固肾安胎中药对小鼠早期胚胎体外发育的影响

固肾安胎中药在助孕保胎方面有着良好的临床疗效，其中尤以寿胎丸为经典名方。本研究旨在通过采用血清药理学及胚胎体外培养的实验方法，动态观察配有各种含药血清的培养基中早期胚胎各期(ZCE至囊胚)的发育率，研究单味固肾安胎中药及寿胎丸对早期胚胎发育的作用，以探讨固肾安     

中药胚胎毒性在体外实验中的研究进展

中药在妊娠期运用广泛,但中药的妊娠毒性和胚胎毒性历来争议较大,体外替代实验是近年来逐渐发展和建立起来的研究药物胚胎和发育毒性的新方法,该文分别从胚胎干细胞实验(EST)、动物胚胎肢芽体外培养、全胚胎培养(WEC)技术在中药胚胎毒性研究中的应用进行综述。     

倒千里光碱对小鼠体外培养胚胎的发育毒性研究

目的 探讨倒千里光碱的胚胎发育毒性.方法 采用小鼠全胚胎培养模型,将8.5d小鼠胚胎在含有倒千里光碱的即刻离心血清中培养48 h(倒千里光碱的终浓度分别为12.5,25,50,100 mg·L-1),观察倒千里光碱对胚胎生长发育(卵黄囊直径、颅臀长、头长、体节数)和组织器官形态分化(卵黄囊循环、尿囊、翻转、心、脑、尾神经管、视听嗅系统、腮弓、颌突、肢芽)的影响.结果 倒千里光碱对胚胎的生长发育和形态分化均具有明显的毒性影响.随倒千里光碱浓度的增加,胚胎的生长发育和组织器官形态分化指标影响越来越严重,其中听嗅系统、腮弓、上下颌突、前后肢芽的影响最为明显.结论 倒千里光碱对体外培养的小鼠胚胎有明显的毒性作用,提示妊娠期暴露于该化合物对胎儿具有潜在的毒性.     

全胚胎培养技术及其应用研究进展

体外全胚胎培养技术是以体外胚胎替代整体动物进行实验的技术,主要用于研究早期器官的生长发育和化学物质的胚胎毒性及造成胚胎毒性的机制等。本文就大鼠和小鼠的全胚胎培养技术及其应用进行综述,着重介绍了全胚胎培养技术的发展概况,应用全胚胎培养技术的注意事项及全胚胎培养技术在生长发育研究、环境污染物和重金属的胚胎毒性研究、药物安全性评价、中药的胚胎毒性及其机制研究领域的应用,并就该技术在中药生殖毒性研究中的应用前景进行了讨论。     

齐墩果酸诱导多种小鼠胚胎干细胞向生殖细胞方向分化研究

目的:寻找一种能诱导多种胚胎干细胞向生殖细胞方向分化的化合物,并以常用的诱导物维甲酸(Retinoic Acid,RA)作为阳性参照物。方法:分别培养小鼠胚胎干细胞1B10、D3、R1/E,诱导它们形成拟胚体,让拟胚体贴壁生长,加入特定化合物诱导贴壁细胞分化,诱导72 h后,提取被诱导细胞的RNA,再合成c DNA,最后利用实时荧光定量PCR检测各被诱导细胞中与生殖分化相关的基因的表达水平的变化。结果:发现齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)显著上调了所有被研究的小鼠胚胎干细胞的生殖分化关键基因的表达水平,同时发现阳性参照物RA仅能诱导1B10、R1/E,而不能诱导D3向生殖细胞方向分化。结论:OA能诱导多种胚胎干细胞向生殖细胞方向分化,诱导能力方面具有比常用诱导物维甲酸更广泛的普遍性。     

体外培养软骨细胞修复软骨缺损的研究进展

关节软骨缺损是常见的疑难病症之一。创伤、肿瘤、骨关节炎等原因所致的关节软骨缺损由于不能自行修复 ,目前临床多采用自体或异体软骨移植修复 ,软骨膜或骨膜移植修复、软骨细胞移植修复等。但自体软骨来源有限 ,异体软骨又存在慢性免疫排斥反应 ,最终可能导致手术失败 ;软骨膜或骨膜移植远期软骨易于退化〔1〕。随着体外细胞培养方法的不断改进 ,现已能够把软骨细胞从坚韧的软骨中分离出来 ,获得大量高纯度的软骨细胞并分裂出新生软骨细胞〔2〕。克服了软骨细胞来源有限的缺点 ,从而推动了软骨缺损修复的发展。1　种植软骨细胞的性质　　…     

应用全胚胎培养方法研究野百合碱对 小鼠胚胎发育的影响

目的:探讨野百合碱的胚胎发育毒性.方法:采用小鼠全胚胎培养模型,将8.5 d小鼠胚胎在含有野百合碱的即刻离心血清中培养48 h(野百合碱的终浓度分别为100,50,25,12.5 mg·L-1),观察野百合碱对胚胎生长发育(卵黄囊直径、颅臀长、头长、体节数)和组织器官形态分化(卵黄囊循环、尿囊、翻转、心、脑、尾神经管、视听嗅系统、腮弓、颌突、肢芽)的影响.结果:随野百合碱浓度的增加,胚胎的生长发育和组织器官形态分化受到的影响越来越严重,其中以视听系统、颌突、肢芽等项的影响最为明显.结论:野百合碱对体外培养的小鼠胚胎有明显的毒性作用,提示妊娠期暴露于该化合物对胎儿具有潜在的毒性.     

