羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标的检测

目的检测羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标,分析此模型的相关指标与牛Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎模型的异同。方法分别用牛、羊Ⅱ型胶原蛋白免疫动物,比较两组免疫大鼠足趾容积、关节炎肿胀评分、血清细胞因子的榆测和关节滑膜病理改变。结果羊Ⅱ型胶原蛋白成功诱导出关节炎模型,与牛Ⅱ型胶原白诱导关节炎模型在造模成功率上差别无统计学意义,其中羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组大鼠关节发病时间、关节肿胀达高峰时间及肿胀程度均早于和重于牛Ⅱ型胶原蛋白诱导组。羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组血清细胞因子IL-1β、TNF—α升高较牛胶原蛋白诱导组更为显著（P〈0．01）。病理切片显示两模型组关节滑膜均有炎细胞浸润,滑膜细胞层次增多,排列紊乱,但牛组重于羊组。结论羊Ⅱ型胶原蛋白可诱导大鼠关节炎。     

蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白治疗胶原诱导性关节炎大鼠的相关作用机制研究

目的 探讨蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)治疗胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的相关作用机制.方法 60只10周龄Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为蕲蛇CⅡ高、中、低剂量组和空白组、模型组、塞来昔布(对照)组,每组10只.除空白组外,其余5组采用牛CⅡ-弗氏完全佐剂乳剂注射法构建CIA大鼠模型,2周后分别给予相应药物治疗,治...     

Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较

目的对Ⅱ型胶原蛋白（ＣⅡ－Ａ）和弗氏完全佐剂（Ａ－Ａ）大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。方法分别采用Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型，利用排水法对大鼠足部体积进行测定，并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。结果从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变，但ＣⅡ－Ａ大鼠与Ａ－Ａ大鼠比较，滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显，关节炎持续时间也较长，更接近于人的类风湿性关节炎。结论ＣⅡ－Ａ大鼠模型与Ａ－Ａ相比是研究ＲＡ较为理想的动物模型。     

Ⅱ型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎的动物模型

Ⅱ型胶原蛋白（CII）只存在机体透明软骨，眼玻璃体、视网膜和角膜[1]。类风湿性关节炎病人（RA）可检测到针对Cll的体液和细胞免疫反应。在大鼠［’l、／J’鼠l’］和灵长类【‘］动物上用Cll配合不完全福氏佐剂可引发胶原蛋白性关节炎，该类风湿性关节炎模型（CI）反映了临床上RA形成的兔疫学机制，与目前常用的佐剂性关节炎模型相比，有其独特的优点，国际上已广泛应用于关节炎基础理论和抗关节炎药物研究。作者摸索了Cll简便高效的提取方法，模型的制备条件，利用国内有限条件，首次成功地建立了大鼠的胶原蛋白性关节炎模型，并进…     

Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化和鉴定

1　材料和方法1.1　材料　胃蛋白酶及 型胶原蛋白 (C )标准品购自美国Sigma公司 . Mr14 .4～ 97.4× 10 3低分子标准蛋白购自上海丽珠东风生化技术有限公司 .CS- 90 0 0薄层扫描仪购自日本岛津公司 .1:Protein marker;2 :C (Sigma) 2 g·L- 1 ;3 :C (Sigma) 1g·L- 1 ;4:C 1g· L- 1 ;5 :C 0 .5 g·L- 1 ;6:C 0 .2 5 g·L- 1 ;7:0 .12 5 g· L - 1 .图 1　 SDS- PAGE分析经 DEAE- 5 2纤维素柱层析纯化的 C 1.2　方法　新鲜牛软骨剥去骨膜 ,在液氮冷冻下磨成粉 ,称质量 ,用 10倍体积的 4 mol· L- 1 盐酸胍 - 0 .0 5 mmol· L…     

