多西紫杉醇联合斑蝥酸钠对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨多西紫杉醇联合斑蝥酸钠对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:斑蝥酸钠和多西紫杉醇均能显著抑制人肺腺癌A549细胞的增殖诱导细胞凋亡(P<0.05),联合使用抑制率及凋亡率均显著高于单药组(P<0.05)。结论:多西紫杉醇和斑蝥酸钠均可明显抑制人肺腺A549细胞,联合使用抑制作用增强。     

二氯乙酸钠联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的实验研究

目的研究二氯乙酸钠(Sodium dichloroacetate,DCA-Na)、顺铂(DDP)联合对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用MTT法检测DCA-Na、DDP应用对A549细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测DCA-Na、DDP单药及两药联合作用于A549细胞凋亡率的变化;用分光光度法检测DCA-Na作用于A549细胞后半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9蛋白的活性。结果DCA-Na、DDP单药组均对A549细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量-时间依赖性。0.4、2μg/mL的DDP与37.5、75、150μg/mL的DCA-Na联合作用A549细胞24、48、72 h后的抑制率显著高于同浓度DDP单药组(P<0.05),且2μg/mL的DDP与75μg/mL的DCA联合在48 h表现为协同作用。流式细胞仪检测显示,A549细胞联合组凋亡率显著高于各单药组(P<0.05)。DCA-Na作用于A549细胞后,分别在12、24、48、72 h测得Caspase-3、-8、-9蛋白活性显著高于对照组(P<0.05)。结论 DCA-Na对人肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用,并且随着药物浓度增加、作用时间延长,其抑制作用也增加(呈剂量和时间依赖性)。一定浓度范围的DCA-Na和DDP联合作用于人肺腺癌A549细胞能够产生协同作用。DCA-Na可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,且与DDP联合后其诱导凋亡作用更为显著。     

尿多酸肽对人非小细胞肺癌细胞生长与凋亡的影响

目的:初步探讨尿多酸肽(CDA-2)体外诱导非小细胞肺癌细胞凋亡作用及其可能的分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测CDA-2对正常人呼吸道上皮细胞HBE细胞及肺癌细胞系A549和H157细胞增殖的抑制效应;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达。结果:CDA-2显著抑制A549和H157细胞增殖,且具有浓度依赖性,其对正常人呼吸道上皮HBE细胞无影响。流式细胞DNA分布宽度检测显示,CDA-2处理组A549细胞亚G1期凋亡峰明显高于对照组(P<0.01);而HBE细胞给药前后比较无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪An-nexinV和PI检测结果显示,CDA-2处理组A549细胞凋亡率和死亡率均明显高于对照组(P<0.01),而HBE细胞给药前后比较无统计学意义(P>0.05)。Western印迹分析显示,CDA-2处理组A549细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达强而快速的下调而促凋亡蛋白Bax表达显著上调,Bcl-2/Bax蛋白比率下降。结论:CDA-2可抑制非小细胞肺癌A549和H157细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能是改变Bcl-2/Bax比率,通过线粒体途径诱导肺癌细胞凋亡。     

白藜芦醇促TRAIL诱导PC-3细胞凋亡的作用

目的研究白藜芦醇（Res）促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白诱导人前列腺癌细胞PC-3凋亡的作用。方法实验分为TRAIL蛋白组以及联合应用白藜芦醇和TRAIL蛋白的联合用药组;采用CCK8法检测细胞增殖情况,确定白藜芦醇的用药浓度;通过CCK8法、流式细胞术检测TRAIL蛋白组、联合用药组细胞增殖和凋亡情况;分光光度法检测两组细胞caspase-8、caspase-3活性。结果 CCK8结果提示白藜芦醇的用药浓度为50μmol/L;联合用药组PC-3细胞的增殖率明显低于TRAIL蛋白组（P〈0.05）;流式细胞术检测结果显示,联合用药组PC-3细胞的凋亡率明显高于TRAIL蛋白组（P〈0.05）;caspase活性检测结果显示,联合用药组PC-3细胞caspase-8、caspase-3的活性明显高于TRAIL蛋白组（P〈0.05）。结论白藜芦醇能够促进TRAIL蛋白诱导的PC-3细胞凋亡,为肿瘤的生物学治疗提供新的材料。     

