低剂量照射对树突状细胞表型及功能的影响

目的研究低剂量照射对未成熟树突状细胞（DCs）大肠癌抗原吞噬能力、未成熟DC表型及体外刺激T细胞能力的影响。方法取健康人外周血,密度梯度离心获取单个核细胞。铺板贴壁法分离淋巴细胞,贴壁细胞在重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和白细胞介素4（rhIL-4）的作用下体外诱导5d后收获,并分别以0.1、0.2、0.5和1.0Gy的X射线照射24h。检测照射后未成熟DCs的表型、抗原吞噬能力及负载大肠癌肿瘤抗原信息的DCs在体外刺激T细胞的能力。结果流式细胞仪检测结果显示,0.2Gy照射组成熟DCs的CD40、CD80、CD83、CD86表型及抗原吞噬能力均明显高于对照组（未照射）及其他照射组（均P〈0.05）;体外刺激T细胞的能力随照射剂量的增加而减弱。结论低剂量照射能促进DCs抗原的吞噬能力和成熟,但会减弱体外刺激T细胞的能力。     

四种多肽负载的自体树突状细胞治疗恶性黑色素瘤近期疗效观察

目的探讨MAGE-3、Tyrosinase、MART-1、Gp-100等4种多肽负载的自体树突状细胞（DCs）治疗恶性黑素素瘤的安全性和近期疗效。方法分离患者外周血单核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和白细胞介素-4（rhIL-4）体外诱导DCs,MAGE-3、tyrosinase、MART-1、Gp-100等4种多肽负载自体DCs,对10例HLA-A2阳性的恶性黑色素瘤患者进行4次DCs免疫治疗,观察其安全性、免疫功能和临床疗效。结果治疗中未出现明显不良反应,治疗后血清中IL-2、IL-12和IFN-γ水平呈明显上升趋势（P〈0.05）,6例患者的DTH检测阳性;7例有淋巴结转移的患者中,2例淋巴结转移消失,2例淋巴结肿大减小,3例淋巴结肿大稳定。结论多肽负载的自体DCs治疗恶性黑色素瘤可改善患者的免疫功能,激发特异性免疫反应,缓解病情,且不良反应少,为恶性黑色素瘤的免疫治疗提供了一条新途径。     

间充质干细胞株对小鼠骨髓来源树突状细胞分化成熟的影响

目的探讨间充质干细胞株C3H10T1/2对小鼠骨髓来源树突状细胞（dendritic cells,DCs）体外分化、成熟的影响。方法采用密度梯度离心法分离小鼠骨髓细胞,在mGM-CSF和mIL-4刺激下获得大量未成熟DCs。将DCs和C3H10T1/2细胞共培养2d,同时加入LPS刺激,分别通过倒置显微镜、流式细胞仪,混合淋巴反应以及ELISA检测DCs的成熟。结果经C3H10T1/2细胞体外共培养的DCs,形态观察呈散在分布,细胞边缘圆滑,流式细胞仪检测显示其低表达CD11c、MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40;共培养组的DCs刺激同种异型小鼠脾细胞增殖的能力在各个浓度均明显低于对照组（P〈0.05或0.01）;ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-10的浓度也明显低于对照组（P〈0.05或0.01）。结论间充质干细胞株C3H10T1/2可以明显抑制小鼠骨髓来源DCs的体外成熟。     

小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养体系的构建

建立一种体外诱导培养小鼠骨髓源性的树突状细胞(DCs)方法,在镜下可观察到培养出的未成熟树突状细胞(imDCs)比成熟树突状细胞(mDCs)细胞突起少。流式细胞术检测 CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子在 imDCs 的表达显著低于在 mDCs 上的表达。同种异基因混合淋巴细胞反应显示DCs 刺激 T 细胞增殖的能力随着 DCs 所占比例的增大而增强,在相同比例条件下对刺激 T 细胞增殖的能力,imDCs 显著低于成熟 mDCs。该诱导方法可获得大量符合科研要求的小鼠骨髓源性 DCs。     

