大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量筛选研究

目的:对SD(Sprague Dawley)大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量进行筛选,获得优质凝胶图像.方法:本实验为8月龄SD大鼠,注射戊巴比妥钠麻醉后断头取海马组织,称蘑后加入裂解液,经过匀浆、孵育、离心等处理后测定蛋白浓度.拟采用银染法凝胶染色时上样量分别为200 μg、400 μg、600 μg、800 μg;拟采用考马斯亮蓝染法凝胶染色时上样量分别为1 000 μg、1 200μg、1 400μg、1 600μg.采用双向凝胶电泳后,分别采用银染和考染法凝胶染色.染色后凝胶采用Umax PowerLookⅢ扫描仪和photo-shop8.0图像软件进行扫描,采用ETTAN ImageMaster 2D Elite 4.01软件进行图像分析.结果:双向凝胶电泳胶图经扫描分析,蛋白质上样量400μg电泳银染后所获得的胶图蛋白质点区隔明显,背景清晰,经过点识别等处理后获得(756±42)个点;而蛋白质上样量200 μg、600 μg和800 μg电泳银染后获得的胶图蛋白质点较少;蛋白质上样量1 600μg电泳考染后所获得的胶图蛋白质点区隔明显,背景清晰,经过点识别等处理后获得(812±60)个点;而蛋白质上样量1 000 μg、1 200μg和1 400 μg电泳考马斯亮蓝染法后获得的胶图蛋白质点较少.结论:采用银染法SD大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量为400 μg时可以获得良好的凝胶图像;而采用考染法SD大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量为1 600 μg时即可获得良好的凝胶图像.     

胃癌耐药研究中二维电泳凝胶显色方法的分析

目的分析利用蛋白质组学方法研究胃癌耐药相关蛋白质中双向电泳凝胶的染色显示。方法培养胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细胞SGC7901/VCR,用双向凝胶电泳技术分离总蛋白,银染及胶体考马斯亮蓝染色,Image Scanner扫描仪扫描凝胶。结果获得了背景清晰、重复性好的双向凝胶电泳图谱,两种染色凝胶相比,硝酸银染色在样品少时显示更佳,过量则影响图像质量,而胶体考马斯亮蓝染色在上样量增加时的凝胶蛋白质点数目及丰度均增加,并无明显拖尾。结论两种显色方法受样品量影响较大,恰当选用有利于通过蛋白质组学研究胃癌耐药机制工作的进一步开展。     

姜黄素对人正常肝细胞角蛋白1和内质网蛋白19表达的影响

目的应用双向凝胶电泳、质谱技术和蛋白免疫印迹研究姜黄素(Curcumin,CUR)对人正常肝细胞蛋白质组的影响。方法随机将人正常肝细胞L-02分成两组,对照组不作任何处理,姜黄素组以25μmol.L-1姜黄素处理L-02细胞24 h。用双向凝胶电泳建立姜黄素组和对照组的双向凝胶电泳图谱,并用Image Master 2D Platinum 6.0软件进行差异蛋白质组分析,所获得的明显差异蛋白质用MALDI-TOF-MS进行鉴定分析,最后用蛋白免疫印迹法进行验证。结果姜黄素作用于人正常肝细胞后,有2个蛋白质的表达发生明显变化,角蛋白1与内质网蛋白19表达均上调。结论上调角蛋白1和内质网蛋白19可能是姜黄素抗肿瘤、抗氧化作用的机制之一。     

低砷染毒大鼠肾脏蛋白质组学研究

目的对低剂量砷暴露大鼠肾脏进行蛋白质组学研究,探讨早期砷暴露的生物学标志物。方法选取健康雄性SD大鼠48只,按体质量随机分为4组,每组12只,即对照组(0μg/L),低剂量染毒组(50μg/L),中剂量染毒组(150μg/L),高剂量染毒组(450μg/L)。染毒4周后处死大鼠,取其肾脏运用蛋白质组学技术(双向凝胶电泳)分离蛋白,凝胶经扫描后用Pdquest图形分析软件对2-DE图谱进行了分析,鉴定染毒SD大鼠和正常SD大鼠肾脏蛋白质的差异表达。结果定性分析发现,与对照组比较,低剂量组新出现了2个蛋白质点,消失了4个蛋白质点;中剂量组新出现了4个蛋白质点,消失了3个蛋白质点;高剂量组新出现了3个蛋白质点,消失了7个蛋白质点。定量分析发现,与对照组比较,低剂量组表达量升高的蛋白质点有4个,降低的有4个;中剂量组表达量升高的蛋白质点有11个,降低的有2个;高剂量组表达量升高的蛋白质点有3个,降低的有4个。结论低砷染毒导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达,这些蛋白质可能与砷暴露的毒性作用有关。     