口服胶原蛋白诱导免疫耐受对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用

目的　探讨口服 II型胶原蛋白 (CII)对大鼠佐剂性关节炎 (AA )的治疗作用及给药时间与疗效之间的关系 .方法　在给予完全福氏佐剂 (CFA)致关节炎同时及之前或之后 2 wk开始经口胃饲不同剂量 (0 .3,3.0 ,30 .0 ,30 0 .0 μg及1.0 mg)的 CII治疗 SD大鼠的 AA,疗程均为 3m on.结果　给予 CII口服治疗的 SD大鼠 ,AA的关节症状明显减轻(MMAI43.4± 2 1.0 vs13.8± 15 .9,15 .1± 8.8,19.1± 11.4,P<0 .0 1) ,病程缩短 (10 1.8± 14.5 vs34.6± 31.1,5 4.3±31.1,45 .4± 37.3,P <0 .0 1) ,晚期致肢体畸形比例下降(10 0 .0 % vs30 .0 % ,33.3 % ,40 .0 % ,P<0 .0 1) ,病程中关节外表现亦减少 (80 .0 % vs2 6 .7% ,2 0 .0 % ,2 0 .0 % ,P<0 .0 1) ;其中 ,似以致关节炎前开始治疗的 CII- A组疗效更好 .结论　口服 CII诱导免疫耐受对大鼠 AA有良好的治疗作用 ;预防性用药 ,疗效似更佳 .此结果为口服 CII用于人类类风湿性关节炎的治疗提供了动物实验依据 .     

消化酶在口服Ⅱ型胶原蛋白治疗类风湿性关节炎中的作用

目的:观察消化酶在体内和体外对天然Ⅱ型胶原蛋白(native type Ⅱ collagen,N-C Ⅱ)和变性Ⅱ型胶原蛋白(denatured type Ⅱcollagen,D-C Ⅱ)的酶解作用,探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ)治疗类风湿性关节炎的机制.方法:在体外将胃蛋白酶、胰蛋白酶和...     

二氢青蒿素对大鼠牛Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型作用的初步研究

【摘要】 目的 建立牛Ⅱ型胶原蛋白(BCⅡ)诱导的大鼠关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)动物模型,研究二氢青蒿素对大鼠关节炎的影响。方法 选用雄性Wistar大鼠,在模型组(n=19)大鼠尾根及脊背部皮内注射用弗氏完全佐剂乳化的BCⅡ 0.3 mg,第15 d以同样的剂量在同样的部位加强免疫1次;正常对照组(n=5)以生理盐水按同样的方法和剂量注射。第52 d,将模型组分为单纯模型组（模型空白组,n=7）、二氢青蒿素组〔二氢青蒿素1.5 mL/（kg·d),1 mL含20 mg二氢青蒿素,灌胃;n=12〕。治疗28 d后观察大鼠的关节炎表现。结果 模型组大鼠关节肿胀明显,而正常对照组关节无炎性红肿。二氢青蒿素组:关节肿胀减轻,组织病理检查见只有少量炎性细胞浸润,少量纤维结缔组织和毛细血管增生,关节腔较干净,没有明显的骨质破坏。治疗28 d后,模型空白组关节炎指数较治疗前和正常对照组增加（P<0.05）;二氢青蒿素组与治疗前比较差异无统计学意义（P>0.05）,仍高于正常对照组（P<0.05）。治疗28 d后,模型空白组病理分级高于正常对照组（P<0.05),二氢青蒿素组低于模型空白组（P<0.05）。结论 初步实验表明二氢青蒿素有减轻Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎病变作用。     

Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测

目的:探讨Ⅱ型胶原蛋白(collagen protein type Ⅱ, CⅡ)抗体产生规律,制备CⅡ抗血清.方法:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔,每隔10 d收集血清,以改良间接ELISA法检测抗CⅡ抗体效价.结果:鸡CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天抗体效价为1∶ 3 200,第20天升至1∶ 204 800;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别达到1∶ 409 600和1∶ 819 200.猪CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天血清中未能检测出抗体,第20天血清抗体效价为1∶ 3 200;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别为1∶ 51 200和1∶ 102 400.结论:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔后,经一定潜伏期血清中出现抗体,可以获得高效价抗CⅡ抗体血清.抗体产生情况符合机体初次及再次免疫应答的有关规律,但血清抗体产生的潜伏期和效价与不同种属来源的胶原蛋白有关.     

