血样的不同处理对HIV-1病毒载量检测值的影响

目的观察血样本存放时间、存放温度及冻融次数对HIV病毒载量检测值的影响。方法收集同一HIV感染者的抗凝血标本,在不同时间分离血浆,并在不同温度下保存不同时间或经过不同次数的冻融,应用HIV-1核酸序列扩增技术(NASBA法)检测各样本的病毒载量进行比较。结果与全血样本相比,以血浆形式保存的样本HIV病毒载量更加稳定;病毒载量的下降主要发生在采血后的6h内;-20℃保存的血浆样本反复冻融3次,病毒载量会显著下降。结论对于运送HIV病人的外周血进行病毒载量检测时,应尽量以低温和血浆形式保存,并尽快的送到检测单位。     

人类免疫缺陷病毒感染者重叠输血传播病毒感染的临床研究

目的 了解中国地区人类免疫缺陷病毒（HIV-1）感染者重叠输血传播病毒（TTV）感染的流行情况,并探讨重叠感染TTV对CD4^＋T淋巴细胞计数及HIVRNA病毒载量的影响。方法收集55例HIV-1感染者的血浆标本,采用荧光定量PCR法检测TTVDNA,流式细胞法检测T淋巴细胞亚群,bDNA方法检测HIVRNA。结果HIV感染者中TTVDNA检出率及TTVDNA滴度明显高于健康对照组（P〈0．05）。HIV／TTV重叠感染者CD4^＋T淋巴细胞计数低于单纯HIV感染者。HIVRNA病毒载量高于单纯HIV感染者,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中国地区HIV感染者易重叠感染TTV,且滴度较高。重叠感染TTV可能导致细胞免疫功能进一步下降,加快病毒复制,促进HIV病程的进展。     

两种HIV-1核酸定量检测试剂盒v2．0的对比研究

目的 比较罗氏COMBAS AmpliPrep／COMBAS TaqMan HIV—1 Test version 2．0（简称TagMan v2．0试剂）和生物梅里埃NucliSENS EasyQ HIV-1 v2．0（简称EasyQ v2．0试剂）两种试剂,检测艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）病毒载量间的相关性和一致性。方法 对40份血浆样本采用TaqMan EasyQ v2．0试剂和EasyQ v2．0试剂分别检测HIV-1病毒载量。统计学处理采用配对t检验、回归分析和Bland—Altman分析。结果TaqMan v2．0和EasyQ v2．0试剂测得的病毒载量均值分别为（4．41±0．72）log10拷贝／mL和（3．75±0．75）log10拷贝／mL,差异有统计学意义（t=10．441,P〈0．001）。对两种试剂的检测结果进行回归分析表明,两种试剂有较强的相关性（R2=0．817）。用Bland—Altman分析比较两种试剂检测结果的差异均值,结果具有较好的一致性。结论TaqMan v2．0和EasyQ v2．0两种试剂盒在检测HIV-1病毒载量时具有较好的相关性和一致性。     

集合HIV RNA RT-PCR方法验证及其在IDUs中窗口期检测的应用

目的 对已建立的集合艾滋病病毒（HIV）RNA逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法进行实验室验证，并将其应用于静脉吸毒人群中窗口期的检测。方法 采用50：1、10：1、1：1三级集合HIVRNA RT-PCR方法进行盲样验证及可重复性验证。结果（1）集合HIVRNART．PCR方法盲法验证的结果和预期值一致，重复性验证中9个一级集合的病毒载量对数值的变异系数为6％，单因素方差分析P〉0．05，方法的重复性良好。（2）检测3570份吸毒人群的HIV抗体阴性血清或血浆样本。对发现的RNA阳性感染者进行追踪采样，发现2例HIVRNA窗口期阳性。追踪随访，HIV-1抗体阳转。结论 集合HIVRNART-PCR方法具有良好的实验性能，可应用于HIV高危人群窗口期检测。     

SYBR Green I荧光定量PCR检测HIV-1前病毒方法的建立及应用

目的 建立SYBR Green I荧光定量PCR技术测定HIV-1前病毒载量方法,并以其观察相关病毒进入抑制剂对HIV-1前病毒的作用.方法 选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立SYBR Green I荧光定量PCR测定HIV-1前病毒载量的体系,并以其观察6 μg/ml～6 ng/ml的重组病毒巨噬细胞炎症蛋白（rvMIP）、逆转录酶抑制剂（AZT）、膜融合抑制剂（T-20）、rvMIP＋AZT、rvMIP＋T-20对HIV-1前病毒载量的影响.结果 所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101 Copies,其标准曲线的相关系数为0.998 9,斜率为-4.925,截距为35.70;除6 ng/ml的 rvMIP、AZT、T-20外,三种药物处理后HIV-1前病毒载量均显著减小（P〈0.05）,并呈质量浓度依赖性;联合用药者前病毒载量显著低于单用rvMIP者（P〈0.05）,HIV-1前病毒载量rvMIP＋T-20 〈rvMIP＋AZT〈rvMIP〈T-20〈AZT.结论 本研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法具有灵敏、快速、准确及成本低廉等优点;与T-20或AZT联用可增强rvMIP对HIV-1前病毒的抑制作用.     

