17β-雌二醇对子宫内膜间质细胞体外分泌趋化因子IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309的影响

目的：探讨17β-雌二醇对子宫内膜间质细胞分泌IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309的调控，以解析雌激素在子宫内膜异位症发生发展中的作用机制。方法：用不同浓度17β-雌二醇处理子宫内膜间质细胞48小时；此后选用10^-9mol／L 17β-雌二醇处理子宫内膜间质细胞12、24、36和48小时，ELISA法分析刺激前后培养上清中IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309分泌水平。结果：子宫内膜间质细胞体外高水平自然分泌IL-8，17β-雌二醇能抑制IL-8的分泌，呈剂量依赖性。RNATES和MIP-1α分泌水平较IL-8低，经雌激素刺激子宫内膜间质细胞后MIP-1α表现出与IL-8相同的分泌方式，但对RANTES分泌无明显影响。子宫内膜间质细胞经雌激素刺激前后均未检测到I-309。结论：雌二醇可能参与子宫内膜白细胞和单核巨噬细胞的募集，但不是异位灶中上述趋化因子高表达的原因。     

17-β雌二醇对卵巢去势大鼠延髓神经元超微结构的影响

目的观察雌激素对卵巢去势大鼠延髓神经元超微结构的影响。方法30只雌性成年SD大鼠随机分为去卵巢组(A组)、雌二醇组(B组)和假手术对照组(C组),A组和B组动物卵巢切除后10天超分别皮下注射生理盐水0.1 m l/d、17-β雌二醇20μg/kg/d。C组动物,只切开腹膜,不切除卵巢,手术后10天起分别皮下注射生理盐水0.1 m l/d。各组动物连续用药6周后,观察结果。结果血清雌二醇的浓度A组明显低于C组(P<0.01),B组明显高于A组(P<0.01),而B组和C组之间比较无差异。A组动物延髓孤束核神经元和神经胶质细胞超微结构有明显的损伤表现,细胞核形状不规则,核周间隙局部明显增宽,胞浆内有空泡,线粒体肿胀,嵴断裂;神经纤维有脱髓鞘,髓鞘板层分离,有空泡,线粒体肿胀。B组动物,在应用雌激素替代治疗后,延髓神经元的损伤表现明显减轻。C组神经元形态结构正常。结论雌激素对去势大鼠延髓神经元有明显地保护作用。     

17β-雌二醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 观察17β-雌二醇对大鼠心缺血再灌(I/R)损伤的保护作用并探讨其机制. 方法 30只成年雌性SD大鼠卵巢切除后,随机分成C组(I/R假手术组)、 I/R组和 I/R+E2组(17β-雌二醇预处理).17β-雌二醇预处理2周后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,用氯化三苯甲基四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死范围,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos的蛋白表达. 结果 17β-雌二醇能明显减少缺血再灌注心肌梗死体积,降低心肌细胞凋亡率,减弱缺血再灌注心肌细胞c-Fos的表达. 结论 雌激素对大鼠缺血再灌注心有保护作用,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达有关.     

17β-雌二醇诱导大鼠脾细胞产生一氧化氮的机制研究

目的：观察17β-雌二醇(F2)对大鼠脾细胞一氧化氮(NO)产生和雌激素受体(ER)基因敲除小鼠诱导型一氧化氮合成酶(jiNOS)的影响，揭示雌激素对免疫细胞调节的信号转导机制。方法：应用正常、福氏不完全佐剂(m)或髓鞘基质蛋白(MBP)免疫的大鼠脾细胞单个核细胞培养，用Griess试剂检测培养上清NO的生成，免疫荧光方法检测脾脏iNOS表达。结果：①＆剂量依赖性地诱导正常大鼠脾细胞NO的生成，FIA或MBP免疫的EAE大鼠脾细胞有同样的表现；iNOS抑制剂LNAME或者MAPK阻断剂能抑制该效应。②在体内，＆能促进野生型小鼠脾脏iNOS的表达，但对ERa基因敲除小鼠(EPKO)无作用，EllB受体基因敲除小鼠(BERKO)的表现和野生型(WT)相同。结论：＆可通过诱导NO产生而调控免疫系统，该效应同时涉及基因组和非机制基因组机制。     

