5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

 [摘要] 目的 研究5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导结肠癌细胞HCT116凋亡与核转录因子-κB (NF-κB) 活化以及uPA表达的关系，并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）抑制NF-κB活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响。方法 采用流式细胞仪Annexin Ⅴ-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化。结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-κB活化，1umol/LPDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P<0.05), uPA变化与NF-κB一致。结论5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κB，uPA表达亦随之增强；PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用，uPA表达也相应下降     

5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导人结肠癌细胞(HCT116)凋亡与核转录因子-κ B(NF-κ B)活化以及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的关系,并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)抑制NF-κ B活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响.方法 采用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化.结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-кB活化,1μmol/L PDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P＜0.05),uPA变化与NF-κB一致.结论 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κ B,uPA表达亦随之增强;PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT16细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用,uPA表达也相应下降.     

CDX2基因通过NF-κB信号通路抑制结肠癌细胞增殖

目的 观察过表达CDX2基因对人结肠癌细胞株增殖影响,并初步探讨其作用机制。方法 通过基因转染技术将CDX2基因转染入结肠癌HT-29细胞株,经G418筛选后获得稳定转染细胞株,RT-PCR和Western blot检测CDX2基因表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。Western blot检测CDX2过表达对HT-29细胞内Cyclin D1和NF-κB磷酸化水平的影响。结果 经脂质体转染和筛选,建立了稳定过表达CDX2人结肠癌HT-29细胞株。转染CDX2组与未转染组和空白质粒组相比,细胞的生长速度减慢(P＜0.05),细胞周期中G₁/G₀期比例增加(P＜0.05),而S期比例则减少(P＜0.05);与未转染组和空白质粒组比较,转染CDX2基因组HT-29细胞的Cyclin D1和p-NF-κB活性明显降低。结论 CDX2基因可能通过抑制NF-κB通路抑制Cyclin D1活性,从而抑制人结肠癌HT-29细胞增殖。     

结肠癌HT-29细胞中PIDD蛋白的表达及其对细胞耐药性的影响

目的:以结肠癌HT-29细胞株为载体,研究PIDD(p53-induced protein with a death domain)蛋白在结肠癌耐药中的作用机制.方法:构建并转染PIDD基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,用Western印迹法检测其干扰效果.通过MTT比色法检测细胞对化疗药物的敏感性,并用凝胶阻滞分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)法检测核因子NF-κB活性的变化.结果:RNA干扰后给予细胞药物刺激,细胞核中PIDD表达下降,核因子NF-κB活性明显降低,细胞耐药性下降.结论:转染siRNA后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)的敏感性增加,此作用可能与细胞核PIDD复合体减少、核因子NF-κB活性减低及细胞凋亡增多有关.     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

青蒿不同溶剂萃取粗提物对结肠癌HT-29、LoVo细胞NF-κB活性的影响

目的:通过比较不同溶剂萃取青蒿的粗提物对结肠癌HT-29和LoVo细胞的核因子κB(NF-κB)活性的影响,寻找青蒿中对结肠癌细胞NF-κB活性有作用的萃取相.方法:分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇对青蒿水煎液进行萃取,并将萃取得到的粗提物分别处理结肠癌HT-29细胞和LoVo细胞,提取核蛋白后采用凝胶阻滞分析(EMSA)方法对NF-κB活性进行测定.结果:青蒿水煎液氯仿萃取相对HT-29细胞和LoVo细胞的NF-κB活性表达均有明显的抑制作用(P＜0.05),其它各萃取相对两种细胞NF-κB活性的影响与对照组比较无明显差异.结论:在不同溶剂萃取青蒿水煎液中,氯仿萃取相粗提物对结肠癌HT-29细胞和LoVo细胞的NF-κB活性具有抑制作用.     

NF-κB抑制对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性影响的观察

目的:探讨抑制核转录因子κB(NF-κB)表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响。方法:通过对HeLa细胞加入NF-κB的抑制剂100μmol/LPDTC或2μmol/L PS-341,均作用2 h来抑制NF-κB的表达。将HeLa细胞分为PDTC组、PS-341组及对照组加入等量生理盐水。各组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4和6 Gy。用蛋白质印迹法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法检测细胞增殖。结果:辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC及PS-341均可以抑制由射线介导NF-κB的增加。在0 Gy条件下对照组与PDTC组及PS-341组HeLa细胞的凋亡指数分别为3%、12%和15%,两实验组的凋亡指数均高于对照组,P<0.01;6 Gy条件下实验组细胞的凋亡指数都高于同条件下对照组,P<0.01。结论:在宫颈癌HeLa细胞中,PDTC及PS-341均可抑制NF-κB的表达从而增加了由射线介导的细胞凋亡,增加HeLa细胞的放疗敏感性。     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