肿瘤标志物对辅助诊断良、恶性胸水的临床价值探讨

对122例患者胸水进行CA-50(糖类抗原50),DNA-P(DNA 聚合酶)、CEA、ADA、SA 同步检测,其中结核性胸水72例,男56例,女16例,年龄19～70岁;癌性胸水50例,男36例,女14例,年龄32～76岁,包括腺癌39例(术后9例),鳞癌8例,间皮瘤2例(1例为心包积液),小细胞未分化癌1例。检测结果:癌性胸水CA-50 40.13±25.20μ/ml,CEA 34.83±38.91ng/ml,ADA18±15.70μ/L,SA430.90±171.31μg/ml;DNA-P3021±604.2CPM,结核性胸水CA-50 4.69±4.79μ/ml,CEA4.46±7.42ng/ml,ADA34.07±18.77μ/L,SA448.44±158.73μg/ml,DNA-P2629±525.8CPM。CA-50、CEA、ADA 检测结果两组相比有显著差异,P<0.001。结     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞分化的差异蛋白质分析

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中蛋白质的差异表达。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离DADS处理前后人胃癌MGC803细胞总蛋白,凝胶经过银染后用PDQuest软件进行分析,差异蛋白质点经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的数据进行生物信息学处理。结果 DADS处理MGC803细胞前后的总蛋白质的双向电泳银染图谱,经扫描成像及PDQuest软件分析,对照组与处理组蛋白质点与平均匹配率分别为(576±14)个和(583±4)个与76%和70%,421个匹配,200个未被匹配。经相关数据库查询,在初步鉴定的差异蛋白质点中,发现24个与细胞分化、肿瘤转移、细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫及代谢等相关的蛋白质,如gastric mucin、nM23、CDC2、uPAR、LIMK、RORα、MHC DR-beta-1 chain、TCR等,这些蛋白质可能在胃癌的发生发展中起着潜在的作用。结论 DADS可能通过多种途径诱导MGC803细胞分化。蛋白质组差异表达的初步分析为进一步研究胃癌分化的相关蛋白质及标记物奠定一定基础。     

神经胶质瘤蛋白质双向电泳技术的建立

目的建立神经胶质瘤双向电泳技术。方法利用不同体积的裂解液提取大鼠脑组织中的蛋白质，并通过不同的蛋白质上样量（1、2、3mg），进行双向电泳，考马斯亮蓝染色，图谱分析。结果在等电点3-10，相对分子质量6．5-200KDa范围内分离得到蛋白质斑点为，1mg蛋白质上样量为574个蛋白质斑点，2mg为798个，3mg为803个斑点。2mg蛋白质上样量的双向电泳图谱更清晰，分离更好。结论成功建立了神经胶质瘤蛋白质的双向电泳技术。     

子痫前期蜕膜组比较蛋白组织学探讨及筛选

目的 分析子痫前期患者蜕膜组织差异蛋白表达,探讨差异蛋白与子痫前期发生的可能关系.方法 双向电泳技术对总蛋白进行分离,考马斯亮兰显色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白.结果 获得了正常妊娠及子痫前期重度患者蜕膜组织双向电泳凝胶蛋白质图谱,蛋白质点子痫前期组(410±10)个,正常妊娠组(398±12)个,图像分析结果 显示表达丰度相差2倍发上的差异蛋白质点有12个,它们在子痫前期中均表现下调.结论 子痫前期患者蜕膜组织中存在差异蛋白表达.这些蛋白质在子痫前期的发病过程可能起重要作用.     