17-β-雌二醇对大鼠垂本前叶细胞转化生长因子基因表达的影响

实验采用无血清原代培养大鼠垂体前叶细胞及原位杂交方法，观察了不同剂量（１０１０、１０８和１０６ｍｏｌ／Ｌ）的１７β雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）对大鼠垂体前叶细胞转化生长因子α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒα，ＴＧＦα）和转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）基因表达的影响。结果表明：１０１０ｍｏｌ／ＬＥ２作用２４ｈ后，对两种生长因子的表达均无显著影响；而１０８ｍｏｌ／Ｌ和１０６ｍｏｌ／ＬＥ２则显著升高ＴＧＦαｍＲＮＡ，分别为对照组的１５倍和１６倍（ｐ＜０００１）；同时明显降低ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ，使ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ水平分别降低为对照组的７０％和５５％（ｐ＜０００１）。说明一定浓度的Ｅ２对正常大鼠垂体前叶细胞ＴＧＦα和ＴＧＦβ１基因表达有明显影响，提示这两种生长因子可能以自分泌／旁分泌机制，参与Ｅ２对垂体前叶细胞功能的部分作用     

17β-雌二醇和二噁英对子宫内膜间质细胞表达趋化因子IL-8及其受体CXCR1 的调控作用

解析内外环境因素对子宫内膜间质细胞表达IL-8及其自分泌作用的调控。采用免疫组化法比较子宫内膜异位症患者异位灶和在位内膜CXCRI翻译水平表达;流式细胞术分析17β-雌二醇和二嗯英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞表面CXCRI表达的调控作用;ELISA法分析17β-雌二醇和二嗯英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞分泌IL-8的影响。结果显示CXCRI在子宫内膜异位症患者异位灶组织高表达。17β-雌二醇和二嗯英单独作用均抑制子宫内膜间质细胞表面CX—CR1的表达以及IL-8的分泌。二者联合作用能够上调CXCR1的表达,上调幅度与雌二醇浓度呈正相关;但进一步抑制了IL-8的分泌。雌激素与二嗯英对子宫内膜间质细胞复合作用抑制其IL-8的分泌及其自分泌作用;子宫内膜异位症患者腹腔液高水平IL-8并非由内外雌激素样物质直接作用于异位灶子宫内膜间质细胞所致。     

17β-雌二醇和二噁英对子宫内膜间质细胞表达趋化因子IL-8及其受体CXCR1的调控作用

解析内外环境因素对子宫内膜间质细胞表达IL-8及其自分泌作用的调控。采用免疫组化法比较子宫内膜异位症患者异位灶和在位内膜CXCR1翻译水平表达;流式细胞术分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞表面CXCR1表达的调控作用;ELISA法分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞分泌IL-8的影响。结果显示CXCR1在子宫内膜异位症患者异位灶组织高表达。17β-雌二醇和二噁英单独作用均抑制子宫内膜间质细胞表面CX-CR1的表达以及IL-8的分泌。二者联合作用能够上调CXCR1的表达,上调幅度与雌二醇浓度呈正相关;但进一步抑制了IL-8的分泌。雌激素与二噁英对子宫内膜间质细胞复合作用抑制其IL-8的分泌及其自分泌作用;子宫内膜异位症患者腹腔液高水平IL-8并非由内外雌激素样物质直接作用于异位灶子宫内膜间质细胞所致。     