2005年陕西省HIV耐药监测结果分析

目的 评估陕西省艾滋病高效抗逆转录病毒治疗（HAART）效果，及时发现艾滋病病毒（HIV）耐药毒株。方法 选择26例艾滋病（AIDS）治疗患者和2例待治疗HIV感染者作为监测对象，进行横断面调查，填写调查问卷，采集20ml抗凝血，检测病毒载量、CD4^＋T淋巴细胞计数和基因型耐药变异。结果 26例治疗患者在4种方案HAART治疗2～23个月（平均15个月）后，临床症状明显改善，20例（76．9％）治疗患者病毒复制得到有效控制，11例（42．3％）血浆病毒载量在检测水平以下；CD4^＋T淋巴细胞绝对计数平均为346．8±164．0个／mm^3，其中9例（34％）〉400个／mm^3。28例HIV／AIDS患者均未出现原发性耐药变异。结论 4种治疗方案疗效良好，均可有效抑制HIV-1复制，促进机体免疫重建，改善临床症状，无原发性耐药变异发生，未检出耐药毒株。     

应用流式细胞术和原位杂交技术检测HIV-1感染者T淋巴细胞内病毒的初步研究

目的 建立检测艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者外周血单核细胞内HIV-1的方法，并初步探讨其临床应用价值。方法 应用流式细胞仪和荧光原位杂交半定量检测记忆性T细胞(CD4^ CD45RO^ )内的HIV-1，同时测定HIV-1感染者外周血CD4^ T淋巴细胞绝对数和血浆病毒载量。结果 7例病人中6例有阳性结果，波动范围0～6．29％。细胞内病毒含量的结果与血浆病毒载量完全一致。结论 荧光原位杂交检测细胞内HIV-1的方法敏感性高，重复性好，检测速度快，可以成为评价艾滋病病程进展和抗病毒治疗的重要方法。     

我国部分地区HIV-1流行株的分离培养

目的分离得到能够稳定传代的我国艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）流行毒株,并进行生物学表型鉴定。方法分离、活化正常人的外周血单核细胞（PBMC）,分离病人的PBMC,采用PBMC共培养和全血共培养的方法分离病人的HIV-1,通过培养上清内P24抗原含量检测病毒的复制情况。同时,标本采集后测定CD产T淋巴细胞计数和病毒载量。结果从270例HIV-1标本中,分离到可稳定传代的强阳性毒株58株,总分离率为21．48％。病毒载量与分离率呈正相关;CD4^＋T细胞计数对分离率的影响没有显著性差异。病毒载量高的标本比病毒载量低的标本分离株的快高型比例大。提示毒株的生长动力学特征与病人的病毒载量相关。结论从我国5个地区的270份HIV-1感染者样本中,分离出58株原代分离毒株,丰富了我国HIV-1毒种库,为进一步开展相关的艾滋病防治研究提供了重要的材料,奠定了坚实的基础。     

长期ART的AIDS病人更换二线药物的效果及耐药情况

目的分析接受一线抗病毒治疗（ART）时间较长的艾滋病（AIDS）病人，更换二线药物后的治疗效果及相关耐药位点的变化。方法在河南和安徽采用随访观察的方法，比较更换二线药物前和换药10个月左右，AIDS病人病毒及免疫学指标的变化情况。结果共调查68名AIDS病人，更换抗病毒药物前治疗时间中位数为77个月。病毒载量（VL）≥1000拷贝／mL组，在换药后病毒抑制率为79．1％（34／43），换药前后的耐药率分别为76．7％和9．3％（Pdo．05）；CD＋T淋巴细胞中位数分别为186个／μL和320个／μL（P〈0．05）。耐药组换药后的耐药率为11．4％（4／35），换药后病毒抑制率由换药前的5．7％上升到82．9％（P〈0．05）；换药前后CD＋T淋巴细胞中位数分别为187个／μL和325个／μL（P〈0．05）。换药前常见的耐药位点包括K103N、Y181C、TAMs、M184V和69位插入复合体，而换药后的蛋白酶抑制剂（PIs）突变位点为M46I。结论对于长期接受一线ART且病毒载量≥l000拷贝／mL或耐药的病人，更换二线药物后可取得较好的临床效果；而对于病毒载量〈1000拷贝／mL或非耐药的病人，如何换药仍需进一步研究。     

