三氧化二砷对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞,应用MTS/PES方法检测细胞增殖,NBT实验测定细胞分化,流式细胞术检测细胞凋亡和分化相关抗原CD11b的表达,SYBR Green real-time RT-PCR方法检测C-FES、BCL-2、BAX、Survivin、P21和P27 mRNA水平变化。结果:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖,其效应呈剂量依赖和时间依赖性(r=-0.967;r=-0.954);低浓度(0.1、0.5和1.0μmol/L)As2O3能明显促进细胞分化,NBT阳性率和CD11b表达水平均有不同程度的增高;较高浓度As2O3(2.5和5.0μmol/L)能明显诱导细胞凋亡,抑制细胞分化。HL-60细胞经1.0和5.0μmol/L浓度As2O3处理后,C-FES mRNA表达均明显上调,但以1.0μmol/L组更为明显,证实C-FES mRNA表达水平与细胞分化程度成正比。此外,5.0μmol/L浓度As2O3显著下调了HL-60细胞BCL-2和Survivin的表达,相反明显上调了BAX、P21和P27的表达。结论:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖、促使细胞分化成熟及诱导细胞凋亡,其机制可能涉及C-FES以及细胞周期和凋亡相关基因的调控。     

米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0.924）和浓度（r=0.947）依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期（P〈0.05）,在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0.05）,BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。     

姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响

为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术（FCM）分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果表明：姜黄素明显抑制RPMI8226细胞的增殖,并表现为时间、剂量依赖性,24、48小时IC50值分别为12.15μmol/L、4.9μmol/L;凋亡率由10.6%增加到36.9%（p〈0.05）,细胞发生G2/M期阻滞;RPMI8226细胞细胞强表达Survivin、Bcl-2,弱表达Bax。RPMI8226细胞经10μmol/L姜黄素处理24小时后,survivin、Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax表达上调。结论：姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,并诱导凋亡。姜黄素的抗瘤机制可能与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2、bax在转录水平的调节有关。     

Ad-NK4增强人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞对硼替佐米化疗敏感性的作用

目的:观察Ad-NK4能否增强RPMI 8226细胞对硼替佐米(BOR)的化疗敏感性。方法:细胞-基质粘附实验和RPMI 8226细胞-ECV 304细胞粘附实验检测Ad-NK4对RPMI 8226细胞粘附的影响;Western blot检测粘附和侵袭相关蛋白MMP2、MMP3、MMP7、VEGF表达的变化;MTT法检测Ad-NK4对细胞增殖的影响;PI流式细胞术检测Ad-NK4对细胞凋亡的影响;Western Blot检测Cleaved caspase-3、BAX和BCL-2蛋白表达水平的变化。结果:两种细胞粘附实验均显示Ad-NK4可显著抑制RPMI 8226细胞粘附,且与Erk信号通路和JAK/STAT信号通路显著相关(P0.05);Ad-NK4能明显降低RPMI 8226细胞MMP-2、MMP-3和VEGF蛋白的表达水平(P0.05),但对M M P-7的蛋白表达水平无明显影响(P0.05)。Ad-NK4和BOR联用的细胞抑制率和诱导凋亡比例均显著高于单用Ad-NK4或BOR。同样,Ad-NK4和BOR联用组Cleaved caspase-3和BAX蛋白水平均明显高于单独作用组,而BCL-2蛋白水平却相反,同时在联用组BAX/BCL-2比率增加。结论:通过活化Caspase-3和上调BAX/BCL-2比率的途径,Ad-NK4可增强BOR体外抗骨髓瘤RPM I 8226细胞作用。     

二甲双胍抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的实验研究

目的:探讨二甲双胍对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:取0、5、10、20、40、80 mmol/L二甲双胍分别作用于RPMI8226、U266细胞株24、48、72 h,应用CCK-8法检测二甲双胍对骨髓瘤细胞株增殖的影响;取0、10、20、40 mmol/L二甲双胍分别作用于RPMI8226细胞株48 h,应用流式细胞术检测细胞凋亡;取0、5、10、20 mmol/L二甲双胍作用于RPMI8226细胞株48 h,Western blot检测Caspase-3、PARP、STAT3、p-STAT3、BCL-2、Cyclin D1、P21的表达。结果:二甲双胍可以抑制RPM I8226和U266细胞株的增殖,并呈浓度(r=0.982,r=0.967,P0.05)及时间依赖性(r=0.956,r=0.962,P0.05);随着二甲双胍浓度的增加,RPMI8226细胞凋亡比例逐渐增高(r=0.976,P0.05);二甲双胍可引起RPMI8226细胞株凋亡相关蛋白procaspase-3及PARP的活化,并可抑制STAT3磷酸化、下调BCL-2、Cyclin D1表达,上调P21蛋白表达。结论:二甲双胍可抑制RPMI8226、U266细胞株增殖,并诱导其凋亡,下调STAT3信号转导通路是其潜在的作用机制之一。     

