人类脐带血间充质干细胞的培养及鉴定

目的对人类脐带血中的有核细胞进行分离培养及鉴定,观察能否得到间充质干细胞。方法抽取人类脐带静脉血,进行细胞分离和培养,并进行荧光激活细胞分析。结果脐带血中间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;流式细胞术鉴定结果表明这种细胞能表达CD29、CD44、CD90、CD95、CD105、CD166以及MHCⅠ(组织相容性抗原复合体Ⅰ),但不能表达CD14、CD34、CD40、CD45、CD80、CD86、CD117、CD152以及MHCⅡ(组织相容性抗原复合体Ⅱ);并且具有分化成骨细胞和脂肪细胞的潜能。结论可以从人类脐带血中成功分离培养得到间充质干细胞。     

人脐带血间充质干细胞诱导肝样细胞研究进展

间充质干细胞是来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，研究发现人脐带血中含有间充质干细胞，在一定的条件下能向肝细胞定向分化。通过对其减轻肝损害，促进肝细胞再生的研究，给肝病患者的治疗带来新的思路和方法。     

人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定

目的：体外分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞（hBMSC）。方法：利用密度梯度离心法分离出人骨髓单个核细胞（MNC），通过贴壁筛选法建立hBMSC的体外培养体系，并通过一系列检测方法对所培养的细胞进行鉴定。结果：细胞主要呈“成纤维样”，但体积较大、形状不规则、细胞质突起多，细胞核大而疏松，核仁明显。流式细胞仪检测：CD34阳性率为2．09％、CD29阳性率为94．46％；CD54及CD105表达阳性。细胞周期及透射电镜检测提示细胞处于相对原始状态。免疫细胞化学染色显示：CD14、CD45、胶原蛋白Ⅱ呈阴性；CD106、CD166、纤维连接蛋白、波形蛋白及胶原纤维酸性蛋白呈阳性。细胞化学染色：糖原染色呈强阳性；碱性磷酸酶染色呈阴性。通过诱导分化培养可诱导出成骨细胞。结论：成功建立了稳定的hBMSC体外培养体系，按照此培养体系进行培养可获得hBMSC。hBMSC可传代培养，但在培养过程中细胞逐渐出现老化现象，且不能冻存。     

脐带血血清分离培养人胎盘间充质干细胞

目的：探讨脐带血清（UCBS）分离、培养人胎盘间充质干细胞（PMSCs）的增殖及分化能力。方法：将 UCBS 处理后用于分离、培养 PMSCs 作为实验组,同体积 FBS 分离、培养 PMSCs 作为对照组,用相差显微镜观察实验组与对照组 PMSCs 的形态、流式细胞仪检测 PMSCs 表面标志、MTT 法检测 PMSCs 的增殖能力。结果：10％ UCBS 的培养液分离纯化的 PMSCs 成梭形、增殖能力强,具有分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力,高表达CD29、CD44及 CD105,低表达或不表达 CD34、CD45及 HLA-DR;与对照组相比,UCBS 组细胞增殖能力更强。结论：脐带血清能分离、培养及扩增 PMSCs,培养的 PMSCs 的增殖能力及分化潜能好于 FBS。     

低氧促进人脐带血间充质干细胞向神经细胞分化

目的探讨低氧环境对脐带血间充质干细胞诱导分化成神经细胞的促进作用。方法收集4例志愿者脐带血,分离获得间充干细胞,体外扩增培养。研究分为常氧组、常氧诱导组、低氧组、低氧诱导组。研究低氧诱导培养的脐带血间充质干细胞组与对照组比较在细胞生物学特征、诱导分化能力等方面的差异。结果在5%含氧量条件下细胞的增生能力不同程度的提高;在诱导成神经细胞的过程中,低氧诱导的间充质干细胞向神经细胞的分化能力增强。神经细胞表面标记Nestin、NF-M表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组比具有显著性差异（P〈0.05）。结论低氧条件可以提高脐带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。     

