041 缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心脏有关酶保护作用的研究

目的: 在在体大鼠模型上原位观察比较了经典缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心肌有关酶活性的影响, 以期进一步探讨预处理保护作用的机制. 方法: 将24只体重200～250 g的雄性SD大鼠分为4组, 即: Ⅰ组, 假手术组; Ⅱ组, 缺血/再灌注组, 左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血30 min后恢复再灌20 min; Ⅲ组, 经典缺血预处理组, 按Murry法进行; Ⅳ组, 去甲肾上腺素预处理组, 在缺血前15 min开始由舌静脉在5 min内缓慢滴入NE 1.6 μg. 再灌结束后原位观察过氧化氢酶、 5'-核苷酸酶及Ca2+-ATP酶活性及琥珀酸脱氢酶损伤性反应. 结果: Ⅲ组心肌琥珀酸脱氢酶损伤性反应较Ⅱ组明显减轻(P<0.05); 过氧化氢酶、 5'-核苷酸酶及Ca2+-ATP酶活性较Ⅱ组(P<0.05)升高. 结论: 经典缺血预处理能保护缺血/再灌注大鼠心脏超微结构, 这种作用可能与经典缺血预处理保护5'-核苷酸酶活性, 使内源性腺苷增多; 保护Ca2+-ATP酶活性, 减轻细胞内钙超载及抗氧自由基损伤有关.     

去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏有关酶保护作用的研究

目的 :本实验在在体大鼠模型上原位观察比较了去甲肾上腺素预处理和经典缺血预处理对缺血 /再灌注大鼠心肌有关酶活性的影响 ,以期探讨一种非创伤性预处理保护作用的机制。方法 :将 2 4只体重2 0 0～ 2 50ｇ的雄性ＳＤ大鼠分为 4组 ,即 :Ⅰ组 ,假手术组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注组 ,左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血 30ｍｉｎ后恢复再灌 2 0ｍｉｎ ;Ⅲ组 ,经典缺血预处理组 ,按Ｍｕｒｒｙ法进行 ;Ⅳ组 ,去甲肾上腺素预处理组 ,在缺血前 1 5ｍｉｎ开始由舌静脉在 5ｍｉｎ内缓慢滴入ＮＥ 1 6μｇ。再灌结束后测血清一氧化氮含量 ,原位观察过氧化氢…     

缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心脏有关酶保护作用的研究

目的 :在在体大鼠模型上原位观察比较了经典缺血预处理对缺血 /再灌注大鼠心肌有关酶活性的影响 ,以期进一步探讨预处理保护作用的机制。方法 :将 2 4只体重 2 0 0～2 5 0 ｇ的雄性ＳＤ大鼠分为 4组 ,即 :Ⅰ组 ,假手术组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注组 ,左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血 30ｍｉｎ后恢复再灌 2 0ｍｉｎ ;Ⅲ组 ,经典缺血预处理组 ,按Ｍｕｒ ｒｙ法进行 ;Ⅳ组 ,去甲肾上腺素预处理组 ,在缺血前 15ｍｉｎ开始由舌静脉在 5ｍｉｎ内缓慢滴入ＮＥ 1.6 μｇ。再灌结束后原位观察过氧化氢酶、5’ 核苷酸酶及Ｃａ2 ＡＴＰ酶活性及琥珀酸脱…     

去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏5’-核苷酸酶的保护作用

目的 :在在体大鼠模型上从生化和酶组化的角度观察比较了去甲肾上腺素预处理和经典缺血预处理对缺血 /再灌注大鼠心脏的保护作用及 5’ 核苷酸酶 (5’ ＮＴ)活性的影响 ,以期为一种非创伤性预处理方式提供实验依据并探讨其机制。方法 :将 2 4只体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ的雄性ＳＤ大鼠分为 4组 ,即 :Ⅰ组 ,假手术组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注组 ,左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血 30ｍｉｎ后恢复再灌 2 0ｍｉｎ ;Ⅲ组 ,经典缺血预处理组 ,按Ｍｕｒｒｙ法进行 ;Ⅳ组 ,去甲肾上腺素预处理组 ,在缺血前 15ｍｉｎ开始由舌静脉在 5ｍｉｎ内缓慢滴入ＮＥ 1.6…     

