自体CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的实验研究

目的:观察细胞因子活化的杀伤细胞(CIK细胞)治疗恶性实体瘤的疗效.方法:分离患者自体外周血单核细胞(PBMC),用γ-IFN、抗CD3单克隆抗体、IL-2、IL-1等细胞因子诱导激活,并大量扩增培养.制备成细胞因子活化的杀伤细胞(cytokin induced killer即CIK),应用该细胞治疗中晚期恶性肿瘤患者23例.结果:3例患者完全缓解,5例患者部分缓解,7例好转,7例病情稳定,1例进展,治疗总有效率为34.8%.23例患者治疗后生命质量明显提高.治疗过程中除2例患者出现发热外(体温38.5℃左右),其他无任何不良反应.结论:CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤疗效确切,副作用小,并能有效改善和提高患者的机体免疫功能.     

自体CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床研究

目的:观察自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)治疗晚期恶性肿瘤的临床疗效?方法:从50例晚期恶性肿瘤患者外周血分离单个核细胞,体外经IFN-γ?IL-2?CD3单抗和 IL-1α体外诱导产生CIK细胞?观察CIK细胞增殖,流式细胞术检测50例肿瘤患者CIK细胞治疗前?后免疫表型的变化,3H-TdR释放法检测杀伤活性的变化,观察CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床疗效?结果:CIK细胞的数量和杀伤活性10~16天达到高峰,培养第13天时CIK细胞比例达到30.2%±5.6%,CIK细胞的杀伤活性为62.5%±8.9%?CIK治疗后,CD3+?CD4+细胞百分率上升,CD8+细胞百分率下调,CD4+/CD8+比值上升,NK细胞百分率明显升高(P < 0.05),杀伤活性22.2%±4.8%明显升高达17.5%(P < 0.01)?可评价38例患者中,无完全缓解(CR),6例部分缓解(PR),缓解率为15.8%(6/38),疾病稳定率52.6%(20/38),疾病控制率68.4%,进展12例?Karnofsky评分提高率76%?不良反应轻微?结论:自体CIK细胞治疗能明显提高肿瘤患者细胞免疫功能,治疗晚期恶性肿瘤是一种安全?有效的治疗方法?     

不同来源细胞因子诱导的杀伤细胞体外杀伤作用比较

目的比较晚期恶性肿瘤患者自身来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与健康人来源的CIK细胞对肺癌细胞株A549杀伤作用的差异,初步探讨差异形成的机制,为临床应用健康人CIK细胞治疗恶性肿瘤提供理论依据。方法提取晚期恶性肿瘤患者及健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入细胞因子诱导成CIK细胞,LDH释放法检测不同来源PBMC及CIK细胞对A549杀伤活性,流式细胞仪检测细胞表型及NK细胞活化受体(NKG2D)表达水平,ELISA法检测患者及健康人血浆游离MHCⅠ类相关链A分子(sMICA)水平。结果健康人来源的CIK细胞各亚群有更高的NKG2D受体表达,而血浆游离MICA浓度较晚期恶性肿瘤患者低,表现出更有效的抗肿瘤作用。结论健康人CIK细胞治疗恶性肿瘤有良好的应用前景。     

自体细胞因子诱导的杀伤细胞治疗急性B淋巴细胞白血病22例临床观察

目的：观察自体细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer，简称CIK)治疗急性B淋巴细胞白血病(B—ALL)的效果。方法：用血细胞分离机采集患者的单个核细胞(PBMNC)，再用抗CD3单抗(MabCD3)、白细胞介素2(IL2)、干扰素γ(IFNγ)培养10d，经洗涤后分两次回输给患者。结果：22例接受CIK治疗的B—ALL完全缓解率(CCR)为78％，中位生存期为24月。其中7例骨髓存在残留异常基因或异常染色体的患者经CIK治疗2—3疗程后有6例消失。结论：自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗急性B淋巴细胞白血病(B—ALL)疗效显著，可清除微小残留白血病，防止复发。     