脐带血来源间充质干细胞体外分离培养条件的优化分析

目的探讨脐带血来源间充质干细胞体外分离培养条件的优化。方法就主要影响UCB-MSCs体外培养的相关因素进行分析,并为干预措施的制定提供条件。结果 UCB-MSCs培养中细胞的接触密度为最显著的影响因素,MSCs在接种密度越大的情况下越易生长,培养出MSCs的几率越大,另外在MSCs生长过程中添加细胞因子显示出较为明显的刺激生长作用,添加细胞因子GM-CSF和IL-3在高接种密度的基础上,使UCB-MSCs体外原代培养的成功率从约30%显著提高至90%以上(P<0.05)。流式检测结果显示,细胞表达间充质干细胞在分离培养中的抗原。造血细胞不表达抗原,可向脂肪、软骨及成骨分化,一致于骨髓源的间充质干细胞。故对培养方法进行确定,可将大量优质的UCB-MSCs种子细胞向临床提供。结论采用诱导分化鉴定结果与流式细胞仪检测的结果表明,将细胞因子所培养出的成纤维状细胞在传统培养方法的基础上添加,为脐带来源的间充质干细胞,使UCB-MSCs的原代培养成功率显著提高,具有非常重要的研究价值。     

脐带血间充质干细胞研究进展及应用前景

干细胞是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能产生至少一种高度分化子代细胞的细胞，主要存在于胚胎、骨髓、外周血、脐带血等处。而血液(外周血、脐带血)中的干细胞，目前发现有造血干细胞(hematopoietlc stem ceils，HSCs)和间充质干细胞(mesenchymal stem ceils，MSCs)两种。脐带血中干细胞含量丰富，明显超过成人外周血含量，     

脐带血血清培养脐带血间充质干细胞对脐带血CD34~+细胞的体外扩增作用

目的探讨脐带血血清(UCBS)培养的脐带血间充质干细胞(UCB-MSC)对脐带血CD34+细胞体外造血的支持作用。方法采用UCBS培养脐带血贴壁细胞,采用ELISA法检测贴壁细胞培养液中SCF、GM-CSF、IL-6和TPO含量;用流式细胞术分析其免疫表型特征;在成骨细胞和脂肪细胞诱导培养条件下诱导细胞分化,采用脐带血贴壁细胞单独或与细胞因子共培养脐带血CD34+细胞。结果采用UCBS培养脐带血贴壁细胞获得的细胞具有MSC的一般特性,在贴壁细胞培养液中检测到SCF、IL-6和TPO,贴壁细胞和脐带血CD34+细胞培养14 d,联合组第10天和第14天的CD34+细胞的扩增倍数明显高于细胞因子组(P<0.05),联合组第10天明显高于单独UCB-MSCs组(P<0.05),联合组第14天与单独UCB-MSCs组类似,CD34+CD13+亚群细胞比例在联合组均明显高于细胞因子组和单独UCB-MSCs组(P<0.05)。联合组和单独UCB-MSCs组CD34+CD33-亚群细胞比例明显高于细胞因子组(P<0.05)。结论单独应用UCB-MSCs或联合细胞因子可有效地体外扩增脐带血CD34+细胞。     

人脐血间充质干细胞的体外培养及生物学特性

目的:建立一种体外纯化增殖人脐血源性间充质干细胞(MSCs)的实验方法,并观察其生物学特性。方法:从正常分娩的足月胎儿脐血中分离出MSCs进行原代培养,培养瓶预先用自体血浆包被处理。72-96 h半量更换培养液,弃去未贴壁细胞,以后每3-5 d半量换液1次。待细胞达到80%-90%融合时,按1∶2的比例进行传代。倒置或相差显微镜下每日观察原代和传代细胞的生长情况及形态学特征。取第3代脐血MSCs用流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45的表达。结果:脐血经分离、培养5-7 d后有间充质样细胞贴壁,3-4周后,细胞生长达80%-90%融合,形态学类似骨髓源性MSCs。连续传至5代以后,增殖能力未见明显减弱。脐血MSCs的大部分细胞(>90%)处于G0/G1期,且均一稳定地表达间充质干细胞表面抗原CD29、CD44,但不表达CD34、CD45。结论:脐带血内含有MSCs,并可在体外纯化增殖,该技术可为实验研究和临床应用提供足够的干细胞来源。     

人骨髓间充质干细胞体外分离培养与鉴定

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)体外分离培养、鉴定条件及方法,探讨其作为种子细胞构建血管化组织工程皮肤可行性.方法 用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,筛选贴壁细胞培养并传代.观察细胞形态,绘制细胞生长曲线,检验细胞CD44、CD29、CD14、CD45等表面标记.采用定向诱导分化方法体外鉴定hBMSCs...     

