BA46基因转染树突状细胞治疗乳腺癌的研究

目的探讨以乳腺癌特异抗原删46基因转导树突状细胞（DC）治疗乳腺癌的可行性。方法取健康人外周血，采用密度梯度离心的方法分离外周血单个核细胞（DC前体细胞），以AIM-V培养基于6孔板培养，贴壁5h，轻轻洗去悬浮细胞（T细胞，冻存备用），取贴壁细胞，将细胞分为基因转染组及对照组，基因转染组感染携带翻46基因的重组腺相关病毒rAAV／BA46/Neo，对照组以293细胞冻融液刺激，两组细胞均采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、白细胞介素4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导DC前体细胞成熟。第7天，收集悬浮细胞（DC），显微镜观察细胞形态，流式细胞仪分析DC的表面标志CD80、CD86、CD40的表达情况；另取该DC与T细胞按1：20比例混合，含5％人血清蛋白的AIM—V为培养基，同时加入IL-2与GM—CSF，共育7d，诱导获得细胞毒性T淋巴细胞（CTL），取删46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T为靶细胞，采用^51Cr释放法测量杀伤效率，同时以流式细胞仪检测CTL群体中CD8／CD4和CD8／CD56的比值。结果酗46基因转导的DC表面标志CD80、CD86、CD40的表达均明显高于对照组DC，所激活的T细胞对鲋46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T有很好的杀伤效果，此杀伤具有抗原特异性和MHC限制性，且该T细胞中CD8／CIM和CD8／CD56的比值均明显高于对照组（细胞裂解物冲击DC所激活的T细胞）。结论删46基因转染成功制备DC，并诱导特异的CTL，为乳腺癌的DC基因转染疗法打下基础。     

肺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞的格局变化及意义

目的：研究肺癌患者外周血（PBMC）及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的比例改变，探讨其在抗肿瘤免疫中的调节作用。方法：分离肺癌患者PBMC及TIL，FACS分析CD4^＋／CD8^＋T细胞的比值及CD4^＋ CD25^highT细胞占CD4^＋T细胞的比例。Real-time PCR检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在PBMC及TIL中的表达。结果：肺癌患者PBMC及TIL中CD4^＋／CD8^＋比值降低；而CD4^＋ CD25^high T细胞在CD4^＋T细胞中所占比例升高；Foxp3基因仅在TIL中高表达，而在PBMC中低或不表达，表明肿瘤局部的CD4^＋ CD25^high T细胞主要是CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋ Treg。结合临床资料分析显示Treg在肺腺癌比例较高。结论：CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋ Treg在肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中明显升高，可能与其通过细胞与细胞间接触抑制CD8^＋T细胞的杀伤效应，最终发挥免疫抑制效应相关。     

树突状细胞在再生障碍性贫血患者T细胞寡克隆增生中的作用

目的：探讨树突状细胞（Dendritic cell,DC）在再生障碍性贫血（AA）发病中的作用,尤其是对淋巴细胞异常活化的激发作用。方法：采用直接免疫荧光标记流式细胞术分析AA患者骨髓中I型DC的比例;在体外用重组人粒单细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）及白介素4（IL-4）诱导外周血单个核细胞成为DC,流式细胞仪检测DC表型,并观察经纯化人脐血CD34^＋细胞抗原,经可溶性人CD40配体（rhsCD40L）激发后对自体T细胞活化和扩增效应;实时定量PCR（RQ-PCR）定量测定DC载荷抗原前后T细胞TCRVβ基因谱的改变。结果：AA患者骨髓中CD1a^＋CD11c^＋细胞和CD11c^＋CD83^＋双阳性细胞比例增多,且以CD11c^＋CD83^＋双阳性的成熟DC为主;外周血来源的DC负载人脐血CD34^＋细胞后对自体淋巴细胞具有明显的刺激作用,并使T细胞TCRVβ基因谱发生取用偏移。结论：DC在AA淋巴细胞寡克隆增殖中起重要作用,但识别的何种抗原尚进一步研究。     