NS-398联合硼替佐米对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞的增殖抑制作用

目的:观察NS-398能否增强多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞对硼替佐米(BOR)的化疗敏感性。方法:NS-398与BOR联用后,用MTT法测定对体外培养的RPMI 8226细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响;ELISA法检测细胞的Caspase-3活性;Cox-2试剂盒定量检测各组细胞Cox-2的活性。结果:NS-398联合BOR对RPMI 8226细胞的增殖抑制率大于单用组(Q0.85);NS-398联合BOR使RPMI 8226细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显高于单用组(Q1.15);NS-398联合BOR组细胞的Caspase-3的活性高于单用组(Q1.15)。结论:NS-398具有协同增强BOR体外抗骨髓瘤RPMI 8226细胞的作用。     

Hedgehog信号通路异常对多发性骨髓瘤化疗耐药的影响

目的:探讨Hedgehog信号过度活化与多发性骨髓瘤耐药的关系。方法:以浓度梯度递增法建立骨髓瘤耐药细胞株RPMI8226/R,实验分为RPMI8226/R,RPMI8226/S,GANT61+RPMI8226/R和GANT61+RPMI8226/S4组,用CCK8法检测4组细胞的增殖抑制率;RT-PCR检测RPMI8226/S和RPMI8226/R耐药前后Gli1,Gli2,Shh,Ihh,Smo和Sufu mRNA表达的变化;Western blot法检测耐药蛋白Cyclin D1,P21和BCL-2及MDR相关信号通路蛋白p-Akt,p-MAPK和STAT3在耐药前后两组细胞的表达。加入不同浓度的GANT61后,Western blot法检测RPMI8226/R,RPMI8226/S组细胞Gli2的表达。结果:Shh、Ihh、Smo、Gli2在RPMI8226/R中表达明显升高,Sufu抑制子则相反,Hedgehog通路下游靶点相关蛋白在RPMI 8226/R中的表达显著高于RPMI8226/S,GANT61体外处理之后,骨髓瘤细胞中Gli2表达量显著减低,GANT61对Gli2表达的减低作用在RPMI8226/R细胞中较RPMI8226/S细胞更为显著,GANT61处理后RPMI8226/R细胞对DOX的敏感性(IC_(50))由7.11±0.061μmol/L升为0.99±0.053μmol/L,相应的耐药指数从5.51降至1.69。结论:Hedgehog信号通路的活化与多发性骨髓瘤的耐药密切相关,GANT61能够阻断Hedgehog信号通路,因此后者可能成为临床克服MM的化疗耐药的一种新的治疗靶点。     

砷剂诱导多发性骨髓瘤细胞socs-1基因去甲基化作用的研究

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）对人多发性骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞内socs-基因甲基化状态的影响。用MTT法观察As2O3对骨髓瘤细胞增殖情况的影响，采用甲基特异性PCR法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226 socs-1基因的甲基化状态，以实时定量PCR技术定量检测细胞株给药前后socs-1基因mRNA的表达变化，流式细胞技术检测As2O3诱导的骨髓瘤细胞的凋亡情况。结果表明：人骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226均存在不同程度的socs-1基因CpG岛甲基化，socs-1基因不表达的现象。As2O3作用72小时后socs-1基因甲基化程度明显减弱或消失，socs—1基因在mRNA水平上表达明显增强，与各野生型细胞株相比，差异具有显著性P〈0．05），且细胞生长抑制明显，早期、晚期细胞凋亡比率明显升高，并呈现剂量依赖性。结论：As：03可诱导socs—1基因甲基化状态的改变，使基因表达上调，恢复其活性，这为进一步阐明As2O3诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制和As2O3治疗多发性骨髓瘤的可能机制提供新的思路和新的研究方向。     