二氮嗪预处理对大鼠心肌线粒体呼吸功能与呼吸酶活性的影响

目的： 探讨特异性线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌线粒体呼吸功能和酶活性的影响。方法: 采用Langendorff装置建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型，将72只SD大鼠随机分为正常组（NOR）、缺血再灌注组（IR）、二氮嗪预处理组（DIA）、5－羟葵酸拮抗二氮嗪组（5HD-DIA）。NOR组在平衡灌注20 min后续灌100 min，IR组在平衡20 min后续灌30 min，继后全心缺血40 min，复灌30 min。DIA组在缺血前给予含二氮嗪50 μmol/L的K-H液10 min后，全心缺血40 min，复灌30 min。5HD-DIA组在二氮嗪预处理之前先给予含5－羟葵酸100 μmol/L K-H液10 min，其余同二氮嗪预处理组。分别于平衡末、缺血前及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体，测定各组线粒体的呼吸功能、呼吸酶活性。结果: 再灌注末DIA组的线粒体呼吸功能（呼吸控制率、磷氧比、3态呼吸速率）和呼吸酶活性（NADH氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C 氧化酶）明显优于IR组和5HD-DIA组（P<0.05）但次于NOR组（P<0.01）；而IR组和5HD-DIA组比较无显著差异(P>0.05)。结论: 线粒体钾通道开放剂二氮嗪预处理能够保护缺血/再灌注损伤心肌的线粒体，其机制与保护线粒体的呼吸功能及呼吸链的酶活性有关。     

腺苷预处理培养大鼠心肌细胞后酶活性变化和超微结构观察

目的 :应用组化方法和透射电镜 ,观察腺苷预处理培养大鼠心肌细胞琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶及Ca2 +,Mg2 +依赖性ATP酶活性细胞超微结构的变化。方法 :取SD大鼠乳鼠心室肌细胞在无菌状态下 ,用DMEM常规培养 5天后分四组 :正常对照组、拟缺血再灌注组、拟缺血预处理组、腺苷预处理组 ,用组化方法检测心肌酶活性 ;以透射电镜观察细胞形态结构变化。结果 :在缺血预处理组和腺苷预处理组琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶、Ca2 +,Mg2 +依赖性ATP酶活性均高于拟缺血再灌注组 ,且细胞结构保存良好 ;缺血预处理组、腺苷预处理组与正常对照组无显著性差异。结论 :腺苷预处理对缺血再灌注心肌细胞具有类似缺血预处理的保护作用     

大鼠心脏硫酸腺嘌呤预处理心肌酶活性变化

目的实验观察经典缺血处理及硫酸腺嘌呤处理大鼠心肌细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的活性变化.方法采用SD雄性大鼠24只,分4组假手术组、缺血再灌注组、经典缺血预处理组、硫酸腺嘌呤预处理组.术后速取左心室前壁肌行冰冻切片,以DAB法测定细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的活性.依Ridit法行显著性检验.结果缺血再灌注组大鼠心肌过氧化氢酶和细胞色素氧化酶损伤性反应明显,经典缺血预处理组和硫酸腺嘌呤预处理组细胞色素氧化酶、过氧化氢酶损伤性反应较之明显减轻(P＜0.05).结论经典缺血预处理和硫酸腺嘌呤预处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤有明显保护作用.     

腺苷矛处理培养大鼠心肌细胞后酶活性变化和超微结构观察

目的：应用组化方法和透射电镜,观察腺苷预处理培养大鼠心肌细胞琥碧酸脱氢酶,细胞色素氧化酶及Ca^2 ,Mg^2 依赖性ATP酶活性细胞超微结构的变化。方法：取SD大鼠乳鼠心室肌细胞在无菌状态下,用DMEM常规培养5天后分四组：正常对照组,拟缺血再灌注组,拟缺血预处理组,腺苷预处理组,用组化方法检测心肌酶活性;以透射电镜观察细胞形态结构变化,结果：在缺血预处理组和腺苷预处理组琥珀酸脱氢酶,细胞色素氧化酶,Ca^2 ,Mg^2 依赖性ATP酶活性均高于拟缺血再灌注组,且细胞结构保存良好;,缺血预处理组,腺苷预处理组与正常对照组无显著性差异。结论：腺苷预处理对缺血再灌注心肌细胞具有类似缺血预处理的保护作用。     