慢性肾功能不全患者外周血调节性T细胞的表达

目的：探讨慢性肾功能不全患者外周血调节性T细胞表达水平及意义。方法：采用流式细胞术测定40例慢性肾功能不全患者外周血CD4’T细胞占淋巴细胞（CD45^＋细胞）的比例及CD4^＋CD127^-Treg、CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果：慢性肾功能不全各组患者外周血CD4^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例显著低于健康对照组，而CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例较健康对照组无显著性差异，代偿期患者CD4^＋T占淋巴细胞的比例跟健康对照组相比，没有统计学差异，其余各期均显著高于健康对照组。患者CD4^＋T细胞占淋巴细胞的比例，CD4^＋CD127^-Treg、CD4＋CD25^＋CD127^-Treg占CD4^＋T细胞的比例与血清BUN和Cr值之间没有相关性。结论：慢性肾功能不全患者外周血CD4^＋T细胞数量增高，CD4^＋CD127^＋Treg数量降低，免疫功能异常。     

外周血树突状细胞的快速募集及其体外抗肿瘤免疫效应

目的：在外周血中快速募集树突状细胞（DC）,研究其诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肿瘤细胞的体外杀伤效应.方法：B6小鼠尾静脉注射灭活的痤疮丙酸杆菌（P.acnes）,分选出外周血B220^-CD11c^＋细胞,以GM-CSF、IL-4及mTNF-α培养5～6天,检测其表型和混合淋巴细胞反应;对荷载肿瘤抗原的B220^-CD11c^＋细胞,测定其诱导T细胞对靶肿瘤细胞的杀伤效应.结果：注射P.acnes后小鼠外周血中出现了大量的B220^-CD11c^＋细胞,经诱导可成为成熟DC.当荷载肿瘤抗原后,可致敏CD3＋T细胞在与靶肿瘤细胞反应中产生高水平的INF-γ并特异性地杀伤肿瘤细胞.结论：注射P.acnes可以直接快速动员B220^-CD11c^＋ DC前体细胞进入小鼠外周血,这些DC前体细胞可诱导强烈的体外杀伤肿瘤效应.     

EBV-LMP2A重组腺病毒体外转染树突状细胞激发特异性CTL的研究

目的：用EBV潜伏膜蛋白2A(EBV-LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞(DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL)，分析CTL的特性。方法：用AdS-LaMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC，与自体来源的外周血单个核细胞(PBMC)混合培养，激发LMP2A特异性CIL。用LDH释放法检测CIL杀伤活性；流式细胞术(FACS)检测培养细胞群体中CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 、CD56^ 细胞的组成；生物活性法检测细胞培养上清中IFN-γ含量；RT-PCR分析CTL的FasL mRNA表达。结果：EBV健康携带者及鼻咽癌患者的PBMC，经AdS-LMP2A转染的自体DC两次刺激后，都能诱导出显著的EBV-LMP2A特异的CIL。EBV健康携带者CTL的杀伤活性，随DC刺激次数的增加而逐渐增强，诱导的CTL细胞群体以CD^4 和CD8^ 细胞组成为主，且CD4^ 细胞比例高于CD8^ 细胞，另含少量CD56^ 细胞；在不同时段所诱导的CTL上清中，均含一定量的IFN-γ并随刺激次数和诱导时间的延长呈上升趋势；RT-PCR研究表明，所诱导的CTL有FasL mRNA的表达。结论：以腺病毒载体介导EBV-LMP2A基因转染的成熟DC，在体外能激发较强的LMP2A特异的功能性CTL，可用于EBV相关NPC的免疫治疗。     

