地西他滨对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在观察去甲基化药物地西他滨(DAC)对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响。用台盼蓝染色法检测DAC对NB4及K562细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同浓度DAC作用后细胞周期的变化和CD11b的表达水平;瑞氏染色法观察药物作用后细胞形态变化;DNA梯形片段电泳分析细胞凋亡。结果表明,DAC显著抑制NB4及K562细胞的增殖(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性,DAC作用NB4及K562细胞72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.113μmol/L和0.138μmol/L;不同浓度DAC作用72 h后,0.15μmol/L DAC处理组两种细胞株G0/G1期细胞比例均显著增高,而S期细胞比例降低(P<0.05);两种细胞株的髓系分化抗原CD11b表达水平均升高(P<0.05);两种细胞株经不同浓度DAC处理48 h后,0.15μmol/L DAC处理组均出现典型的凋亡梯形DNA条带。结论:DAC抑制NB4及K562细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡;DAC对NB4细胞作用更明显。     

苦参碱对急性早幼粒细胞白血病细胞维甲酸耐药的逆转作用研究

目的 探讨苦参碱逆转急性早幼粒细胞白血病(APL)全反式维甲酸(ATRA)耐药的作用及可能的机制.方法 以ATRA敏感的APL细胞系NB4及其ATRA耐药株NB4-R1、NIM-R2作为研究对象.用MTT法明确苦参碱低毒性剂量,进一步计算ATRA联合100μmoL/L苦参碱作用前后细胞ATRA IC50值,明确苦参碱的逆转耐药倍数;用NBT还原实验分析不同浓度(10、8、6、4、2、1、mmol/L,100、10、1μmol/L)苦参碱联用1μmol/L ATRA对耐药细胞分化能力的影响,并观察细胞形态变化;Annexin V/PI染色流式细胞术检测不同浓度苦参碱联用1 μmol/L ATRA作用下细胞凋亡率.结果 ①苦参碱对NB4、NB4-R1、NB4-R2细胞的增殖抑制作用随浓度增加而增强,IC50值分别为(0.661±0.035)、(0.673±0.132)、(0.329±0.020)mmol/L;②联用100 μmol/L苦参碱能显著逆转NB4-R1细胞的耐药性(逆转耐药倍数为4.96±1.15),但不能增强NB4-R2细胞对ATRA的敏感性,甚至增强其耐药性(逆转耐药倍数为0.66±0.17);③苦参碱与1 μmol/L ATRA联用时,NB4、NB4-R1细胞的分化能力随苦参碱作用浓度的增大而增强,且在苦参碱为100 μmol/L时达到峰值(P<0.05),但对NB4-R2细胞无明显影响;④1 μmol/L ATRA联合苦参碱能显著提高NB4、NB4-R1细胞凋亡率(P<0.05和P<0.01),但对NB4-R2细胞同样无明显作用.结论 苦参碱能有效逆转NB4-R1细胞的ATRA耐药,可能与其协同ATRA诱导分化及促进细胞凋亡有关.苦参碱与ATRA联用非但不能缓解NB4-R2细胞的ATRA耐药,甚至可能加重耐药、阻断耐药细胞的凋亡过程.     

地西他滨联合三氧化二砷对急性髓系白血病MV4-11细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨地西他滨(DAC)单用或联合三氧化二砷(As2O3)对人类急性髓系白血病(AML)MV4-11细胞的增殖和凋亡的影响,为寻找治疗MLL重排的AML的有效方法提供实验依据。方法:应用CCK8法检测DAC和As2O3单药对MV4-11细胞增殖的抑制情况,以低于50%抑制浓度(IC_(50))的DAC与低于20%抑制浓度(IC_(20))的AS_2O_3联合用药,检测联合用药对MV4-11细胞增殖时的抑制情况。用流式细胞术检测两药单用及联合应用时M V4-11细胞的凋亡情况。结果:DAC和AS_2O_3单独用药时,随着药物浓度的增加对MV4-11细胞的增殖抑制作用逐渐增强(P0.01)。DAC和As_2O_3对MV4-11细胞的IC_(50)分别为2.409和2.364μmol/L。与DAC单独用药比较,低于(IC_(50))值各浓度(0.01、0.1、0.5、1μmol/L)DAC与As_2O_3(0.25μmol/L)分别联合用药,对MV4-11细胞增殖抑制率均明显升高(P0.05)。DAC(5.0μmol/L)作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为13.50%±1.87%,As_2O_3(2μmol/L)作用MV4-11细胞48 h的凋亡率为12.60%±2.33%,两药联合采用的凋亡率增高为51.13%±4.97%。结论:DAC和As_2O_3能显著抑制MV4-11细胞增殖并诱导其凋亡,两药联合应用对MV4-11细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。     