三氧化二砷与干扰素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)、干扰素(IFN-α1、IFN-α2、IFN-β)及其两者联合对人类骨髓瘤细胞株(RPMI8226)的增殖的影响。方法以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)测定RPMI8226细胞的增殖活性,并观察不同类型、不同浓度干扰素和亚砷酸对RPMI8226细胞增殖的影响以及两者联合对RPMI8226细胞的增殖作用。结果As2O3对RPMI8226细胞增殖有显著的抑制作用;IFN-α1对RPMI8226细胞生长无抑制作用,当IFN-α2浓度大于500 kU/L和IFN-β浓度大于1000 kU/L时对RPMI8226细胞增殖有抑制作用(P<0.05);且IFN-α2与As2O3联合对RPMI8226细胞增殖抑制有协同作用(P<0.05)。结论As2O3对骨髓瘤细胞增殖有抑制作用,而干扰素须达到一定浓度才对RPMI8226细胞增殖有抑制作用。     

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的 探究冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Bax比例,调节细胞凋亡有关。     

丙戊酸钠联合三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡及其机制研究

本研究旨在探索丙戊酸钠联合三氧化二砷对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制.利用CCK-8法检测不同浓度的丙戊酸钠、三氧化二砷单药和两药联合应用对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.半定量RT-PCR和Western blot分别检测各组BCL-2、BAX、caspase-8及caspase-9的mRNA和蛋白表达水平的变化.结果表明：丙戊酸钠及三氧化二砷均可抑制RPMI 8226细胞增殖,两者联合应用有协同作用（Q值大于1.15）.联合用药组RPMI 8226细胞凋亡率较单药组明显增加（P＜0.05）.与丙戊酸钠或三氧化二砷单药组相比,联合用药组RPMI 8226细胞BCL-2 mRNA及蛋白表达水平下降,BAX、caspase-8及caspase-9mRNA及蛋白表达水平上调.结论：丙戊酸钠和三氧化二砷有协同抑制RPMI 8226细胞增殖和诱导凋亡的作用,这可能与BCL-2表达下调,BAX、caspase-8及caspase-9表达上调有关.     

DAPT对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖和凋亡的影响

本研究旨在探讨DAPT对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖的抑制作用及相关机制。用CCK-8法检测RPMI8226细胞的增殖率,用流式细胞术检测凋亡率,用Western blot法检测RPMI8226细胞Notchl、Hes1蛋白表达情况。结果表明,DAPT 0.5-5.0μmol/L作用于RPMI8226细胞24-72 h后,细胞增殖水平明显下降,呈时间和浓度依赖性(r=1.000)。不同浓度的DAPT能诱导RPMI8226细胞发生凋亡,与对照组相比差异有统计学显著性;随着DAPT浓度的增加,Notch1、Hes1蛋白的表达逐渐下调(rNotch=-0.979,rHes1=-0.988)。结论:DAPT能够抑制RPMI8226细胞的增殖,其机制可能与RPMI8226细胞中Notch1、Hes1蛋白的下调有关。     

β-榄香烯对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖与凋亡的影响

为了研究β-榄香烯对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖、凋亡的影响,探讨其作用的分子机制,用MTT法检测β-榄香烯对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式术检测β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞凋亡的作用;Western blot法检测β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞BCL-2、caspase-3、DR-4和NF-κB P65蛋白表达影响。结果表明:β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;10-80μmol/Lβ-榄香烯作用48小时可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增;β-榄香烯以时间依赖方式上调caspase-3、DR-4蛋白表达,并可下调BCL-2、NF-κB P65蛋白表达。结论:β-榄香烯通过诱导细胞凋亡有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与细胞内、外凋亡通路激活、抗凋亡机制被抑制有关。     