鼻咽癌患者自体树突状细胞疫苗治疗对机体免疫功能的影响

目的比较鼻咽癌患者自体树突状细胞（DCs）疫苗治疗前后对患者机体免疫机能的影响,探讨热休克的鼻咽癌细胞抗原负载的鼻咽癌自体DCs疫苗激发机体免疫应答的能力与趋势。方法 20例鼻咽癌患者随机分为对照组及治疗组,对照组实施常规放疗,治疗组在常规放疗后给予1个疗程的DCs免疫治疗（4次皮内注射）。治疗过程中动态检测T细胞亚群、自然杀伤（NK）细胞、Th1类细胞因子（IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ）水平,进行分析比较。结果 DCs治疗前与治疗后外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞比率无明显变化（P〉0.05）;治疗后治疗组细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的水平较治疗前明显升高（P〈0.05）。结论鼻咽癌自体DCs疫苗免疫治疗可明显提升鼻咽癌患者Th1类细胞因子水平,激发Th1型免疫应答,增强机体抗瘤能力。     

IL-23对溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞分泌IL-17、IFN-γ的影响及意义

目的观察IL-23在溃疡性结肠炎（UC）患者外周血中的表达及其对外周血单个核细胞（PBMCs）分泌IL-17、IFN7的影响及意义。方法60例活动期UC患者为UC组,健康体检者40例为对照组。两组患者取肘静脉血3mL,送实验室进行PBMCs分离与培养。ELISA法检测上清液（经或未经LPS刺激）中IL-23含量;ELISA法检测上清液（经或未经IL-23刺激）中IL-17、IFN-γ含量。结果UC组上清液中IL-23水平均明显高于对照组（P〈0．01）;经LPS刺激后,两组上清液中IL-23表达水平均明显高于LPS刺激前（P〈0．01）。未经IL-23刺激的两组间IL-17、IFN-γ表达水平差异有统计学意义（P〈0．01）,UC组明显高于对照组;IL-23刺激后两组间IL-17、IFN-γ表达水平差异有统计学意义（P〈0．01）,UC组明显高于对照组。各组经IL-23刺激后,IL-17、IFN-γ表达水平均显著高于IL-23刺激前（P〈0．05或P〈0．01）。结论IL-23是UC发病的重要启动因素,IL-17（IL-23诱导）在UC发病过程中发挥重要作用。     

特应性皮炎患者外周血IL-4、IFN-、IL-2水平的检测

目的了解特应性性皮炎（Atopic dermatitis,AD）患者外周血单个核细胞（PBMCs）培养上清液中部分细胞因子水平。方法分离培养97例AD患者及20例健康对照者外周血单个核细胞（PBMCs）,采用ELISA方法检测细胞培养上清液白介素4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）、白介素2（IL-2）水平。结果 AD患者PBMCs培养上清液IL-4、IL-2水平高于健康对照组（P分别〈0.01及0.05）,而IFN-γ水平显著低于对照组（P〈0.01）。结论细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-2水平的变化在AD患者发病过程中起到一定的作用。     

灰树花多糖对人外周血单个核细胞白细胞介素-2及干扰素-γ表达的影响

目的探讨灰树花多糖（GRN）对人外周血单个核细胞（PBMCs）白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）表达的影响。方法使用不同浓度GRN与人PBMCs共培养,对照组以不加GRN的PBMCs培养相同时间。RT-PCR检测人PBMCs中IL-2 mRNA的表达,应用流式细胞术检测Th1细胞中IFN-γ的表达。结果经GRN处理的人PBMCs中,IL-2 mRNA的表达较对照组呈显著增高（P〈0.01）;Th1细胞中IFN-γ的表达与对照组相比也显著增高（P〈0.01）。结论 GRN可提高PBMCs中IL-2 mRNA及IFN-γ的表达,提高细胞免疫功能。     

