金钗石斛茎提取物联苄类化合物对人肝癌高侵袭转移细胞株FHCC-98增殖的抑制

目的:通过体外实验初步探讨从兰科植物石斛的茎中提取的单体化合物对人肝癌细胞株FHCC-98的细胞增殖抑制作用。方法:实验于2006-04/07在解放军第四军医大学细胞工程研究中心完成。采用噻唑蓝法筛选由金钗石斛提取分离的31种单体化合物,测定其在体外对人肝癌细胞株FHCC-98的生长抑制作用,以人正常肝细胞QSG7701为阴性对照。首先利用单浓度(100μmol/L)、单时间点(48h)对化合物进行初筛,其中有3个化合物符合要求,可以进行复筛,分别为玫瑰石斛素(Crepidatin)、鼓槌联苄(Chrysotobibenzyl)、4,4’-二羟基-3,3’,5-三甲氧基二苄(Moscatilin)。复筛采用多浓度点(100,50,25,12.5,6.25μmol/L)、单时间点(48h)对化合物检测细胞毒性(IC50)。IC50值>100表示无细胞毒性。结果:玫瑰石斛素、鼓槌联苄、4,4’-二羟基-3,3’,5-三甲氧基二苄3种化合物对人肝癌细胞株FHCC-98显示不同的增殖抑制作用(IC50值分别为74.30±0.98,56.60±0.92,8.68±0.95),其中化合物4,4’-二羟基-3,3’,5-三甲氧基二苄的作用尤为明显,而3种化合物对正常细胞QSG7701基本没有毒性(IC50值>100)。结论:从金钗石斛中提取的3种单体化合物对人肝癌高侵袭细胞株的增殖具有一定抑制作用。     

辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响

目的了解辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用MTT检测法,观察终浓度100-400μmol/L的辣椒素作用24、48 h对人结肠癌SW480细胞株生长作用的影响;采用流式细胞仪检测400μmol/L辣椒素作用人结肠癌SW480细胞株后其细胞周期变化和凋亡率。结果辣椒素能抑制结肠癌SW480细胞株增殖,呈浓度、时间依赖性。在400μmol/L辣椒素作用下,结肠癌SW480细胞株停滞于G0/G1期。辣椒素作用24、48 h,SW480细胞凋亡率升高（F=8.73、8.10,q=4.86-7.30,P〈0.01）。结论辣椒素抑制SW480细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能是阻滞细胞周期于G0/G1期。     

RNAi沉默ROCK-1基因抑制人视网膜母细胞瘤细胞株Y79的增殖、侵袭和转移

目的探讨利用RNA干扰技术(RNAi)沉默人视网膜母细胞瘤Y79细胞株ROCK-1基因对细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法实验设空白对照组、阴性脂质体组、实验组。转染后48 h,采用半定量RT-PCR检测ROCK-1、MMP9和CXCR4 mRNA的相对表达变化,采用Western blot检测ROCK-1、MMP9和CXCR4蛋白的表达变化。采用MTT法在转染后24 h、48 h、72 h分别检测细胞的生长情况。采用Transwell小室检测转染后细胞的侵袭和迁移能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞ROCK-1、MMP9和CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显下调;细胞生长活力显著下降、凋亡比率显著增加;基因沉默显著抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,差异均具有统计学意义。结论应用ROCK-1-siRNA转染人视网膜母细胞瘤Y79细胞株,可有效抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。小干扰RNA治疗有望成为人视网膜母细胞瘤靶向治疗的新手段。     

miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用

摘要：目的：观察miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响及可能的机制。 方法：miR-205 mimics转染SGC7901细胞后,观察其增殖能力;SYBR Green I实时荧光定量PCR检测miR205的表达水平;RT-PCR检测细胞ZEB1和ZEB2的基因表达水平。 结果：与空白对照组miR-205表达的相对水平（0.000 619±0.000）及阴性片段对照组（0.001 064±0.001）相比,miR-205 mimics处理组(0.027 33±0.014)miR205表达水平明显增高（q分别为5.77和5.67,P均<0.01）,而SGC7901细胞的克隆形成能力明显下降,ZEB1和ZEB2 mRNA明显下调。 结论：miR-205可抑制胃癌细胞增殖,其机制可能与下调ZEB1和ZEB2基因表达有关,对研究胃癌分子诊断与治疗具有重要意义。     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的 探讨下调微小核糖核酸（miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)法检测miR-572,第10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（HGC-27,AGS和SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株AGS细胞中加入miR-572 inhibitor后,CCK8检测细胞活力;Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例;qPCR检测miR-572,PTEN和AKT2的表达量。结果 miR-572和AKT2在胃癌细胞系HGC-27(6.97±1.62,4.98±1.34),AGS(7.21±1.32,5.39±1.14)和SGC-7901(5.97±1.44,4.02±1.02)中较正常胃黏膜上皮细胞GES-1表达升高（1.00±0...     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的:通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响,初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和BAX表达水平的影响。结果:MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点,细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡,免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达,下调Bcl-2基因表达。结论:粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响．初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用．以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bct-2和BAX表达水平的影响。结果：MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用。其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡，免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达．下调Bcl-2基因表达。结论：粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关     

银杏叶提取物对缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞增殖和迁移的影响

目的研究银杏叶提取物(EGB)对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞的增殖和抑制的影响,探讨其作用机制。方法 0、5、10、50、100 mmol/L的EGB分别作用于缺氧条件下RPE细胞24、48、72 h,CCK-8法检测RPE细胞的增殖抑制率;CCK-8法检测缺氧条件下RPE细胞的增殖情况;细胞划痕实验检测RPE细胞的迁移能力。结果不同浓度的EGB在不同时间对缺氧条件下RPE细胞的增殖抑制率不同,浓度为100 mmol/L的EGB在24、48、72 h对缺氧下RPE细胞的增殖抑制率作用分别为(71.10±27.13)%、(86.67±13.10)%、(97.02±11.35)%。在EGB浓度为100 mmol/L条件下与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01);在缺氧时间为72 h时EGB浓度分别为5、10、50、100 mmol/L,RPE细胞增殖抑制率分别为(58.00±26.77)%、(74.26±10.07)%、(74.47±20.41)%、(97.02±11.35)%。在作用时间为72 h条件下与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01);通过CCK-8法检测24、48、72 h缺氧组与对照组OD值差异均有统计学意义(分别为:t24 h=2.833,P<0.05;t48 h=2.576,P<0.05;t72 h=2.535,P<0.05),随缺氧时间增长,RPE细胞的增殖能力逐渐增强;在缺氧条件下EGB作用时细胞移行的速度比单纯缺氧时细胞移行速度明显减慢。结论 EGB可以有效地抑制缺氧条件下RPE细胞的增殖,并可抑制RPE细胞迁移,可能为增殖性玻璃体病变的研究和治疗提供一定的理论依据。     

RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响

背景：Delta—like4（DLL4）是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明抑制DLL4可导致过度无效的血管生成。目的：研究RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点：随机分组,对比观察,于2007—07／2008—09在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成。材料：人微血管内皮细胞由上海细胞生物和生物化学研究所提供。方法：设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamine^TM2000介导DLL4 siRNA转染人微血管内皮细胞。提取细胞总RNA,进行反转录一聚合酶链反应扩增,琼脂糖电泳检测DLL4mRNA。提取细胞总蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。采用四甲基偶氮唑盐法检测DLL4 siRNA对人微血管内皮细胞增殖的影响,实验分4组：①85nmol／LDLL4 siRNA—duplex组。②85nmol／LDLL4 siRNA-scrambled阴性对照组。⑧lepofectamine组。④未经处理组。主要观察指标：RNA干扰后,人微血管内皮细胞DLL4的转录和蛋白表达及人微血管内皮细胞的增殖。结果：反转录聚合酶链反应和Western blot实验结果显示,人微血管内皮细胞转录DLL4和表达DLL4蛋白;85nmoIILDLL4 siRNA完全抑制人微血管内皮细胞DLL4转录和DLL4蛋白的表达。DLL4sIRNA抑制人微血管内皮细胞DLL4表达的有效浓度为85nmol／L。四甲基偶氮唑盐实验结果显示,85nmol／LDLL4 siRNA-duplex组的细胞增殖率为190．00％,未经处理组的细胞增殖率为110．00％。结论：人微血管内皮细胞表达DLL4,DLL4 siRNA抑制人微血管内皮细胞表达DLL4并促进人微血管内皮细胞增殖,DLL4对人微血管内皮细胞增殖具有抑制作用。     