非创伤性预处理对大鼠缺血心脏的保护效应

目的 :探讨三种非创伤性预处理对大鼠缺血心脏的保护效应。方法 :采用 2 5 0g～ 3 0 0 gSD雄性大鼠 48只 ,分成 6组 ,即假手术组(Ⅰ组 )、缺血 /再灌组 (Ⅱ组 )、经典缺血预处理组 (Ⅲ组 ) ,缺氧预处理组 (Ⅳa组 )、后肢缺血预处理组 (Ⅳb组 )、去甲肾上腺素预处理组 (Ⅳc组 ) ,观察各组左室梗塞范围、心肌琥珀酸脱氢酶 (SDH )、Ca2 + Mg2 + ATPase、细胞色素氧化酶 (CCO)活性的变化。结果 :Ⅳa、Ⅳb、Ⅳc三组非创伤性预处理均可明显缩小左室梗塞范围、提高心肌SDH、Ca2 + Mg2 + ATPase、CCO酶活性。结论 :三种非创伤性预处理均能使大鼠显示和经典预处理相类似的心脏保护效应。     

大鼠心脏硫酸腺嘌吟预处理心肌酶活性变化

目的：实验观察经典缺血处理及硫酸腺嘌呤处理大鼠心肌细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的活性变化。方法：采用ＳＫ雄性大鼠２４只,分４组：假手术组、缺血再灌注组、经典缺血预处理组、流酸腺嘌呤预处理组。术后速取左心室前壁肌行冰冻切片,以ＤＡＢ法测定细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的活性。依Ｒidit法行显著性检验。结果：缺血再灌注组大鼠心肌过氧化氢酶和细胞色素氧化酶损伤性反应明显,经典缺血预处理组和硫酸腺嘌呤预处理组细胞     

延迟预适应减少大鼠心肌缺血再灌注的细胞凋亡

目的 以SMAC和XIAP的表达变化为着眼点,探讨心肌缺血延迟预适应抗心缺血再灌注（MI/R）后细胞凋亡的机制。方法 SD大鼠分为对照组、假手术组、缺血再灌注组、延迟缺血预处理组。缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎,缺血1h,再灌1h。延迟缺血预处理组采用缺血5 min,再灌5 min,反复循环3次,24 h后缺血1 h,再灌1 h。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,检测caspase-3活性,Western blot分析胞质SMAC及XIAP的表达。结果 与对照组相比,缺血再灌注组细胞凋亡率、caspase-3的活性及SMAC的表达明显升高（P<0.01）,XIAP的表达明显下降（P <0.01）。延迟缺血预处理组细胞凋亡率、caspase-3的活性及SMAC的表达较缺血再灌注组明显下降（P<0.01）,XIAP的表达较缺血再灌注组升高（P <0.01）。结论 心肌缺血延迟预适应可以减少MI/R造成的细胞凋亡,机制与其阻碍SMAC自线粒体释放,从而保护XIAP对caspase家族的抑制密切相关。     

不同部位缺血预处理对未成熟心肌保护作用的研究

目的探讨不同部位缺血预处理对未成熟心肌保护作用。方法采用经典心脏缺血预处理、肾缺血预处理及双下肢缺血预处理动物Langendorff灌注模型比较三种方法对缺血 /再灌(I/R)未成熟心肌损伤的效应。分为5组 :正常对照组(NC,n=6) ,离体心脏仅灌注KH液70min;缺血 /再灌 (I/R ,n=6) ,离体心脏灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;心脏缺血预处理组 (IPC,n=6),离体心脏灌注15min转为工作心15min后反复2次缺血5min/再灌5min,然后重复I/R组方法 ;肾缺血预处理组(K -IPC ,n=6) ,反复3次阻断左肾动脉5min,放开5min,然后重复I/R组方法。双下肢缺血预处理组 (DL-IPC ,n=6) ,反复3次捆扎双下肢5min,松开5min,然后重复I/R组方法。以左心室功能恢复、心肌含水量、血清肌酸激酶 (CK)和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率 ,心肌组织ATP和丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及电镜作为观察指标。结果IPC、DL-IPC及K-IPC组在左心室功能恢复优于I/R组 (P<0.05) ,在ATP含量、SOD活性及心肌超微结构方面均优于I/R组(P<0.01) ,心肌含水量低于I/R组 (P<0.05) ,在MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于I/R组 (P<0.01)。结论不同部位的非心脏缺血预处理 ,与心脏缺血预处理可诱发同等的心肌保护作用     