雄黄诱导人弥漫性大B淋巴瘤SU-DHL-4细胞凋亡及其机制的初步研究

本研究旨在探讨雄黄（Realgar,AS4S4）诱导人弥漫性大B淋巴瘤su-DHL-4细胞凋亡及其可能的机制。采用MTT法观测雄黄对SU—DHL-4细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞术检测药物对SU-DHL-4细胞周期的影响及其诱导凋亡情况,利用琼脂糖凝胶电泳方法观察凋亡细胞的DNA降解情况,通过透射电子显微镜技术观察药物作用前后细胞超微结构的变化,采用Westernblot方法检测药物诱导SU—DHL4细胞48h后Caspase-3、Bcl-2以及Bax蛋白表达情况。结果表明：20、40、80μmol／L的雄黄均可抑制su—DHL-4细胞增殖,抑制率呈时间-剂量依赖性（r=0．982;P〈0．05）;AnnexinV／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率显示雄黄作用SU—DHL-4细胞48h后,随着药物浓度的增加,早期凋亡细胞所占比率增高（P〈0．05）;PI单染流式细胞术检测细胞周期发现,雄黄作用SU—DHL4细胞48h后处于细胞周期S期的细胞显著减少（P〈0．05）;透射电子显微镜下观察雄黄作用SU-DHL-4细胞48h后各浓度组细胞,均呈典型凋亡的改变,偶见坏死细胞;琼脂糖凝胶电泳结果显示,各浓度实验组雄黄干预SU—DHL-4细胞48h后,细胞核DNA降解呈梯状;Westemblot结果显示,雄黄作用SU-DHL-4细胞48h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和Caspase-3蛋白表达增加。结论：雄黄可以诱导人弥漫性大B淋巴瘤细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、上调Caspase-3和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白而诱导细胞凋亡。     

L-肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护机制

目的探讨L-肌肽对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）凋亡保护的作用机制。方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上加入肌肽,采用MTT比色法检测肌肽对H2O2抑制PC12细胞增殖的影响;RT-PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达变化;免疫组织化学SABC法检测Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20mmol/L浓度时达最大值（P〈0.05）;20mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低其Caspase-3 mRNA的表达及Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测显示,肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡。结论肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制Caspase-3的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。     

多西他赛对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究旨在观察多西他赛对人骨髓瘤细胞系RPM18226增殖和凋亡的影响,探讨其作用的分子机制。采用MTT法检测骨髓瘤细胞增殖抑制率,光学显微镜及电子显微镜观察多西他赛对骨髓瘤细胞形态的影响,Annex-in-VFITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,PI染色流式细胞术检测骨髓瘤细胞周期分布情况,半定量RT-PCR检测多西他赛对B观-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达影响,Westernblot法检测多西他赛作用前后骨髓瘤细胞BCL-2蛋白表达变化。结果显示：0．25-8．0μg／ml终浓度的多西他赛均可抑制RPM18226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．927）和浓度（r=0．726）依赖性;多西他赛处理组光学显微镜下可见细胞数量明显减少,排列紊乱,高倍镜可见凋亡细胞,偶见坏死细胞;电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变以及少数坏死细胞;多西他赛可明显诱导骨髓瘤细胞凋亡（P〈0．01）,主要将细胞阻滞于G2／M期（P〈0．01）,作用48h时BCL-2mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0．05）,caspase-8、caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：多西他赛通过诱导细胞凋亡可抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡通路有关。     

辛伐他汀对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测不同浓度SIM作用不同时间对SHI-1细胞生长的抑制作用;实验分为阴性对照及辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、20μmol/L),处理48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;半定量RT-PCR法检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达;Western blot法检测caspase-3、BCL-2蛋白表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间与剂量依赖性。与对照组相比,辛伐他汀处理SHI-1细胞48小时后,各浓度组S期细胞百分比明显增多,5μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞能明显阻滞细胞周期进程,但不能诱导细胞凋亡。细胞中BCL-2mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而下降,caspase-3mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而增高(p<0.05)。SHI-1细胞中BCL-2蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而降低,caspase-3蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而增加(p<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调BCL-2和上调caspase-3表达有关。     

醋酸棉酚诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制的实验研究

本研究探讨醋酸棉酚对经典人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226的作用及其机制。采用四唑盐比色试验（MTT）、细胞形态学观察、流式细胞仪检测、DNA电泳、Western—blot等方法分剐观察醋酸棉酚对RPMI8226细胞的抑制增殖、诱导凋亡效应及其机制。结果表明：醋酸棉酚在〉16μmol／L浓度时可显著抑制RPMI8226细胞的增殖、促进其凋亡,随着剂量的增加以及时间的延长,效应越明显。研究还发现,醋酸棉酚是通过抑制线粒体膜电位（△ψm）、诱导Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达来实现上述效应的。结论：醋酸棉酚对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞具有选择性抑制增殖、促进凋亡的效应。