外源性p16基因稳定转染对胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的：研究外源性ｐ１６基因对胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４的抑制作用,探索胶质瘤基因治疗的新途径。方法：利用携带４９０ｂｐ的人ｐ１６全长ｃＤＮＡ真核表达载体,采用脂质体介导法将其导入人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４中,用Ｇ４１８筛选阳性克隆,以原位杂交,免疫组化方法检测ｐ１６基因在细胞转染前后的表达情况。,应用流式细胞仪,电子显微镜,生长曲线测定等方法研究ｐ１６基因对胶质瘤细胞周期,形态,生长等的影响.     

转染p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响

目的 探讨p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响。方法 通过脂质介导的基因转移技术将野生型P16基因导入人膀胱癌细胞系T24中,绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果 与对照组相比,转染p16基因的膀胱癌细胞生长速率降低,流式细胞仪检测显示S期及增殖指数明显降低。结论 p16基因能阻止肿瘤细胞进入S期,抑制肿瘤细胞DNA的合成,对膀胱癌细胞生长起明显抑制作用。     

外源性p27Kip1基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响

目的：探讨外源性p27Kip1基因对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响。方法：应用脂质体转染法将含人野生型p27Kip1基因质粒DNA转染乳腺癌MCF-7细胞,免疫细胞荧光化学方法验证p27Kip1基因转染MCF-7细胞后蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,观察外源性p27Kip1对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。结果：免疫细胞荧光化学方法证实p27Kip1基因转染MCF-7细胞后存在蛋白表达;流式细胞仪检测结果提示,细胞周期出现G0/G1期阻滞;细胞计数法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖明显抑制。结论：外源性p27Kip1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞周期有明显抑制作用。     

腺病毒介导外源性p16基因对人膀胱癌细胞系RT112的作用

目的 通过包装腺病毒介导外源性p16基因，导入内源p16基因缺失的膀胱癌细胞系RT112，观察对膀胱癌细胞的生长抑制作用，并探讨其作用机制。方法 构建p16腺病毒表达载体，通过293细胞包装，产生假病毒；应用打点杂交技术及免疫细胞化学检测外源p16基因的表达；流式细胞仪检测细胞周期；透射电镜观察细胞凋亡情况。结果 p16基因克隆入腺病毒载体中，并经包装后产生腺病毒。感染外源性p16基因的肿瘤细胞生长速率明显下降，出现G1期阻滞，并使部分细胞出现凋亡。结论 外源性p16基因重表达可抑制膀胱肿瘤细胞的恶性生长。p16基因可能与膀胱癌发生有关。     

外源性p16基因对人前列腺癌的作用

目的:研究外源性p16基因对人前列腺癌PC-3M细胞系生长及致瘤性的抑制作用,探索前列腺癌基因治疗的新途径.方法:利用携带约800 bp的外源性p16 cDNA的真核表达质粒,通过脂质体介导将其导入人前列腺癌PC-3M细胞系中,用G418筛选阳性克隆,经流式细胞仪及细胞生长曲线测定等方法研究p16基因对人前列腺癌细胞周期生长特性的影响,并观察导入外源性p16基因的人前列腺癌细胞PC-3M对裸鼠致瘤能力的影响.结果:野生型p16基因转染到有p16基因缺失的人前列腺癌细胞PC-3M上,细胞周期明显变化,细胞从G1期到S期发生抑制,细胞增殖活性降低.结论:转染外源性p16基因可阻止人前列腺癌细胞由G1期进入S期,并使肿瘤恶性增殖受到抑制.     

p16基因在喉癌中的表达

目的 探讨p16基因的表达与喉癌的关系。方法 采用RT—PCR方法检测喉癌中p16mRNA表达情况。结果 不同病理级别喉癌组织中p16mRNA表达均有不同程度下降，Ⅱ-Ⅲ级患者下降比较明显。结论 p16基因在喉癌中的表达明显低于正常喉粘膜组织。可能与喉癌的发生发展密切相关。     