17β-雌二醇对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的观测17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对肾上腺素（PE）诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响并探讨其机制。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,[^3H]标记亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos蛋白表达,半定量RT-PCR检测心肌细胞肥大特征性胚胎型基因β-肌球蛋白重链（pMHC）、α-骨骼肌肌动蛋白（α-skA）和心房肽（ANP）的mRNA表达。结果17β-雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和蛋白质合成速率的增加;17β-雌二醇减弱肥大心肌细胞c-fos蛋白表达;17β-雌二醇降低pMHC、α-skA的mRNA表达,但增加ANPmRNA表达。结论17β-雌二醇可抑制心肌细胞肥大,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达,逆转收缩蛋白基因（β-MHC和α-skA）向胚胎型转化及促进ANPmRNA表达有关。     

17-β-雌二醇对HMGB1过表达THP1细胞的细胞周期进程的影响

目的:研究17-β-雌二醇联合HMGB1的过表达对人单核细胞系THP1细胞细胞周期和NF-κB转录因子的影响。方法:血清饥饿法同步化细胞周期后,利用脂质体法将pFLAG-CMV-HMGB1转染THP1细胞;10-9mol/L17-β-雌二醇刺激同步化THP1细胞16、30小时后,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR检测Cyclin A、Cyclin D1的mRNA表达水平,免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性。结果:HMGB1过表达的THP1细胞中HMGB1蛋白的表达水平比正常THP1细胞要高3.7倍,血清饥饿法成功将THP1细胞周期同步化,同步化后G0/G1期细胞百分数由53%上升到78%;17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞30小时后出现Cyclin AmRNA表达上升为原来的7.9倍,而Cyclin D1 mRNA表达明显下降,G1期细胞百分比由53.11%下降为33.33%,S期细胞百分比由35.43%上升为53.91%,此改变在刺激后30小时达到最大值;NF-κB活性在17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞明显升高,且时间上提前于细胞周期动力学改变。结论:雌激素对THP1细胞周期调节依赖HMGB1,NF-κB可能参与其中。     

17β-雌二醇增加人肝细胞C-反应蛋白表达

C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)主要由肝脏合成,离体与在体实验均证实,IL-6是CRP基因表达的主要诱导者.传统观点认为,CRP是天然免疫系统的重要组分和炎症标志物.越来越多的医学基础与临床研究显示,CRP可以直接诱导炎症,是心血管疾病最为有力的预示因子与最重要的危险因子,可以直接参与动脉粥样硬化病理发生的各个重要阶段,促进疾病的发生、发展.     

17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制

目的探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制。方法用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA并转染BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;CHIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响。结果用10-8mol/L的E2处理不同时间BCPAP细胞,随着E2处理时间增加,E2对BCPAP细胞中Hsp27蛋白的表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P0.05);E2作用转染ERαsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P0.05);E2作用转染ERβsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P0.05);Ch IP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合。结论 E2可以通过ERα促进BCPAP细胞中Hsp27蛋白水平的增高。     

超剂量米非司酮对大鼠子宫内膜超微结构的影响

目的 :电子显微镜下观察超剂量使用米非司酮的大鼠子宫内膜超微结构改变 ,为进一步扩大米非司酮临床使用范围提供形态学依据。方法 :实验组大鼠每日灌服米非司酮 30 m g/只 ,分别于第 8,15 ,2 9天处死取子宫 ,超薄切片 ,电子显微镜观察。结果 :子宫内膜纤毛细胞纤毛减少 ,分泌细胞胞质内出现有空泡的圆形颗粒 ,并有顶浆分泌 ,内膜上皮基质呈动情前表现。子宫腺细胞基底及核上区有糖原斑 ,为动情晚期形态。小血管内皮间隙增大 ,其周围大量多形核细胞浸润 ,似人类月经期崩解的子宫内膜。子宫内膜多种细胞及间质内均可见多泡体、巨大溶酶体和残余体。结论 :长期超剂量使用米非司酮会使子宫内膜发育不同步 ,还可能导致细胞代谢失调     