Wnt5a对成熟树突状细胞诱导初始性T细胞向记忆性T细胞分化的作用

目的:利用负载供者抗原的未成熟或成熟树突状细胞(imDCs或mDCs)体外诱导受者初始性T细胞(TNs)的活化、增殖和分化,并研究Wnt5a基因在这一过程中的可能的作用及其机制。方法:构建高表达Wnt5a基因的重组腺病毒,转染imDCs。建立同种异体小鼠皮肤移植模型,分选培养受体小鼠的imDCs,mDCs和T_Ns。在96孔板中用负载供者抗原的imDCs、转染腺病毒Ad/CMV/Wnt5a的imDCs、转染腺病毒Ad/CMV/LacZ的imDCs,和正常mDCs与记忆性T细胞(TMs)进行混合淋巴细胞反应。流式细胞术检测T_Ns向T_Ms分化的情况。ELISA检测共培养上清中IL-2,IL-10,IFN-γ细胞因子的浓度。RT-PCR检测T细胞中Wnt/β-catenin通路相关的基因表达情况。双荧光素酶报告基因检测混合淋巴细胞反应中T_Ns的β-catenin/TCF信号通路转录活性。结果:RT-PCR和免疫荧光检测发现mDCs中的Wnt5a的表达水平显著高于imDCs(P<0.05)。与负载供者抗原的mDCs相比,imDCs组可显著诱导T_Ns向T_Ms的分化,上调IL-2和IFN-γ细胞因子的分泌(P<0.05)。双荧光素酶报告系统检测显示mDCs共培养TNs可显著增强β-catenin/TCF信号通路转录活性(P<0.05)。此外,imDCs通过转染高表达Wnt5a基因的重组腺病毒,也显著提高了其诱导TNs向T_Ms的分化的能力,同时也显著活化了Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05)。结论 :在负载供者抗原的DCs与受者T_Ns混合淋巴细胞反应过程中,可诱导T_Ms分化形成,其中DCs的Wnt5a基因介导的T_Ns内β-catenin/TCF信号通路转录激活可能是其中一条重要的途径。     

负载膀胱癌冻融抗原对树突状细胞分泌IL-12的影响

目的 探讨负载膀胱癌冻融抗原对树突状细胞（DCs）分泌IL-12的影响。方法 反复冻融法获得膀胱癌细胞株BIU-87细胞抗原；联合应用重组人的GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康志愿者DCs并负载膀胱癌肿瘤抗原；用ELISA法检测第3、6和9天培养细胞的上清液，评价DCs分泌IL-12 p70的能力。结果 联合应用重组人的GM-CSF、IL-4和TNF-α可在体外诱导出DCs；经ELISA方法检测，不同时期的DCs分泌IL-12的量不同，而且负载抗原DCs较未负载抗原DCs有更强的分泌能力（P〈0．05）。结论 IL-12 p70的分泌量受DCs的成熟状态及某些刺激信号的影响，膀胱癌冻融抗原是其刺激信号之一。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞细胞因子检测意义

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中细胞因子的临床意义。方法采用免疫酶联免疫吸附技术双抗体夹心法检测30例慢性乙型肝炎患者和15例健康对照外周血单个核细胞IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果CHB组PBMC培养上清分泌IL-4水平显著高于健康对照组（P〈0．05）,而IFN-γ水平则显著低于健康对照组（P〈0．01）;HBVDNA水平与IL-4水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关。结论CHB存在异常细胞免疫应答,Th1／Th2水平失衡可能与HBV持续感染有关。     

CC16及转录因子T-bet、GATA-3对支气管哮喘患者气道炎症的调控作用

目的探讨Clara细胞分泌蛋白(CC16)及转录因子T-bet、GATA-3在支气管哮喘患者气道炎症中的价值。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞(PBMC),用ELISA测定血浆中CC16、IFN-γ、IL-4的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet mRNA和Gata-3 mRNA表达水平。结果哮喘组CC16及IFN-γ分别为(21.96±7.31)ng/mL和(118.73±22.59)pg/mL,明显低于对照组[(64.88±25.27)ng/mL和(145.53±29.50)pg/mL,P均0.01],哮喘组IL-4高于对照组[(425.22±4.37)pg/mL比(69.72±10.15)pg/mL,P0.01]。哮喘组T-bet mRNA、T-bet/GATA-3表达水平(0.12±0.01,0.25±0.04)显著低于对照组(0.48±0.12,1.89±0.65)(P均0.01),GATA-3 mRNA表达(0.45±0.05)较对照组(0.30±0.08)明显升高(P0.01)。CC16与T-bet mRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关(r值分别为0.792和0.761,P均0.01);与GATA-3 mRNA无明显相关性(r=-0.146,P=0.551)。结论哮喘患者CC16水平降低,对气道炎症的保护性削弱,可能与T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4的失衡有关。     

慢性乙型肝炎病毒感染者血清TNF-α和IFN-γ水平分析

目的：分析不同临床阶段的慢性HBV感染者血清TNF-α和IFN-γ水平差异,探讨其水平差异与慢性HBV感染结局的关系。方法：选择慢性乙型肝炎（CHB）87例,乙型肝炎肝硬化（LC）38例,HBV相关肝细胞癌（HCC）34例,应用ELISA法分别检测其血清IFN-γ和TNF-α水平。结果：在所观察的3组中,TNF-α水平均有明显升高,其中LC组和HCC组均显著高于CHB组（P〈0.001）,但LC组和HCC组间无显著性差异;而CHB、LC和HCC3组间血清IFN-γ水平无显著性差异（P=0.208）。结论：血清TNF-α水平可能与慢性HBV感染的结局相关,而IFN-γ水平与慢性HBV感染结局无明显相关性。     

