不同底物对Sombati癫(癎)细胞模型整合素α2表达的影响

目的:探讨不同底物对经体外培养的Sombati癫(癎)细胞模型海马神经元整合素α2表达水平的影响及意义.方法:以层黏连蛋白和多聚L-赖氨酸作为底物于体外培养新生小鼠海马神经元,至第7天时行神经元纯度鉴定;无镁细胞外液继续培养3h后制备Sombati癫(癎)细胞模型,逆转录-聚合酶链反应检测小同处理组海马神经元整合素α2...     

Sombati癫癎细胞模型电压依赖性钾电流的变化

目的：采用全细胞膜片钳记录技术研究Sombati癫癎细胞模型电压依赖性K＋电流的变化。方法：取SD新生乳鼠双侧海马,体外原代培养海马神经元,培养至第9天的部分海马神经元经无镁液处理3h制备癫癎细胞模型,采用全细胞膜片钳技术分别记录正常组（未经无镁液处理的海马神经元）和致癎组（经无镁液处理3h后更换为正常维持培养液的海马神经元）海马神经元的电压依赖性外向K＋电流。结果：致癎组外向K＋电流比正常组增大,峰值电流由（596.62±79.23）pA增至（978.68±53.23）pA,两组间比较差异有统计学意义（P=0.000）。与正常组相比,致癎组的I-V曲线明显左移,I-V曲线形态无显著改变。结论：Sombati癫癎细胞模型中,电压依赖性外向K＋电流显著增加可能是癫癎细胞模型癎性放电后为了保持细胞稳态的代偿性保护作用。     

内侧颞叶癫癎病人脑组织GABRG2基因变异研究

目的探讨GABRG2基因变异与内侧颢叶癫癎的关系.方法运用RT-PCR方法测定内侧颞叶癫癎致癎灶和其他类型癫癎病人手术切除脑组织内的GABRG2基因mRNA序列.结果全组共发现3处单核苷酸多态性,其电内侧颞叶癫癎组245 G→A出现频率与对照组存在统计学差异.结论GABRG2基因突变极有可能在内侧颞叶癫癎的发病中起重要作用.     

轴突导向因子EphrinA2在难治性癫(癎)患者颞叶中的表达

目的 检测轴突导向因子EphrinA2在难治性癫(癎)患者颞叶中的表达,探讨颞叶癫(癎)的发病机制.方法 难治性癫(癎)患者(实验组)颞叶标本12例,正常(对照组)颞叶脑组织标本2例.采用免疫组织化学方法,观察EphrinA2在患者颞叶和正常颞叶组织中表达变化.结果 癫(癎)患者颞叶组织细胞中EphrinA2呈阳性反应,细胞体积较对照组膨胀增大,细胞黄染,胞浆内为棕黄色的阳性反应颗粒,呈圆形或椭圆形;对照组细胞体积正常,胞浆为蓝色.实验组EphrinA2的OD值与对照组比较,显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EphrinA2参与了癫(癎)的病理生理过程,EphrinA2在癫(癎)中的高表达可能与在颞叶癫(癎)患者轴突出芽和突触重建有关.     

红藻氨酸诱发大鼠复杂部分性癫癎发作的海马神经元和星形胶质细胞反应及相互关系

目的:观察大鼠癫发作后海马内神经元与星形胶质细胞反应变化的时空效应及相互关系。方法:以红藻氨酸诱发的大鼠复杂部分性癫发作为模型,利用免疫组织化学法,在原位显示癫发作后153、0、60、901、20、180 min 6个时间点海马神经元Fos蛋白及星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化、相互关系及分布规律。结果:致后15 min海马内GFAP表达开始增多,60 min达高峰。Fos阳性神经元在癫诱发后30 min开始出现,120 min达高峰。海马内GFAP阳性细胞与Fos阳性神经元分布规律基本一致。结论:在癫病理状态下,海马内星形胶质细胞的反应略早于神经元,两者之间分布呈平行关系,它们之间可能存在着复杂的信息通讯,以复合体的形式共同对各种病理生理刺激作出反应。     

