金华地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型及耐药基因位点突变类型分析

目的分析金华地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特征及HBV耐药基因位点突变情况,并探讨两者的关系。方法选取104例经核苷（酸）类似物治疗的慢性乙型肝炎患者为研究对象,采用Sanger双脱氧法测序技术检测患者血清HBV的基因型和10种常见的HBVP区耐药基因位点突变情况,并分析两者关系。结果本组慢性乙型肝炎患者中,HBVB基因型占46.15%,C基因型占53.85%,未发现其他基因型。检测出发生耐药基因位点突变61例,突变率为58.65%,其中C基因型占65.57%,B基因型占34.43%。HBVP区耐药基因位点突变率最高的为M204V/I（73.85%）,其次为L180M（36.92%）和A181V/T（23.08%）。HBVP区耐药基因发生单位点突变的占50.82%,其中M204I突变类型最多（29.51%）;发生多位点突变的占49.18%;以M204I和M204V/I+L180M两种突变类型最常见。HBVC基因型的患者耐药基因突变率高于B基因型的患者（71.43%vs43.75%,P＜0.05）,其中C基因型的患者A181V/T位点突变率高于B基因型的患者（14.29%vs2.08%,P＜0.05）。结论金华地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型以B、C基因型为主;HBVP区耐药基因位点突变类型以M204I和M204V/I+L180M两种类型最常见;HBVC基因型的患者比B基因型的患者更易发生耐药突变,且更易发生A181V/T位点突变。     

新型HIV-1表型耐药系统临床检测应用研究

目的应用新型HIV-1表型耐药系统对经过HAART治疗的40例临床患者样本进行表型耐药检测,通过比较表型和基因型耐药的结果,实现这一新型HIV-1表型耐药体系在临床检测中的应用。方法通过分子克隆方法、Gateway重组技术、体外细胞功能试验,得到表型耐药结果。结果成功构建含有患者基因的用于假病毒表型耐药的假病毒株40株,在总数达54个表型耐药性检测中,与基因型耐药性检测一致性达75.9%（41/54）。其中蛋白酶抑制剂（克力芝）试验组、核苷类逆转录酶抑制剂（3TC）试验组和非核苷类逆转录酶抑制剂（EFV）试验组的表型耐药性检测,与基因型耐药性检测一致性高达100.0%;而核苷类逆转录酶抑制剂（AZT）试验组共6个表型耐药性检测,与基因型耐药性检测一致性为66.7%（4/6）;2组多药试验共24个表型耐药性检测,与基因型耐药性检测一致性为54.2%（13/24）。其中显示出一个较为明显的特征,AZT药物敏感性试验的表型检测结果大多低于其基因型耐药检测的耐药水平（68.75%,11/16）。结论本研究建立了一个新型表型耐药系统对HIV耐药性进行检测,通过40例临床样本的检测,充分证明新型HIV-1表型耐药检测体系可以准确地反应样本耐药水平并对其进行定量。这一方法弥补了以往假病毒表型耐药检测方法中载体不能重组所有药物靶点的缺陷,证明该新型HIV-1表型耐药体系具有广阔的临床检测应用前景。     

乙型肝炎病毒耐药突变基因的检测与分析

目的检测该院2013年-2015年乙型肝炎患者基因分布及病毒耐药基因突变情况及相关性和临床意义。方法采用荧光定量和基因芯片技术检测240例乙型肝炎患者乙肝病毒(HBV)基因型和对拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替比夫定药物突变基因型。结果 240例乙型肝炎患者中,HBV基因型包括:B型61.3%(147/240)、C型25.0%(60/240)、B和C混合型5.4%(13/240)、其他型8.3%(20/240),未检出D型。182例未出现耐药,拉米夫定耐药突变44例,阿德福韦出现耐药突变者7例,恩替卡韦出现耐药突变者6例,替比夫定出现耐药突变者为1例。M204V以及M204I是两种常见的拉米夫定耐药突变情况,在阿德福韦耐药突变中以N236T±A181位碱基替换相对常见;T184位碱基替换是恩替卡韦耐药突变的典型代表;M204I是替比夫定耐药突变的主要表现。部分从来没有采用核苷酸等药物治疗者也有可能被检测出耐药突变情况。44例出现拉米夫定耐药的基因型中,180M及其混合突变型占86.4%(38/44),C型HBV基因突变占61.4%(27/44),且主要为180M耐药突变型(24/27)。结论检测乙型肝炎病毒耐药突变基因,可以帮助医学工作者确定患者是否存在耐药性,从而选择恰当的抗病毒方法对其进行治疗。     