破骨细胞体外培养分化因素及其机制的研究进展

早在1873年Kolliker就报道了破骨细胞（osteoclast，OC），然而OC为高代谢的分化终末细胞，组织含量极少又非常脆弱，体外培养较困难。到1982年Chambers和Magnus才首次建立OC体外培养的方法，使体外研究OC成为可能。OC是由单核／巨噬细胞家族中的单核细胞祖细胞融合后形成的一种多核巨细胞，一般含5～20个核，噬骨实验（即骨片上形成骨吸收陷窝）及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色实验阳性，是其组织形态学鉴定标准。OC骨吸收机制的研究对阐明骨组织病理生理机制和代谢性骨病的防治具有十分重要的意义，体外培养OC模拟体内过程就成为必要方式。     

铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响

目的研究铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响。方法采用水提醇沉法对铁皮石斛进行初步提取,体外培养小鼠胚胎干细胞,通过克隆形成率试验、MTT试验及实时定量PCR的方法研究铁皮石斛提取多糖对小鼠胚胎干细胞的增殖及多能性维持的作用。结果铁皮石斛多糖处理组细胞(50~200μg/m L)的克隆形成率、MTT吸光度值均高于空白对照组,同时其干性相关基因的表达量与对照组相比无显著差异。结论铁皮石斛多糖可以显著促进小鼠胚胎干细胞的增殖、提高其克隆形成率,同时又不影响其多潜能性的维持。     

黄芪多糖在长期骨髓细胞培养中支持体外造血的作用

目的:研究黄芪多糖(APS)在长期骨髓细胞培养中是否能刺激或支持体外造血作用及刺激基质细胞的增殖。方法:采用长期骨髓细胞培养法,研究APS对骨髓细胞的影响。结果:在APS作用下,培养体系中的非贴壁细胞数在5～8周增加19～168倍。第6周时,在APS处理的培养体系中,97%非贴壁细胞为成熟中性粒细胞,而对照仅为8％。实验结束即第17周时,APS使贴壁细胞数从每瓶2.2×10~5增加到4.1×10~5。结论:黄芪多糖在长期培养骨髓细胞(LTBMC)中可支持体外造血作用。     

体外培养原代脊髓神经细胞

目的：用一种新方法在体外培养原代脊髓神经细胞。为脊髓神经细胞缺血再灌注损伤方面的分子机制及药物作用机制的研究提供条件。方法：取出生于24h内的SD大鼠的脊髓，然后将其中的分离出的神经细胞作原代细胞，再将其进行培养。最后用细胞形态学及细胞免疫化学检测法来检测培养细胞的状况。结果：大鼠的脊髓神经细胞在体外培养生长情况好，纯度高。结论：培养脊髓神经细胞时该方法简便，且培养的细胞生长好，纯度高。这将有助于对脊髓神经细胞的研究开展。     

苦参碱对体外培养小鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒的影响

近年来，病毒性心肌炎发病率显著上升，尤其在青壮年中，而临床上尚缺乏有效的防治药物。许多报道已证实了该病的致病原因主要与肠道病毒，特别是ＣＶＢ３病毒有关［１］。但目前国内外对本病尚无公认的有效治疗措施而致使临床治疗处于被动的状态。本实验采用细胞化学染色，心肌酶及ＭＤＡ含量测定等方法观察苦参碱（Ｓｏｐｈｏｒａ Ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ Ａｉｔ ＳＦＡ）对ＣＶＢ３感染的心肌细胞的保护作用，旨在为临床治疗病毒性心肌炎（ＶＭＣ）的药物选择提供实验依据。１材料和方法１．１材料出生１～２ｄ的ＢＡＬＢ／Ｃ乳鼠由我院实…     

艾叶油对小鼠胚胎骨骼发育毒性影响的研究

目的 探讨艾叶油对小鼠胚胎骨骼发育的影响.方法 选用昆明种孕鼠25只,随机分为5组,每组5只,设置阴性对照组(花生油)、艾叶油实验组(高剂量组2 ml/kg、中剂量组1 ml/kg、低剂量组0.5 ml/kg)、阳性对照组(环磷酰胺12.5 mg/kg).实验组和阴性对照组自孕12 d开始灌胃,1次/d,连续5d;阳性对照组于孕13天腹腔注射环磷酰胺(12.5 mg/kg)1次.各组孕鼠均于孕第16天处死后取出1/2数量胎鼠行阿利新蓝和茜素红骨骼双染,对前肢芽进行Neubert评分,观察胎鼠主要骨骼骨化点的发育.结果 在胎鼠肢芽和骨骼发育时,艾叶油高、中、低剂量组与阴性对照组相比无显著性差异(P>0.05).实验组与阳性对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论 艾叶油对胎鼠肢芽和骨骼发育无毒性影响.     

