肿瘤特异性凋亡基因诱导人宫颈癌细胞凋亡作用

目的 研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人宫颈癌细胞凋亡过程中信号转导机制.方法 用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人宫颈癌细胞(hela);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测hela细胞的凋亡;以比色法检测胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)的相对活性.结果 Apoptin基因瞬间转染的hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率[(40.45±0.76)%]明显高于正常对照组[(3.25±0.16)%]和载体对照组[(3.55±0.12)%](P＜0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性无明显变化.结论 Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导hela细胞凋亡.     

肿瘤特异性基因对黑色素瘤细胞凋亡诱导作用

近年来的研究发现．鸡贫血病毒(Chicken anemia virus．CAV)VP3基因编码的一种蛋白质,可能通过独立于p53作用途径，不被Bcl-2抑制的方式，诱导人肿瘤细胞或转化细胞发生凋亡，而对人正常细胞没有毒性作用，故称之为肿瘤特异性凋亡因子（Apoptin）。其独特的诱导凋亡作用，有望成为一种新的有产的抗肿瘤药物。我们在克隆和构建VP3基因真核表达载体的条件下，     

三丁基锡诱导细胞凋亡的机制

三丁基锡（TBT）的大量使用造成了严重的环境污染,从而给人类以及其他生物带来了很大的危害。作为一种细胞毒性化学物,诱发细胞凋亡是TBT作用于细胞的一种重要方式。该文主要综述了低浓度TBT诱发细胞凋亡的机制。     

肿瘤特异性凋亡基因对人淋巴瘤细胞诱导作用

目的观察肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)对人淋巴瘤细胞U937的凋亡诱导作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937；采用台盼蓝染色法、RT—PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人淋巴瘤细胞U937诱导凋亡的作用。结果Apopin基因瞬间转染的人淋巴瘤细胞U937可出现明显的细胞凋亡：而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关。结论Apoptin基因具有诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡的作用。     

Caspase-3与肝癌细胞凋亡

肿瘤细胞增殖与凋亡的失衡是肿瘤发生和发展的重要环节。Caspase-3（半胱天冬酶-3）是介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶，即Caspase中的关键效应酶，是凋亡执行的重要效应分子，广泛表达于正常人体组织及多种肿瘤组织中。大量研究表明Caspase-3蛋白酶激活与肝癌细胞凋亡有密切联系。现就Caspase-3与肝癌细胞凋亡的关系综述如下。     

亚急性高原低氧对移居大鼠海马神经元凋亡和CA1区半胱天冬蛋白酶-3表达的影响

目的初步探讨亚急性高原低氧对移居大鼠海马神经元凋亡和CA1区半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响及其机制。方法将48只清洁级健康成年Wistar雄性大鼠随机分为2组,低海拔对照组(海拔400m),亚急性高原组(海拔4300m);在不同海拔喂养30d后,取海马组织,利用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率,通过免疫组织化学法观察CA1区神经元Caspase-3的表达变化,并测定海马组织MDA含量、SOD活力、Ca2+-ATP酶活力和钙含量。结果与低海拔对照组相比,亚急性高原组大鼠海马神经元凋亡率、CA1区神经元Caspase-3免疫组化阳性细胞数、MDA含量、钙含量均较高,而Ca2+-ATP酶活力降低,差异均有统计学意义(P0.01)。两组SOD活力间差异无统计学意义。结论亚急性高原低氧可诱导移居大鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与其降低Ca2+-ATP酶活力、增加组织钙含量,使自由基含量升高有关。     

细胞凋亡过程中的信号转导

多种金属离子、细胞因子、死亡受体等都能诱导细胞凋亡。细胞凋亡的信号转导过程涉及了凋亡信号的产生、凋亡信号经各种信号转导途径的传递，及细胞内的凋亡效应器对细胞凋亡的调控执行三个阶段。细胞内还存在抗凋亡的信号转导途径，凋亡的信号转导与抗凋亡的信号转导共同作用，一起调节着细胞的生死。本文对上述问题作了综述。     