HIV-1感染者血浆病毒RNA与全血前病毒DNA的比较

目的分析艾滋病病毒1型(HIV-1)DNA在长期抗病毒治疗过程中的动态变化及与血浆RNA的比较。方法纳入2004-2014年接受拉米夫定为主的一线治疗方案的44例HIV-1感染者,通过建立Taqman实时荧光定量法对全血HIV-1DNA进行定量检测,并与血浆RNA病毒载量进行比较。结果治疗前HIV-1DNA与血浆RNA病毒载量呈显著的正相关关系(P=0.003),但是与CD4+T淋巴细胞数之间的相关关系没有统计学差异(P=0.505)。通过分析治疗失败的15人HIV-1DNA的动态变化,发现8人在治疗过程中HIV-1DNA水平的动态变化与血浆RNA病毒载量呈现显著的相关关系(P值均0.05),其他7人尽管没有统计学差异,但是HIV-1DNA水平与血浆RNA病毒载量呈现相同的变化趋势。结论 HIV-1DNA与血浆RNA病毒载量呈现相关关系,因此,全血HIV-1DNA的检测可作为HIV-1感染者长期疾病进展的辅助监测指标。     

甲型H1N1流感合并肺炎的临床特点分析

目的通过对甲型H1N1流感合并肺炎的临床特点的分析。方法分析2009年月10月-2010年3月在我院入住的29例甲型H1N1流感合并肺炎患者的临床表现、实验室检查及胸部CT等资料。结果本组病例男性16例,女性13例。3例妊娠,13例合并有基础疾病。所有病例均有流感样前驱症状,呼吸道主要症状为发热、干咳少痰,严重者气短、呼吸困难、咯血。合并细菌感染时咯脓痰。肺部听诊无啰音或少啰音,合并哮喘时有哮鸣音,合并细菌感染时可有湿啰音。实验室检查65%白细胞不高或降低,41%心肌酶升高,58.6%存在低氧血症,35%呼吸衰竭。影像学表现多种多样：65.5%主要为单侧或双侧棉团样、团片样边界模糊高密度渗出影伴肺实变,其内见充气支气管征,病变沿支气管血管束分布。轻症及早期较局限,重症者及晚期病变融合呈双肺多发弥漫性改变。少数呈大叶及小叶性肺炎表现。预后大多良好,病死率6.9%。主要死亡原因为呼吸衰竭及大咯血。结论甲型H1N1流感合并肺炎是以甲型H1N1流感病毒肺炎为主要疾病的多种肺炎构成。甲型H1N1流感病毒肺炎临床表现具有流感病毒肺炎共性特点,其影像学表现有一定特征性。     

代谢酶基因CYP 1A1与广西胃癌遗传易感性的关系

目的探讨代谢酶基因CYP 1A1MSP1多态性与广西地区汉族、壮族人群胃癌遗传易感性之间相关性。方法采用PCR-RFLP技术检测广西地区汉族、壮族人群中121例胃癌患者和138例健康人CYP1A1MSP1多态性的分布频率,分析其与广西地区汉族、壮族人群胃癌遗传易感性的相关性及与吸烟、饮酒在胃癌易感性中的相互作用。结果 (1)CYP 1A1MSP1三种基因型(m1/m1、m1/m2、m2/m2)分布频率在两组间比较差异无统计学意义(χ2=0.901,P=0.342);(2)携带CYP1A1MSP1突变m2基因型的个体较携带m1/m1基因型的个体患胃癌的风险增加(OR=1.509),但差异无统计学意义(P=0.342)。结论单独的CYP 1A1基因MSP1多态性与广西地区汉族、壮族人群胃癌易感性无明显相关性。     

Trp-21 is important in the processing and secretion of big endothelin-1

To investigate the intracellular processing of endothelin-1 (ET-1), the synthesis and secretion of preproET-1 (PPET-1) was studied in transiently transfected COS-7 cells. Replacements at the highly conserved C-terminal region of ET-1 were made by site-directed mutagenesis, with codons for residues Ile-20 and Trp-21 being replaced by one for Ala in the PPET-1 cDNA. The mutant and wildtype PPET-1 cDNAs were expressed in COS-7 cells following transient transfection, and cell media and extracts, collected after 48 h, were assayed for ET-1 and big ET-1 by radioimmunoassay. The concentration of immunoreactive ET-1 in the medium obtained from the Ala-21-ET-1 mutant was 10-fold lower than that from PPET-1 wildtype and (Ala-20-ET-1) PPET-1 transfected cells. Moreover, Ala-21 -big ET-1 accumulated in the cells transfected with the cDNA for (Ala-21-ET-1) PPET-1, whereas there was no significant accumulation of ET-1-like or big ET-1-like immunoreactivity in the cells transfected with cDNAs for PPET-1 wildtype and (Ala-20-ET-1) PPET-1. These results suggest that Trp-21 is involved in intracellular processing and secretion of big ET-1.     

