花椒及其混淆品的rDNA ITS区序列分析与鉴别

目的研究不同居群的花椒及其混淆品的rDNA ITS区碱基序列的特征及其差异，为花椒的鉴别提供可靠的分子标记。方法运用PCR产物直接测序和克隆测序法对甘肃、陕西、四川、河北等7个花椒居群及3个混淆种的rDNA ITS区(包括ITS1，5.8S，ITS2)碱基序列进行序列测定。结果首次报道花椒ITS区的碱基序列，序列总长度为619-620 bp，长度变异较少，与混淆种长度仅相差4 bp。花椒各居群中，rDNA ITS区碱基序列有15个变异位点、12个信息位点、3个特异性识别位点。与混淆品间的碱基差异则较为显著，多达71个变异位点，有4个花椒特异性识别位点。结论依据花椒ITS区的序列特征可准确鉴别各居群的花椒及其混淆品；亲缘关系密切的花椒居群在地理位置上也非常靠近；rDNA ITS序列特征可作为花椒种内和种间鉴别的有效分子标记。     

基于DNA条形码和PCR-RFLP技术的进口紫草ITS2序列特征研究

目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技术比较不同来源进口紫草的ITS2序列与紫草对照药材的异同。结果:39份进口紫草样品经限制性内切酶AluI酶切后,其产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,仅DH3在500 bp左右有条带,而在100～300 bp无条带,其余样品均在100～300 bp有2条或3条明显条带;进口紫草样品与紫草对照药材的ITS2序列进行比对,其中样品DH3与紫草对照药材的碱基差异最多,有15个碱基差异,样品F2与紫草对照药材的ITS2序列一致,其他进口紫草样品与紫草对照药材的碱基差异为1～9个碱基;从聚类结果中可以看出进口紫草样品DH3与其他进口紫草样品和紫草对照药材均明显区分,独自为一枝,而与紫草对照药材共同聚为一枝且支持率≥50%的样品共有14个。结论:选用ITS2区域,基于DNA条形码和PCR-RFLP技术,比较了进口紫草与紫草对照药材ITS2序列的异同,为...     

6种红树林植物的ITS2条码鉴定

摘要：目的 研究红树林植物红树、拉关木、秋茄树、海桑、玉蕊、阔苞菊的ITS2（DNA内转录间隔区2,internal transcribed spacer 2）条码鉴定方法,为红树植物药用价值的开发和优良种质资源的引进提供鉴定基础。方法 对样本进行DNA提取、PCR扩增和双向测序。用CodonCode Aligner软件进行序列拼接,通过MEGA5.1软件比较各序列间的变异性,计算遗传距离;采用邻接法构建NJ(近邻结合法,Neighbor-Joining)系统树及采用ITS2 数据库模拟各植物的二级结构。结果 6种红树林植物的ITS2序列间存在明显变异,这种差异不仅体现在序列的碱基种类和数量上,更体现在ITS2序列遗传变异和二级结构上。结论 ITS2序列可准确有效地鉴别不同红树植物。     

蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究

以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordyceps sinensis)新鲜子实体为材料，采用分子生物学方法，以rDNA-ITS序列为分子标记，对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨。以真菌通用引物ITS1/ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增，获得的片段克隆到pMD18-T Vector上进行测序，结果表明，随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(Hirsutella sinensis) 或冬虫夏草的rDNA-ITS序列的一致性均在99%以上，但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列的一致性约为72%。根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列设计了两对特异引物，分别以不同产地及不同生长时期共4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板，进行PCR及巢式PCR扩增，均得到了相应片段，该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列具有100%的一致性。在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA-ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA-ITS序列一致性仅为87.3%，但根据AB067740序列设计特异引物，也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列。研究结果表明，在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外，还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌。     

5SrRNA基因间隔区DNA序列在穿心莲道地性中的可行性研究

目的探讨5SrRNA基因间隔区DNA序列在穿心莲道地性研究中的可行性。方法提取不同产地穿心莲总DNA后,PCR特异扩增5SrRNA基因间隔区,采用荧光标记末端终止子双脱氧末端终止法测序,对测序结果进行多序列联配分析。结果成功得到321bp的5SrRNA基因间隔区碱基序列,经过多序列联配分析发现,不同产地穿心莲的此段5SrRNA基因间隔区DNA序列之间没有差异。结论5SrRNA基因间隔区DNA序列不适合用于研究穿心莲药材的道地性。     