自体CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的研究

目的：观察细胞因子杀伤细胞（cytokine induced killer,CIK）治疗恶性肿瘤的疗效。方法：分离患者自体外周血单个核细胞,体外诱导CIK细胞,应用该细胞治疗中晚期恶性肿瘤患者28例。观察CIK细胞培养前后细胞表型情况,疗效和生活质量评定。结果：CIK细胞培养后可见CD3、CD8和CD3、CD56细胞较培养前显著增加。4例患者完全缓解,5例患者部分缓解,9例好转,8例病情稳定,2例进展,治疗有效率32.14%。28例患者治疗后生活质量明显提高,均无明显不良反应出现。结论：自体CIK细胞过继性免疫治疗恶性肿瘤效果确切,副作用小,可有效改善和提高患者机体免疫功能。     

CIK与DC细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤

目的 研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC)联合治疗晚期肿瘤. 方法 从外周血分离单个核细胞,体外经GM-CSF和白细胞介素4(IL-4)诱导产生DC细胞,淋巴细胞经干扰素γ(IFN-γ)、IL-2、CD3单抗和IL-1α体外诱导产生CIK细胞,采用流式细胞术检测CIK的表型,并回输患者进行治疗,至少接受3次治疗. 结果 82例可评价病灶的患者中,3例完全缓解(CR),7例部分缓解(PR);31例不可评价病灶的患者中,7例患者胸腹水消失,与治疗前相比,治疗后患者CD3 和 CD8 明显升高(P＜0.05). 结论 CIK细胞治疗晚期恶性实体瘤有一定的临床疗效,为该类患者的治疗提供一种有效的免疫治疗手段.     

细胞因子诱导的杀伤细胞在胃癌治疗中的作用及临床应用

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)被称为自然杀伤T细胞,其杀伤肿瘤的作用不受主要组织相容性复合体的限制,是过继细胞免疫治疗的代表类型。CIK细胞通过分泌细胞毒颗粒及细胞因子、调节癌基因表达、活化NKG2D受体等发挥抗肿瘤作用。CIK细胞联合化疗,不仅可以延长胃癌患者的无病生存期和总生存期,改善生活质量,而且不良反应少,治疗耐受性较好。虽然CIK细胞治疗已经广泛应用于临床,但仍有很多问题需要进一步探讨。     

206例自体细胞因子诱导的杀伤细胞治疗恶性肿瘤的临床疗效及安全性研究

目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)对恶性肿瘤患者的临床疗效及安全性,为临床提供依据。方法选取2013年5月至2016年12月在本院接受治疗的206例恶性肿瘤患者,予以回输自体CIK细胞治疗,对比治疗前后患者生存质量、免疫功能和不良反应。结果 2个周期的自体CIK细胞治疗后,恶性肿瘤患者的生存质量、免疫功能较治疗前显著改善,差异有统计学意义(P0.05);2人发生高热反应(38.5℃),对症处理后完全缓解,10人有一过性体温升高(37.4-37.6℃)。结论 CIK细胞治疗可以提高机体免疫力,改善生存质量,副作用小,是肿瘤传统治疗手段的有效补充。     

索拉菲尼联合细胞因子活化的杀伤细胞对肝癌的杀伤效应研究

目的 探讨索拉菲尼联合细胞因子活化的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)对肝癌细胞的体外杀伤效应.方法 取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-1、IL-2和抗CD_3单抗诱导CIK细胞成熟,流式细胞仪检测培养第1、7、14天的CIK细胞表型.Cell Counting Kit-8试剂盒(CCK-8)检测索拉菲尼、CIK细胞及两者联合对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应,并用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测肝癌细胞的凋亡率.结果 CIK细胞经多种细胞因子诱导培养后,CD_3+CD_(56)~+细胞比例明显上升,14d时CD_3~+CD_(56)~+ 细胞比例达(46.83±2.53)%,与第1天比差异有显著性(P<0.01),细胞量扩增了近1 000倍.索拉菲尼和CIK细胞在适当浓度及效靶比联合应用时表现出杀伤活性增强(P<0.01).索拉菲尼联合CIK细胞诱导的肝癌细胞BEL-7402凋亡率达(70.56±2.58)%,明显高于索拉菲尼组(45.38±1.76)%和CIK组(52.18±8.63)%(P<0.05).结论 索拉菲尼与细胞因子活化杀伤细胞疗法联合应用能明显增强对肝癌细胞的体外杀伤效应.     

CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床研究

目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期恶性肿瘤的临床疗效。方法收治42例无手术、放、化疗指征的晚期恶性肿瘤患者,将CIK细胞输注给患者,观察其近、远期疗效、不良反应,比较患者治疗前后外周血的T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+)分布、生活质量的变化。结果 42例患者均可评价疗效及不良反应。经CIK细胞治疗后客观缓解率为16.7%,CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+均有明显的升高,生活质量评分显著改善,中位无进展生存期(progression free survival,PFS)为8.1个月,中位生存期(overall survival,OS)为12.8个月,仅少数患者输注过程中出现发热,未见其他不良反应。结论应用CIK细胞输注治疗晚期恶性肿瘤可提高患者的细胞免疫功能,提高生活质量,延长生存期,且无明显不良反应,具有一定的临床使用价值。     

健康人和肿瘤患者CIK细胞的生物学特性

目的 比较健康人和肿瘤患者CIK（Cytokine—induced kiuer）细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性,以期为临床应用中效应细胞的选择提供提供实验数据。方法健康人和肿瘤患者外周血各10例,经密度梯度离心获得单个核细胞（PBMC）,以干扰素-γ、CD3MAb、IL-2和IL-1为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较两者的扩增速度。流式细胞杈检测比较两者细胞表型,MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。结果健康人外周血CIK细胞的扩增速度、对K562和LOVO细胞株杀伤活性均显著高于肿瘤患者外周血CIK细胞,（P〈0．01）;流式细胞仪检测显示健康人外周血CIK细胞CD3^＋CD56^＋百分比显著高于肿瘤患者外周血CIK细胞,（P〈0．01）。结论健康人较肿瘤患者外周血CIK细胞体外扩增快,CD3^＋CD56^＋比例高,杀伤活性强。为临床应用CIK细胞进行过继性免疫治疗提供了实验依据。     

CIK细胞治疗对晚期恶性肿瘤患者疗效研究

目的 观察自体CIK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤患者后,生活质量及相关指标的变化.方法 从患者外周血中分离出单个核细胞,加入IFN-γ、抗CD3单抗、IL-2等细胞因子,扩增后CIK细胞分4次回输患者体内,观察患者生活质量、毒副反应及相关指标的改变.结果 38例接受CIK治疗的患者疼痛缓解、体重增加、睡眠改善等明显,毒副反应轻微,差异有统计学意义(P﹤0.05),并且有效率(CR+PR+MR )为66%,肿瘤标记物下降,患者外周血中CD3、CD4 T细胞和NK细胞比例均显著提高(P﹤0.05).结论 自体CIK细胞过继性免疫疗法能显著提高肿瘤患者生活质量,改善临床症状,提高患者免疫功能,对晚期肿瘤病人有积极意义.     

恶性肿瘤患者自体CIK细胞的实验研究

目的通过比较CIK细胞和LAK细胞的增殖、表型和抗瘤效应,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供资料。方法取12例恶性肿瘤患者外周血,常规分离成单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导出LAK细胞和CIK细胞,观察两种细胞的增殖、表型和抗瘤效应。结果培养后12天,CIK细胞数量达原来的11.5倍,而LAK细胞数量只有原来的5.2倍;比较培养前后CIK细胞的表型,可发现CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+在培养后均有明显增高(P<0.05或0.001)。CIK细胞杀伤K562细胞和Raji细胞的能力均明显优于LAK细胞(P<0.05或0.001)。结论CIK细胞不仅具有强大的增殖功能,并且对不同的肿瘤细胞系显示出较LAK细胞更强的杀伤活性。因此,它是一种新型的过继免疫治疗方法。     