慢性乙型肝炎患者外周血髓系抑制性细胞的表型特征及其临床关联性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血髓系抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）在疾病进展中的临床意义。方法选取在广州市第八人民医院接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者16例及19例健康对照者,用流式细胞术检测外周血单核细胞（PBMC）中MDSCs的比例,并动态检测该比例在核苷（酸）类似物（NAs）抗病毒治疗12周、24周后的变化特征,用Spearman相关法分析MDSCs比例与血清HBV DNA载量、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）等指标之间的相关性。统计分析采用均数t检验,MDSCs水平采用单因素方差分析检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果慢性乙型肝炎患者外周血MDSCs表型为HLADR-/lowCD11b＋CD33＋的细胞群其主要为CD14＋的单核细胞型。其比例为（1.4±0.27）%,明显高于健康对照组（0.53±0.06）%,（P〈0.01）;抗病毒治疗12周后其比例为（1.33±0.26）%、24周后其比例为（1.82±0.48）%。MDSCs的比例与治疗前比较差异无统计学意义（P=0.778,P=0.452）。横断面比较分析结果显示MDSCs水平与HBV DNA无相关性（r=-0.14,P=0.60）,但与ALT（r=0.621,P=0.01）、AST（r=0.612,P=0.012）、TBIL（r=0.717,P=0.003）呈显著正相关。结论慢性乙型肝炎患者外周血MDSCs比例在一定程度上反映慢性乙型肝炎病情。     

慢性乙型肝炎患者CD4+ CD25+调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎患者CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)免疫抑制功能.方法 收集北京大学人民医院22例慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)以及18名健康对照的PBMC标本,以流式分析对PBMC中CD4+ CD25+ Treg的频率进行分析;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法评价CD4+ CD25+ Treg的免疫抑制功能;并同时通过磁珠分选去除CHB患者PBMC中的CD4+ CD25+ Treg,分别以MHC-肽-五聚体法和酶联斑点免疫法(Elispot)检测HBVcore18-27抗原肽刺激对HBV特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的频率以及IFN-γ的分泌.结果 CHB患者外周血中CD4+ CD25+ Treg细胞群所占CD4+T细胞群的比例明显高于健康对照(t=3.74,P＜0.01);CHB患者CD4+ CD25+ Treg细胞可非特异抑制自身活化的CD4+ CD25- T细胞,并呈剂量依赖的特点,且抑制能力与健康对照相比无明显差异;在经HBVcore18-27抗原肽诱导条件下,去除CD4+ CD25+ Treg CHB患者,HBVcore18-27特异性CTLs的频率以及CTLs分泌IFN-γ的频数与未去除CD4+ CD25+ Treg组比出现显著上调(t=4.75,t=7.828,P＜0.01).结论 CHB患者循环中CD4+ CD25+ Treg细胞频率升高.在体外去除CHB患者PBMC的CD4+ CD25+ Treg后可显著地增强HBV抗原诱导的抗HBV细胞免疫应答.     

HBV侵犯外周血单个核细胞对干扰素-γ表达的影响

目的:探讨HBV侵犯外周血单个核细胞(PBMCs)对干扰素-γ(IFN-γ)表达和分泌水平的影响。方法:巢式PCR检测120例慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA;采用实时定量RT-PCR和ELISA法分别检测PBMCs中IFN-γmRNA的表达及血清IFN-γ的分泌水平。结果:120例慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA阳性率为62.5%,且HBeAg阳性组PBMCs中HBVDNA阳性率(80.0%)明显高于HBeAg阴性组(45.0%);慢性HBV感染者IFN-γmRNA的表达和分泌水平均低于健康对照组;慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA阳性组IFN-γmRNA的表达和分泌水平均明显低于HBVDNA阴性组;HBeAg阳性组IFN-γ表达和分泌水平均明显低于HBeAg阴性组。结论:慢性HBV感染者IFN-γ的表达和分泌水平与HBV侵犯PBMCs有关,亦与不同疾病状态相关。     