脓毒症大鼠脾细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达及中药血必净的影响

目的观察血必净对脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达以及半胱天冬酶(caspase)3活性的影响。方法96只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)、模型组(40只)和血必净治疗组(40只),以盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症模型;TUNEL法检测脾细胞凋亡情况、分光光度法测定脾组织半胱天冬酶3活性、流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中CD3+细胞比例以及免疫组化法检测脾脏FasL、Bcl-2蛋白表达水平。结果假手术组大鼠脾脏FasL表达的IOD值为4.54±1.41,模型组较之明显增多,至48 h达757.96±188.10,假手术组大鼠脾脏Bcl-2表达的IOD值为594.05±183.32,模型组表达下降,于48 h仅为22.71±9.22,假手术组仅有少量细胞凋亡(0.87±0.51),半胱天冬酶3活性较低(4.34±1.34),CD3+细胞比例为63.49%;模型组于造模后4 h起脾组织细胞凋亡数增多达8.88±3.68,半胱天冬酶3活性升高至12.22±3.15,而脾细胞中CD3+细胞比例明显下降为52.09%;血必净干预后可明显降低脾脏FasL表达、促进Bcl-2表达,减轻脾组织半胱天冬酶3活化程度,减少脾细胞凋亡,并使CD3+细胞比例恢复正常。结论脓毒症时凋亡途径的活化使脾细胞过度凋亡,引起了免疫失衡的发生,血必净可以通过调节凋亡相关蛋白的表达,减轻脾细胞凋亡,恢复脓毒症的免疫平衡。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H₂O₂诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。方法通过检测caspase(半胱天冬酶)-6和caspase-9活性水平考察C3G对损伤细胞的影响,并采用Western blot法检测cleaved caspase-3、cleavedPARP、Bcl-2和Bax的蛋白表达量变化。结果 H₂O₂损伤细胞后,凋亡相关蛋白酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L C3G预处理损伤细胞后,caspase-6和caspase-9活力显著低于损伤组(P<0.05),并呈浓度依赖性降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白表达量均呈浓度依赖性下调,显著低于损伤组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较损伤组比显著提升(P<0.05)。结论矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H₂O₂诱导的HEK-293细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能是通过调控caspa...     

Apoptin基因对小鼠S180荷瘤细胞抑制作用

目的研究肿瘤物异性凋亡基因（apoptingene）对肿瘤细胞的抑制作用。方法以S-180肉瘤细胞的荷瘤小鼠为模型，用克隆的肿特异性凋亡基因的真核表达载体直接进行基因抑制，分别测定小鼠体内的肿留大小、荷瘤小鼠生存期和肿瘤细胞的凋亡。结果与对照组相比，基因抑制组小鼠一般生长状态良好、体内肿瘤生长明显减缓（P〈0．01）、生存期延长、体重增加，在基因抑制的肿瘤组织中可检测到肿瘤特异性凋亡基因mRNA的表达及肿瘤细胞的7岗亡。结论肿瘤特异性凋亡基因在体内具有明显的抗肿瘤作用，对开展肿瘤的基因治疗有一定意义。     

金雀异黄素诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究

采用 4’ ,6 二乙酰基 2 苯基吲哚染色、琼脂糖凝胶电泳实验观察了金雀异黄素 (Gen)对体外培养的人胃癌SGC 790 1细胞的凋亡诱导作用 ,并采用WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞p5 3、Caspase 3蛋白的表达情况。结果显示 ,Gen诱导了胃癌细胞凋亡 ,并抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达。结果提示 ,Gen抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达 ,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一     

神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡的作用

目的 探讨外源性神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用。方法 采用噻唑兰(MTT)显色法、荧光显微镜、电镜观察以及通过免疫组化方法检测Fas、P53的表达情况。结果 神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用，并可诱导HT-29细胞产生凋亡，并随着神经酰胺浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加；Fas蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现逐渐升高的趋势，p53蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论 神经酰胺能诱导HT-29细胞产生凋亡。     

微波辐照对心肌细胞凋亡促进基因影响

目的探讨微波辐照诱导心肌细胞凋亡的分子病理机制。方法以功率密度峰值为950mW/cm2的脉冲微波辐照心肌细胞0,30,60,120s后,采用倒置显微镜观察心肌细胞形态,流式细胞仪及原位末端标记方法检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测多种凋亡相关基因表达的变化。结果辐照后心肌细胞呈现出典型的细胞凋亡形态。辐照60s后6,24h,心肌细胞凋亡率分别为（36.76±5.31）和（26.44±3.94）,与对照组（2.36±0.87）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。原位末端标记结果表明,心肌细胞凋亡率与辐照剂量呈正相关。凋亡促进基因Bax、P53、双向调控基因c-myc表达显著增强（P〈0.01）,凋亡抑制基因Bcl-2表达一过性增强,随后明显降低（P〈0.01）。结论心肌细胞是微波辐照损伤的敏感细胞,微波辐照可诱导心肌细胞凋亡,并存在剂量效应关系。Bcl-2/Bax、P53、c-myc参与微波辐照诱导的心肌细胞凋亡并发挥重要调控作用。     

大豆异黄酮诱导胃癌细胞凋亡作用研究

目的：体外实验探讨大豆异黄酮诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法：采用MTT比色法测定大豆异黄酮对胃癌细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL染色法，定性、定量地研究大豆异黄酮与胃癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT－PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：大豆异黄酮对胃癌细胞有明显抑制作用，随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强；透射电镜可见胃癌细胞出现典型的凋亡细胞形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法可染色阳性的胃癌细胞出现细胞核碎裂，核质固缩，细胞膜突出形成质膜小泡等凋亡细胞形态学变化。免疫组织化学和RT－PCR法发现大豆异黄酮下调bcl-2的表达，上调bax的表达。结论：诱导胃癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗胃癌作用的机制之一，大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。     

维甲酸诱导肺癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨维甲酸(RA)诱导肺癌细胞的凋亡.[方法]采用吖啶橙(AO)荧光染色及透射电镜(TEM)观察RA作用后的肺癌A59细胞株的凋亡改变.[结果]RA(10-5M/L)作用6 d后,A59细胞由2×104/L下降为0.9×104个/L,AO荧光染色后RA处理组较对照组有更多的凋亡细胞及凋亡指数,P＜0.05,(TEM)亦观察到在RA处理组中有明显的凋亡改变.[结论]RA能够抑制肺癌细胞的增殖并诱导该肿瘤细胞出现凋亡改变.     