麦角甾醇与吉非替尼联合用药协同抑制非小细胞肺癌A549和PC-9细胞增殖

目的研究麦角甾醇(ERG)与吉非替尼(GEF)联合用药协同对非小细胞肺癌A549(GEF耐药细胞)和PC-9(GEF敏感细胞)细胞的抑制作用。方法将人肺癌细胞A549和PC-9细胞分别分为对照组、ERG 5～160μmol·L~(-1)单药组、GEF 5～160μmol·L~(-1)(A549)或0.625～20μmol·L~(-1)(PC-9)单药组及不同浓度ERG+GEF联合用药组,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258观察细胞核形态变化;流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞周期;Western印迹法检测蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt),磷酸化AKT(p-Akt),表皮生长因子受体(EGFR),磷酸化EGFR(p-EGFR)蛋白的表达。结果在不同作用时间点,与ERG和GEF单药组相比,相应浓度两药联用组对A549和PC-9细胞的增殖抑制率提高(P<0.01),表现出明显的协同效应(q>1.15);Hoechst 33258凋亡染色结果显示,与单药组相比,联用组A549细胞和PC-9细胞各给药组细胞出现明显核分叶、碎裂、凋亡样小体和核大小不一等典型凋亡样特征。与相应浓度GEF和ERG单药组相比,ERG+GEF联用(10+10)μmol·L~(-1)和(40+40)μmol·L~(-1)组A549细胞凋亡率升高(P<0.01),ERG+GEF(40+5)μmol·L~(-1)和(80+10)μmol·L~(-1)组PC-9细胞凋亡率显著升高(P<0.01);两药联用组(20+20)μmol·L~(-1)A549细胞的p-EGFR/EGFR蛋白比值显著降低(P<0.01),两药联用组(40+5)μmol·L~(-1)PC-9细胞的p-Akt/Akt和p-EGFR/EGFR蛋白比值显著下调(P<0.05,P<0.01);细胞周期结果显示,对于A549细胞,两药联用改变了G_0/G_1,G_2/M和S期细胞比例,主要将细胞阻滞在G_0/G_1期。对于PC-9细胞,两药联用未改变G_0/G_1,G_2/M和S期细胞比例。结论 ERG与GEF联用具有协同抑制A549和PC-9细胞增殖的作用,诱导细胞凋亡,其作用机制可能是抑制EGFR信号通路相关蛋白。     

活性氧介导5, 7- 二甲氧基黄酮增敏TRAIL 诱导肺癌细胞凋亡

目的研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的人肺癌细胞凋亡及其作用机制。方法体外培养人肺癌A549细胞。MTT法测定细胞增殖活性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和ELISA试剂盒检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光标记FCM检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 5,7-DMF能增强TRAIL诱导的A549细胞凋亡和ROS生成。N-乙酰半胱氨酸能有效阻断5,7-DMF与TRAIL所诱导的A549细胞凋亡及ROS生成。结论 5,7-DMF通过促进A549细胞内活性氧生成从而增强TRAIL诱导的凋亡。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

姜黄素抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞的凋亡

目的 探讨姜黄素对人食管癌A549细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定不同浓度姜黄素对人食管癌A549细胞的增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 在一定的浓度范围内,随着姜黄素浓度的增加,细胞增殖的抑制率显著增加,呈明显量-效关系(r＝0.992, P＜0.01);姜黄素对人食管癌A549细胞的凋亡率为(18.89±0.58)%,明显高于对照组的(4.25±0.19)%(P＜0.01).结论 姜黄素可抑制人食管癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡.     