雷公藤红素对胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用研究

目的研究雷公藤红素对牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎小鼠抗炎作用及其对T细胞的作用机制。方法选用DBA/1J小鼠,以牛Ⅱ型胶原诱导建立小鼠关节炎CIA模型。成模后,以雷公藤红素2mg/kg给药治疗并设置对照组,记录小鼠关节评分;二次免疫70d后摘眼球取血处死小鼠,ELISA检测小鼠血浆中IL-17、IL-6、TGF-β水平,HE染色法观察小鼠关节病理变化,流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中Th17和Treg比例。结果雷公藤红素组小鼠关节评分显著低于模型组(P0.01);HE染色结果显示,雷公藤红素有效改善关节滑膜炎性浸润情况(P0.05);ELISA检测小鼠血浆结果显示雷公藤红素使Th17相关细胞因子IL-6水平显著降低(P0.01);流式检测结果显示,雷公藤红素可显著降低小鼠脾脏中Th17细胞亚群比例(P0.01)并增加Treg细胞亚群比例(P0.05)。结论雷公藤红素可以有效缓解CIA小鼠关节炎症症状,抑制关节滑膜炎性细胞浸润、血管翳生成和软骨破坏。雷公藤红素治疗CIA小鼠炎症反应可能是通过减少CIA小鼠体内IL-6等促炎症因子的分泌并伴随着抑炎因子参与的免疫平衡调节过程而实现。     

曲古抑菌素A对小鼠胶原诱导性关节炎的影响及其机制

目的:研究曲古抑菌素A(TSA)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠病情的影响及其机制。方法:将DBA/1雄性小鼠随机分为模型组、TSA组、对照组。免疫34d后对小鼠进行关节炎病变评分、滑膜炎症评分、组织病理检查,通过实时荧光定量PCR及ELISA方法分别检测辅助性T细胞Th1、Th17、Th2细胞的代表性细胞因子干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-17、-4mRNA及蛋白表达水平。结果:TSA组小鼠关节炎指数(2.81±0.10)显著低于模型组(3.63±0.23);TSA组IFN-γ、IL-17 mRNA表达水平(6.39±0.51,2.94±0.40)低于模型组(7.99±0.63,5.87±0.24),IL-4表达水平(2.11±0.15)ng/L高于模型组(1.12±0.07)ng/L。且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:TSA可能通过抑制Th1和Th17细胞分泌细胞因子IFN-γ及IL-17,增加表达Th2细胞IL-4因子来帮助缓解CIA病情。     

小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究

目的 胶原诱导性关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA)是研究类风湿性关节炎发病机制和治疗药物筛选的理想模型,也是目前国际上公认的关节炎模型.但是,目前鲜见Ⅱ型胶原诱导CIA模型的系统免疫学变化的报道.因此,本研究采用DBA/1小鼠诱导了CIA模型,并对其免疫学改变进行了系统研究.方法 将牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂混和并充分乳化,于DBA/1小鼠尾根部皮内注射进行初次免疫,20 d后同样方法进行再次免疫.应用千分尺测量CIA模型小鼠的左右两侧足掌厚度,并进行关节炎评分.酶联免疫吸附试验测定小鼠血清Ⅱ型胶原特异性抗体,Luminex技术和αLISA技术测定血清及培养上清中的细胞因子水平.结果CIA小鼠于造模后23 d开始,陆续出现前肢、后肢的红肿、功能障碍,发病率高达100％,且随着时间的延长其关节肿胀程度呈进行性加重,关节炎评分增高.CIA小鼠脾脏指数较正常组明显升高,且Ⅱ型胶原刺激的特异性T细胞增殖明显增强.细胞因子检测结果表明,脾细胞培养上清中IFN-γ和1L-4含量及IFN-γ/IL-4比值明显升高,TNF-α和IL-1β水平亦显著升高.此外,CIA小鼠血清中存在高水平的Ⅱ型胶原特异性抗体.结论 Ⅱ型胶原诱导CIA模型发病率高,免疫学改变以Th1细胞因子升高为主,兼有细胞免疫功能及体液免疫功能损伤.     