17β-雌二醇调节小鼠淋巴结树突状细胞的表型和吞噬功能

为探索17β-雌二醇(E2)对免疫应答能力的调节是否与树突状细胞(DC)的成熟和功能相关,用Metrizamide密度梯度离心方法分离BALB/c小鼠淋巴结内的淋巴细胞得到DC,不同浓度的E2处理DC 24 h后,使用PE标记的单抗CD11c和FITC标记的单抗MHC I/MHC II/CD40/CD54/CD80/CD86、IL-10/TNF-α以及右旋糖酐(dextran)双标DC,流式细胞仪分别检测其表型和胞内细胞因子的表达及吞噬能力的变化。结果显示,不同浓度的E2处理DC 24 h后,MHC分子、黏附分子CD54和共刺激分子CD86与对照组相比显著提高,而CD40显著降低,但CD80的表达无明显改变。胞内细胞因子IL-10和TNF-α的表达水平随E2的处理而显著增加,其中TNF-α的变化呈剂量依赖性。与对照组相比,DC的吞噬能力随E2的处理浓度增加而显著降低。以上结果表明,E2能够改变DC的成熟和功能,这提示E2对机体的免疫应答的影响可能通过DC的改变而改变。     

17β-雌二醇通过microRNA-29b调节NK细胞干扰素γ的分泌

目的:研究17β-雌二醇(E2)对人自然杀伤细胞株NK92中干扰素γ(IFN-γ)分泌的影响及其可能的机制。方法:用E2和poly I:C处理NK92细胞,分别在4、8、12和24小时后用实时定量PCR、酶联免疫吸附法和流式细胞术测定NK92细胞中IFN-γ的表达情况,用实时定量PCR检测microRNA-29b(miR-29b)的变化。进一步,构建含有IFN-γ3’UTR的pEGFP-C1质粒,并转染pre-29b和pEGFP-IFN-γ3’UTR质粒至HEK293A细胞中,用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)的变化。结果:E2抑制NK92细胞的IFN-γ分泌和上调miR-29b的表达;miR-29b能够直接靶向调节IFN-γ3’UTR mRNA。结论:E2可能通过调节NK92的miR-29b而影响IFN-γ的分泌水平,进而影响其免疫功能。     

17β-雌二醇及α-玉米赤霉醇对人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

为探讨17β-雌二醇(17β-estrodiol，17β-E2)及植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-zearalanol，α-ZAL)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)组织因子(tissue factor，TF)蛋白含量及mRNA表达的影响，进行人脐静脉内皮细胞原代培养，传至2—3代后用于实验。在细胞培养液中分别加入不同浓度17β-E2及α-ZAL作用48h，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞裂解液中TF蛋白浓度，双辛丁酸法(bicinchoninic acid，BCA)检测细胞总蛋白含量。提取细胞总RNA，用RT-PCR观察17β-E2及α-ZAL对TF mRNA表达的影响。结果发现：10^-7mol／L 17β-E2及α-ZAL均可明显降低HUVECs组织因子蛋白含量及mRNA的表达，二者的作用类似。表明17β-E2及α-ZAL可明显抑制HUVECs组织因子的表达，这可能是它们抗血栓形成、发挥心血管保护作用的机制之一。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇与17β雌二醇、戊酸雌二醇对兔食饵性动脉粥样硬化的作用