昆明地区乙型肝炎患者基因型和耐药情况分析

目的分析昆明地区乙型肝炎患者基因型和HBV核苷(酸)类似物耐药相关的10个位点的突变情况及其临床意义。方法选取昆明市第三人民医院2017年5月至2019年3月期间,住院及门诊就医的2 707例慢性乙肝患者,采用Sanger测序法进行常见的核苷(酸)类治疗乙肝病毒的相关耐药基因突变位点检测,并分析不同耐药的突变模式。结果昆明地区HBV基因型以C型为主占62.4%,B型次之占37.3%,D型也有发现占3.4%,2 707例患者中,共有274例(10.1%)患者检测到发生耐药基因突变,变异率为10.12%。其中,168例患者发生拉米夫定耐药突变,突变比例为6.20%。耐药突变位点主要集中于rt M204V/I和rt L180M,替比夫定5.68%和恩曲他滨(5.91%)次之,阿德福韦1.07%和恩替卡韦2.10%耐药率较低。替诺福韦尚未发现耐药株,敏感度最高为99.66%。结论昆明地区的HBV基因型分布状况有独立特征。一线核苷(酸)类治疗药是高耐药屏障的替诺福韦或恩替卡韦,在乙型肝炎治疗上具有广阔的应用前景。使用基因测序法进行慢性乙型肝炎患者基因型和耐药突变位点检测,准确有效,可以更好地指导... 更多     

慢性乙型肝炎患者拉米夫定和恩替卡韦基因型耐药突变特征分析

目的 分析慢性乙型肝炎患者拉米夫定和恩替卡韦基因型耐药突变特征.方法 对我院180例拉米夫定（LAM）和120例恩替卡韦（ETV）治疗的慢性乙型肝炎患者进行耐药基因分析,并将检测耐药基因突变的结果进行统计分析.结果 LAM耐药突变率为60.6%（109/180）,常见耐药位点主要有rt 180Ml＋rt 204V、rt 204I＋rt 207I,变异频率分别为32.1%（35/109）和22.9%（25/109）.ETV耐药突变率为58.3%（70/120）,常见耐药位点主要有rt 184L＋ rt 180M＋ rt 204V,变异频率为80.0%（56/70）.结论 LAM和ETV存在rt 204V共同耐药位点,但是不会在临床过程中同时显现HBV-DNA阳性,当LAM耐药后,可用ETV继续治疗.     

海南省抗病毒治疗失败HIV/AIDS患者HIV-1亚型及基因型耐药分析

目的 了解海南省经艾滋病抗病毒治疗（antiretroviral therapy,ART）失败HIV/AIDS患者的HIV-1基因型耐药特点,为海南省HIV/AIDS患者有效抗病毒治疗提供基础依据。方法 采集2014—2019年ART治疗失败的患者血样进行基因型耐药检测,分析HIV-1毒株亚型与耐药突变特点。结果 172例治疗失败患者通过Pol基因区扩增及测序成功,其中男性150例（占87.21%）,年龄中位数为35.81（27.38,41.32）岁,未婚者102例（占59.30%）,性传播128例（占74.42%）,治疗前CD4⁺ T淋巴细胞中位数为225.93（73.00,328.25）个/µL;HIV-1毒株亚型为CRF01_AE 122例（占70.93%）,其次CRF07_BC亚型31例（占18.02%）。109例（63.37%）患者发生HIV-1低度以上耐药位点突变,非核苷逆转录酶抑制剂（NNRTI）耐药109例（占63.37%）;核苷逆转录酶抑制剂（NRTI）的耐药86例（占50.00%）,NRTI/NNRTI同时发生耐药86例（占50.00%例）;未发生蛋白酶抑制剂低度以上耐药位点突变。共检测出31种耐药位点,主要突变位点为M184V/I（38.95%）,Y181C/I/V/L（23.26%）,K65R（22.09%),V179D/E（20.93%）和K103N（19.77%）。对奈韦拉平（NVP）、依非韦伦（EFV）、拉米夫定（3TC）、替诺福韦（TDF）、齐多夫定（AZT）的高度耐药构成比依次是61.05%、50.00%、40.12%、12.79%、3.49%。扩增阳性者耐药构成比在性别、婚姻状况、传播途径、病毒亚型、基线CD4⁺ T淋巴细胞间差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 海南省ART治疗失败患者中,以NNRTIs耐药为主,应加强监测治疗效果及耐药情况,以及时调整治疗方案和减少耐药的发生与传播。     