中国不同地区蛇床的rDNA ITS序列分析

目的：探讨不同分布区的蛇床Cnidium monnieri的ITS序列变异与其地理分布和化学成分的相关性。方法：设计2对引物,Pf+Pb及P5.8S ITS1+P5.8S ITS2,PCR扩增产物纯化后用银染法或ABI 310测序。结果：得到核糖体DNA中的ITS及5.8S rDNA完全序列,18S和26S rDNA部分序列,共约700 bp。5个地点样品的ITS-1及ITS-2的序列大小分别为210～217 bp和219～224 bp。ITS-1碱基序列的遗传距离0.00～1.93%,ITS-2碱基序列的遗传距离0.46～2.34%,ITS-1较为保守。以NJ法根据ITS-2序列数据重建系统发生树。哈尔滨样品聚为一组,衡水与德州样品和郑州与高淳样品各自聚为一组。结论：ITS-2序列的变异与中国产蛇床的纬度分布相关,而其与蛇床化学型的关系尚需作进一步研究。     

葛根超微饮片ITS序列指纹图谱的研究

目的探求葛根超微饮片的品种鉴别方法。方法以来自不同产地的4个野葛样品和10个粉葛样品制成的超微饮片为实验材料，用分子克隆方法获得并测定其ITS序列。结果标记它们的ITS1，5．8S，ITS2的全长序列，构建了葛根的ITS序列指纹图谱，通过分析比较，发现葛根属中野葛之间，野葛和粉葛之间有显著差异；粉葛之间的差异较小。野葛序列总的同一性为80．74％，长度差异可达20bp，但可分为2个同一性为99．7％以上的组，提示来源可能为2个种。野葛和粉葛序列总的同一性为62％，最大长度差异可达180bp。粉葛之间序列的同一性为98％以上，长度差异仅有4bp。结论以ITS序列测定与分析作为葛根超微饮片品种鉴定和质量控制标准是完全可行的。     

枸杞属植物nrDNA ITS致同进化不完全

为探讨枸杞属(Lycium) nrDNA ITS序列致同进化不完全现象及假基因问题,本研究以cDNA ITS为参照,对枸杞属栽培品种的ITS进行测序。综合GenBank数据库获取的44条枸杞属ITS序列进行分析。考察碱基变异、GC含量、5.8S保守基序、二级结构最小自由能、进化模式及系统发育关系等对枸杞属的ITS多态性和假基因进行鉴定。结果表明,枸杞属植物内存在明显的ITS多态性,植物种间及个体内存在致同进化不完全现象, 144条序列中共83条序列被鉴定为假基因序列。本研究首次对枸杞属ITS多态性和假基因进行了较为系统地检验,阐述了枸杞属ITS假基因特性,评估了假基因对枸杞属系统进化的影响。为ITS序列用于枸杞属种质资源研究和DNA条形码鉴别研究等提供了参考。     

中药黄草石斛rDNA ITS序列分析

目的　研究黄草石斛ITS片段遗传多样性,分析该片段在黄草药材DNA分子鉴别和石斛属植物系统学研究中的意义。方法　用一对引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后用双脱氧终止法(Sangerdideoxy)测序。结果　获得核糖体DNA中ITS和5 8SrDNA完整序列,14个石斛类群的ITS 1与ITS 2序列的长度分别为228-233bp和242-247 bp。石斛种间ITS 1序列的差异百分率为11.79% - 31.58% ,ITS 2序列的差异百分率为10.29% - 25.30% ,金钗石斛种内ITS 1序列的差异百分率为0.87% ,ITS 2序列无差异。石斛各类群与外类群的差异百分率ITS 1序列为23.56% - 36.89% ,ITS 2序列为26.5.2 % - 33.31%。用NJ法根据ITS 1与ITS 2序列数据重建系统发生树。结论　两段序列在石斛种内保守,在种间有较大的差异,与外类群的差异最大,可作为中药黄草石斛分子鉴定的标记,而石斛属的系统发生关系尚须进一步研究     