目的:研究新的植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)的抗动脉粥样硬化(AS)作用。方法:49只新西兰成熟未孕雌兔分成6组。A组为正常对照组;B组为假手术组;C组为高脂对照组;D组为17βE2雌二醇组;E组为戊酸雌二醇组;F组为α-ZAL组。分别测定血清TC,LDL-C,HDL-C含量和血浆ET-1及NO水平,肉眼观察并用扫描仪测定各组主动脉内膜脂质斑块沉积面积与内膜总面积之比。并进行病理组织学观察。测定子宫重量/体重。结果:主动脉内膜脂质斑块沉积与内膜总面积之比为B、D、E、F组vs C组P<0.01。病理观察:C组内皮脱落和大量泡沫细胞;B、D、E、F组上述病理变化明显减轻,内皮基本正常或正常,仅有少量或无泡沫细胞。子宫重量/体重D、E、F组较C组明显增加,但F组增加明显小于D组、E组。血清TC、LDL-C、C组均明显升高,而B、D、E、F组明显低于C组,HDL-C各组无显著差异;血浆ET-1与NO水平C组明显升高,而B、D、E、F组明显下降。结论:α-ZAL可减少主动脉内膜脂质斑块沉积面积,减轻病理变化,减轻高脂血症,降低增高的ET-1与过度增高的NO,具有较强的抗AS作用。但对子宫增大作用明显小于17βE2与E2V。     

17-β-雌二醇诱发大鼠腺垂体催乳素瘤的形成及原癌基因c-myc的高表达

给SD大鼠皮下埋植17-β-雌二醇,60天后,其垂体重量显著增加;垂体前叶细胞明显增生,分化受抑制;用放射免疫法测定血浆催乳素含量显著增加;斑点杂交显示垂体细胞原癌基因c-myc的转录水平也显著增加。     

17-β雌二醇提高巯醇抗氧化物(酶)治疗脊髓损伤的作用

目的探讨17-β雌二醇治疗脊髓损伤的分子机制,为临床应用雌激素治疗脊髓损伤提供理论依据。方法成年雄性SD大鼠180只,采用改良的Allen法构建大鼠急性脊髓挫伤模型后经17-β雌二醇治疗,采用化学比色法测定脊髓组织中丙二醛(MDA)和内源性巯醇抗氧化物(酶):还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;免疫组织化学分析凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化。结果17-β雌二醇治疗组与脊髓损伤组比较,BBB评分明显增加;在多个时间点MDA含量明显降低;巯醇抗氧化物(酶)GSH、SOD和GSH-Px含量显著增加;Caspase-3和Bax表达的阳性细胞数明显减少;Bcl-2表达的阳性细胞数明显增加(P0.05)。结论大剂量的17-β雌二醇治疗可能通过调控内源性巯醇抗氧化物(酶),提高肢体运动功能,抑制细胞凋亡,从而减轻脊髓损伤程度。     

大鼠实验性子宫内膜异位症模型复制

大鼠实验性子宫内膜异位症模型复制江西中医学院病理教研室（南昌３３０００６）肖纯，黄桂林，彭泽华，匡冰近年来，子宫内膜异位症在我国的发病率明显增高￣（１），已成为一种常见的妇科疾病。激素类药物治疗本病虽然取得一定的疗效￣（２），但治疗期长，停药后复发及...     

戊酸雌二醇与醋甲羟孕酮不同剂量配伍对子宫内膜变化的影响

目的：通过观察戊酸雌二醇与醋甲羟孕酮不同剂量配伍对子宫内膜变化的影响以指导临床方案选择。方法：将确诊的91例自然绝经妇女随机分为阴性对照组（A组）、阳性对照组（B组）以及戊酸雌二醇与醋甲羟孕酮不同剂量配伍组（C、D、E组）,分别治疗3月后,对各组用药前后进行雌二醇、超声子宫内膜厚度、吸管活检子宫内膜细胞学检查,部分患者行组织病理学检查。结果：B组和C组内膜厚度显著增加（P〈0．01）,其他各组改变无显著差异（P〉0．05）,D组增厚最少。细胞学检测发现内膜增厚人数B组由1人增至7人;E组由4人增至9人;C组和D组均增加2人,其中各有1例细胞学报告内膜增生而组织病理学均无病变。结论：戊酸雌二醇与醋甲羟孕酮不同剂量配伍对子宫内膜变化具有不同的影响,其中戊酸雌二醇1mg配伍醋甲羟孕酮2mg治疗效果最佳。