内源性大麻素联用顺铂对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用

目的观察内源性大麻素（AEA）、顺铂（DDP）单用或联用对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测AEA和DDP对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪（FCM）PI单染检测AEA联用DDP对细胞周期的影响,以Annexinv／PI双染法检测AEA联用DDP对细胞凋亡的影响。结果AEA对肺癌细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。10,20μmol／L的AEA和1,2mg／L的DDP联合作用24,48,72h后,细胞增殖抑制率显著高于单用组;两药联用后诱导细胞凋亡的作用显著增强,AEA可使A549细胞阻滞于G2／M期。结论AEA及DDP对肺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,在一定范围内呈量效关系,且两者联合应用具有相加或协同作用。     

益气养阴散结方含药血清对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨益气养阴散结方含药血清对人肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法应用MTT比色法检测益气养阴散结方对肺癌细胞增殖的抑制率,并用AnnexinV/PI染色法检测凋亡率。结果药物组肺癌A549细胞的增殖明显弱于对照组（P〈0.05）,凋亡率明显高于对照组（P〈0.05）。结论益气养阴散结方含药血清能明显抑制A549细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察

目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性;塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.     

培美曲塞联合顺铂通过TRAIL诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡发挥抗癌效果的研究

目的：初步探讨培美曲塞联合顺铂通过TRAIL诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡发挥的抗癌效果。方法：将肺癌细胞株A549做4种处理并分为4组：空白组（Blank组）、顺铂处理组（CDPP组）、培美曲塞处理组（MTA组）、培美曲塞联合顺铂处理组（MTA+CDPP组），应用CCK-8和流式细胞术检测4种处理细胞的细胞活性和细胞凋亡变化；qPCR检测顺铂单药治疗组和培美曲塞联合顺铂治疗组的细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）表达差异；干扰TRAIL后再次检测各处理组细胞的细胞活性和细胞凋亡变化；qPCR和WB检测干扰TRAIL后BCL-2转录水平和蛋白表达。结果：培美曲塞联合顺铂（CDDP）在非小细胞肺癌细胞中起到降低细胞活性和诱导细胞凋亡的作用，二者协同发挥抗肿瘤效果；培美曲塞联合顺铂治疗组TRAIL转录表达显著高于顺铂处理组；干扰TRAIL后，顺铂与培美曲塞联合诱导的细胞活力的降低作用被抑制，并逆转了顺铂与培美曲塞联合对细胞凋亡的促进作用；培美曲塞联合顺铂通过TRAIL降低Bcl-2的转录水平和蛋白表达来发挥促进肿瘤细胞凋亡的作用。结论：培美曲塞可联合顺铂（CDDP）在非小细胞肺癌细胞中发挥抗肿瘤效果，其通过TRAIL降低Bcl-2的表达来诱导肿瘤细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。     

三氧化二砷增强TRAIL杀伤人A549细胞的作用及机制研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA表达变化。结果 As2O3有抗肿瘤活性,IC50值为(42.44±0.66)μmol.L-1;As2O3与TRAIL联用时IC50值为(7.04±0.19)μmol.L-1;As2O3协同增强TRAIL的抗肿瘤活性,CDI值为0.94。联合药物组作用48h后,随As2O3浓度增高Survivin mRNA的表达降低,Caspase-3mRNA的表达增强。结论 As2O3是有效的化疗药物,通过下调Survivin mRNA的表达,上调Caspase-3 mRNA的表达,逆转A549的耐药性,协同TRAIL增强对肺癌细胞的杀伤作用。     