乙肝病毒X蛋白对不同肝细胞系凋亡的诱导作用

目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)通过核转录因子NF-κB信号通路对不同肝细胞系凋亡的诱导作用。方法:建立稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的人正常肝细胞系L02(L02/HBX)和人肝癌细胞系HepG2(HepG2/HBX),用特异性NF-κB阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)阻断NF-κB信号通路,流式细胞术检测PEGFP-N1-HBX转染前后及加入PDTC前后L02和HepG2细胞的细胞周期与凋亡,Western blotting检测NF-κB的表达。结果:成功构建了稳定转染PEGFP-N1-HBX的L02/HBX和HepG2/HBX细胞。与对照组L02细胞相比,L02/HBX细胞凋亡率明显增加[(31.31±0.51)%vs(14.05±0.09)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著增加,S期和G2/M期细胞比例减少。与对照组HepG2细胞相比,HepG2/HBX细胞凋亡率显著降低[(1.21±0.04)%vs(10.26±0.10)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著减少,S期和G2/M期细胞比例增加。PDTC作用后,L02/HBX/PDTC组凋亡率[(40.33±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较L02/HBX组显著增加,G2/M期细胞比例明显减少,而HepG2/HBX/PDTC组凋亡率[(5.45±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较HepG2/HBX组显著增加,S期和G2/M期细胞比例明显减少,但其凋亡率仍低于对照HepG2细胞。West-ern blotting结果显示,L02/HBX细胞NF-κB表达显著下调,而HepG2/HBX细胞NF-κB表达显著增加,L02/HBX/PDTC和HepG2/HBX/PDTC细胞NF-κB几乎不表达。结论:HBX可下调正常肝细胞L02 NF-κB蛋白的表达,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡;而HBX可增加肝癌细胞系HepG2中NF-κB蛋白的表达,加速细胞周期,抑制肝癌细胞凋亡。     

NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用

目的　探讨NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂(FASI)诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用。方法　FASI—浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株,四唑盐比色试验(MTT法)、片断DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及荧光染色(AO/EB)等方法检测细胞调亡,用凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测NF-κB活性。结果　LoVo细胞在FASI作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡。FASI对人成纤维细胞增殖无明显影响。NF-κB在不同浓度浅蓝菌素(10-9～10-5)处理LoVo细胞12h后,可抑制NF-κB活性,其抑制程度呈剂量依赖性递减。结论FASI可能通过抑制LoVo细胞内源性脂肪酸合成,诱发细胞凋亡来阻遏LoVo的增殖。NF-κB可能参与FASI诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的信号转导。     

NGX6对结肠癌细胞系HT-29基因表达谱的影响

背景与目的:结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制仍未完全明了。本研究在前期工作的基础上探讨候选抑瘤基因NGX6对结肠癌细胞系HT-29基因表达谱的影响。方法:通过脂质体介导的基因转染构建稳定表达NGX6的结肠癌细胞系pcDNA3.1( )/NGX6/HT-29,以NGX6转染组为实验组,空白质粒转染组为对照组,利用高通量的表达谱芯片BiostarH-80sx1筛选差异表达基因,RT-PCR验证部分基因芯片的实验结果。结果:NGX6基因转染结肠癌细胞系HT-29后引起该细胞系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异3倍以上的基因共377个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面,包括细胞信号转导﹑细胞周期调控﹑细胞凋亡﹑细胞骨架和运动﹑基因转录和翻译、DNA损伤修复﹑蛋白质合成和代谢等。其中包括一些非常重要的信号转导通路上的分子改变,如Wnt/β-catenin信号通路上的DKK1、ILK、MMP1、COL11A1,ILK信号通路上的ILK,Eph-Ephrins信号通路上的EpHB2,RhoA信号通路上的ROCK2,RanGTPase信号通路上的RANBP1,以及RB/RBBP1信号通路上的RBBP1等。结论:NGX6转染引起了一些非常重要的信号转导通路上的分子改变,可能通过参与调节这些信号转导通路而发挥其抗肿瘤增殖和转移的作用。     

地塞米松诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨地塞米松（Ｄｅｘ）体外抑制结肠癌细胞株的增殖并诱导其凋亡的作用机制。方法：采用ＭＴＴ及流式细胞仪检测细胞增殖抑制及凋亡,ＲＴ-ＰＣＲ检测ＧＲ、ＩκＢ及Ｂcl-２的表达改变,凝胶迁移或电泳迁移率实验（ＥＭＳＡ）检测Ｄｅｘ作用过程中的ＮＦ-κＢ活性改变。结果：Ｄｅｘ体外作用后,对４种结肠癌细胞株ＬｏＶｏ、ＨＣＴ-１１６、ＨＴ-２９及ＳＷ-４８０均有抑制作用,ＬｏＶｏ和ＨＣＴ-１１６细胞作用最显著。流式细胞仪检测显示,Ｄｅｘ（１×１０^-4mol/L）诱导７２ｈ后,在ＬｏＶｏ和ＨＣＴ-１１６细胞检测到细胞凋亡和坏死峰,明显高于未加Ｄｅｘ的对照组,具有显著性差异。ＲＴ ＰＣＲ检测显示Ｄｅｘ作用后ＧＲα、ＩκＢ表达升高,Ｂｃｌ-２无明显改变,ＥＭＳＡ结果也显示ＮＦ-κＢ活性明显降低。结论：地塞米松可能通过上调ＧＲα、ＩκＢ表达,抑制ＮＦ-κＢ活性来抑制ＬｏＶｏ细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