CIK细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIKcells）的体外扩增特性及其在抗肿瘤免疫治疗中的作用。方法通过提取健康供血者的PBMNC,培养诱导CIK细胞,显微镜下观察其扩增倍数、增殖速率,流式细胞仪分析细胞免疫表型,用MTT法观察其对K562细胞的体外杀伤效应,并通过流式细胞仪进一步分析30例实体瘤患者CIK细胞输注前后外周血免疫活性细胞表型的改变。结果经2周培养,CIK细胞平均增加了30倍,总数达（4.8～5.0）×109,活性细胞比例〉90%;体外杀伤率约50%,表型检测效应细胞CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋亚群比例显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。实体瘤患者CIK细胞输注后外周血中免疫活性细胞比例也明显升高,差异也有统计学意义（P〈0.05）。结论CIK细胞在体内外能明显抑制肿瘤生长,有效改善患者的免疫功能,为晚期肿瘤治疗提供了新的方法。     

应用自体肿瘤免疫细胞治疗中晚期肿瘤的意义

目的探讨树突状细胞（dendriticcells,DCs）和细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinducedkil—let,CIK）联合化疗治疗晚期实体瘤的临床意义。方法采用自体肿瘤免疫细胞治疗晚期实体瘤患者130例。分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子及白细胞介素4等诱导产生DCs,并用自体肿瘤细胞或外源性肿瘤细胞抗原致敏,获得Ag．DCs;悬浮细胞经干扰素-γ,IL2和CD3单克隆抗体（CD3 monoclonal antibody,CD3mAb）等诱导产生CIK细胞,将DCs与CIK细胞共同培养;采用FCM法检测DCs及CIK细胞表型,一次回输患者。结果130例中晚期肿瘤自体肿瘤免疫细胞联合化疗治疗后,完全缓解（CR）5例,部分缓解（PR）19例,稳定（SD）87例,疾病进展（PD）13例,6例晚期肿瘤进展死亡,疾病控制率85．38％。结论DCs—CIK细胞联合化疗治疗中晚期恶性实体瘤安全有效,具有重要的临床意义和应用前景。     

CIK细胞免疫疗法联合化疗治疗非小细胞肺癌的临床疗效

  目的   评价化疗联合CIK（cytokine-induced killer）细胞免疫疗法对非小细胞肺癌NSCLC早期、晚期患者的临床疗效。   方法   收集2013年1月至2016年12月昆明医科大学第三附属医院收治NSCLC患者122例为研究对象,按患者病程分为Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期,将其随机分入4个受试组:化疗A组（n = 30）,联合CIK A组（n = 31）,化疗B组（n = 30）,联合CIK B组（n = 31）。其中,受试组采用化疗方法均为吉西他滨联合顺铂治疗（GP）。评价患者临床疗效、生存质量和外周血淋巴细胞和细胞因子变化。   结果   与化疗组比较,联合CIK治疗组显著提高ORR值和DCR值,分别是（67.74%,45.16%）和（74.19%,64.52%）（P < 0.05）;提高KPS评分和ECOG评分,分别是（80.65%,58.06%）和（80.65%,70.97%）（ P < 0.05）;提高患者外周血中CD3 +、CD8+淋巴细胞亚群比率及CIK细胞比率（P < 0.05）;提高患者外周血中IFN-γ,TNF-α、IL-4、IL-6细胞因子表达水平（ P < 0.05）;延长患者生存期（ P < 0.05）。与联合CIK A组（Ⅰ-Ⅱ期）比较,联合CIK B组（Ⅲ-Ⅳ期）患者外周血中CD3 +、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞比率、CIK细胞比率均显著提高（P < 0.05）,维持和调控增强外周血中IFN-γ,TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6细胞因子表达水平（ P < 0.05）。   结论   化疗联合CIK细胞治疗能显著提高不同阶段NSCLC患者临床疗效、延长生存期、提高近期生存质量,提高化疗期患者体内免疫细胞持续对抗肿瘤的细胞毒性和免疫应答能力,尤其对晚期患者的疗效更佳。      