苯乙双胍通过影响线粒体功能促进A549/DDP细胞凋亡

目的 探究苯乙双胍抑制 A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡的可能机制。方法 MTS法检测顺铂（顺铂 组）和苯乙双胍（苯乙双胍组）对 A549/DDP 细胞和 A549 细胞的细胞活力（24 h 和 48 h）的影响。苯乙双胍组以 2.5 mmol/L苯乙双胍处理,对照组采用PBS处理,MTS法检测苯乙双胍对A549/DDP细胞增殖的影响,克隆形成实验检测 苯乙双胍对 A549/DDP细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测苯乙双胍对 A549/DDP细胞凋亡和活性氧（ROS） 胞内线粒体质量（Mitotracker）、钙离子（Rhod-2）的影响,实时荧光定量PCR检测线粒体DNA（mtDNA）变化,三磷酸腺 苷（ATP）试剂盒检测 ATP的变化,Western blot检测苯乙双胍对线粒体氧化磷酸化复合物表达的影响。结果 与顺 铂组比较,苯乙双胍组A549/DDP细胞在24 h和48 h的细胞活力降低（P＜0.05）,而2组间A549细胞24 h和48 h活力 差异无统计学意义。顺铂处理48 h时A549/DDP细胞活力均高于A549细胞（P＜0.05）,而24 h间差异无统计学意义; 苯乙双胍处理的A549/DDP细胞活力低于A549细胞（P＜0.05）。与PBS组相比,苯乙双胍组A549/DDP细胞的24 h和 48 h 增殖率、集落形成数减低,而凋亡率升高,ROS 水平增高,Mitotracker、Rhod-2、mtDNA 及 ATP 水平降低（P＜ 0.05）,线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ中的NDUFB8蛋白、复合物Ⅱ中的SDHB蛋白和复合物Ⅳ中的MTCO1蛋白表达明 显降低（P＜0.05）。结论 （1）A549/DDP细胞较 A549细胞对苯乙双胍更为敏感,但对顺铂耐受性较 A549细胞强。 （2）苯乙双胍通过增加细胞内 ROS、减少线粒体质量、钙离子和 mtDNA、抑制线粒体氧化磷酸化复合物表达,减少 ATP生成,从而抑制A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡。     

7- 二氟甲氧基-5, 4′- 二- 正辛烷氧基金雀异黄素诱导肺癌A549 细胞凋亡

目的研究7二氟甲氧基-5,4＇二正辛烷氧基金雀异黄素（7-difluorom＋hoxyl-5,4＇-di-n-octylgenistein,DFOG）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用。方法体外培养A549细胞。二氟甲基化或烷基化得到一系列金雀异黄素衍生物。MTT法测定细胞活力;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 9个金雀异黄素衍生物较先导化合物GEN具有更强的抗肿瘤活性。其中DFOG对A549细胞活性显示最强的抑制作用,IC50为3.9μmol·L^-1。DFOG（2.0、4.0和8.0μmol·L^-1）作用48h的细胞凋亡率依次增高。8.0μmol·L^-1DFOG处理A549细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。8.0μmol·L1DFOG处理A549细胞6h、12h和24h,Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达上升。结论 DFOG诱导A549细胞凋亡作用与其增高Bax/Bcl-2比值有关。     

Induction of apoptosis by gallic acid in lung cancer cells

The apoptosis-inducing effect of gallic acid (3,4,5-trihydroxybenzoic acid) was investigated in four human lung cancer cell lines, SBC-3 (small cell carcinoma), EBC-1 (squamous cell carcinoma), A549 (adenocarcinoma) and SBC-3/CDDP (cisplatin-resistant subclone of SBC-3). Gallic acid induced apoptosis in a dose-dependent manner as evidenced by analyses of DNA fragmentation, changes in cell morphology and loss of viability. Fifty percent inhibitory concentration (IC50) values of gallic acid on the cell viability of SBC-3, EBC-1 and A549 were around 10, 20 and 60 microg/ml, respectively. The IC50 value for SBC-3/CDDP cells was almost the same as that of SBC-3, suggesting that susceptibility of cells to gallic acid-induced apoptosis is not altered by the acquisition of cisplatin resistance. The apoptotic process was effectively triggered by 30 min exposure to gallic acid. A caspase inhibitor and alpha-tocopherol effectively prevented the gallic acid-induced apoptosis, indicating the involvememt of caspase activation and oxidative processes during the course of apoptosis in gallic acid-treated cancer cells. These findings suggest the possible applicability of gallic acid in lung cancer therapy, especially to circumvent resistance to anti-cancer drugs.     