川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注所致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 :用心肌缺血预处理的整体动物模型 ,观察川芎嗪预处理对麻醉大鼠心肌缺血再灌注所致血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 :动物麻醉后 ,在人工呼吸状态下 ,开胸 ,结扎左冠状动脉。单纯缺血再灌注组 :结扎冠脉 3 0min ,其后再灌 12 0min ;缺血预处理组 :冠脉结扎5min ,再灌 5min ;然后 ,再次结扎冠脉 3 0min ,其后再灌 12 0min ;药物预处理组 :川芎嗪 2 0mg·kg-1 连续静脉给药 5min ;5min后 ,结扎冠脉3 0min ,其后再灌 12 0min ;假手术组 :冠脉下穿线 ,不做任何处理。实验结束后 ,腹主动脉采血 ,分离血浆。用放免法 (RIA)测ET ,TXB2 /6 酮 PGF1α,降钙素相关基因肽 (CGRP)。结果 :川芎嗪预处理降低缺血再灌后ET及TXB2 的释放 ,而 6 酮 PGF1α的释放增加 ,对CGRP没有影响。结论 :川芎嗪可能通过预处理途径对大鼠心肌缺血再灌注所致血管内皮细胞损伤具有保护作用     

血红素氧化酶-1在离体大鼠心肌缺血预处理中的作用

目的：观察缺血预处理对离体大鼠心肌缺血再灌注后心功能、乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量及血红素氧化酶-1活性的影响。方法：应用Langendorff离体大鼠等容收缩灌流模型行离体大鼠心脏灌流。缺血预处理方案为停灌5 min后再灌5 min反复3次,持续缺血再灌方案为停灌40 min后再灌20 min,监测正常对照组、缺血再灌组（IR）和缺血预处理组（IPC）心功能指标的同时,测定冠脉流出液LDH活性、心肌MDA含量和HO-1活性变化。结果：IPC组再灌20 min时的心功能恢复率显著高于IR组（P<0.01）,心肌血红素氧化酶-1活性也明显高于IR组（P<0.05）,而LDH活性及MDA含量显著少于IR组（均为P<0.01）。结论：血红素氧化酶-1活性增高可能与缺血预处理对大鼠缺血再灌心肌的保护作用有关。     

微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的：观察比较支甲肾上腺素预处理与经典缺血预处理对大鼠缺血／再灌注心脏的保护作用。方法：将实验动物分为对照组、缺血／再灌注组,经典缺血预处理和去甲肾上腺素预处理４组在相应时点分别测定心肌梗塞面积心功能,观察心肌超微结构,线粒体内膜标志酶损伤性反应及热休克蛋白７０、ｍＲＮＡ表达的变化。     

17β-雌二醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 观察17β-雌二醇对大鼠心缺血再灌(I/R)损伤的保护作用并探讨其机制. 方法 30只成年雌性SD大鼠卵巢切除后,随机分成C组(I/R假手术组)、 I/R组和 I/R+E2组(17β-雌二醇预处理).17β-雌二醇预处理2周后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,用氯化三苯甲基四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死范围,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos的蛋白表达. 结果 17β-雌二醇能明显减少缺血再灌注心肌梗死体积,降低心肌细胞凋亡率,减弱缺血再灌注心肌细胞c-Fos的表达. 结论 雌激素对大鼠缺血再灌注心有保护作用,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达有关.     

去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血再灌注心肌的延迟性保护作用

目的观察去甲肾上腺素预处理后热休克蛋白(HSP70)在心肌细胞的表达以研究去甲肾上腺素预处理对大鼠离体缺血再灌注损伤心肌的延迟性保护作用.方法24只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=8)及实验组(E112h及E24h组),实验组按腹腔注射去甲肾上腺素到建立Langendorff灌注模型的时间分为E12h及E24h组,每组各8只.分别检测LDH及CK的漏出量、心肌ATP含量及心功能指标(LVSP及±dp/dt max),用Westem Blot法测量心肌组织中HSP70的含量.结果E12h组HSP70表达较对照组增高,E24hHSP70表达最高.E24h组LDH与CK含量较其它两组低,而ATP较其它两组高(P＜0.01),心功能改善.E12h与对照组相应各指标(LDH、CK、ATP、LVSP及±dp/dt max)间差异无显著性.结论去甲肾上腺素预处理24h后HSP70高表达对大鼠离体缺血再灌注心肌有延迟性保护作用.     