冻融抗原负载树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞特异性杀伤急性白血病细胞的实验研究

我们应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 ) ,基因重组人粒 /单细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)联合培养体系自健康志愿者骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载急性髓系白血病 (AML)细胞冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,观察负载AML细胞冻融抗原后DC的状态对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对AML细胞特异性杀伤活性。我们发现负载AML冻融抗原后DC的CD1a、CD83、CD86、CD11C、HLA DR表达率为较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,且负载AML冻融抗原的DC诱导的CTL中CD3 CD8 T细胞比例 ,较诱导前明显增高 (P <0 .0 1) ,而负载AML细胞冻融抗原的DC诱导CTL对AML细胞有较强的杀伤作用 ,明显强于加或不加IL 2培养的T细胞对照组 (P <0 .0 1) ,而对K5 6 2细胞无明显的杀伤活性。通过以上实验我们认为经rhGM CSF ,rhIL 4培养产生的DC为CD14CD1a DC ,能诱导CTL对AML细胞产生明显的特异性杀伤作用 ,另外 ,负载AML细胞冻融抗原DC诱导的CTL中CD3 CD8 T细胞比例明显增高 ,提示CD8 T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD8^＋调节性T细胞亚群，探讨其与疾病活动性、肾脏损伤、血清抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白和补体C3含量的关系。方法：采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊SLE患者（n=37）外周血CD4^＋CD25^＋T、CD4^＋CD8^＋T细胞群比例，以15例RA和15例SS组成自身免疫性疾病对照，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与SLE患者疾病活动性指标SLEDAI、IgG、C3及血清抗ds-DNA抗体的关系。结果：①疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞群比例显著低于正常对照组（P〈0.01），疾病稳定期和风湿性疾病对照组与正常对照组结果差异无统计学意义。疾病活动期和稳定期SLE患者CD4＋CD8＋T细胞群比例都略高于正常对照组，但未发现结果差异有统计学意义（P〉0.05）。②疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于稳定期患者（P〈0.01）。SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值与SLEDAI、补体C3呈低度相关（r分别为-0.491、0.368，P〈0.05），CD4^＋CD25^＋T细胞数量与SLEDAI呈负相关（r=-0.578，P〈0.05）。③SLE并发肾病组外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于非肾病组（P〈0.01；P〈0.05）。同一SLE患者治疗前后CD3^＋CD4^-CD8^-细胞和NK细胞降低，CD4^＋CD25^＋细胞、CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值及CD8^＋T细胞增加，但未发现这些结果差异有统计学意义。本次研究未发现NK细胞、CD4^＋CD8＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞群比例在ds-DNA＋组与ds-DNA-组之间结果差异有统计学意义。结论：SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例与SLEDAI成负相关，与肾脏的损害也有密切关系，但与血清抗ds-DNA抗体产生的关系不明显。活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞减少，稳定期CD4^＋CD25^＋T细胞比例回升，因此推测CD4^＋CD25^＋T细胞的变化可能是导致疾病发生和病情发展及相关器官（如肾脏）损伤的关键环节之一。     

鼻咽癌患者树突状细胞对EBV特异性细胞毒T细胞的免疫反应

目的：用负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的鼻咽癌患者树突状细胞（DC）诱导自身CD8^＋T细胞，观察其细胞毒性T细胞的免疫应答能力。方法：在体外分离并诱导成熟HLA—A2基因型鼻咽癌患者自身的DC，分别负载EB病毒抗原LMP-2的HIA—A2限制型两个表位肽段CLGGLLTMV（CLG）和LTAGFIFL（LTA）后，诱导自身CD8^＋T细胞，培养2周后，运用酶联免疫斑点法（Elispot）和HLA-肽四聚体法（Tetramer）检测诱导后T细胞的免疫应答情况。结果：经DC抗原呈递后分泌IFN-γ的CLG和LTA特异性CD8^＋T细胞数，分别为（42．67±33．79）个／孔和（25．67±18．25）个／孔，而呈递前分别为（2．67±1．97）个／孔和（5．33±1．86）个／孔。两者IFN-γ^＋CD8^＋T细胞数均有明显增加（P〈0．05）。CLG和LTA肽段特异性细胞毒性T细胞（CTL）的中位数在呈递前分别为0．135％和1．14％；呈递后则为1．045％和1．945％。两者较呈递前均明显增加（P〈0．05）。结论：负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的DC诱导鼻咽癌患者自身CD8^＋T细胞，可产生特异性CTL，对鼻咽癌患者的免疫治疗具有潜在的应用价值。     

FBL3细胞在小鼠体内外诱导CD4+CD25+调节性T细胞增殖的实验研究

目的：通过小鼠体内外实验观察肿瘤细胞是否可以诱导CD4^＋CD25^＋Treg的分化增殖。方法：将小鼠的红白血病瘤细胞系FBL3接种于C57BL/6小鼠腹壁皮下,流式细胞仪检测小鼠外周血、脾脏及瘤组织CD4^＋CD25^＋Treg细胞含量,RT-PCR检测小鼠脾脏及瘤组织Foxp3 mRNA的表达;体外实验检测FBL3细胞培养上清液对小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg细胞的作用。结果：荷瘤鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg比例与正常鼠比较无统计学差异（P〉0.05）,但荷瘤鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg比例显著高于正常对照（P〈0.01）,荷瘤小鼠脾脏组织Foxp3 mRNA的表达量明显增加;体外实验表明FBL3培养上清液促使CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例增高,并诱导Foxp3 mRNA表达增加。结论：FBL3细胞及其分泌的可溶性物质能诱导CD4^＋CD25^＋Treg细胞的增殖,说明是肿瘤的发生促进了CD4^＋CD25^＋Treg增高。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在α-GalCer预防T1D中的作用机制探讨

