抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。采用间接ELISA方法和Westernblot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶107;mAbO4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具。     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

Annexin A2单克隆抗体制备及初步鉴定

制备Annexin A2特异性单克隆抗体(McAb),为Annexin A2的体内外功能的研究提供有力的抗体工具。以原核表达的全长p36蛋白(Annexin A2单体)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对Annexin A2的McAb。以间接ELISA法筛选出目的杂交瘤细胞株并进行染色体计数;分析McAb的亚型,检测其效价、浓度及亲和常数;以细胞荧光染色,Western blot和RT-PCR鉴定McAb特异性。结果得到1株能稳定分泌特异性针对p36的McAb的细胞株F8,其抗体亚类重链为IgG2a,轻链为κ型;腹水纯化后效价为1∶4 000;亲和常数为3.4×109L/mol。成功获得了能稳定分泌AnnexinA2特异性McAb的细胞株。     

抗重组人表皮生长因子单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的　制备出高效价的抗重组人表皮生长因子 (EGF)单克隆抗体。方法　以重组人表皮生长因子作为抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞 ,运用细胞杂交瘤技术制备 ,间接ELISA法筛选产生针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株 ;以体内诱生法产生腹水 ,并采用ProteinA Sepharose柱对其纯化 ,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类 ,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位。结果　获得 3株产生针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株EGF B2 、EGF C7、EGF A8,Ig亚分别为IgG1κ型 ,IgG1λ型 ,IgG3 κ型 ,亲和力常数分别为 2 .76× 10 10 、3.2× 10 9、1.4 5× 10 9。结论　成功制备 3株稳定分泌抗rhEGF的杂交瘤细胞株 ,产生的McAb特异性好 ,亲和力高 ,为探讨EGF的作用机制及临床应用奠定了基础 ,为肿瘤的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具 ,此外 ,为EGF的纯化提供实验材料     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp)单克隆抗体（McAb),并对其特异性进行鉴定。用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA,Westen blotting试验分析其特异性。结果,制备出2A5和1H10两株能稳定分泌抗LDHpMcAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1：512和1：256,腹水效价分别为1：25600和1：12800,两株单抗与间日疟,红细胞,弓形虫,日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

天津地区抗霍乱弧菌单克隆抗体(McAb)细胞系的建立及其应用的研究

应用天津市防病中心保存的EL-Tor霍乱弧菌小川型和稻叶型菌体抗原,混合免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞Sp 2/0-Ag 14融合,采用ELISA法筛选抗霍乱弧菌McAb阳性孔,细胞融合率为328/384(85.2％);经过三次克隆化后筛选出9株分泌抗霍乱弧菌菌体抗原的McAb杂交瘤细胞系。取其中两株细胞进行分析研究;培养上清抗体效价在     

抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的 制备出高效价的抗重组志贺毒素ⅡB亚基(rStx2B)单克隆抗体.方法 以融合蛋白EspA-Stx2B作为抗原,免疫Balb/c小鼠,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞;运用细胞杂交瘤技术制备,运用间接ELISA法筛选产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株;体内诱生法产生腹水,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,再采用HiTrap rProtein A柱进一步纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚型,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株Stx2B-1H9、Stx2B-1H10、Stx2B-3E5,Ig亚型分别为IgG1κ型,IgG2aκ型,IgG2bκ型,亲和力常数分别为7.36×108、6.94×108、5.85×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗rStx2B的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高,为应用这些单克隆抗体建立免疫亲和层析法纯化天然志贺毒素Ⅱ,鉴定Stx2B的表位,研究针对EHEC O157:H7感染的治疗性抗体奠定了基础.     

两株抗鸡CARP单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的:制备抗鸡CARP单克隆抗体(McAb)。方法:克隆并原核表达鸡CARPN端110个氨基酸,纯化CARP蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆;并利用ELISA、Western blot方法测定其效价和特异性。结果:获得2株能够稳定分泌抗鸡CARP的McAb杂交瘤细胞株,命名为4A8和4E6,亚型都属于IgG1,轻链为κ链;抗体腹水效价分别为3.2×104、1.28×105。Western blot检测到这两株抗体能够识别鸡CARP蛋白。结论:成功获得了2株能识别鸡CARP的杂交瘤及其分泌的特异性McAb。     