云南省HIV-1 CRF01_AE毒株基因型耐药研究

目的 了解云南省HIV-1 CRF01_AE毒株的流行分布及基因型耐药情况。 方法 收集2018—2021年云南省抗病毒治疗失败的HIV/AIDS患者的人口学资料,采集患者血浆,逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol基因蛋白酶和逆转录酶区并进行序列测定,对基因型为CRF01_AE的序列进行耐药情况分析。结果 通过基因型耐药检测共获得967例亚型为CRF01_AE序列,其中男性682例（占70.5%）,耐药509例,耐药率为52.6%,异性性传播813例（占84.1%）,同性性传播95例（占9.8%）。同性性传播的耐药率最高,为65.3%;治疗时长<12个月的耐药率最低,为35.9%,36~<48个月耐药率最高,为58.1%。核苷类反转录酶抑制剂（NRTIs）耐药率为33.9%,非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTIs）的耐药率为48.5%,蛋白酶抑制剂（PIs）的耐药率较低为1.3%。NRTIs类药物中阿巴卡韦（ABC）、恩曲他滨（FTC）和拉米夫定（3TC）耐药率较高,分别为为32.9%、32.4%和32.4%;NNRTIs类药物中奈韦拉平（NVP）和依非韦仑（EFV）耐药率较高,分别为47.6%和47.5%,均以高度耐药为主。一线治疗方案耐药率56.2%高于二线治疗方案耐药率29.5%,差异有统计学意义（P<0.001）。NRTIs耐药突变位点中,以M184V/I突变位点为主,突变率为30.0%;NNRTIs耐药突变位点中,以K103N/Q/S突变位点为主,突变率为28.1%;PIs耐药位点突变率相对较低,主要的耐药突变位点是L33F,突变率为3.7%。结论 云南省抗病毒治疗失败亚型CRF01_AE的患者耐药率有所降低,但部分地区及人群的耐药率仍较高,应加强对重点地区和人群的管理,加强耐药监测,对治疗失败的患者及时掌握耐药情况,合理调整治疗方案。     

两种HIV-1基因型耐药检测方法用于干血斑样本的比较

目的使用两种HIV-1基因型耐药检测方法分别检测干血斑(Dried Blood spot,DBS)样本并比较耐药结果,以期建立适合的检测方法。方法选择河南省和安徽省经高效抗逆转录病毒治疗(highly active anti-retroviral therapy,HAART)5年以上HIV感染者共35名,采集全血制作干血斑标本,进行CD4+细胞计数和病毒载量测定,分别使用两种文献报道的方法扩增干血斑标本中的HIV-1 pol区核苷酸片段,进行HIV-1基因型耐药检测,并比较34个主要耐药突变位点差异。结果低载量1×103copies/m L,方法2具有更高的扩增率(5/5),而方法1能扩增成功3份(3/5)。方法2共检出269个主要耐药突变位点,两种方法耐药位点的一致率为95.9%(258/269)。与方法1比较,有11个耐药位点存在差异,7个位点由混合碱基引起,另4个差异位点则集中为:E138Q和K101Q。结论两种方法都能够检测病毒载量大于1×103copies/m L的样本,但是对于低载量样本方法 2较方法 1有更好的表现,后续应选择更多的不同亚型标本进行研究。     