氯法拉滨对NB4细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2表达的影响

本研究观察氯法拉滨对人急性髓系白血病NB4细胞的增殖抑制作用并探讨其可能的作用机制。用MTT法观察氯法拉滨0.01-0.1μmol/L作用于NB4细胞48 h的增殖抑制作用;氯法拉滨0.01-0.1μmol/L作用于NB4细胞24 h后,用流式细胞术分析其细胞的凋亡水平,Western blot检测细胞内Bcl-2的蛋白表达。结果表明,氯法拉滨对NB4细胞具有浓度依赖性增殖抑制作用。氯法拉滨作用24 h后,NB4细胞凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达下调。结论:氯法拉滨能抑制NB4细胞增殖,其作用机制可能与下调Bcl-2的蛋白表达,诱导NB4细胞凋亡有关。     

三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡和环氧合酶-2基因表达研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞凋亡过程中线粒体膜电位的改变及环氧合酶-2的表达变化。利用免疫荧光显微镜、DNA电泳等观察As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中NB4细胞的形态学改变,流式细胞术检测NB4细胞凋亡率及线粒体膜电位改变,Western blot分析环氧合酶-2的蛋白质表达水平变化。结果表明,经2μmol/L As2O3处理NB4细胞48小时后,荧光显微镜显示NB4细胞出现核致密浓染、染色质固缩及片断化断裂,甚至呈碎片状;提取DNA进行琼脂糖电泳显示典型DNA Ladder现象。流式细胞术分析发现,NB4细胞经3μmol/L As2O3处理48小时后细胞凋亡率为33.34%,As2O3浓度越高,NB4细胞凋亡率越高;以0.5、1、2、4及8μmol/L As2O3分别处理NB4细胞48小时后,线粒体膜电位分别下降12.8%、21.6%、66.9%、83.7%和83.8%;Western blot检测显示,环氧合酶-2在实验组的表达明显低于对照组,且随着As2O3浓度的升高,环氧合酶-2的表达逐渐降低,二者呈显著的负相关关系。结论 :As2O3能够有效诱导NB4细胞凋亡,且在一定浓度范围内具有量效关系;线粒体膜电位下降与As2O3诱导的NB4细胞凋亡有关;环氧合酶-2可能参与了As2O3诱导的NB4细胞凋亡过程。     

阿托伐醌诱导非霍奇金淋巴瘤Raji细胞周期阻滞和细胞凋亡

目的：探讨阿托伐醌对非霍奇金淋巴瘤Raji细胞周期与细胞凋亡的影响与作用机制。方法：分别采用MTT比色法和锥虫蓝染色法检测阿托伐醌对Raji细胞增殖的作用;PI染色后采用流式细胞术检测细胞周期分布;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA探针标记检测细胞内活性氧水平变化;Western blot法检测细胞周期和凋亡相关分子的蛋白表达。结果：不同浓度阿托伐醌（5-40μmol/L）剂量依赖性抑制Raji细胞增殖（r=0.951）。阿托伐醌（20和30μmol/L）处理Raji细胞24、48和72 h后均明显抑制细胞增殖,与空白对照组相比具有统计学差异（P<0.01,P<0.001,P<0.001）。阿托伐醌（20和30μmol/L）处理Raji细胞24 h后显著诱导Raji细胞周期G1期阻滞（P<0.01,P<0.001）,同样处理Raji细胞48 h后则显著诱导细胞凋亡（P<0.01）。阿托伐醌（20和30μmol/L）处理Raji细胞24 h后,显著诱导p-JAK2及p-STAT3(Y705)蛋白表达下调（PP<0.001,...     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡及相关机制的研究