人喉癌组织中p15、p16基因缺失和STK15基因过表达的研究

目的 探讨p15、p16基因和STK(丝氨酸/苏氨酸激酶)15基因表达与喉癌发生、发展的关系。方法 自50例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中,分别取癌组织和癌旁正常组织进行以下检测:(1)提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,进行p15基因第二外显子(p15E2)和p16基因第二外显子(p16E2)纯合缺失研究;(2)提取RNA,反转录合成cDNA,以β-肌动蛋白基因为内对照进行PCR扩增,分析STK15基因表达的水平。同时检测人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞系STK15基因表达水平。结果 喉癌组织p15E2纯合缺失率为12％(6/50),p16E2纯合缺失率为14％(7/50),p15E2、p16E2共同缺失率为6％(3/50)。50例患者中34例(68％)癌组织STK15基因表达高于癌旁正常组织;全组患者癌组织STK15基因表达/β-肌动蛋白基因表达平均密度比值(ADV)为1.03±0.30,癌旁正常组织STK15基因表达/β-肌动蛋白基因表达ADV为0.89±0.22,其间差异有非常显著意义(t=4.333,P<0.01)。Hep-2细胞系中STK15基因表达高于内对照β-肌动蛋白基因。结论p15E2、p16E2纯合缺失和STK15基因过表达可能在喉癌的发生及恶性进展中发挥一定作用。     

外源性p21WAF1/CIP1基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性p21^WAF1／CIP1基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响．方法：采用脂质体介导法将p21^WAF1／CIP1基因质粒转导人人胶质瘤细胞系SHG44细胞，然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察。结果：酶切电泳和斑点杂交显示p21^WAF1／CIP1基因成功的转染至SHG44细胞。转染p21^WAF1／CIP1基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生；生长速度明显慢于亲代细胞，其倍增时间约是对照细胞的二倍；细胞周期发生明显改变，G1期明显增多，S期明显减少．结论：外源性p21^WAF1／CIP1基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用，并可诱导细胞凋亡产生。     

p16、p53和nm23在喉癌组织中的表达研究

目的 研究ｐ１６、ｐ５３及ｎｍ２３在喉癌中的表达及其与临床的相关性。方法 应用免疫组化的方法对４２例喉鳞癌样本进行检测。结果 在喉鳞癌中ｐ１６蛋白表达的阳性率为４７．６２％，ｐ５３的阳性率为５４．７６％，ｎｍ２３的阳性率为５２．３８％；中、低分化的鳞癌（Ⅱ～Ⅲ级）组ｐ１６阳性率低于高分化的鳞癌（Ⅰ）组（Ｐ〈０．０５），有淋巴结转移组ｐ１６的表达阳性率低于无淋巴结转移组（Ｐ〈０．０５）；ｐ５３在临床     

外源性Rb基因导入对U937细胞周期和p21基因表达的影响

目的 利用RLb基因重组腺病毒载体(AdCMV-RLb)，将外源性RLb基因导入U937细胞，研究其对细胞周期、细胞凋亡及原癌基因p21表达的影响。方法 AdCMV-Rb导入U937细胞后，用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率及Rb蛋白和p21蛋白的表达；RT-PCR检测原癌基因p21的表达。结果 AdCMV-Rb可以高效导入U937细胞，RLb基因导入使U937细胞主要阻滞在G1期，细胞凋亡率在RLb基因导入24h后无明显改变，48h后凋亡率增高；Rb蛋白和p21蛋白表达增强；RT-PCR结果显示Rb基因的导入可以上调p21基因的表达。结论 外源性Rb基因的导入可以上调原癌基因p21的表达，使得U937细胞周期阻滞在G1期。     

中药艾迪诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的 研究中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用.方法 四亚基噻唑蓝(MTT)法测定中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长的抑制作用,荧光显微镜观察人喉癌细胞Hep-2的凋亡状况,流式细胞仪技术(FCM)观察人喉癌Hep-2细胞周期及凋亡,荧光定量PCR法测定人喉癌细胞Hep-2环氧化酶(COX-2)的表达量.结果 不同浓度的中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长均有抑制作用,并有明显的时间和剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪分析显示中药艾迪能减少G1期的比例,增加G2和S期的比例,并能诱导细胞凋亡.中药艾迪作用人喉癌细胞Hep-2 24h后其环氧化物酶-2的表达量升高,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 中药艾迪在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,其机制可能是诱导细胞凋亡.     