乙肝耐药全基因测序分析研究

目的探讨接受核苷(酸)类药物抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者的耐药突变连锁模式。方法采用nest-PCR及测序方法对经抗病毒药物治疗的慢乙肝患者进行全基因测序,分析了126例样本的测序结果。结果 126例样本的检测结果,发现发生耐药突变的74例。经过分析,其中发生耐药位点连锁突变的为49例(66.2%),连锁模式达36种。M204I位点突变13例;M204V位点单点突变或连锁突变共34例,M204V连锁M180L再联合其他位点突变的达30例,其中M180L+M204V+S202G为12例,占40%(12/30)。其中也发现可能对恩替卡韦耐药的L180M+M204V+A181G/C的突变。结论抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中广泛存在多个耐药位点,随着临床用药,其他新的耐药突变模式也陆续出现。提示在接受核苷(酸)类药物抗病毒治疗前,在治疗过程中的合适时间点检测耐药相关变异位点,可为临床慢性乙型肝炎的抗病毒治疗提供重要参考。     

深圳地区新近诊断HIV-1感染者的传播耐药性检测

目的:通过对深圳地区人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)新近感染者耐药基因型的研究,了解当地HIV-1耐药株传播水平。方法:收集198例2009年3月～2011年10月新确诊的、年龄>20岁的HIV-1感染者的血浆样本,使用一步法RT-PCR和巢式PCR扩增Pol区蛋白酶基因全长(1～99aa)和逆转录酶区前部分基因(1～300aa),并进行耐药基因变异分析。结果:PCR扩增阳性且测序成功163例,总的耐药比例为17.2%(28/163,95%CI 11.4%～22.9%),其中3.7%(6/163,95%CI 1.1%～6.5%)对蛋白酶抑制剂(PIs)耐药,10.4%(17/163,95%CI 5.7%～15.1%)对核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)耐药,11.7%(19/163,95%CI 6.8%～16.6%)对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药。结论:深圳地区HIV-1新近感染者中耐药率高达17.2%,对新近HIV-1感染者进行连续耐药性检测是有必要的。     

慢性乙型肝炎患者在核苷(酸)类药物规范化治疗前耐药突变研究简

目的研究慢性乙型肝炎患者在核苷（酸）类药物（NAs）规范化治疗前耐药突变情况。方法在我国北方地区4家医院收集148例慢性乙型肝炎患者在NAs规范化治疗前的血清,提取血清中HBVDNA,用巢式聚合酶链反应一直接测序法获得HBV全长RT区序列,用生物信息学技术筛查该区内11个经典耐药突变位点（rt169、rt181、rt184、rt194、rt202、rt204、rt236、rt250、rt80、rt173和rt180）并鉴定患者HBV基因型。采用SPSS13．0软件进行统计分析。计量资料采用x-±s表示,计量资料的比较采用t检验,计数资料的比较采用x2检验。P〈0．05为差异有统计学意义。结果148例慢性乙型肝炎患者中,有142例血清HBVRT区在11个经典耐药突变位点上均为野生型氨基酸;6例患者检出经典耐药突变,分别为rtM204I2例,rtA181V、rtA181T、rtL180M＋rtM204I、rtL80V＋rtL180M＋rtM204I各1例,其在半年以前均有不规范NAs治疗史。148例患者基因型分布为：B基因型占4．1％（6／148）,C基因型占95．3％（141／148）,D基因型占0．6％（1／148）。结论依据PCR产物直接测序结果,本研究中慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗基线时体内HBV以野生株为优势株,检出NAs耐药突变株的患者均有既往不规律抗病毒治疗史。基线耐药检测有助于NAs个体化治疗方案的优化。     