抗人层黏连蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗人层黏连蛋白(laminin,LN)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:以人LN免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人的mAb;同时采用间接ELISA法柃测mAb的腹水效价及mAb的相对亲和力;采用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、进行表位分析及特异性鉴定。结果:获得4株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞2A3、2C6、3G7和4H2,其腹水mAb 的效价为3.6 × 104～2.1×106;4株mAb的Ig亚类为IgG1,轻链均属κ型;相对亲和力2C6在1012以上,2A3、3G7和4H2在106以上;其中2株与1个表位结合,另2株与另外的1个表位结合。结论:成功地制备出抗人LN的mAb,为进一步研究LN在一些疾病中的作用提供了工具。     

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。方法利用重组Derf1蛋白为免疫原,免疫BALB／c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western—blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Derf1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Derf1检测及纯化方法奠定了基础。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究

用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定簇均对蛋白酶敏感,其中2株的抗原决定簇既存在于蛋白质中,又存在于脂类中。9株McAbs所识别的抗原分子量均为30kDa。4株均作用于同一抗原决定簇,其它McAb各作用于另外互不相同的抗原决定簇。免疫电镜观察,McAb 1A3所作用的蛋白质抗原主要分布在细胞内,少量分布于细菌胞壁。9株McAbs除1株外均显示出很强的特异性,其中4株仅与牛型结核茵反应阳性。利用McAb 1A3通过亲和层析柱纯化牛型结核杆菌PPD后,得到亲和层析纯抗原Ag 1A3,它仅与牛型结核杆菌免疫血清反应阳性,与其它分枝杆菌免疫血清反应阴性;对牛型结核杆菌致敏的豚鼠皮肤反应阳性,而与人型及BCG致敏豚鼠皮肤反应阴性。     

Detection of Vibrio cholerae with monoclonal antibodies specific for serovar O1 lipopolysaccharide.

Six hybridoma cell lines, each of which produced a monoclonal antibody (MAb) against Vibrio cholerae O1 lipopolysaccharide (LPS), were established. Each MAb was active serologically by both enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the slide agglutination test. In the ELISA, each MAb was tested against 7 O1 and 9 non-O1 LPS preparations. Three MAbs reacted with both Inaba and Ogawa serovars (A antigen), two MAbs reacted with the Ogawa serovars only (B antigen), and one MAb reacted with the Inaba serovars only (C antigen). Each MAb was also tested in the ELISA against whole-cell preparations of 37 O1 and 52 non-O1 V. cholerae serovars, 20 heterologous Vibrio species, and 37 heterologous bacterial species. The MAbs reacted with V. cholerae O1 cells only, except for one anti-A antigen MAb which reacted weakly with five V. cholerae non-O1 serovars and Serratia marcescens. Each anti-A antigen MAb was labeled with fluorescein isothiocyanate (FITC) and tested by direct immunofluorescence against selected O1 and non-O1 serovars. Each MAb-FITC conjugate, when tested alone, exhibited O1-specific fluorescence; however, mixtures of the MAb-FITC dramatically enhanced fluorescence intensity on O1 cells. This finding was also visualized by immunoelectron microscopy on both thin-sectioned and negatively stained O1 cells by using an anti-mouse immunoglobulin-colloidal gold conjugate. These results suggest that the A antigen can be described by more than one epitope and that a superior serotyping reagent can be prepared from a defined mixture of MAbs.     

Antibody specificity and antigen characterization of rat monoclonal antibodies against Streptococcus mutans cell wall-associated protein antigens.

Monoclonal antibodies to Streptococcus mutans OMZ175 (serotype f) cell wall-associated antigens (wall-extracted antigens [WEA]) were derived from the fusion of Lou C plasmocytoma rat cells (IR 983 F) and spleen cells from Wistar R inbred rats immunized with WEA. Four cell lines producing monoclonal antibodies directed against a component of S. mutans WEA have been established. All four monoclonal antibodies reacted only with two antigens of WEA from S. mutans OMZ175 by Western blotting and immunoprecipitation techniques, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive ELISA. Western blot analysis of WEA showed that the four monoclonal antibodies recognized two related cell wall-associated proteins with apparent molecular weights of 125,000 and 76,000. Immunoprecipitation of whole cells with the monoclonal antibodies confirmed the surface localization of the two antigens. The ELISA and competitive ELISA were used to analyze the distribution of the epitopes on seven S. mutans serotypes. All S. mutans serotypes were found to express the recognized epitopes; however, different reactivity patterns could be distinguished among the various strains tested, and the four monoclonal antibodies reacted only weakly with S. mutans serotypes d and g.     