膀胱癌细胞p16抑癌基因失活的研究

目的 探讨膀胱癌中p16基因失活情况。方法 采用PCR、PCR—SSCP和DNA甲基化分析技术等方法对25例膀胱癌组织中p16基因进行检测。结果 25例膀胱癌标本中有6例存在p16基因纯合性缺失，缺失率为24％；无1例出现点突变；16例出现异常甲基化，检出率为69．6％(16／23)。结论 外显子2的纯合性缺失在安徽区域发生的膀胱癌中可能不是一个较频繁发生的事件；通过CpG岛异常甲基化失活可能是膀胱癌p16基因失活的主要机制。     

吲哚美辛对喉癌Hep-2细胞增殖与iNOS活性的影响

目的：探讨吲哚美辛对喉癌细胞增殖与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性的影响,为喉癌的预防和治疗提供理论依据。方法： Hep-2细胞培养于含吲哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）的培养基中,分别培养24 h和48 h;用MTT方法检测吲哚美辛组细胞增殖的抑制率,用台盼蓝染色法检测吲哚美辛组细胞活力的抑制作用,并与溶剂对照组进行比较;吲哚美辛（125、250和500 μmol•L^-1）与脂多糖（LPS,10 μmol•L^-1）同时处理细胞16　h,同时设只加LPS对照组,采用酶法和分光光度法检测细胞培养上清液中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活性。结果：与对照组比较,不同浓度的吲哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）组Hep-2细胞增殖的抑制率均显著增加（P<0.05）。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞增殖的抑制率显著降低（P<0.05）;与对照组比较,不同浓度的吲 哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）随剂量增加,Hep-2细胞活力的抑制程度均显著增加（P<0.05）。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞活力的抑制程度显著降低（P<0.05）;与LPS对照组比较,吲哚美辛在125、250及500 μmol•L^-1浓度时, LPS诱导的细胞培养上清液中iNOS的活性显著降低（P<0.05）。结论：吲哚美辛在30～250 μmol•L^-1浓度范围内显著抑制Hep-2细胞的细胞增殖与细胞活力,明显降低LPS诱导的细胞 iNOS的活性升高。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 观察三氧化二砷（AS2O3）对喉癌Hep-2细胞株诱导细胞凋亡的作用和对细胞周期的影响。方法 体外培养的Hep-2细胞与不同浓度的AS2O3作用24、48、72h，通过MTT还原法检测细胞的生长抑制率，用倒置相差显微镜、流式细胞仪、荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学改变，检测细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果 As2O3可有效抑制Hep-2细胞的生长，呈时间和浓度依赖性特点。形态学观察发现，As2O3诱导Hep-2细胞凋亡。2μmol/L As2O3作用24h，S期细胞比例增高，72h后，S期细胞明显下降，细胞大量凋亡。AS2O3在低浓度时，阻滞细胞通过S期，高浓度时诱导S期细胞凋亡。结论 AS2O3可诱导Hep-2细胞的凋亡，与细胞周期阻滞有关。     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

人乳头状瘤病毒16E7在人喉癌细胞系中的转染及表达

目的:构建含人乳头状瘤病毒16E7(HPV16E7)基因的真核表达载体,观察HPV16E7对人喉癌HEp-2细胞系生物学特性的影响,为后续实验提供研究对象.方法:以含HPV16E7基因的中间质粒pET28a-HPV16E7为模板扩增出HPV16E7基因全长序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-) B中,并进行序列分析和酶切鉴定.电穿孔法将重组体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7转染入喉癌HEp-2细胞中,Western 印迹法检测HPV16E7蛋白的表达,相差显微镜观察转染前后的HEp-2细胞系形态学变化,流式细胞仪检测转染前后细胞生长周期的改变.结果:成功构建并将pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7转染入人喉癌HEp-2细胞中;转染后HEp-2细胞增生活跃,S期明显延长,并能够稳定表达HPV16E7蛋白.结论:HPV16E7有促进HEp-2细胞的致瘤活性;真核表达载体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7可为下一步建立动物模型和喉癌体外治疗实验提供研究工具.     

降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

Replacement of the p16 gene in human ovarian cancer cells

目的　研究逆转录病毒介导的p16基因对人卵巢癌细胞系CAOV3生长与致瘤性的抑制作用。方法　用脂质体介导法将外源野生型p16基因转染不表达p16的人卵巢癌细胞系CAOV3,对转染后细胞DNA、RNA和蛋白进行分析并观察其生物学行为变化。结果　外源性野生型p16基因已整合入细胞并获稳定表达 ,表达有外源p16基因的细胞生长速度、集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。细胞周期分析可见G1期增加 ,S期下降。电镜下超微结构出现生长抑制特征。结论　p16基因在卵巢癌发生、发展过程中起重要作用 ,为用p16基因转染对卵巢癌患者进行基因治疗提供了实验依据。