Urocortin-I预处理对离体大鼠心肌线粒体呼吸功能及呼吸酶活性的影响

目的:探讨urocortin-I预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌线粒体呼吸功能及酶活性的影响,观察心肌细胞ATP含量的变化。方法:(1)健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常组(Nor组)、缺血再灌注组(IR组)、urocortin-I预处理组(Ucn I组)、5-羟葵酸(5-HD)拮抗urocortin-I组(5-HD+Ucn I组)。采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型。分别于平衡末(T_1)、缺血前(T_2)及再灌注末(T_3)分离、提取心肌线粒体,测定各组线粒体呼吸功能及呼吸酶活性。(2)利用MPA离体心脏灌注装置分离成年大鼠心肌细胞,将分离培养24 h后同批次的心肌细胞随机分为正常组(Nor组)、缺氧复氧组(I/R组)、urocortin-I预处理组(Ucn I组)、5-HD拮抗urocortin-I组(5-HD+Ucn I组)。建立缺氧复氧模型,于复氧末用高效液相色谱法检测各组心肌细胞ATP含量。结果:T_3时点除Nor组外,其余各组与T_1、T_2时点相比呼吸功能(3态呼吸速率、呼吸控制率)及琥珀酸氧化酶、NADH氧化酶、细胞色素C氧化酶活性均明显下降(P0.05);T_3时Ucn I组心肌线粒体的呼吸功能及呼吸酶活性明显优于5-HD+Ucn I组及IR组(P0.05),但次于Nor组(P0.05);T_3时5-HD+Ucn I组心肌线粒体的呼吸功能及呼吸酶活性(琥珀酸氧化酶、NADH氧化酶)较IR组好(P0.05),但2组间细胞色素C氧化酶活性差异无统计学显著性;T_1、T_2时点各组组内及组间呼吸功能及3种呼吸酶活性的差异无统计学显著性。心肌细胞实验结果显示,复氧末Nor组ATP含量较其余各组均高(P0.01);I/R组和5-HD+Ucn I组心肌细胞的ATP含量较Ucn I组低(P0.05);此外,5-HD+Ucn I组心肌细胞的ATP含量较I/R组高(P0.05)。结论:Ucn I预处理可减轻缺血再灌注对心肌线粒体呼吸功能及呼吸酶活性的干预,保证了缺氧/复氧后心肌ATP的含量。     

银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

探讨银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法以36只雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物随机分为3组:假手术组、心肌缺血再灌注模型组与银杏酮酯组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组穿线后不结扎,模型组于缺血前30 min腹腔注射生理盐水,银杏酮酯组大鼠于缺血前30 min腹腔注射银杏酮酯(100mg/kg)。造模24h后处死大鼠,TUNEL法检测心肌细胞凋亡, Western blot方法检测心肌组织Bax和caspase-3蛋白表达,实时PCR方法检测心肌组织Bax mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果银杏酮酯预处理可明显降低心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡率,降低心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bax和caspase-3蛋白与mRNA表达水平。结论银杏酮酯预处理降低缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡率可能与抑制Bax和caspase-3表达相关。     

前列地尔预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心脏超微结构的保护作用

目的　观察比较前列地尔预处理及经典缺血预处理对在体大鼠缺血 /再灌注心肌损伤的保护效应。方法　动物分为假手术对照组、缺血再灌注组、经典缺血预处理组、前列地尔预处理早期保护组及延迟保护组 ,透射电镜观察心肌超微结构的变化 ,同时用黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织的超氧化物歧化酶 (SOD)活性和用硫代巴妥酸法测定丙二醛 (MDA)含量。结果　前列地尔预处理及经典缺血预处理均有保护心肌超微结构和抗氧化效应 ,与模型组相比 ,经典缺血预处理组、前列地尔预处理早期保护组及延迟保护组明显降低缺血再灌注后的心肌MDA含量 (P<0 .0 5 和升高T SOD (P<0 .0 5 水平。结论　前列地尔预处理对在体大鼠缺血 /再灌注心肌损伤具有保护效应 ,能模拟经典缺血预处理心肌保护效应。