5-氟尿嘧啶联合热疗对人肝癌细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)联合热疗诱导人肝癌细胞株(SSMC7721细胞)的增殖抑制率,细胞凋亡率及其对细胞周期进程的影响,旨在为肝细胞癌的综合治疗提供理论依据.方法 应用MTT比色法检测不同条件下对SSMC7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,电子显微镜检测亚细胞结构改变.结果 单纯热疗组、5-FU组及联合组对SSMC7721细胞抑制率分别为18.4%、28.3%和52.7%,与对照组相比差异均有统计学意义(P均＜0.01).流式细胞仪结果显示:G1期细胞增多,S期细胞减少、G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),电子显微镜结果显示细胞核染色质趋边凝集、线粒体肿胀.结论 5-FU联合热疗能显著提高SSMC7721细胞的增殖抑制率,抑制SSMC7721细胞G1期向S期转化进程,诱导SSMC7721细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

抗钙调素抗体对细胞增殖抑制作用的研究

为探讨兔抗钙调素抗体（ＲＡＣａＭ）对细胞增殖作用的影响，将Ｋ５６２细胞接种于９６孔培养板，加入不同浓度兔抗钙调素抗体（ＲＡＣａＭ）、正常兔γ球蛋白（ＮＲ－γ）或重组人钙调素（ｒｅｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，ｒｈＣａＭ培养４８ｈ，用ＭＴＴ比色法检测细胞增殖状况。结果表明，兔抗ＣａＭ抗体可抑制细胞增殖，ＮＲ－γ则无此抑制效应，ｒｈＣａＭ可改善兔抗ＣａＭ抗体对细胞增殖的抑制作用。     

FH535抑制人肝癌细胞HepG2增殖及cyclin D表达

目的 探讨β-catenin抑制剂FH535对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响及可能机制.方法 HepG2细胞分为对照组和FH535用药组,使用改良3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法(MTS)检测FH535对HepG2细胞增殖的影响,以Western blot法检测HepG2细胞β-catenin以及cyclin D蛋白表达水平,用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测HepG2细胞cyclin D mRNA水平.结果 FH535能够显著抑制HepG2细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性.与对照组相比,FH535给药组HepG2细胞内β-catenin蛋白表达无差异.FH535给药组细胞wnt/β-catenin信号通路的靶基因cyclin D的mRNA和蛋白的表达显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.0001).结论 FH535通过抑制cyclin D mRNA及cyclin D蛋白表达而抑制HepG2细胞增殖.     

声动力学治疗对MDA-MB-231细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨超声辐照血卟啉单甲醚和声诺维对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖及侵袭能力的影响。方法 将对数生长期的MDA-MB-231细胞制成细胞悬液,加入HMME和SonoVue后用超声进行辐照。分3组：对照组,不接受治疗;辐照组1：输出声强0.3 W/cm²,辐照时间60 s;辐照组2：输出声强0.6 W/cm²,辐照时间30 s。采用MTS法绘制细胞生长曲线,平板克隆方法观察细胞形成克隆的能力,并用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果 对照组的生长曲线陡直,而辐照组的曲线平缓。接种2周后对照组出现肉眼可见的细胞克隆,而辐照组未出现。结晶紫染色后观察,辐照组仅可见由少许细胞聚集成的细胞团。接种后24 h、48 h观察,对照组、辐照组1、辐照组2穿越小室的细胞数分别为42.00±13.52、3.52±1.26、2.75±0.96（P<0.05）及104.25±12.61、36.25±3.40、28.75±4.99（P<0.05）。对照组穿越小室的细胞数显著高于辐照组（P<0.05）。结论 超声辐照联合HMME及SonoVue能有效抑制MB-231细胞增殖,降低细胞形成克隆的能力,并显著降低细胞的侵袭能力。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞细胞周期的阻滞作用及其机制探讨

