通注射液中乙酸、丙酸、丁酸的含量测定方法简便、快速、灵敏,适用于该产品的质量控制研究。     

Oleanolic acid and ursolic acid: research perspectives

Oleanolic acid and ursolic acid are ubiquitous triterpenoids in plant kingdom, medicinal herbs, and are integral part of the human diet. During the last decade over 700 research articles have been published on their research, reflecting tremendous interest and progress in our understanding of these triterpenoids. This included the isolation and purification of these tritepernoids from various plants and herbs, the chemical modifications to make more effective and water soluble derivatives, the pharmacological research on their beneficial effects, the toxicity studies, and the clinical use of these triterpenoids in various diseases including anticancer chemotherapies. A briefly commentary is attempted here for their research perspectives.     

HPLC法测定清毒片中齐墩果酸和熊果酸含量

目的：建立清毒片中齐墩果酸和熊果酸含量测定的HPLC方法。方法采用HPLC法测定清毒片中齐墩果酸、熊果酸含量,色谱柱为kromasil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸水溶液(88∶12),检测波长210 nm,流速1.0 ml/min。结果齐墩果酸和熊果酸的进样量分别在0.06～0.54μg(R＝0.9993)和0.30～2.70μg(R＝0.9997)范围内与峰面积呈良好线性关系;齐墩果酸和熊果酸的加样回收率分别为100.48%和102.21%。结论本方法操作简便、准确、重复性好,可为清毒片的质量控制提供参考。