Monoclonal antibodies against group- and type-specific lipopolysaccharide antigens of Vibrio cholerae O:1

Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies against the O-antigenic determinants of Vibrio cholerae O:1 have been established. The specificity of the antibodies was ascertained by enzyme-linked immunosorbent assay inhibition experiments by using lipopolysaccharides from V. cholerae O:1 strains and type strains of groups O:2 and O:21. The anti-A antibody was of the immunoglobulin M (IgM) class, whereas the anti-B and -C antibodies were IgG3. The antibodies had a good agglutinating capacity when tested against V. cholerae O:1 strains in the slide agglutination test.     

应用单抗分析结晶天花粉蛋白的抗原决定簇

本文报道用制备的22株单克隆抗体为探针,采用ELISA双抗体相加试验以分析结晶天花粉蛋白上抗原决定簇的结果。经集群分析法处理,可将22株单抗集群为不同的六组。由此提示,结晶天花粉蛋白上有六个不同的、可被单抗识别的抗原决定簇。此数目与我们对结晶天花粉蛋白上B细胞识别的抗原决定簇进行计算预测所得到的结果相吻合。这对于从分子水平进一步探讨结晶天花粉蛋白结构与功能之间的关系奠定了基础。     

抗人P185~(erbB_2)单克隆抗体的制备及特性分析

目的制备可特异识别 P185 erb B2 胞外区的单抗 ,选出亲和力较高并具有抑瘤作用的克隆。方法以高表达 erb B2 的人乳腺癌细胞系 SKBR3免疫 BABL / c小鼠 ,用纯化的重组 DNA表达的 P185胞外区蛋白作为抗原 ,以间接 EL ISA方法筛选阳性克隆。结果获得 10株稳定分泌抗 P185胞外区单抗的杂交瘤细胞株。 4株为 Ig G1、1株为 Ig G3、5株为 Ig M,分别可识别 P185胞外区 3个不同表位 ,且只与天然形式的 P185胞外区特异结合。其中 4株 Ig G1类抗体可明显抑制 SKBR3及 SKOV3细胞增殖。免疫组化实验可使 SKBR3及 SKOV3细胞膜特异性染色 ,且可检出乳腺癌、卵巢癌等石蜡切片标本中 erb B2 高表达的阳性细胞。结论所获单抗可特异识别 P185胞外区抗原 ,具有肿瘤诊断、判断预后及人源化改造后用于治疗的应用潜力。     

Molecular cloning and expression in Escherichia coli K-12 of the O antigens of the Inaba and Ogawa serotypes of the Vibrio cholerae O1 lipopolysaccharides and their potential for vaccine development.

The gene clusters that determine the biosynthesis of both the Inaba and Ogawa serotypes of the O antigen of the lipopolysaccharide of Vibrio cholerae were cloned and expressed in Escherichia coli K-12. Restriction analysis of the clones demonstrated that about 15 kilobases were common to all clones and a further 5 kilobases were common to the Ogawa clones. The O antigens expressed by E. coli K-12 had the specificity of V. cholerae. Antibodies raised against E. coli K-12 that harbor one of these clones, pPM1001 (Inaba), were as highly protective in the infant mouse model system as were antibodies to V. cholerae itself. Introduction of such clones into suitable carrier strains could be expected to produce a good oral immunogen against cholera.     

霍乱弧菌单克隆抗体的诊断应用

本文将获得的12株抗霍乱弧菌单克隆抗体及霍乱弧菌多克隆抗体,对各型霍乱弧菌及其他各种肠道等菌进行敏感性和特异性凝集试验并以荧光素异硫氰酸荧光黄和吖啶橙、葡萄球菌A蛋白及过氧化物酶标记这些抗体制成标记试剂后对这些细菌和霍乱弧菌粪便模拟实验标本进行检测,探索其用于快速诊断的价值。实验结果证明抗霍乱弧菌单克隆抗体比抗霍乱弧菌多克隆抗体特异和敏感,制成单克隆抗体标记试剂用于快速诊断效果同样佳。文中对各种标记的单克隆和多克隆试剂的特异性、敏感性及用于临床检验的适用性进行了讨论。