全反式视黄酸对CIA大鼠血清炎性细胞因子及软骨损伤相关蛋白表达的影响

目的 探讨全反式视黄酸（ATRA）对胶原诱导的类风湿关节炎模型大鼠（CIA大鼠）关节炎症反应、炎性相关细胞因子及软骨损伤相关蛋白表达的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组和造模组,造模组采用牛CⅡ型胶原和不完全弗氏佐剂诱导关节炎。造模成功后,将模型鼠随机分为CIA模型组和ATRA治疗组。ATRA治疗组给予不同剂量（0.50 mg/kg、1.00 mg/kg）的ATRA腹腔注射,3次/周,连续治疗6周。空白对照组给予等体积的生理盐水,CIA模型组给予等体积玉米油。观察CIA大鼠关节炎指数（AI）评分、血清炎性相关细胞因子的水平、膝和踝关节组织病理形态学改变及软骨损伤相关蛋白的表达。结果 ATRA干预6周后,不同剂量ATRA治疗组AI评分与CIA模型组相比,差异均无统计学意义（ P>0.05）;HE染色示,CIA模型组和ATRA 1.00 mg/kg剂量组膝、踝关节结构紊乱,ATRA 0.50 mg/kg剂量组膝关节结构有所改善。此外,与CIA模型组相比,ATRA可抑制促炎细胞因子干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、白介素-17A的分泌（ P<0.05）,促进白介素-4的分泌（ P<0.05）;下调解整链蛋白金属蛋白酶（ADAMTS）-4、基质金属蛋白酶（MMP）3、MMP1的表达（ P<0.05）。结论 ATRA可在一定程度上抑制促炎因子分泌,纠正Th1/Th2及Th17/Treg失衡,并抑制软骨损伤相关酶类的蛋白表达,对类风湿关节炎有潜在的有利影响。     

Attenuation of Collagen Induced Arthritis by Centella asiatica Methanol Fraction via Modulation of Cytokines and Oxidative Stress

Objective To investigate the anti-inflammatory, antioxidant and anti-arthritic effects of Centella asiatica methanolfraction(CaM E) on collagen-induced arthritis(CIA), an animal model of rheumatoid arthritis. Methods Arthritis was induced in female wistar rats by immunization with porcine type II collagen. The CIA rats were treated orally with CaM E(50, 150, and 250 mg/kg/day) for 15 d(beginning on day 21 of the experimental period). The clinical, histological, biochemical, and immunological parameters were assessed. Results CaM E treatment(150 and 250 mg/kg) significantly attenuated the severity of CIA and reduced the synovial inflammation, cartilage erosion, and bone erosion as evident from both histological and radiographic data. The escalated plasma levels of pro-inflammatory cytokines TNF-α, IL-1β, IL-6, and IL-12 alongwith nitric oxide in CIA rats decreased significantly on CaM E treatment. The serum levels of type-II collagen antibody were significantly lower in rats of CaM E(150 and 250 mg/kg) treated group than those in the arthritic group. Furthermore, by inhibiting the above mediators, CaM E also contributed towards the reversal of the disturbed antioxidant levels and peroxidative damage. Conclusion Our results clearly indicate that oral administration of CaM E suppresses joint inflammation, cytokine expression as well as antioxidant imbalance, thereby contributing to an amelioration of arthritis severity in CIA rats.     