那可丁对人结肠癌5-Fu耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu耐药性的影响

目的 探讨那可丁（Nos）对人结肠癌5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药株耐药性的影响及其机制。方法 构建人结肠癌耐药株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu，MTT法筛选出Nos对各组细胞的半数抑制浓度（IC50），观察细胞形态变化，利用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平；RT-qPCR及Western blot检测细胞P38表达和激活水平，以及耐药相关蛋白的表达。结果 成功构建耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu和SW480/5-Fu。与对照组比较，Nos干预后的结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu细胞周期明显阻滞在G₀/G₁期（P<0.01），凋亡率升高，而P38表达及磷酸化受到显著抑制（P<0.01），与耐药相关的多药耐药相关蛋白、肺耐药相关蛋白及P-glycoprotein表达显著降低（P<0.01）。结论 Nos对耐5-Fu的人结肠癌细胞具有一定的毒性作用，降低了耐药细胞耐药性，作用机制可能与抑制P38的表达和磷酸化有关。     

常用化疗药物对大肠癌细胞系PTEN蛋白表达的影响

目的　探讨常用化疗药物对大肠癌细胞系PTEN蛋白表达的调控作用。方法　采用WesternBlot法 ,检测氟脲嘧啶( 5 Fu)、丝裂霉素及顺铂作用于大肠癌细胞HT 2 96h及 2 4h后PTEN蛋白表达情况。结果　 3种药物作用 6h后 ,与对照组比较 ,PTEN表达量均呈不同程度增高 ,其中以顺铂的上升幅度最大 ,为对照组的 2 .16倍 ,5 Fu为对照组的 1.2 1倍 ,丝裂霉素为对照组的 1.5 0倍。作用 2 4h后 ,PTEN表达量顺铂为对照组的 3 .5 3倍 ,5 Fu为对照组的 1.68倍 ,丝裂霉素为对照组的 2 .2 1倍。且用上述药物作用 6h后 ,大肠癌细胞的生长速度较对照组明显减慢。结论　常用化疗药物可通过上调癌细胞中PTEN表达量来实现其抗癌作用     

食管小细胞癌中Survivin、NF-κB、VEGF-C 的表达及其与MVD、MLVD的相关性

 目的 探讨食管小细胞癌中Survivin、NF-κB和VEGF-C的表达与MVD、MLVD 之间的关系及其肿瘤生物学意义。方法 采用免疫组织化学二步法检测34例食管小细胞癌中Survivin、NF-κB、VEGF-C的表达情况，并对微血管密度（MVD）和微淋巴管密度（MLVD）计数。结果 Survivin、NF-κB、VEGF-C在食管小细胞癌中的表达率分别为35.29%、67.65%和79.41%。Survivin、MLVD与食管小细胞癌淋巴结转移和浸润深度均无关。VEGF-C、NF-κB、MVD与淋巴结转移密切相关，与浸润深度无关。NF κB、VEGF C阳性病例的MVD明显高于阴性表达的病例。结论 食管小细胞癌中VEGF-C、NF-κB、MVD均与淋巴结转移密切相关,在食管癌发生发展中起着重要作用，有可能成为临床生物治疗的参考指标。     

黄芩素对HT-29细胞增殖、迁移的影响及相关机制研究

目的 探讨黄芩素对结肠癌HT-29细胞增殖、迁移能力的影响。方法 MTT法观察黄芩素（5、10、20、40、80 μg／ml）对HT-29细胞的增殖抑制作用,Transwell试验评价黄芩素（80 μg／ml）对HT-29细胞迁移能力的抑制作用,Western blotting检测黄芩素（20、40 μg／ml）对HT-29细胞中信号转导与转录激活因子3（STAT3）、核因子（NF）-κB和p53蛋白表达的影响。同时以未加黄芩素为对照组。结果 与对照组比较,黄芩素对细胞增殖能力有抑制作用,增殖抑制率随浓度升高而增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）;黄芩素处理后的细胞迁移能力及STAT3和NF-κB蛋白水平均降低,p53蛋白水平升高,与对照组的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 黄芩素可显著抑制HT-29细胞的增殖、迁移能力,可能与上调细胞中p53、降低STAT3和NF-κB蛋白的表达有关。     

NF-κB抑制剂对卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的探讨NF—κB抑制剂（PDTC）对卡铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察了卡铂诱导下卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB在细胞质和细胞核中的表达变化;采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,检测卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF—κB的活性;MTT和流式细胞仪分别检测2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率。结果NF—κB在卵巢癌SKOV3细胞质中表达,卡铂诱导12h后卵巢癌SKOV3细胞质中的NF—κB转移至细胞核。EMSA实验结果表明,卡铂诱导后的卵巢癌SKOV3细胞NF—κB的活性增强,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为6．7％、20．1％;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率为14．0％、32．7％,两者比较差异显著（P〈0．05）。结论卡铂能诱导NF—κB的活化,NF—κB的抑制剂可以增强卡铂诱导SKOV3细胞的凋亡,提高化疗疗效。