人脐带间充质干细胞体外培养的生物学特性研究

目的建立人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外培养的方法,探讨该方法培养的脐带间充质干细胞特性及分化潜能。方法用新取的脐带制成细胞悬液,放入含10%胎牛血清的DMEM/F-12混合培养基培养,动态观察原代培养细胞的生长过程。取生长状态良好的第三代细胞(P3),MTT检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测表面标志物CD29、CD44、CD31、CD45、CD34,鉴定hUC-MSCs;诱导hUC-MSCs分化成为脂肪细胞,鉴定所分离的hUC-MSCs具有多向分化能力。结果来源于人脐带培养的MSCs呈现梭形生长,经流式细胞仪检测示CD29(98.3%)、CD44(99.2%)阳性,CD34(0.3%)、CD31(0.8%)、CD45(0.4%)阴性,经过诱导分化,证实hUC-MSCs有成脂分化潜能。结论采自脐带标本分离培养可获得稳定、均质性良好的hMSCs,并具有多向分化能力。     

脐带源性和脐血源性间充质干细胞分离培养方法的比较

目的建立分离培养人脐带间充质干细胞（UCMSCs）和脐带血间充质干细胞（UCBMSCs）的方法,并比较其效果。方法无菌条件下采集健康足月新生儿脐带及脐血各30份,分别通过原代贴壁培养法、酶消化法培养UCMSCs,及淋巴细胞分离液法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离两步分离法获得脐血中单个核细胞培养UCBMSCs。应用含10％胎牛血清的DMEM／F12培养基,比较UCMSCs和UCBMSCs分离培养的效果与生长形态。流式细胞术检测其表面标志及诱导分化鉴定其分化能力。结果UCMSCs原代贴壁培养法8d左右可见成纤维样细胞从组织块边缘爬出且成簇生长,酶消化法培养UCMSCs5d左右均匀生长;UCBMSCs分离培养用羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离两步法得到的细胞数量较淋巴细胞分离法明显增多。两种来源MSCs培养方法相比较,UCMSCs原代培养的时间短,培养成功率明显增高。流式细胞仪检测两种来源的MSCs具有MSCs表面标志特征。定向诱导分化结果表明MSCs具有被诱导为成骨细胞、脂肪细胞的分化能力。结论人脐带来源间充质干细胞原代培养周期短,培养效率更高;脐血间充质干细胞的分离方法中羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离两步法效率更高。     

人脐血和脐带源MSCs分离培养难易及生物学特征的对比研究

目的 比较从人脐血和脐带中分离培养间充质干细胞（MSCs）的难易及两种不同来源MSCs的生物学特性,寻找最佳MSCs来源.方法 采用密度梯度离心法和组织块法分离培养人脐血MSCs和脐带MSCs.流式细胞术检测脐血和脐带源MSCs表面分子表型;采用丹参联合生长因子的方法诱导两种不同来源的MSCs向神经细胞分化.结果 脐带 MSCs原代分离培养成功率可达88%,而脐血MSCs分离培养成功率只有24%;脐带MSCs和脐血MSCs倍增时间分别为22h和38h;流式细胞术检测结果显示：两者具有相似的免疫表型,均表达黏附分子和基质细胞标记,不表达造血细胞标记、内皮细胞标记和HLA-DR;两种来源的MSCs在体外均可分化为樟经元样细胞.结论 脐带源 MSCs在生长速度、培养成功率上远高于脐血源 MSCs,在细胞表型及分化能力方面无差别.脐带 MSCs 是一种理想的 MSCs 来源.     

人脐带间充质干细胞的生物学特性及其在血液系统疾病中的应用

间充质干细胞是一种具有自我更新和多向分化能力的成体干细胞,在组织工程、基因治疗和造血干细胞移植领域具有较好的应用前景。骨髓是间充质干细胞的经典来源。近年研究显示,人脐带中也存在大量间充质干细胞,由于脐带来源间充质干细胞具有来源广泛、取材方便、相对纯净、含量丰富以及免疫原性低等优点,正逐渐成为间充质干细胞研究领域的热点之一。本文就其生物学特征、优势以及在血液系统疾病中的应用前景等予以综述。     