AG490对氯化锂-匹罗卡品致癫癎大鼠星形胶质细胞活化及癫癎的影响

目的 探讨匹罗卡品致癫癎大鼠海马肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达、星形胶质细胞活化及JAK/STAT信号转导通路在颞叶癫癎发作中的作用.方法 应用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品(PILO)的方法建立颞叶癫痫 间模型,应用JAK/STAT信号转导通路特异性抑制剂AG490进行腹腔注射建立干预模型组;用Western blotting方法测定大鼠海马匀浆后TNF-α表达水平的变化,用免疫荧光观察AG-490阻滞JAK/STAT通路后对大鼠海马TNF-α表达水平与星形胶质细胞活化及癫痫 间发作的影响.结果 (1)PILO致癫痫 间模型组有80.00%(32/40)的大鼠达Racine分级Ⅳ级以上发作;10.00%(4/40)的雄性大鼠死亡;10.00%(4/40)的雄性大鼠未达Racine分级Ⅳ级发作,模型成功率为80.00%;1月后有自发发作者8只(25.00% 8/32).AG490干预组雄性大鼠Ⅳ级以上发作的发生率为75.00%(30/40);病死率为7.50%(3/40);17.50%(7/40)的雄性大鼠未达Ⅳ 级发作,模型成功率为75%;1月后有自发发作者1只(3.3% 1/30),AG490组Ⅳ级及以上发作及自发发作数与PILO致癫痫 间模型组比较,有显著性差异(P<0.05);(2)PILO致癫癎模型组TNF-α表达水平较对照组开始增高,AG490干预组TNF-α表达水平均较 PILO致癫癎模型组明显降低(P<0.05);(3)PILO癫痫 间模型组可见阳性颗粒在星形胶质细胞内的空间分布,AG490腹腔注射建立干预后阳性颗粒的星形胶质细胞明显减少(P<0.05).结论 癫痫 间发作后TNF-α表达水平明显增高,提示星形胶质细胞增生.AG490可阻断JAK/STAT信号转导通路进而抑制星形胶质细胞活化,同时也可以影响癫痫 间大鼠的行为学变化,提示AG490对癫癎的发作可能有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制星形胶质细胞增生有关.     

雌激素对癫癎大鼠大脑皮层、海马FOS蛋白表达的影响

目的;了解雌激素对马桑内酯（ＣＬ）致■大鼠中枢神经系统ＦＯＳ蛋白（ＦＯＳ）表达的影响。方法：应用流式细胞免疫荧光技术对ＣＬ致■及给予雌激素后再致■大鼠大脑皮层、海马细胞ＦＯＳ表达进行定量检测。结果：ＣＬ致■组大鼠大脑皮层、海马ＦＯＳ表达的荧光指数（ＦＩ）和阳性细胞数较正常对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）;给予雌二醇（Ｅ２）后再致■组皮层、海马ＦＯＳ表达较单纯ＣＬ致■组增加（Ｐ＜００５,Ｐ＜０．０１）。结抡：由于ＦＯＳ可作为神经元兴奋的标志,雌激素可以提高皮层、海马神经细胞的兴奋性,提示雌激素有致■性。     

内侧颞叶癫病人脑组织GABRG2基因变异研究

目的探讨GABRG2基因变异与内侧颢叶癫癎的关系.方法运用RT-PCR方法测定内侧颞叶癫癎致癎灶和其他类型癫癎病人手术切除脑组织内的GABRG2基因mRNA序列.结果全组共发现3处单核苷酸多态性,其电内侧颞叶癫癎组245 G→A出现频率与对照组存在统计学差异.结论GABRG2基因突变极有可能在内侧颞叶癫癎的发病中起重要作用.     

钠离子通道β1亚单位基因三位点等位基因组合分布与癫癎的相关性

目的 分析钠离子通道β1亚单位(SCN1B)基因3个位点(C121W、T189M、R85H)的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNP)的基因组合分布与癫癎的关系.方法 采用等位基因特异性引物PCR技术(ASP-PCR)对SCN1B 3个位点SNP进行检测,并用SAS 8.1统计软件包对所得数据进行分析.结果 从单个位点的基因型来看,癫癎病例组(180例)与健康对照组(150名)3个位点构成在两组间差异具有统计学意义(x~2=11.19、11.14、6.50,P<0.05),在难治性癫癎组(80例)与非难治性癫癎组(100例)间差异不具有统计学意义(P>0.05).从组合基因方面分析,3个位点突变癫癎组为36例(28.80%),高于健康对照组(10名,9.71%),差异具有统计学意义(x~2=12.54,P<0.01);难治性癫癎组18例(30.51%),非难治性癫癎组21例(28.77%),差异无统计学意义.2个位点突变的癫癎组50例(40.00%),健康对照组41名(40.20%),差异无统计学意义;难治性癫癎组25例(42.37%),非难治性癫癎组21例(28.71%),差异亦无统计学意义.结论 SCN1B基因突变尤其是多个位点突变的人群易患癫癎,基因组合分布在难治性与非难治性癫癎患者中较为相近.     