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对白血病细胞系Kasnmi-1细胞周期的影响并探讨其分子机制.方法 不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,碘化丙锭染色流式细胞术分析细胞周期的变化.RT-PCR及Western blot方法 分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21 WAF1/CIP mRNA或蛋白水平变化.结果 ①VPA抑制Kasumi-1细胞的细胞周期,使其阻滞于G0/G1期.3 mmol/L VPA处理3 d,G0/G1期细胞由(50.7±2.8)%上升至(80.7±1.7)%.②以3 mmol/LVPA处理Kasumi-1细胞不同时间,与对照组比较,3 mmol/L VPA组cyclin D1 mRNA表达水平下调;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3 d,结果 发现随着VPA药物浓度增加cyclin D1 mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性.③VPA诱导p21WAF1/CIP mRNA表达明显增加,呈现时间及剂量依赖性.不同浓度VPA处理细胞3 d时,随着用药浓度的增加,p21WF1/CIP蛋白相对表达水平增加,3 mmol/L VPA处理细胞2 d与0 d比较,p21 WAF1/CIP蛋白相对表达水平明显增加(2.498±0.240对0).结论 VPA可以通过对cyclin D1及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF1/CIP调节使Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期.     

组织因子途径抑制物-2对胰腺癌细胞增殖的影响

目的：检测人胰腺癌组织中组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响.方法：采用免疫组织化学方法检测43例胰腺癌及9例正常胰腺组织中TFPI-2及Ki-67蛋白的表达.结果：胰腺癌中TFPI-2的表达低于正常胰腺组织,其表达水平与胰腺癌临床分期及转移有关, 于Ⅰ、Ⅱ期及无转移的胰腺癌组织中的表达高于Ⅲ、Ⅳ期及有转移的胰腺癌组织（P＜0.05）.其表达水平与胰腺癌细胞增殖活性呈负相关（rs=- 0.339,P＜0.05）.结论：TFPI-2基因在胰腺癌中呈低表达,能抑制肿瘤细胞的增殖,可能参与了胰腺癌细胞周期的调控.     

姜黄素体外抑制人结肠癌癌细胞Caco-2增殖

目的研究姜黄素在体外对人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测姜黄素在相同浓度下、不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制量(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT:相同干预浓度姜黄素抑制人结肠癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:205.737±14.929μmol/L、102.023±6.809μmol/L、86.627±9.005μmol/L;RT-PCR:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及姜黄素干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.786±0.101、0.310±0.046,P<0.05;COX-2 mRNA灰度值分别为0.830±0.173、0.063±0.035,(P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来抑制结肠癌细胞Caco-2增殖。     

苦杏仁甙抑制成人肾脏成纤维细胞的增殖

背景:苦杏仁甙在体外具有抑制纤维细胞增殖的作用,而肾脏移植后一定时间内的肾活检均提示有程度不同的纤维化,苦杏仁甙是否能抑制肾脏移植后的纤维化是一个有临床意义的课题.目的:观察苦杏仁甙对成人肾脏成纤维细胞增殖的影响.设计、时间及地点:前瞻性随机对照实验,于2003-06/2007-12在南京军区福州总医院实验科完成.实验室为南京军区重点实验室.材料:苦杏仁甙经中国药品生物制品检定所鉴定,批号020903.方法:采用消化法原代培养人肾成纤维细胞,并以免疫细胞化学方法鉴定.采用MTT比色法检测含25,50,80,100,200 mg/L苦杏仁甙的培养液对人肾成纤维细胞增殖的影响,以不含苦杏仁甙的培养液为对照.主要观察指标:苦杏仁甙培养液对肾脏成纤维细胞的增殖活性的影响.结果:分离出的成纤维细胞免疫细胞化学方法进行鉴定显示,vimentin呈阳性表达,keramin和desmin呈阴性表达,确认为成纤维细胞.随着培养时间的延长,对照组肾脏成纤维细胞明显增殖.不同质量浓度苦杏仁甙组肾脏成纤维细胞增殖明显低于对照组.不同质量浓度苦杏仁甙对成纤维细胞的增殖活性均有抑制作用,且呈一定剂量依赖性,以100 mg/L苦杏仁甙抑制作用最强.结论:苦杏仁甙能明显抑制人肾成纤维细胞增殖,并呈剂量依赖性.