甲基苯丙胺致PC12细胞的差异蛋白表达

目的探讨甲基苯丙胺(METH)作用于PC12细胞后的蛋白质表达变化。方法 METH2.5 mmol·L-1作用PC12细胞24 h后,提取细胞总蛋白质,丙酮沉淀法纯化蛋白,Braford法对蛋白质进行定量,并对蛋白质进行双向凝胶电泳,Image scannerⅢ透射扫描仪获取凝胶电泳图谱。应用Image Master 7.0软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行差异性蛋白质点分析,并对相应差异蛋白点用高端基质辅助激光解析-飞行时间(MALDI-TOF)串联质谱仪进行差异蛋白质鉴定。结果应用双向凝胶电泳结合质谱分析技术,METH作用PC12细胞24 h后,共鉴定出18个差异表达蛋白质点,其中8个差异蛋白点在METH作用后表达增强,10个蛋白点表达减弱。这些蛋白质主要包括细胞骨架相关蛋白、分子伴侣、氧化应激和凋亡相关的蛋白以及与能量代谢相关的酶类。结论 METH诱导PC12细胞18个蛋白差异表达。     

UPLC法测定布地奈德吸入气雾剂中PBT低聚物的迁移量

目的:建立超高效液相色谱(UPLC)法测定布地奈德吸入气雾剂中聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)低聚物迁移量。方法:采用ACQUITY BEH C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.7μm),以水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,检测波长240 nm。结果:PBT二聚物和PBT三聚物在0.1～10.5μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好(r=1.000),PBT四聚物和PBT五聚物在0.02～2.0μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好(r=1.000);各成分的平均加样回收率在94.18%～104.7%(n=6);各成分的检测限均小于0.02μg·mL^-1。在布地奈德吸入气雾剂的药液中,不同程度地检出了PBT二聚体和PBT三聚体,但均未检出PBT四聚体和PBT五聚体。结论:该方法准确可靠,选择性好,简便快速,可用于PBT低聚物迁移量的测定及气雾剂包材质量评价。     

肝病良恶性腹腔积液前期处理后差异蛋白质组学分析

目的 分析肝炎后肝硬化及其相关性原发性肝癌患者腹腔积液前期处理后差异蛋白质组学,探讨肝病癌性腹腔积液具有特征性的标志蛋白组合模式.方法 应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术,对46例肝炎后肝硬化（肝硬化腹腔积液组）及27例肝炎后肝硬化相关性原发性肝癌患者（肝癌腹腔积液）腹腔积液前期处理后蛋白质进行检测,对蛋白质波谱进行分析,并寻找合理运算规则以确定能够区分原发性肝癌和肝炎后肝硬化腹腔积液患者的蛋白质组学图谱.结果 浓缩前肝硬化腹腔积液组的蛋白质浓度低于肝癌腹腔积液组[（8 ±4）g/L比（39±4） g/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.浓缩后,肝硬化腹腔积液组蛋白质浓度与肝癌腹腔积液组的蛋白浓度接近[（54±5）g/L比（58±5）g/L],差异无统计学意义（P＞0.05）.离心前,肝癌腹腔积液组腹腔积液细胞计数明显多于肝硬化腹腔积液组[（3146±1362）×10^6/L比（287 ±51）×10^6/L] （P＜0.05）;离心1次后,肝硬化腹腔积液组腹腔积液细胞计数为（9 ±3）×10^6/L,肝癌腹腔积液组腹腔积液细胞计数为（19 ±7）×10^6/L,2组差异无统计学意义（P＞0.05）;离心2次后,2组腹腔积液中细胞计数均为0.在质荷比为11 467、4 475时,肝癌腹腔积液组特征峰表达值均高于肝硬化腹腔积液组,7 852时,肝癌腹腔积液组特征峰表达值低于肝硬化腹腔积液组.SELDI-TOF-MS技术检测肝癌与肝硬化的灵敏度为81.5％（22/27）,特异性为87.0％（40/46）.结论 腹腔积液前期处理能满足SELDI-TOF-MS技术的要求,确立的标志蛋白组合模式的特异性及敏感度较高.     

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳（2-DE）检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。     

电视胸腔镜手术在老年恶性胸腔积液患者治疗中的作用

目的：观察电视胸腔镜手术在老年恶性胸腔积液患者治疗中的作用。方法：对符合病例入选标准的60例恶性胸腔积液患者在全麻下通过胸腔镜吸除积液,然后喷洒无菌滑石粉形成胸膜固定。结果：本组60例经治疗气短、咳嗽、胸痛、胸闷、发热、咯血等临床症状均明显缓解,饮食及活动量显著增加。患者手术时间最短20 min,最长70 min,平均（36.5±3.4）min。术后引流量最少360 ml,最多720 ml,平均（608.5±23.4）ml;拔管时间最短2 d,最长8 d,平均（3.5±0.4）d。术后随访3～12个月,平均（5.5±0.5）个月,均未见复发。结论：电视胸腔镜治疗恶性胸腔积液是一种微创、有效、实用的治疗方法。     