本研究旨在探索硼替佐米(bortezomib)联合三氧化二砷(As2O3)诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的凋亡及相关调控机制。用流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Hoechst染色法观察凋亡细胞形态;Western blot检测caspase-3,caspase-9的活化以及NOXA蛋白的表达;以小干扰RNA(siRNA)技术特异性"沉默"NOXA基因;用脂质体Lipofectamine2000转染pEGFP-Noxa质粒和空载体pEGFP。结果表明,bortezomib(10 nmol/L)联合As2O3(0.5μmol/L)诱导NB4细胞凋亡率较单药As2O3(0.5μmol/L)诱导时增加,相应的caspase-3,-9的活化明显加强。单药As2O3诱导的NB4细胞中Noxa蛋白水平未发生改变,bortezomib和As2O3联合诱导的NB4中NOXA蛋白水平上调。特异性"沉默"NOXA基因后bortezomib和As2O3联合诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度降低,细胞凋亡率也明显下降。通过转染质粒高表达NOXA蛋白,单药As2O3诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度增加。结论:bortezomib可以增加NB4细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性,这可能和促凋亡蛋白NOXA的表达上调有关。     

Manumycin对白血病细胞生长及survivin基因表达的影响

目的:观察不同浓度的Manumycin对白血病K562细胞生长及survivin基因表达的影响,初步探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞,采用不同浓度的Manumycin(0、0.5、1、2、4、8 μmol/L)掺入细胞,作用48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR检测细胞中survivin mRNA表达.结果:MTT法显示,1～8 μmol/L组对K562细胞具有明显的增殖抑制作用.流式细胞术结果显示,1～8μmol/L组均可诱导细胞凋亡(P＜0.01).RT-PCR结果显示1～8 μmol/L组细胞的survivin mRNA水平明显低于空白对照组(P＜0.01).结论:Manumycin可有效抑制K562细胞的增殖,诱导其凋亡,分子机制可能与下调survivin的表达有关.     

辛伐他汀对人急性单核细胞白血病SHI-1细胞PI3K/AKT通路的影响

本研究探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂辛伐他汀对人急性单核细胞白血病株(SHI-1)细胞增殖和凋亡的影响及PI3K/AKT通路变化。取对数生长期细胞,实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15μmol/L),培养24、48、72 h。采用MTT法观察SHI-1细胞增殖能力;流式细胞术测定SHI-1细胞凋亡指标变化;PCR芯片研究SHI-1细胞PI3K/AKT通路84个特异性基因mRNA的差异表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞有明显抑制增殖和促凋亡作用,呈时间与剂量依赖性。15μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞24、48、72h,细胞增殖抑制率分别为26.82%、47.09%、63.92%,细胞早期凋亡率分别为5.73%、13.25%、15.59%。与对照组相比,15μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞48 h组中有39个基因表达发生改变,其中26个基因表达下调、13个基因表达上调。结论:辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节PI3K/AKT通路相关基因的表达有关。     

CM通路AEA对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的观察在神经酰胺(CM)通路中,大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺(AEA)抑制人胶质瘤U251细胞增殖及在诱导细胞凋亡中的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法,分别测定不同浓度的CM(5~20μmol/L)和烟曲霉毒素(FB1)(10μmol/L)预处理24h后对AEA(1~10μmol/L)抑制人胶质瘤U251细胞增殖作用的影响;流式细胞仪Annexin-V/PI双染色法定量分析FB1(10μmol/L)预处理24h后对AEA(10μmol/L)促细胞早期凋亡作用的影响。结果不同浓度的AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用不同,且与CM具有协同作用;10μmol/L FB1预处理24h后可显著对抗AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;AEA(10μmol/L)可诱导人胶质瘤U251细胞发生早期凋亡,而FB1(10μmol/L)预处理24h后凋亡发生率明显下降。结论 AEA可通过CM从头合成通路,与CM呈浓度依赖性协同,从而抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导其早期凋亡。     