目的：研究CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中的作用机制。方法：流式细胞仪分析反复注射α-GalCer的NOD小鼠胰腺引流淋巴结（PLN）CD4^＋CD25^＋T细胞频率,CD4＋CD25＋T细胞中FoxP3＋细胞的比例,CD4＋CD25＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）;检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能。用Anti-CD25阻断CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能。结果：α-GalCer处理过的小鼠的CD4^＋CD25^＋T细胞中FoxP3^＋细胞的比例增加,CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）增强,CD4^＋CD25^＋Treg细胞的抑制功能增强。采用CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能阻断剂后,α-GalCer不能预防T1D的发生。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中数量增加、功能增强,且是必需的。     

放疗前后食道癌患者红细胞免疫功能及T淋巴细胞亚群的变化分析

目的 研究放疗前后对食道癌患者红细胞免疫功能变化及T淋巴细胞的影响.方法 随机选择我院68例食道癌患者作为病例组,另外选取健康对照组40例.病例组接受放疗治疗（6周）,使用流式细胞仪检测病例组治疗前后及对照组血清中T细胞亚群水平,使用受体黏附法检测红细胞免疫功能.结果 治疗前红细胞免疫功能、血清T细胞亚群水平显著低于对照组（P＜0.01）,红细胞免疫复合物花环（RBC-ICR）高于对照组（P＜0.01）;治疗结束后的1周,病例组的CD4＋细胞百分率、肿瘤红细胞花环（DTER）红细胞C3b受体花环（RBC-C3bRR）进一步下降、CD8^＋细胞百分率明显升高,CD4^＋/CD8^＋比值降低;同放疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05）;放疗结束后3个月CD4^＋细胞百分率、DTER、RBC-C3bRR逐步升高、CD8^＋细胞百分率及RBC-ICR逐渐下降,CD4^＋/CD8^＋比值升高,同放疗前及放疗结束后1周比较差异具有统计学意义（P＜0.05）;结论 食道癌患者红细胞免疫功能及T淋巴细胞亚群水平低下,在刚结束放疗时,细胞免疫抑制作用为主导,放疗结束3个月后,红细胞细胞免疫、T淋巴细胞亚群功能逐渐改善.放疗可有效减少肿瘤负荷,改善患者红细胞免疫及T淋巴细胞功能.     

流式细胞术检测过敏性紫癜患儿外周血调节性T细胞的研究

目的了解过敏性紫癜（HSP）患儿外周血调节性T细胞数量的改变及其在过敏性紫癜患儿免疫功能紊乱中的调控作用。方法应用四色流式细胞术,对35例过敏性紫癜患儿和35例正常儿童的CD4^＋CD25^hi调节性T细胞、CD3^＋T淋巴细胞、CD3^＋CD4^＋辅助T细胞、CD3^＋CD8^＋抑制T细胞、CD19^＋B淋巴细胞、CD3^-CD16^＋ 56^＋NK细胞进行测定。结果HSP患儿外周血CD4^＋CD25^hi调节性T细胞、CD3^＋CD4^＋辅助T细胞、CD3-CD16^＋56＋NK细胞的百分率下降均明显低于对照组;CD19^＋B淋细胞的百分率则显著增高;而两组间CD3^＋T淋巴细胞、CD3^＋CD8^＋抑制T细胞的变化差异无统计学意义。结论HSP患儿体内存在细胞及体液免疫功能紊乱,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其数量下降可能是导致过敏性紫癜发病的重要原因之一。     