青藤碱对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠滑膜炎症的抑制作用及其机理探讨

[目的]研究青藤碱对于胶原诱导型关节炎（CLA）大鼠滑膜及表达IL－6mRNA的影响。[方法]采用CIA大鼠动物模型，HE常规病理切片，观察青藤碱对滑膜的炎性浸润、巨噬A型细胞增生、纤维组织增生及原代培养滑膜细胞表达IL－6mRNA的影响。[结果]青藤碱可明显减轻滑膜的炎性浸润、巨噬A细胞和纤维组织增生，减少滑膜细胞IL－6mRNA的表达。[结论]青藤碱可以通过抑制滑膜细胞恶性增殖及IL－6基因的表达来阻断滑膜炎的进程。     

补肾通督胶囊对胶原诱导关节炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的观察补肾通督胶囊对胶原诱导关节炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响。方法将大鼠分为正常对照组、模型对照组、补肾通督胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组和雷公藤组6组。第1天在大鼠尾巴基底部的松弛皮肤,皮下注射含有300μgⅡ型胶原蛋白的乳化剂,7d后,皮下再次注射含有100μgⅡ型胶原蛋白的乳化剂,造成胶原诱导关节炎模型。从第13天开始灌胃给药18d,在第31天检测各组大鼠的血清CRH、ACTH和CORT。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠的血清CRH、ACTH和CORT的水平皆有显著降低(P0.01),补肾通督3组大鼠的血清CRH、ACTH和CORT的水平较模型组皆有显著上升,其中高剂量组的水平与雷公藤组没有显著差异(P0.05)。结论补肾通督胶囊可以提高大鼠血清CRH、ACTH和CORT的含量,故其临床治疗类风湿性关节炎的作用机制很有可能是由于其对下丘脑-垂体-肾上腺轴的调控作用。     

脐带间充质干细胞移植对胶原诱导型关节炎大鼠炎性趋化因子表达的影响

目的观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)移植对胶原诱导型关节炎(collagen typeⅡ-induced arthritis,CIA)大鼠模型血清中:血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,初步探讨UC-MSC移植对CIA大鼠炎性趋化因子的调节作用。方法采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型,经大鼠尾静脉注射UC-MSC;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠干预前后血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平变化。结果模型组血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平均明显高于同期空白对照组(P<0.05);经UC-MSC治疗组上述炎症因子水平逐渐降低,至第5周上述指标均接近空白对照组(P<0.05)。结论 CIA大鼠存在免疫功能紊乱,其炎症趋化因子水平显著增高;UC-MSC能下调CIA大鼠炎症趋化因子水平,减轻机体免疫性炎症反应,促进疾病缓解,改善预后。     

雷公藤内酯醇对胶原诱导的大鼠关节炎关节腔和外周血清中细胞因子的影响

目的:观察雷公藤内酯醇对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血清和关节腔中IL-6、IL-10、TNFα的影响,探讨雷公藤内酯醇治疗CIA的可能机制。方法:以胶原诱导的W istar大鼠关节炎为动物模型,将模型复制成功的20只大鼠随机分为模型组和雷公藤内酯醇组。雷公藤内酯醇按40μg/kg BW肌注给药,每3 d 1次,31 d处死动物,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清和膝关节腔液中TNFα、IL-6和IL-10含量。结果:与正常对照组大鼠相比,CIA模型大鼠关节腔液和血清中TNFα、IL-6含量升高IL-10含量降低(P<0.01),经过雷公藤内酯醇治疗后,关节腔液和血清中TNFα、IL-6含量降低,IL-10含量升高,模型组与治疗组相比,差异有显著性(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇可能通过调节细胞因子变化而达到治疗CIA,这也可能是雷公藤治疗类风湿关节炎的机制之一。