Molecular crosstalk between TRAIL and natural antioxidants in the treatment of cancer

The endogenous protein, tumour necrosis factor receptor apoptosis-inducing ligand (TRAIL), induces apoptosis in a wide variety of transformed and cancer cells but has little or no effect on normal cells. Therefore, TRAIL is considered to be a tumour-selective, apoptosis-inducing cytokine and a promising new candidate for cancer prevention and treatment. Some cancer cells are however resistant to TRAIL-induced apoptosis, but treatment in combination with conventional chemotherapeutic drugs or radiation generally restores TRAIL sensitivity in those cells. A novel class of molecules exhibiting synergy with TRAIL but devoid of major side effects are emerging as alternative approaches to treat resistant cancer cells, including natural antioxidants such as sulphoraphane or the flavonoids curcumin, quercetin, resveratrol, baicalein and wogonin. In this issue of the BJP, Lee et al. demonstrate that treatment of TRAIL-resistant cancer cells with wogonin restores TRAIL-induced cell death in a reactive oxygen species-dependent manner through up-regulation of p53 and Puma.     

Reactive oxygen species up-regulate p53 and Puma; a possible mechanism for apoptosis during combined treatment with TRAIL and wogonin

Background and purpose:

Tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) triggers apoptotic death in a variety of cancer cells without marked toxicity to most normal cells. We previously reported that wogonin, a potent anticancer agent from a Chinese herb, up-regulates p53 in prostate cancer cells. In this study, the effects of combinations of TRAIL and wogonin on a human prostate cancer cell line LNCaP, resistant to TRAIL, was evaluated for evidence of synergy in triggering apoptosis.

Experimental approach:

Western blot assay and the ‘comet’ assay were used to study the underlying mechanisms of cell death and search for any mechanisms of enhancement of TRAIL-induced apoptosis in the presence of wogonin.

Key results:

During combined treatment with wogonin and TRAIL, cytotoxicity, poly(ADP-ribose) polymerase cleavage and caspase activation were associated with up-regulation of p53 through DNA damage and reactive oxygen species (ROS) generation. N-acetylcysteine (NAC), an antioxidant, inhibited ROS generation and synergistic interaction between TRAIL and wogonin. Experimental results in human colon cancer HCT116 cells demonstrated that p53-dependent Puma up-regulation played an important role; deficiency in either p53 or Puma prevented wogonin-enhanced TRAIL-induced apoptosis.

Conclusions and implications:

The present studies suggest that wogonin enhances TRAIL-induced cytotoxicity through up-regulation of p53 and Puma, mediated by ROS.     

辽东葱木皂苷体内外抗肿瘤作用的实验研究

目的通过体内外抗肿瘤实验观察辽东葱木皂苷的抗肿瘤作用.方法:在小鼠异体移植性S180肿瘤模型上观察辽东葱木皂苷的抗肿瘤作用,同时用MTT比色法检测辽东葱木皂苷对腺癌A549和喉癌Hep2细胞株的体外细胞毒作用.结果:辽东葱木皂苷对荷S180小鼠肿瘤生长有明显抑制作用,高、中、低剂量组抑瘤率分别是70.31%,47.23%,41.31%;而且能明显抑制体外培养的肿瘤细胞的生长,对两种细胞有明显的细胞毒效应,其IC50分别是0.0155 mg/ml和0.0246mg/ml;结论:辽东葱木皂苷具有一定的体内外抗肿瘤活性.