成熟与未成熟小鼠树突状细胞的生物免疫学特性研究

目的 研究小鼠骨髓成熟树突状细胞(mDC)与未成熟树突状细胞(imDC)的生物免疫学特性.方法 体外诱导培养小鼠骨髓imDC,经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激获得mDC.用小鼠CD11c免疫磁珠纯化DC.电镜观察DC的细胞形态.流式细胞术(FCM)检测细胞表面分子MHCⅡ、CD80、CD86的表达.用细胞增殖检测试剂(CCK-8)检测混合淋巴细胞反应(MLR)中DC刺激同种异基因T细胞的增殖能力.实时荧光定量PCR(QPCR)检测DC上细胞因子mRNA的表达.ELISA检测DC培养上清中的细胞因子表达.结果 电镜观察:imDC比mDC细胞突起少、短.胞质内有更多吞饮泡及溶酶体.FCM检测imDC上MHC-Ⅱ(27.2％)、CD80(27.6％)、CD86(29.5％)的表达水平均显著低于mDC MHC-Ⅱ(97.7％)、CD80(97.2％)、CD86(96.4％).MLR中相同反应比例imDC刺激T细胞的增殖能力,1∶5(1.63±0.04),1∶10(1.50±0.08),1∶20(1.28±0.07),1∶40(1.19±0.04),显著低于mDC 1∶5(2.21±0.09),1∶10(1.92 ±0.02),1∶20(1.64±0.01),1∶40(1.45±0.06),两组间差异均有统计学意义(均P＜0.01).QPCR检测imDC上IL12p35(0.66±0.13)、IL12p40(0.57±0.10)、IFN-γ(0.74±0.08)mRNA相对表达量(mDC为对照)显著低于mDC(1.00±0.00,P＜0.05),而TGF-β(1.35±0.09)显著高于mDC(1.00±0.00,P＜0.05).ELISA法检测imDC分泌IL12p70(6 ±4)、IFN-γ(56±15)显著低于mDC IL12p70(120±22)、I FN-γ(90±15,P＜0.05),而TGF-β(176±23)显著高于mDC TGF-β(55±18,P＜0.05).结论 imDC低表达共刺激分子、MHC-Ⅱ和Th1类细胞因子,高表达TGF-β,不能活化T细胞,具有耐受原性.mDC高表达共刺激分子、MHC-Ⅱ和Th1类细胞因子,可激活初始T细胞,具有免疫原性.     

表面抗原调节慢性乙肝患者树突状细胞免疫功能的研究

目的研究表面抗原（HBsAg）对慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞（DC）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者外周血DC,分为HBsAg组和无HBsAg组,培养7d后用流式细胞术检测各组DC的CD83及CD86的表达,MTT法检测DC对混合淋巴细胞的刺激作用,ELISA方法检测培养上清中IL-12及IL-6的含量。结果 HBsAg组CD83、CD86的表达量分别为（19±4）%和（49±9）%,无HBsAg组则分别为（12±4）%和（18±6）%（P均〈0.01）。HBsAg组和无HBsAg组的DC对混合淋巴细胞的刺激指数分别为（20±10）%和（7±4）%（P〈0.01）。HBsAg组的DC培养上清中IL-12、IL-6的含量分别为（111±68）ng/ml和（646±426）ng/ml,无HBsAg组分别为（38±12）ng/ml和（1843±235）ng/ml,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。结论 HBsAg可增强CHB患者外周血DC提呈抗原、激活T淋巴细胞的功能,对DC分泌细胞因子的功能有调节作用。     

慢性乙型肝炎患者血清TH1/TH2细胞因子水平对α干扰素疗效的影响

目的研究慢性乙型肝炎患者血清Th1/Th2细胞因子水平对干扰素治疗效果的影响,探讨α干扰素治疗慢性乙型肝炎的疗效预测因素及治疗策略。方法以接受α干扰素正规治疗的77名慢性乙肝患者作为研究对象,用ELISA法检测干扰素治疗前患者外周血清Th1细胞分泌的IFN-γ及Th2细胞分泌的IL-10水平,最后根据患者治疗效果分为完全应答组、部分应答组及无应答组分别进行统计分析。结果完全应答组患者外周血清IFN-γ水平较部分应答组及无应答组高（P〈0.05）,完全应答组及部分应答组IL-10水平较无应答组低（P〈0.05）。结论α干扰素治疗不同应答水平与血清Th1/Th2细胞因子水平有关。