紫苏属药用植物的rDNA ITS区SNP分子标记与位点特异性PCR鉴别

目的分析单种属——紫苏属各变种间rDNA ITS区的序列以及存在的单核苷酸多态性(SNP)现象，设计出位点特异性PCR引物，用于紫苏属各变种间的分子标记鉴别。方法对紫苏属各变种多个体的rDNA ITS区全序列进行了准确测定，运用Clustral X 1.8，MEGA 3.0进行排序并进行SNP分析，从而设计出鉴别各变种的等位基因位点特异性PCR鉴别引物。结果紫苏属各变种(紫苏、白苏、鸡冠苏和耳齿紫苏等)的rDNA ITS区全序列共有615～618 bp的长度，ITS1为233～235 bp，5.8S为179 bp，ITS2为203～204 bp，GC含量为61.5%～61.9%。从rDNA ITS区碱基变异的整体情况来看，紫苏属各变种间不仅在非编码的转录间隔区ITS1和ITS2内存在非编码区单核苷酸多态性(ncSNP)，而且在保守的5.8S编码区内也存在3个位点的单核苷酸多态性，即编码区SNP(cSNP)，所有的SNP均只具2等位多态性。5.8S区cSNP的出现与产生该变异的变种出现的显著形态差异关联。本文还利用这些SNP位点设计出了鉴别紫苏属各变种的位点特异性PCR引物，无需测序即可对紫苏属的原植物及“苏子”、“苏叶”等药材进行有效准确的分子鉴别。结论紫苏属药用植物rDNA ITS区存在的SNP可用作紫苏属各变种鉴别的分子标记。     

蒺藜药材HPLC指纹图谱研究

目的采用高效液相法建立蒺藜药材的指纹图谱,以控制其质量。方法用反相高效液相色谱(RP-HPLC)-ELSD法测定蒺藜的指纹图谱,并根据向量夹角法计算相似度,进行比较分析。结果初步建立了蒺藜药材的指纹图谱。结论HPLC指纹图谱法重现性好,可作为控制蒺藜药材内在质量的标准。     

蒺藜果实的化学成分研究

目的研究蒺藜果实中的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等手段进行分离,根据理化性质及波谱数据鉴定结构。结果与结论从蒺藜果实的乙酸乙酯萃取液中分离得到7个已知成分,分别鉴定为棕榈酸单甘油酯（1）、琥珀酸（2）、香草酸（3）、3-羟基-豆甾-5-烯-7-酮（4）、4-ketopinoresinol（5）、蒺藜酰胺（6）、N-反式咖啡酰基对羟基苯乙胺（7）。化合物1-5为从该植物中首次分离得到。     

蒺藜总黄酮对大鼠血小板黏附和聚集功能的影响

目的:探讨蒺藜总黄酮对血小板黏附和聚集功能的影响。方法:选用不同药物浓度,采用体外血液灌流的方法,在低切变率下观察血小板在胶原蛋白表面上的黏附形态,计算黏附面积;利用血小板聚集仪,以二磷酸腺苷诱导大鼠血小板聚集,测定血小板最大聚集率。结果:不同浓度的蒺藜总黄酮均能明显降低血小板在胶原蛋白表面上的黏附面积(P<0.01),对照组血小板的黏附聚集成团,实验组则疏松散在或单个黏附;血小板最大聚集率在蒺藜总黄酮高、中剂量组也显著下降(P<0.01)。结论:蒺藜总黄酮具有显著抑制血小板黏附和聚集的作用。     

Tribulus terrestris for treatment of sexual dysfunction in women: randomized double-blind placebo - controlled study

Background

Tribulus terrestris as a herbal remedy has shown beneficial aphrodisiac effects in a number of animal and human experiments. This study was designed as a randomized double-blind placebo-controlled trial to assess the safety and efficacy of Tribulus terrestris in women with hypoactive sexual desire disorder during their fertile years. Sixty seven women with hypoactive sexual desire disorder were randomly assigned to Tribulus terrestris extract (7.5 mg/day) or placebo for 4 weeks. Desire, arousal, lubrication, orgasm, satisfaction, and pain were measured at baseline and after 4 weeks after the end of the treatment by using the Female Sexual Function Index (FSFI). Two groups were compared by repeated measurement ANOVA test.