脐带组织间充质干细胞分离及向成骨与脂肪细胞的分化

目的探讨人脐带组织间充质干细胞体外分离、扩增与成骨、成脂肪细胞诱导分化的方法与条件。方法取脐带沿血管长轴切开,去掉血管,再将脐带重新缝合形成环状,灌入胶原酶悬液,6～8h后灌洗离心,获取细胞培养、扩增,细胞呈集落生长后传代,取传代细胞进一步行免疫表型测定和成骨、成脂肪细胞诱导分化。结果去除血管后获取脐带组织细胞的方法,可获得贴壁生长的细胞,呈短棒状或梭形样细胞,易扩增和形成集落,有基质细胞免疫表型表达,成骨诱导分化的细胞茜素红染色胞浆中有大量的钙沉积,碱性磷酸酶钙钴法染色胞质呈灰黑色,阳性细胞百分率>85%;成脂肪分化的细胞油红染色示胞浆充满了油滴空泡。结论脐带组织存在具有间叶细胞分化能力的间充质干细胞,并可在体外进行培养扩增形成集落细胞传代,传代细胞表达基质细胞表面抗原,能够向成骨细胞、成脂肪细胞分化。     

人脐带问充质干细胞在胶原支架材料体外复合培养的生物学特性研究

目的：观察体外人脐带间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）黏附胶原蛋白支架条件下的干细胞免疫表型及成骨特性的变化,为复合载体移植提供实验依据。方法：将人脐带间充质干细胞静态接种于胶原蛋白支架上,经体外培养两周后,检测细胞在胶原蛋白材料中的干细胞CD44、CD105、HLA-DR、Ⅰ型胶原表达,观察细胞特性变化。结果：细胞在支架上有较好的粘附,CD 44、CD105、Ⅰ型胶原表达阳性,HLA-DR表达阴性。结论：混合培养中人脐带MSCs不仅与胶原蛋白有较好的组织相容性,且细胞在支架上培养仍保持了其干细胞的特点,Ⅰ型胶原表达阳性,提示具有潜在的成骨能力,为人脐带间充质干细胞组织工程体外预制提供实验基础。 更多还原     

脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的研究进展

人脐带间充质干细胞是一种从人脐带间质组织中分离出来的全能干细胞,具有自我更新、免疫缺陷和多向分化潜能。新近研究表明,人脐带间充质干细胞在体内微环境及体外细胞因子的作用下不仅能够分化为胰岛样细胞,而且具有一定的β细胞分泌功能,能够降低血糖,克服了胰岛移植治疗糖尿病所面临的供体细胞缺乏和免疫排斥反应问题,从而有望为临床糖尿病细胞治疗开辟了一条新的途径。     

脐血干细胞的免疫学特性概述

脐血来源丰富,避免了一些伦理问题。脐血干细胞表面表达人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子,存在但不表达HLAⅡ类分子,在多向分化过程中始终不表达HLAⅡ类分子,产生免疫逃避反应,移植入体内可以产生免疫抑制。经多种免疫刺激因子均不产生或较少产生免疫反应,这种免疫反应并不影响脐血干细胞和生物学效应。脐血具有抑制T细胞活性和调节免疫反应,并具有免疫抑制的调节能力。脐血干细胞可作为临床组织工程的来源细胞。     

人脐血间充质干细胞的分离与纯化

目的:探讨人脐血间充质干细胞(MSC)的培养纯化条件。方法:比较不同的梯度离心速度及时间、接种密度、首次换液时间、不同培养基对脐血中的MSC分离及原代培养过程的影响,以流式细胞仪对优化条件下培养的MSC进行细胞周期分析,并对细胞表面标志进行检测。结果:在其他条件不变的情况下,以1 000g×15 min的梯度离心速度及时间分离脐血为最宜,5×106/mL是脐血MSC培养的适宜接种密度,首次换液时间7 d。优化条件下培养的MSC传至3代时,几乎全部强表达CD29、CD44。结论:建立了一种优化的人脐血MSC分离纯化方法。     

人骨髓间充质干细胞体外培养方法探讨

目的：建立并优化人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)分离、消化、传代扩增等培养方法．方法：以Percoil(1．073g／mL)、Ficoll(1．077g／mE)和A液(笔者配制)3种分离介质分离MSCs．传代时以不同浓度胰蛋白酶对MSCs进行消化．结果：A液对MSCs的分离效果最佳，不同蛋白酶液对MSCs消化能力不同。结论：建立了一套稳定、低耗、有效的MSCs培养方法。