甲基丙烯酸环氧丙酯对人支气管上皮细胞周期及凋亡影响的研究

目的探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)对人支气管上皮细胞周期及凋亡的影响。方法人支气管上皮细胞(16HBE)经1~16μg/ml剂量的GMA染毒不同次数后,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的改变,同时测定细胞分裂指数(MI)。结果经1次染毒处理后,随着染毒剂量的增加,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞显著增加,凋亡细胞数增多,细胞分裂指数下降;随着染毒次数的增加,各剂量组细胞周期均明显阻滞于G0/G1期,但高剂量组细胞仍表现出S期和G2/M期增多现象;经3次染毒后,高剂量组细胞出现凋亡率下降、分裂指数升高现象。结论经GMA染毒处理后,16HBE细胞周期由G0/G1期向S期和G2/M期移动而呈现增殖性改变。     

Induction of apoptosis by a hexane extract of aged black garlic in the human leukemic U937 cells

BACKGROUND/OBJECTIVES

In this study, the apoptogenic activity and mechanisms of cell death induced by hexane extract of aged black garlic (HEABG) were investigated in human leukemic U937 cells.

MATERIALS/METHODS

Cytotoxicity was evaluated by MTT (3-(4, 5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazoliumbromide) assay. Apoptosis was detected using 4,6-diamidino-2-phenyllindile (DAPI) staining, agarose gel electrophoresis and flow cytometry. The protein levels were determined by Western blot analysis. Caspase activity was measured using a colorimetric assay.

RESULTS

Exposure to HEABG was found to result in a concentration- and time-dependent growth inhibition by induction of apoptosis, which was associated with an up-regulation of death receptor 4 and Fas legend, and an increase in the ratio of Bax/Bcl-2 protein expression. Apoptosis-inducing concentrations of HEABG induced the activation of caspase-9, an initiator caspase of the mitochodrial mediated intrinsic pathway, and caspase-3, accompanied by proteolytic degradation of poly(ADP-ribose)-polymerase. HEABG also induced apoptosis via a death receptor mediated extrinsic pathway by caspase-8 activation, resulting in the truncation of Bid, and suggesting the existence of cross-talk between the extrinsic and intrinsic pathways. However, pre-treatment of U937 cells with the caspase-3 inhibitor, z-DEVD-fmk, significantly blocked the HEABG-induced apoptosis of these cells, and increased the survival rate of HEABG-treated cells, confirming that HEABG-induced apoptosis is mediated through activation of caspase cascade.

CONCLUSIONS

Based on the overall results, we suggest that HEABG reduces leukemic cell growth by inducing caspase-dependent apoptosis through both intrinsic and extrinsic pathways, implying its potential therapeutic value in the treatment of leukemia.     

9-羧酸蒽对人髓性白血病细胞株HL-60凋亡的研究

目的　研究氯通道抑制剂 9-羧酸蒽 ( 9-AC)对人髓性白血病细胞株HL - 6 0的影响 ,并对相关机制进行探讨。方法　体外培养人白血病细胞株HL - 6 0 ,采用透射电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等观察9-A对HL - 6 0细胞的作用。结果　在 5× 10 -4 mol/L 9-AC作用 48h后 ,细胞发生明显的改变。电镜下细胞形成典型的凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性梯形条带。流式细胞仪分析表明 ,实验组HL - 6 0细胞出现明显的亚二倍体峰 -凋亡峰。结论　 9-AC具有明显的诱导白血病细胞HL - 6 0凋亡的作用。     

胡桃醌诱导宫颈癌Caski细胞凋亡作用

目的 探讨胡桃醌对宫颈癌Caski细胞增殖影响及其促凋亡作用。方法 选取处于对数生长期的宫颈癌Caski细胞,将其分为对照组和不同剂量胡桃醌组（20、40、60、80及100 μmol/L）。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法观察胡桃醌对宫颈癌Caski细胞的增殖抑制作用,并计算出半数抑制浓度（IC₅₀）,依据IC₅₀确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;Hoechst 33258染色观察细胞核形态,流式细胞术测定胡桃醌对Caski细胞凋亡影响。结果 MTT结果显示,与对照组比较,胡桃醌40、60、80、100 μmol/L组宫颈癌Caski细胞增殖[ OD值分别为（0.65±0.11）、（0.53±0.14）、（0.40±0.11）和（0.31±0.05）]明显受到抑制,差异均有统计学意义（P<0.05）;Hoechst 33258染色显示,40 μmol/L胡桃醌培养12 h可明显导致细胞核浓缩;流式细胞仪检测表明,对照组Caski细胞早期凋亡率为（2.86±0.47）%,经40 μmol/L的胡桃醌处理细胞12 h,早期凋亡率增加至（15.47±2.56）%（P<0.05）。结论 不同浓度的胡桃醌可以抑制Caski细胞增殖,同时可诱导Caski细胞凋亡。