Results

Thirty women in placebo group and thirty women in drug group completed the study. At the end of the fourth week, patients in the Tribulus terrestris group had experienced significant improvement in their total FSFI (p < 0.001), desire (p < 0.001), arousal (p = 0.037), lubrication (p < 0.001), satisfaction (p < 0.001) and pain (p = 0.041) domains of FSFI. Frequency of side effects was similar between the two groups.

Conclusions

Tribulus terrestris may safely and effectively improve desire in women with hypoactive sexual desire disorder. Further investigation of Tribulus terrestris in women is warranted.     

蒺藜挥发性成分的GC-MS分析

目的:为蒺藜的开发利用提供试验依据。方法:利用水蒸气蒸馏法提取蒺藜的挥发性成分,采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对挥发性成分进行分析,用峰面积归一化法测定各化学成分的质量分数。结果:共分离出64个化学成分,鉴别出其中54个,占挥发油总量的96.920%。主要成分有(E,E)-2,4-癸二烯醛(9.156%)、香芹烯(7.951%)、反式-茴香烯(7.625%)、肉桂酸乙酯(6.687%)、己醛(5.846%)、α-松油醇(4.457%)、科绕魏素(4.050%)、2-戊烷基-呋喃(3.529%)、(E)-2-庚烯醛(3.507%)、芳樟醇(3.312%)、2,4-癸二烯醛(3.058%)。结论:该试验可为蒺藜的综合利用提供科学依据。     

Molecular analysis of the genus Mitragyna existing in Thailand based on rDNA ITS sequences and its application to identify a narcotic species: Mitragyna speciosa

In Thailand, there are four Mitragyna species; M. speciosa, M. hirsuta, M. diversifolia, and M. rotundifolia. One, M. speciosa, is a narcotic plant and has medicinal importance for its opium-like effect. Since the use of M. speciosa has been forbidden in Thailand, the leaves of M. diversifolia or others are frequently used as substitutes but are not considered as effective. Therefore, accurate authentication of M. speciosa is essential for both medicinal and forensic purposes. The nucleotide sequences of internal transcribed spacers (ITS) and the 5.8S coding region of nuclear ribosomal DNA (rDNA) of the Mitragyna species were analyzed. The whole length of ITS1-5.8S-ITS2 region was 608 bp in M. speciosa, 607 bp in the other species. Nineteen sites of nucleotide substitutions and 3 sites of 1-bp indels were observed, and M. speciosa showed specific sequence differed from the others. Based on the ITS sequences, a distinctive site recognized by a restriction enzyme XmaI in M. speciosa was found and then PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis was established to differentiate M. speciosa from the others. By the method, a 409-bp PCR fragment of ITS1-5.8S (partial) rDNA region from M. speciosa was cleaved into two fragments of 119 bp and 290 bp while the other species remained undigested. This method provides an effective and accurate identification of M. speciosa.     

蒺藜果中两种新甾体皂苷的分离和鉴定

目的　研究蒺藜(Tribulus terrestris J.)果实的化学成分。方法　用各种色谱技术进行分离和纯化,用ESI/MS ,IR ,¹HNMR ,¹³CNMR ,DEPT ,¹H-¹H COSY ,¹H-¹³C COSY和HMBC等光谱技术鉴定结构。结果　从蒺藜果实中分得2个新甾体皂苷,经光谱鉴定化合物I为新海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡糖基 (1→2 )-β-D-吡喃葡糖基 (1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷,化合物II为新海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡糖基 (1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。结论　化合物I和II为新化合物,分别命名为蒺藜皂苷A和B。     

HPLC法测定蒺藜中总黄酮的含量

目的建立测定蒺藜中总黄酮含量的高效液相色谱法。方法以槲皮素、山柰素、异鼠李素为对照品,色谱条件:ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇:0.4磷酸(v/v)45∶55,检测波长为360 nm。结果槲皮素、山柰素、异鼠李素回收率试验的RSD分别为1.59%、0.98%、1.42%。结论本方法简便易行,适用于蒺藜总黄酮的含量测定。