胸腔引流并早期注入尿激酶预防结核性胸膜炎粘连肥厚的研究

目的：探讨胸腔引流下早期胸腔内注入尿激酶对结核性渗出性胸膜炎所致胸膜肥厚和粘连的影响。方法：60例收治的结核性胸膜炎患者,随机分为治疗组（30例）和对照组（30例）,治疗组行胸腔引流术并早期注入尿激酶10万u加生理盐水50ml,对照组注射生理盐水50ml。结果：抽液总量：治疗组（3900±550）ml,对照组（3100±500）ml,P〈0．01;胸膜厚度：治疗组（1．10±0．15）mm,对照组（1．40±0．20）mm,P〈0．01;胸膜粘连发生率：治疗组3例（10％）,对照组9例（30％）,P〈0．01。结论：胸腔引流并早期注入尿激酶能有效降低胸膜肥厚和粘连发生的机会和程度,与对照组相比差异有统计学意义。     

2种阿奇霉素制剂的人体生物等效性研究

目的:研究2种阿奇霉素制剂的人体生物等效性。方法:18名男性健康志愿者采用随机、自身对照、交叉法单剂量口服阿奇霉素分散片(受试制剂)与阿奇霉素胶囊(参比制剂)后,采用微生物法测定血浆中阿奇霉素的血药浓度,利用3p97软件计算主要药动学参数,并进行生物等效性评价。结果:受试制剂与参比制剂的药动学参数分别为:tma(x2.40±0.48)、(2.29±0.55)h,Cmax(0.34±0.06)、(0.30±0.06)μg·mL-1,AUC0～14(42.80±0.80)、(2.82±1.44)μg·h·mL-1,AUC0～∞(2.95±0.67)、(2.91±1.68)μg·h·mL-1。2种制剂的主要药动学参数无显著性差异(P>0.05)。阿奇霉素分散片的相对生物利用度(F)为(99.29±3.85)%。结论:2种阿奇霉素制剂具有生物等效性。     

2种左甲状腺素钠片的人体生物等效性研究

目的:研究2种左甲状腺素钠片的人体生物等效性。方法:按照两制剂两周期随机交叉设计,26名男女健康受试者分别单剂量口服受试制剂(Berlthyrox)或参比制剂(雷替斯)6片(每片含左甲状腺素钠100μg)。采用放射免疫法测定血清中T4、T3浓度,并计算药动学参数,评价2种制剂的生物等效性。结果:受试制剂与参比制剂的T4主要药动学参数分别为:cmax(138.54±16.22)、(147.45±16.92)ng·mL-1,tmax(2.4±1.0)、(2.3±2.2)h,t1/2(253.58±155.94)、(467.97±638.97)h,AUC0～48h(5550.27±679.50)、(5817.83±649.35)ng·h·mL-1,AUC0～∞(48065.79±28322.17)、(85248.31±113292.36)ng·h·mL-1;T3的主要药动学分别为:cmax(1.56±0.23)、(1.55±0.18)ng·mL-1,tmax(39.7±16.5)、(35.4±18.8)h,t1/2(117.55±107.94)、(105.29±65.78)h,AUC0～48h(64.09±7.52)、(65.06±7.60)ng·h·mL-1,AUC0～∞(330.15±250.21)、(307.33±126.61)ng·h·mL-1。受试制剂与参比制剂T4、T3的相对生物利用度分别为(95.9±11.6)%、(99.2±12.6)%。结论:2种左甲状腺素钠片生物等效。     