小鼠血管内皮细胞的原代培养

目的:建立简单有效地获取小鼠血管内皮细胞(VEC)的培养方法。方法:从实验动物、培养基、植块方法、胎牛血清浓度等方面对植块培养法进行改进,应用C57BL小鼠腹主动脉血管组织进行血管内皮细胞的原代培养并传代培养培养小鼠血管内皮细胞,并进行倒置显微镜下观察和免疫组织化学进行鉴定。结果与结论倒置显微镜观察小鼠血管内皮细胞生长情况,培养48h后,可见大部分贴壁细胞连接形成网状,细胞密度较低;3～5d后,内皮细胞岛出现;约7～9d后细胞融合成片,细胞呈单层镶嵌状排列,呈现"鹅卵石样"或"铺路石样",出现接触抑制现象。兔抗鼠抗Ⅷ抗体和荧光素标记抗体鉴定结果显示清晰的血管内皮细胞核。     

六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的：研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法：采用MTT法测定细胞增殖情况；NaOH裂解法测定黑素合成；Takahashi法测定酪氨酶含量。结果：六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用，能使细胞数明显减少（P＜0．05），并能使黑素合成显著下降（P＜0．01），使酪氨酸酶活性逐渐减弱（P＜0．01）。结论：六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性，这可能是临床应有六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制。     

小半夏加茯苓汤含药血清对小鼠胚胎干细胞体外增殖及分化的影响

[目的]研究小半夏加茯苓汤含药血清对体外培养的小鼠胚胎干细胞(ES)增殖及分化的影响.[方法]噻唑蓝比色法(MTT)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下24、48、72、96 h后的ES细胞活性.半定量逆转录-聚合酶链反应法( RT-PCR)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下ES分化为心肌细胞的能力,判断受试物的胚胎发育毒性.[结果]在促细胞增殖方面:小半夏加茯苓汤含药血清作用下的ES细胞,在连续培养24、48、72、96 h时,其活性水平均呈显著上升趋势,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).在促细胞分化方面:小半夏加茯苓汤含药血清对ES分化心肌细胞的肌球蛋白重链基因β-MHC的表达能力,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]小半夏加茯苓汤含药血清能够促进ES细胞增殖,并能促进ES细胞向心肌细胞分化,提示在该实验剂量下,小半夏加茯苓汤无明显胚胎毒性.     

大鼠成骨细胞的体外培养研究

目的:改良大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法。方法:采用改良的胰蛋白酶和I型胶原酶联合的二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养、扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过成骨细胞形态学、茜素红矿化结节染色法观测,确定其增殖与成骨活性。结果:改良的二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。形态学、茜素红染色均呈阳性结果。结论:改良的二次酶消化法能够在更短时间内获得大量的高纯度的成骨细胞,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究模型。     

东川芎对体外培养心肌细胞保护作用的研究

东川芎(Cnidium Officinale Makino)是吉林省延边朝鲜族自治州栽培的东川芎原植物,其根茎系朝鲜族民 族药,多自产自销,具有活血行瘀、疏肝解郁、散气止痛等功效。有关东川芎对体外培养缺氧缺糖心肌细     

人类卵细胞可培养胚胎干细胞

<正>英国《自然》杂志刊登报道说,美国研究人员用人类卵细胞培养出了胚胎干细胞,这一成果可能引起有关克隆问题的新一轮大争论。将体细胞中的遗传物质植入卵细胞中,将其培育成为     

淫羊藿苷诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞方法学研究

 目的采用药物淫羊藿苷(icariin,ICA)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养的微环境,建立一种药物介导提高ES细胞体外定向心肌细胞分化率的实验体系。方法采用悬滴培养法,构建ICA诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的实验评价体系;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定心肌细胞。结果ICA在10^-7mol·L^-1浓度时,对ES细胞定向分化为心肌细胞呈现最佳诱导效应,分化率最高达84%(P<0.001)。ES细胞源心肌细胞表达心肌特异性基因肌球蛋白重链(α-MHC)和心室肌球蛋白轻链(MLC-2v),且心肌特异性肌小节α辅肌动蛋白(α-actinin)和肌钙蛋白T(troponin T)呈阳性表达。结论悬滴培养法结合药物改善微环境,可用于药物诱导ES细胞定向分化心肌细胞的实验体系。