TAM类突变对B'亚型HIV病毒耐药和复制能力的影响

目的 研究T215Y和L210W等TAM类突变在B'亚型pol区遗传背景下对HIV病毒的耐药程度和复制适应性的影响.方法 血浆样本来自我国中部地区1名已接受抗病毒治疗且耐药的患者,利用SGA方法获得其3个病毒准种的含TAM突变的pol基因片段,采用PCR引入点突变分别将T215Y和L210W回复突变为野生型密码子,将突变前后的pol区片段替换pNLA-3-BstⅡ感染性克隆的相应片段,构建重组感染性克隆,利用荧光素酶和P24抗原检测分别评价重组病毒的耐药程度和复制能力.结果 成功构建了3个重组感染性克隆pNL-PAT-1、pNL-PAT-2、pNL-PAT-3,TAM类突变分别为:T215Y、M41L/L210W/T215Y和M41L/L210W/T215Y,回复突变后的重组感染性克隆分别为pNL-PAT-1-T215Y(-)、pNL-PAT-2-L210W(-)和pNL-PAT-3-L210W(-)；与原始重组病毒比较,T215Y和L210W回复突变后的重组病毒对AZT的IC50分别下降4.9、8.1和2.7倍,感染pNL-PAT-1-T215Y(-)的培养上清中P24含量较原始毒株pNL-PAT-1高,而两株含M41L/T215Y的病毒与含M41L/L210W/T215Y突变病毒的复制能力比较结果并不一致,其中pNL-PAT-2-L210W(-)感染上清的P24含量较原始毒株略有降低,而pNL-PAT1-3-L210W(-)的P24含量则较原始毒株明显升高.结论 在B'亚型pol区遗传背景下,T215Y和L210W均可引起HIV病毒对AZT的耐药程度升高,T215Y还可造成病毒复制能力的下降,但是L210W对复制能力的影响不一,基因多态性可能对病毒的耐药和复制能力具有一定的影响.     

重庆市新确证HIV-1感染者传播性耐药突变研究

目的 通过对重庆市新确证人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者耐药基因型的研究,了解我市耐药病毒株的传播水平.方法 采集2014年5月至2017年6月我院新确证未治疗的HIV-1感染者的外周血175例,分离血浆后,使用一步法RT-PCR和巢式PCR扩增HIV-1 pol区的基因,PCR产物经纯化后测序,将获得的基因序列与美国雅培公司的耐药数据库对比,得出患者对药物的耐药性解释.结果 PCR扩增阳性且测序成功168例,发现16例患者存在耐药突变,传播性耐药突变检出率达9.5％ (16/168),其中2014-2017年的耐药比例分别为7.0％、8.0％、9.1％、12.5％,属中度流行.非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)、核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)和蛋白酶抑制剂(PIs)耐药突变率分别为9.5％、2.4％和0％.V179D/E(7.1％)和M184V(2.4％)分别是出现最多的NNRTI和NRTI耐药突变位点.168例感染者中,CRF07_BC亚型是主要流行亚型(42.8％),其次为CRF01_AE (38.7％)和CRF08_BC亚型(10.1％).结论 重庆市新确证未治疗HIV-1感染者耐药比例有逐年上升的趋势,应加强监测,预防原发性耐药和耐药毒株的传播.     

柳州市60株HIV毒株pol区亚型分布和原发性耐药情况

目的了解柳州市HIV亚型分布和原发性耐药情况。方法招募未经抗病毒治疗的柳州HIV感染者66名,采集外周静脉血,从血浆中提取HIV RNA,扩增pol基因并测序,将序列进行系统进化树分析和耐药性分析。结果获得60株序列,47株为CRF01_AE,占78.3%,12株为CRF07_BC,占20.0%,1株不能判断亚型。9株发生耐药性相关突变,其中2株可产生耐药性,原发性耐药的发生率为3.3%。结论当前柳州主要的HIV流行亚型是CRF01_AE和CRF07_BC,HIV原发性耐药的发生率处于国内一般水平。     

对慢性乙型肝炎及肝硬化患者的核苷（酸）类药物耐药位点的分析

目的 研究接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清乙型肝炎病毒（HBV）P区基因序列突变率,突变形式及用药情况,为评估病情进展和实施下一步抗病毒治疗方案提供较为全面的信息.方法 选取浙江中医药大学附属第六医院2009年3月～2012年10月447例接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者为研究对象,采用基因直接测序法,对其血清HBV P区基因PCR扩增产物进行测序,分析各个耐药位点,同时搜集相关用药史进行回顾性分析.结果 在447例病例中存在位点突变者227例（50.8％）,共存在30种变异形式,变异形式以M204I、L180M＋ M204V、L180M＋ M204I三者居多.其余种类复杂多样,大多以联合突变形式出现;耐药药物的使用及产生的耐药位点基本一致;主要的变异位点集中发生在M204I和L180M,余均较为分散.且经统计分析,乙型肝炎及肝硬化两总体的突变率有统计学差异.结论 对核苷（酸）类似物抗病毒治疗中出现病毒学突破的慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清中HBVP区基因耐药位点的分析研究对合理用药以及发生耐药后及时调整治疗方案有重要的作用.