创伤性颅脑损伤患者血清LGT蛋白质组动态变化及临床意义探讨

目的探讨创伤性颅脑损伤(TBI)患者血清LGT蛋白质组的动态变化规律,初步分析其在TBI患者病情判断及预后评估中的临床意义。方法将我院收治的69例TBI患者和30名门诊体检者血清用蛋白质指纹仪及WCX2蛋白质芯片检测血清LGT蛋白质组,共检测212人次。在指纹图上,质荷比(M/Z)为相对分子质量11100～11900之间出现一峰簇样指纹标志且蛋白峰值>5%为阳性诊断标准,依据LGT蛋白质组动态变化共分为4组,观察4组中的病死率。计量资料采用SNK-q检验和Wilcoxon秩和检验,计数资料采用χ2检验,相关性分析采用Spearman相关分析。结果入院初LGT蛋白质组丰度在重度颅脑损伤组[(13.5±9.3)%]和轻中度颅脑损伤组[(5.2±4.9)%]明显高于健康对照组[(1.6±0.5)%,P均<0.01];重度颅脑损伤组LGT蛋白质组丰度明显高于轻中度颅脑损伤组(P<0.01),而健康对照组血清中无表达。LGT蛋白质组丰度与预后呈负相关(r=-0.415,P<0.01),死亡组LGT蛋白质组丰度[(15.2±12.2)%]明显高于存活组[(8.5±6.4)%,P<0.01]。LGT蛋白质组持续阳性组病死率70%,持续阴性组病死率为5%,LGT蛋白质组经治疗由阳性转成阴性组病死率为8%,LGT蛋白质组经治疗由阴性转成阳性组病死率为43%。结论 LGT蛋白质组为TBI患者病理状态下合成的一组蛋白质,与病情严重程度及预后密切相关,对TBI患者病情判断及预后评估可能有重要的临床指导意义。     

结核性胸腔积液蛋白质组学初步研究

目的本实验利用二维凝胶电泳-肽质量指纹谱的蛋白质组学方法,对结核性、恶性和漏出性胸腔积液的相关蛋白质二维凝胶电泳（2-DE）图谱识别、鉴定,寻求结核性胸腔积液的特异蛋白质及其对临床诊断的意义。方法收集我院2010年5月～2011年6月收治的符合要求的胸腔积液患者50例,其中结核性胸腔积液20例,恶性胸腔积液17例,漏出性胸腔积液13例。利用二维凝胶电泳分离技术,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析到相应的肽质量指纹谱（PMF）,最后借助Mascot软件结合NCBInr数据库进行检索鉴定相关结构蛋白质。结果通过对结核性、恶性和漏出性胸腔积液的蛋白质肽质量指纹图比较、分析发现3个存在明显差异蛋白,它们分别是：C1-抑制蛋白、甲状腺三级结构A链和补体C3b。C1-抑制蛋白在结核性胸腔积液高表达,在恶性胸腔积液中低表达。甲状腺素三级结构A链和补体C3b在恶性腔积液中高表达,在漏出液中低表达。结论利用二维凝胶电泳技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对胸腔积液进行蛋白质组学研究,得到结核性、恶性和漏出性胸腔积液的蛋白质图谱,获得差异蛋白质,为结核性胸腔积液的鉴别诊断提供新的思路和方法。     

3种头孢克洛制剂在健康人体内的药动学及生物等效性研究

目的:比较3种头孢克洛制剂在健康志愿者体内的药动学,并评价3种制剂的生物等效性。方法:18名男性健康志愿者,单剂量三交叉分别口服干混悬剂(受试制剂1)、头孢克洛分散片(受试制剂2)和头孢克洛片(参比制剂)500mg后,用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆药物浓度,数据经DAS软件处理,计算药动学参数并评价生物等效性。结果:头孢克洛受试制剂1、2与参比制剂的cmax分别为(13.94±3.76)、(13.54±2.27)、(13.86±3.13)μg·mL-1,tmax分别为(0.56±0.13)、(0.55±0.14)、(0.51±0.13)h,t1/2分别为(0.67±0.09)、(0.68±0.15)、(0.80±0.26)h,AUC0～4分别为(15.16±2.58)、(14.56±1.70)、(14.74±2.07)μg·h·mL-1。受试制剂1、2的F0～4分别为(103.80±17.80)%、(100.50±18.40)%。统计分析表明,2种头孢克洛受试制剂的cmax、tmax、AUC0～4、AUC0～∞与参比制剂相比均无显著性差异。结论:头孢克洛干混悬剂和分散片与参比制剂生物等效。     

沙美特罗白蛋白微球的制备与体外释放度考察

目的:制备沙美特罗白蛋白微球,并考察其体外释放性能。方法:以白蛋白为载体,采用乳化交联法制备沙美特罗白蛋白微球。在单因素考察的基础上,利用正交设计优化沙美特罗白蛋白微球制备工艺,并对微球的粒径,形态,体外释放特性进行研究。结果:制得的微球形态圆整,平均粒径为（16.82±1.25）μm,平均载药量为（52.08±3.26）%,平均包封率为（60.54±3.17）%,体外释放符合Higuchi方程,Q=11.5846t_1/2-1.207（r=0.9985）。结论:沙美特罗白蛋白微球体外释放特性符合长效制剂特征。