地西他滨对白血病Kasumi-1细胞的毒性作用及其机制研究

目的:探讨地西他滨对白血病Kasumi-1细胞的毒性作用及其机制。方法:应用CCK-8法检测0.5～100μmol/L地西他滨作用Kasumi-1细胞24、48、72 h后的细胞存活率,An-nexinⅤ-FITC/PI双染色法检测0.5～20μmol/L地西他滨处理Kasumi-1细胞48 h后的细胞凋亡率,流式细胞碘化丙啶单染色法观察G0/G1期、S期、G2/M期Kasumi-1细胞比例;逆转录PCR法检测p21WAF1/CIP1基因表达水平的变化。结果:0.5～100μmol/L地西他滨均可抑制Kasumi-1细胞增殖,并呈现剂量依赖性与时间依赖性,作用24、48、72 h的IC50浓度分别为6.92、5.03、4.47μmol/L;0.5～20μmol/L地西他滨诱导Kasumi-1细胞凋亡水平较低,但能以剂量依赖的方式阻滞Kasumi-1细胞G2/M期,上调p21WAF1/CIP1基因表达。结论:地西他滨对Kasumi-1细胞具有毒性作用,其机制可能与上调p21WAF1/CIP1表达以及阻滞细胞周期有关。     

尿多酸肽联合环腺苷酸诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的实验研究

目的 探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)单独和联合环腺苷酸(cAMP)对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞的作用.方法 以维甲酸耐药的APL细胞株NB4-R2为体外模型,观察使用CDA-Ⅱ单独和联合cAMP处理前后细胞生长和形态的改变;同时利用流式细胞术检测细胞的凋亡特征,包括细胞内DNA含量的分布、亚二倍体(sub-G1)细胞群所占比例、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平等;并通过电泳鉴定因基因组DNA非随机性降解导致的梯状DNA.结果 CDA-Ⅱ可以通过降低细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,诱导NB4-R2细胞发生凋亡;cAMP则能显著加强CDA-Ⅱ的这一促凋亡作用1 g/L CDA-Ⅱ联合100 μmol/L cAMP共同处理NB4-R2细胞48 h和72 h时Bcl-2阳性细胞比例分别下降至(15.1±4.8)%和(7.3±2.9)%.100 μmol/L cAMP单独作用可使MB4-R2细胞的Bcl-2阳性率由(92.0±0.6)%下降至(75.3±2.0)%.结论 尿多酸肽CDA-Ⅱ联合cAMP对于维甲酸耐药的APL细胞株具有强烈的诱导凋亡效应.     

紫杉醇与顺铂联合化疗对宫颈鳞癌细胞株HCE1作用的实验研究

目的 观察紫杉醇加顺铂联合化疗在宫颈鳞癌细胞株HCE1中的协同效应,指导进一步临床应用.方法 (1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片.(2)实验分组及检测:①终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的紫杉醇培养HCE1细胞;②终浓度为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂培养HCE1细胞;③紫杉醇联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24 h、48 h、72 h后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24 h、48 h、72 h三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变.结果 (1)紫杉醇处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等.(2)经终浓度分别为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L紫杉醇处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(9.5±0.66)%、(17.1±1.51)%、(33.3±1.77)%,48 h时,细胞抑制率分别为(28.0±2.27)%、(45.2±3.15)%、(66.0±2.95)%,72 h时,细胞抑制率分别为(39.4±2.81)%、(66.2±7.02)%、(81.5±1.78)%;经终浓度分别为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(3.6±0.56)%、(6.5±0.98)%、(14.1±2.52)%,48 h时,细胞抑制率分别为(6.5±0.46)%、(9.9±1.35)%、(20.0±3.05)%,72 h时,细胞抑制率分别为(14.1±3.05)%、(42.1±3.90)%、(59.4±4.26)%;联合处理组以48 h 20 μmol/L紫杉醇联合20 μg/ml顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为(30.2±3.34)%,综上可见紫杉醇和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,紫杉醇联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用.(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,紫杉醇处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,紫杉醇联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于紫杉醇处理组和顺铂处理组之间.以20 μmol/L紫杉醇作用HCE1细胞48 h为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(86.0±3.01)%、(9.1±0.66)%,40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(2.1±0.26)%、(92.2±6.24)%,20 μmol/L紫杉醇联合40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(13.2±0.78)%、(80.5±2.46)%.(4)细胞凋亡分析表明,紫杉醇处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;紫杉醇联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高.结论 紫杉醇与顺铂联合对宫颈癌细胞的抑制作用明显增强,提示紫杉醇可与顺铂对宫颈癌细胞增殖的抑制产生协同作用.     

吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞增殖的抑制作用

本研究探讨两种分子靶向治疗药物酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和拉帕替尼对JAK2 V617F阳性的骨髓增殖性疾病(MPD)的潜在治疗作用。吉非替尼(0.5、1、5、10、25μmol/L)和拉帕替尼(0.5、1、2、4、8、16μmol/L)分别作用于携带JAK2 V617F突变的人红白血病细胞株(HEL细胞系)。用MTT法检测2种药物对HEL细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果表明,吉非替尼可明显抑制HEL细胞的增殖,呈浓度依赖性(24和48 h的相关系数为0.991和0.895),48 h的IC50为5.4μmol/L。拉帕替尼作用48 h抑制细胞增殖的IC50为19.6μmol/L。吉非替尼对HEL细胞有显著的诱导凋亡作用,呈浓度依赖性(相关系数为0.896),随药物浓度的增加,凋亡细胞比例的增加。此外,吉非替尼明显地影响细胞周期,将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞有显著的抑制增殖作用,可进一步用于JAK2 V617F阳性的MPD靶向治疗的研究。     

姜黄素联合全反式维甲酸诱导耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究

本研究旨在探讨姜黄素联合全反式维甲酸(ATRA)对耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的影响及其分子机制。以耐药的NB4-R1细胞为实验对象,对细胞进行计数和细胞形态学观察,应用流式细胞术(FCM)检测姜黄素单用或联合ATRA对NB4-R1细胞增殖、分化的影响;用Western blot检测AKT磷酸化在细胞分化中的变化。结果显示,全反式维甲酸对NB4-R1细胞增殖无影响,但可增强姜黄素对NB4-R1生长的抑制作用。单用姜黄素或全反式维甲酸对细胞分化无影响,姜黄素联合全反式维甲酸可明显诱导细胞CD11b表达,细胞在形态上呈明显分化特征。全反式维甲酸可在短时间内促进NB4细胞AKT第473苏氨酸磷酸化,而对NB4-R1细胞中的AKT磷酸化影响不大。姜黄素可以促进NB4-R1细胞AKT磷酸化,而联合全反式维甲酸可进一步增强AKT磷酸化。结论:PI3K/AKT通路失活可能是导致APL细胞耐药的因素之一,而姜黄素通过活化PI3K/AKT信号通路逆转APL耐药,促进NB4-R1细胞分化。     

黄芩提取化合物单体SBX抗白血病效应及机制研究

本研究探讨黄芩提取化合物单体成分SBX对不同人白血病细胞株的抗白血病效应及其可能的相关机制。体外培养人HL-60、NB4、U937、K562、Jurkat细胞,应用CellTiter-Glo发光法进行细胞活力检测,筛选出敏感细胞株,应用流式细胞术检测SBX对敏感细胞细胞周期的影响,应用蛋白Pathway Array技术检测SBX对敏感细胞蛋白表达的影响。结果显示,SBX(10-200μmol/L,72 h)对各种类型的人白血病细胞均有抑制作用,并呈浓度依赖性(r值分别为0.86,0.88,0.95,0.94,0.96),对HL-60细胞抑制作用最强。流式细胞术显示SBX(50,100μmol/L,48h)对HL-60细胞周期的影响主要是引起G0/G1期阻滞。蛋白Pathway Array技术分析SBX(50μmol/L,48 h)对HL-60蛋白表达的影响显示,p-PKCα/βⅡ、p-p38、Cdc25B、XIAP蛋白表达水平上调,而p-AKT、p-SAPK/JNK、cyclin E、Notch4、Cdk4、Cdc2、Akt、Bcl-2、Bax、cdc42、TNF-α、p27、CaMKKa蛋白表达水平下调。结论:SBX能够抑制各种类型人白血病细胞的增殖,其中敏感细胞株为HL-60。SBX主要影响HL-60的EGFR、Ras/Raf/MAPK和Notch信号传导通路,并通过这些信号传导通路影响细胞周期相关蛋白表达的水平,导致细胞周期G0/G1期阻滞。