CIK细胞免疫治疗对转移性肾细胞癌患者免疫功能的影响

目的：观察CIK细胞免疫治疗对转移性肾癌患者免疫功能的影响。方法选取2010-2012年收治的转移性肾癌患者,在常规治疗措施的基础上联合应用CIK细胞免疫方法进行临床治疗,治疗3个疗程后,监测治疗前后CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋比值等免疫功能指标,进行统计学分析。结果治疗后患者外周血中CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平优于治疗前（P〈0.055）。结论采用悦陨运细胞免疫治疗能有效提高转移性肾癌患者的免疫功能。     

Cytokine-induced killer cells showing multidrug resistance and remaining cytotoxic activity to tumor cells after transfected with mdr1 cDNA

Background Routine treatment of cancer such as surgery, radiation or chemotherapy is sometimes unable to erdiacate metastatic malignant cells. So we tried a new method and increased the adoptive immunotherapy of Cytokine-induced killer (CIK) cells in tumor patients and the multidrug resistance (mdrl) cDNA was transfected into CIK cells. Methods CIK cells were obtained from peripheral blood and induced by IFN-γ, anti-CD3 monoclonal antibody, IL-2 and IL-1. CIK cells were transfected with plasmid PHaMDR containing human mdrl cDNA by electroporation. RT-PCR was used to detect mdrl mRNA in transfected CIK cells. P-glycoprotein (P-gp) expressed on surface of CIK cells was assayed by FITC-conjugated anti-P-gp monoclonal antibody and flow cytometry. Multidrug resistance to doxorubicin and colchicine and cytotoxic activity to human breast cancer cell line MCF7 were performed using MTT method. Results mdrl mRNA was detected in transfected CIK cells. P-gp was expressed on the surface of the transfected CIK cells, and the P-gp positive cells reached 21%-37% of the total CIK cells after transfection. The IC50 to doxorubicin increased to 22.3-45.8 times, and that to colchicines to 6.7-11.35 times, as compared to those of untransfected CIK cells. However, the cytotoxic activity to MCF7 cell line remained unaltered. Conclusions CIK cells were successfully transfected with mdrl cDNA by using electroporation. The transfected CIK cells had the characteristics of multidrug resistance without change in their cytotoxic activity to tumor cells.     

IL-24联合CIK细胞体外杀伤黑色素瘤A375细胞的研究

目的 探讨重组人IL-24联合CIK细胞体外杀伤黑色素瘤A375细胞的效果及其相关作用机制.方法 从黑色素瘤患者外周血分离外周血单个核细胞（PBMC）,通过IFN-γ、IL-2、IL-1α、CD3 McAb诱导培养获得CIK细胞.流式细胞仪检测CIK细胞免疫表型,LDH释放法检测IL-24联合CIK细胞对黑色素瘤A375细胞的杀伤效果.进一步通过检测CIK细胞NKG2D、穿孔素表达和IFN-γ分泌情况,以及A375细胞表面MICA/B的表达水平的,分析IL-24联合CIK细胞对A375细胞杀伤作用机制.结果 流式细胞仪检测结果示CIK细胞中主要效应细胞CD3＋ CD8＋双阳性细胞占（53.0±4.6）％、CD3＋ CD56＋双阳性细胞占（21.5±5.2）％.LDH释放法检测结果示IL-24联合CIK细胞对黑色素瘤A375细胞的杀伤作用最强,20∶1的效靶比时杀伤率达55％.IL-24与CIK细胞联合作用后,CIK细胞表达NKG2D和穿孔素水平提高,IFN-γ的分泌增多;同时IL-24能够提高A375细胞MICA/B的表达.结论 IL-24和CIK细胞联合作用明显增强了CIK细胞对黑色素瘤A375细胞的杀伤能力,其作用机制与IL-24促进CIK细胞分泌IFN-γ和上调NKG2D和穿孔素表达、同时上调A375细胞MICA/B的表达等密切相关。