白细胞相关免疫球蛋白样受体-1在宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血T细胞的表达及意义

目的 研究白细胞相关免疫球蛋白样受体(LAIR-1)在宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血T细胞的表达情况,并与子宫肌瘤、子宫癌前病变患者相比较,探讨LAIR-1表达与肿瘤免疫的相关性.方法 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测LAIR-1在196例肿瘤患者外周血T细胞的表达水平.结果 流式细胞术检测结果显示,宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血CD3+CD4+T细胞LAIR-1阳性率均高于子宫肌瘤(P＜0.001;P＜0.05)和癌前病变患者(P ＜0.001;P ＜0.01).平均荧光强度分析结果显示,宫颈癌患者外周血CD3+CD4+T细胞LAIR-1表达水平显著高于癌前病变患者(P＜0.01),CD3+CD8+T细胞LAIR-1表达水平显著高于子宫肌瘤患者(P＜0.05)和癌前病变患者(P＜0.001).子宫内膜癌患者外周血CD3+CD4+T细胞LAIR-1表达水平明显高于子宫肌瘤患者(P＜0.05)和癌前病变患者(P＜0.01),CD3+CD8+T细胞LAIR-1表达水平高于癌前病变患者(P＜0.05).结论 LAIR-1在宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血T细胞表达上调,提示LAIR-1可能与肿瘤免疫逃逸存在相关性.     

消化道恶性肿瘤患者CD4^＋ CD25^＋ Treg的检测及意义

目的：探讨消化道恶性肿瘤患者外周血CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）水平的特点及其临床意义。方法：采用流式细胞术对60例消化道恶性肿瘤患者与30名健康体检者的外周血CD4^＋ CD25^＋Treg水平进行检测。结果：消化道恶性肿瘤外周血CD4^＋ CD25^＋ Treg占总T细胞7.16%±3.37%,与对照组CD4^＋ CD25^＋ Treg4.52%±1.76%比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：恶性肿瘤患者外周血CD4^＋ CD25^＋Treg水平的升高,与恶性肿瘤免疫功能低下及肿瘤的发生、发展密切相关。     

手足口病患儿T淋巴细胞亚群与CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群及CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞在手足口病病人发病中的临床意义。方法采用流式细胞术检测了46例手足口病患者以及17例健康体检者外周血T细胞亚群CD3^＋、CD3^＋CD4ˉCD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8ˉ与CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞水平。结果与正常对照组相比,手足口病患者组CD3^＋、CD3^＋CD4ˉCD8’、CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞的百分率降低（P值分别为0．008、0．050、0．025）。CD3^＋CD4^＋CD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8ˉ百分率以及CD4／CD8比值差异无统计学意义（P值分别为0．847、0．775、0．149）,以上各细胞亚群的百分率以及CD4／CD8比值在年龄与性别方面差异无统计学意义。结论手足口病患者CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞、CD3^＋、CD3^＋CD4ˉCD8^＋异常变化提示其免疫功能异常。     

T淋巴细胞亚群检测在呼吸系统性疾病的诊断价值

目的：探讨T淋巴细胞亚群检测在呼吸系统性疾病的诊断价值。方法：采用流式细胞术对呼吸系统性疾病和正常健康人体内淋巴细胞亚群检测,并通过检测数据分析其淋巴细胞亚群功能变化。结果：①肺结核组、肺炎组和肺癌组的CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及T4／T8比值水平均明显低于正常对照组,差异均有极显著变化（P〈0．01）,而CD3^＋CD8^＋水平明显高于正常对照组,差异有极显著变化（P〈0．01）;②肺结核组、肺炎组与肺癌组T淋巴细胞亚群比较：CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及T4／T8比值水平均明显高于肺癌组,差异均有极显著变化（P〈0．01）,而CD3^＋CD8^＋水平明显低于肺癌组,差异有极显著变化（P〈0．01）;③肺结核组与肺炎组比较：CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋及T4／T8比值水平无显著性差异（P〉0．05）。结论：T淋巴细胞亚群参与了呼吸系统性疾病（肺结核、肺炎和肺癌）的病理过程,在其呼吸系统性疾病的发生、发展中起着十分重要的作用。因此,监测呼吸系统性疾病患者外周血T淋巴细胞亚群,可对肺结核和肺炎患者的疗效作出评估和免疫增强提供理论依据,对肺癌患者的辅助免疫治疗支持参照。     