One SUMO is sufficient to silence the dimeric potassium channel K2P1

Small ubiquitin modifier 1 (SUMO1) is shown to regulate K2P1 background channels in the plasma membrane (PM) of live mammalian cells. Confocal microscopy reveals native SUMO1, SAE1, and Ubc9 (the enzymes that activate and conjugate SUMO1) at PM where SUMO1 and expressed human K2P1 are demonstrated to colocalize. Silent K2P1 channels in excised PM patches are activated by SUMO isopeptidase (SENP1) and resilenced by SUMO1. K2P1-Lys274 is crucial: when mutated to Gln, Arg, Glu, Asp, Cys, or Ala, the channels are constitutively active and insensitive to SUMO1 and SENP1. Tandem mass spectrometry confirms conjugation of SUMO1 to the ε-amino group of Lys274 in vitro. FRET microscopy shows that assembly of K2P1 and SUMO1 requires Lys274. Single-particle TIRF microscopy shows that wild-type channels in PM have two K2P1 subunits and assemble with two SUMO1 monomers. Although channels engineered with one Lys274 site carry just one SUMO1 they are activated and silenced by SENP1 and SUMO1 like wild-type channels.     

Notch/Jagged信号在肝部分切除后肝再生中的表达

目的研究Notch/Jagged信号传导通路在大鼠肝部分切除术后肝再生中所起的作用。方法取雌性wister大鼠行肝部分切除术,术后0 min、5 min、15 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、4 d、7 d留取再生肝组织,观察大体组织变化,检测Notch-1和Jagged-1蛋白的表达,并通过RT-PCR检测Notch-1和Jagged-1的mRNA的表达。结果再生肝Notch-1蛋白第2 d在门脉周围细胞表达增强,第4 d在肝血窦内皮细胞表达增强,Jagged-1在正常肝脏标本中在胆管分布,在肝细胞也有少量表达。在再生的肝上,第2 d在门脉周围的肝细胞上较强地表达,第4 d在胆管内皮细胞表达增强。Notch-1的mRNA表达量在6 h-2 d下调,Jagged-1的mRNA表达量在3-6 h上调,12 h-2 d下调,4 d恢复。统计学处理采用方差分析方法、t检验及直线相关方法（P〈0.05）。结论Notch/Jagged信号通路的激活在肝再生中扮演着重要的角色。它可以促进胆管的形成和结构维持,有助于新生血管的形成及肝细胞的增殖。     

肿瘤-睾丸抗原MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在胃肠间质瘤中的表达

目的:探讨肿瘤-睾丸抗原(CTA)MAGE-1和NY-ESO-1作为胃肠间质瘤(GISTs)免疫治疗特异性靶点及MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA作为辅助GISTs危险度分级指标的可能性.及其与GISTs生物学行为的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测30例GISTs中MAGE-1和NY-ESO-1mRNA的表达,并取正常胃肠道组织作为阴性对照组,同时分析MAGE-1和NY-ESO-1mRNA表达与病理特征的关系.结果:正常对照组中无阳性表达,30例GISTs中,18例至少表达一种CTA,MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在GISTs中的表达率分别为30%和47%.MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA表达与患者年龄、性别和病理类型无关,而与肿瘤生长部位、肿瘤大小及危险度分级有关(P<0.05).MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在低危、中危、高危三个组中表达量随着危险度分级的升高而增高,三组间差异有统计学意义(P<0.05).MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在GISTs中的表达不存在相关性(r=0.018,P>0.05).结论:MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在GISTs中的高特异性表达,其抗原有望成为GISTs免疫治疗特异性的靶点:MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA表达与GISTs危险度分级有关,MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA有望成为辅助GISTs危险度分级的诊断指标.     

SF-1和DAX-1在发育内分泌学的研究进展

核受体的作用极其广泛 ,类固醇生成因子 1(SF 1)和剂量敏感的性别转换综合征和先天性肾上腺发育不良症的关键基因 1(DAX 1)两种核受体家族是近年来发育内分泌学研究的热点之一 ,通过SF 1和DAX 1的动物模型及人类基因突变表现型阐述了在胚胎早期性发育和性分化中SF 1和DAX 1的作用可能通过相同途径相互拮抗 ,在垂体促性腺细胞和肾上腺能细胞中 ,两者在细胞及组织中的分布一致 ,通过下丘脑对垂体 性腺轴及垂体 肾上腺轴发育过程中不同时期的各个环节进行调控 ,本文对SF 1和DAX 1在内分泌器官发育过程中的分布、结构及其作用进行综述。