苯巴比妥对癫癎患者血清免疫球蛋白含量的影响

目的研究单药苯巴比妥(PB)治疗癫(Epilepsy,EP)患者的血清免疫球蛋白含量变化。方法采用免疫比浊法测定48例单药PB抗癫治疗EP患者及30例健康对照组的血清免疫球蛋白含量。结果健康对照组IgAI、gGI、gM含量分别为2.00±0.441、2.80±2.011、.56±0.28(g/L),单药PB抗癫治疗EP患者IgA、IgGI、gM含量分别为1.08±0.69、14.33±2.66、1.44±0.22(g/L),EP患者组IgA含量低于健康对照组(P<0.01),IgG含量高于健康对照组(P<0.05),IgM含量与健康对照组没有显著差异(P>0.05)。结论单药苯巴比妥抗癫治疗EP患者IgA含量下降可能与服用苯巴比妥相关,而与病史长短及发作类型无明显相关(P>0.05)。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子和层黏连蛋白受体在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)和层黏连蛋白受体(LN-R)在胶质瘤中的表达及意义.方法 采用RT-PCR对48例人脑胶质瘤组织的CD147和LN-R的mRNA表达情况进行半定量分析.结果 胶质瘤CD147和LN-R mRNA的阳性表达率分别为66.67%和58.33%,联合表达率为56.25%,两者之间存在正相关(r=0.815,P＜0.01).随着胶质瘤级别增高、侵袭能力增强,CD147和LN-R的mRNA表达水平也相应增高.结论 CD147和LN-R表达与胶质瘤恶性程度密切相关,其可作为判断胶质瘤病人临床预后和治疗有效的参考指标.     

胍丁胺对戊四氮诱导慢性癫癎大鼠的保护作用和海马星形胶质细胞表达的影响

目的:探讨不同剂量胍丁胺对戊四氮诱导的慢性癫癎大鼠模型的保护作用及对海马区星形胶质细胞表达的影响。方法:连续28 d腹腔注射戊四氮35 mg.kg-1建立大鼠慢性癫癎模型。不同剂量胍丁胺(20、40、80 mg.kg-1)进行干预。观察大鼠癫癎发作行为学及海马的形态学变化,检测海马星形胶质细胞的表达。结果:胍丁胺40、80 mg.kg-1可降低癫癎发作的日均等级评分,减少海马神经元丢失及星形胶质细胞增生。结论:胍丁胺40、80 mg.kg-1可抑制慢性癫癎大鼠发作,降低惊厥发作后海马星形胶质细胞的异常增生及神经元损伤。     

妊娠期癫(癎)发作和抗癫(癎)药物对胎儿脑神经元突触素的影响

目的探索妊娠期癫发作和抗癫药对胎儿脑神经元突触素p38(synaptophysin)的影响,以加深对妊娠期癫发作危害胎儿脑发育的认识。方法6月龄引产胎儿分为3组:1组为妊母正常组(6例),2组为妊母应用抗癫药物控制发作组(6例),3组为妊母未应用抗癫药物控制发作组(6例)。运用免疫组化法检测突触素p38在各组胎儿脑部颞叶海马旁回的变化。结果1组免疫组化切片阳性表达产物光密度值(OD)为0.17±0.05,2组为0.16±0.08,3组为0.11±0.07,1、2组阳性表达产物无显著差异(P>0.05),而1、2组分别与3组比较,均有差异(P<0.05),p38在妊母未应用抗癫药物控制发作组胎儿海马旁回中的表达较妊母正常组及妊母应用抗癫药物控制发作组明显减少。结论研究结果表明妊期癫发作对胎儿脑发育的危害比抗癫药物对胎儿的毒性更大。     

拉莫三嗪对癫癎患者生活质量影响的研究

目的:评价拉莫三嗪对癫癎患者生活质量的影响.方法: 采用多中心、前瞻性的研究方法,对新诊断癫癎患者应用拉莫三嗪治疗,并在基线期及用药6个月后,采用QOLIE-31、MOS SF-36量表、数字符号转换测验、HAMD抑郁量表和女性专用调查问卷对患者进行生活质量评价.结果: 共纳入新诊断癫癎患者282例.MOS SF-36量表的8个项目得分在用药后均有显著提高(P<0.01);QOLIE-31问卷中"对癫癎的担心","情绪"、"活力","认知","药物不良反应"、"社会功能"及"总体自身健康评价"项目得分在用药后均有显著提高(P<0.01).用药后,患者Hamilton抑郁量表平均3.65分,显著低干基线期6.42分(P<0.01);数字符号转换测验得分在用药后与基线期比较有显著提高(P<0.01).结论: 拉莫三嗪初始单药治疗能在一定程度上改善新诊断癫癎患者的生活质量.     

戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆改变及海马NR2B表达

目的观察戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆功能变化及海马NMDA2型受体(NR2)B亚单位(NR2B)表达,探讨二者的关系及PTZ致癎大鼠认知障碍发生的分子机制。方法采用戊四氮(PTZ)慢性癫癎(CE)模型,Y-迷宫对两组大鼠进行行为学检测,免疫组织化学方法观察两组大鼠海马CA3区NR2B表达的变化,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马NR2B mRNA的表达。结果癫癎组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马CA3区NR2B阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01),同时伴有海马NR2B mRNA表达下降(P<0.01)。结论戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元NR2B的表达减少有关。     

抗癫(癎)药物对认知功能的影响

癫(癎)是脑部神经元异常放电高度同步化活动所引起的,由不同症状和体征组成的短暂性临床现象.其特点是脑部持续存在的导致癫(癎)反复发作的易感性,以及由于这种疾病引起的神经生物、认知、心理和社会功能障碍等方面的后果.     

TNF-α和IFN-γ影响许旺细胞生长及髓鞘相关糖蛋白mRNA表达水平的研究

目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)对体外培养的许旺细胞(SCs)生长和髓鞘相关糖蛋白(MAG)mRNA 表达水平的影响.方法 建立许旺细胞与神经细胞(NCs)联合培养模型,绘制许旺细胞生长曲线,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α和INF-γ对MAGmRNA 表达水平的影响.结果 许旺细胞培养液中加入TNF-α和IFN-γ后,许旺细胞增殖数目明显增加且高于单纯许旺细胞培养组(q = 7.476,P = 0.000;q = 6.631,P = 0.000);而TNF-α组与IFN-γ组之间差异无统计学意义(q = 0.846,P = 0.411).无神经细胞存在时,许旺细胞不表达MAG mRNA;经神经细胞诱导后,许旺细胞MAG mRNA 表达阳性,且具有时间性;加入TNF-α和IFN-γ后,许旺细胞MAG mRNA 表达水平明显升高,且高于单纯许旺细胞与神经细胞共培养组(q = 8.128,P = 0.000;q = 6.614,P = 0.000),而加入TNF-α和IFN-γ的许旺细胞与神经细胞共培养组之间差异无统计学意义(q = 1.515,P = 0.156).结论 TNF-α和IFN-γ具有促进许旺细胞增殖作用,且可提高髓鞘特异性基因MAG mRNA 表达水平.提示,这两种炎性干扰因子可通过影响许旺细胞及MAG mRNA 表达水平而间接影响髓鞘修复,为研究炎性脱髓鞘性神经疾病慢性期髓鞘修复障碍的发病机制提供了新的思路.     

奥卡西平对癫癎患儿外周血MDR1表达的影响

目的通过比较奥卡西平(oxcarbazepine,OXC)和卡马西平(carbamazepine,CBZ)对癫癎患儿外周血多药耐药基因1(MDR1)表达的影响,初步探讨长期应用OXC治疗癫癎对患儿外周血MDR1的诱导作用。方法 48例癫癎患儿分为2组,26例口服OXC,22例口服CBZ,治疗时间均超过12个月;25例无癫发作患儿为空白对照组。选择用药前、用药后6个月及12个月三个时间点,应用RT-PCR法测定患儿外周血MDR1-mRNA的表达。结果 OXC组和CBZ组外周血MDR1-mRNA表达在用药后6个月、12个月较对照组增高(P<0.01);OXC组和CBZ组患儿外周血MDR1-mRNA表达在用药后6个月及12个月较开始服药前均有增高(P<0.05);OXC组在用药6个月及12个月后外周血MDR1-mRNA表达和卡马西平组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论长期口服OXC和CBZ均会增加癫癎患儿外周血MDR1基因的表达。