输血相关急性肺损伤患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞变化的临床意义

目的检测输血相关急性肺损伤（TRALI）患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞（Treg）的计数及其功能基因又头框蛋白3（Foxp3）mRNA的表达水平,以及探讨其与疾病预后的关系。方法收集2008年6月至2011年11月期间健康体检者（对照组,n=30）和重症监护病房收治的TRALI患者[TRALI组,n=26,TRALI组按预后又分为死亡组（n=5）和存活组（n=21）]外周抗凝血,采用流式细胞术分析各组T细胞亚群。采用四色流式细胞术以Foxp3-FITC／CD25-PE／CD4-PerCP／CD3-PC7抗体组合检测各组受试者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的计数,比较死亡组和存活组患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的水平。实时荧光定量PCR技术检测特异性转录因子Foxp3mRNA的表达水平,并分析患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的比例与Foxp3mRNA的表达水平的关系。结果TRALI患者与对照组健康人间CD3＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞计数的差异无统计学意义,而CD3＋CD8＋T细胞则较对照组增加（P〈0．05）,CD4＋／CD8＋比值降低（P〈0．05）。死亡组CD3＋CD8＋T细胞比例高于存活组（P〈0．05）,C133＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞比例和CD4＋／CD8＋比值则低于存活组（均P〈0．05）。TRALI患者外周血CD4＋CD2.5high Foxp3＋Treg计数为（8．86±3．14）％,明显高于健康对照组（5．67±2．43）％（P〈0．05）。TRALI死亡组患者外周血CD4＋CD2shighFoxp3＋Treg计数为（11．23±3．79）％,显著高于存活组患者（7．69±3．21）％（P〈0．05）。TRALI患者外周血Foxp3mRNA的表达水平为（3．77±2．73）×10^5拷贝/ug,显著高于对照组（0．43±0．21）×10^5拷贝／μg（P〈0．05）。TRALI患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg计数与Foxp3mRNA的表达水平呈正相关（r=0．5131,P〈0．05）。结论TRAM患者外周血CD4＋CD.5highFoxp3＋Treg和Foxp3mRNA的变化可能是导致TRALI疾病发展的关键因素之一,与?     

脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究

目的初步探讨成人脂肪源间充质干细胞（adult adipose tissue-derived mesenchymal stem cells．AMSC）治疗急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease，aGVHD）的分子机制。方法3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者，以每公斤体质量2×10^6个细胞剂量静脉输注AMSC；应用RT-PCR扩增患者AMSC使用前后外周血单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族的CDR3，了解患者TCR Vβ T细胞的分布情况；应用尼龙毛柱分离外周血T淋巴细胞，再经CD8磁珠分选出CD8^＋ T淋巴细胞．应用流式细胞术检测发生aGVHD患者使用AMSC前后外周血CD8^＋T细胞亚群的变化。结果患者发生aGVHD时，有TCR Vβ3及其他亚家族基因表达，输注AMSC后，GVHD得以有效控制。Vβ3不表达；当患者GVHD复发时，Vβ3基因又表达，治疗后不表达；与输注AMSC前相比，输注AMSC后，CD8^＋T细胞中的CD8^＋CD28^-亚群显著上调（P〈0．05），同时．患者的aGVHD得以有效控制。结论AMSC治疗aGVHD的分子机制可能与其抑制TCR Vβ亚家族基因表达有关，TCR Vβ3可能是AMSC作用的靶基因；同时，AMSC治疗aGVHD的作用机制可能与其上调CD8^＋CD28^-T细胞亚群有关．CD8^＋T细胞可能是AMSC作用的靶细胞。     

肺炎支原体肺炎患儿外周血T淋巴细胞表面IL-18Rα的变化及意义

目的：探讨肺炎支原体肺炎（MPP）患儿外周血T淋巴细胞表面IL-18Rα表达的意义。方法：采用流式细胞术测定35例MPP患儿外周血T淋巴细胞亚群（CD3/CD4/CD8）和T淋巴细胞表面IL-18Rα的表达水平,并与正常对照组比较。结果：MPP患儿T细胞亚群与正常对照相比,CD3^＋细胞百分率降低（P〈0.05）,51.4%的MPP患儿CD4^＋/CD8^＋在1.0-1.9的范围之外。急性期MPP组CD4^＋T和CD8^＋T淋巴细胞表面IL-18Rα的表达较正常对照组明显升高,有显著性差异（P〈0.01）;恢复期与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。恢复期表达水平下降,与急性期比较有显著性差异（P〈0.05）。T细胞亚群异常组与正常组相比,CD4^＋T和CD8^＋T细胞IL-18Rα表达明显增高（P〈0.01）,T细胞亚群正常组与正常对照无明显差别（P〉0.05）。结论：MPP患儿存在细胞免疫功能紊乱,外周血T淋巴细胞存在Th1/Th2失衡,急性期表现为Th1优势应答。